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[url=http://www.gdkjfw.com/][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url][/url]内标法: 在分析测定样品中某组分含量时,将一定重量的纯物质作为内标物加到一定量的被分析样品混合物中,然后对含有内标物的样品进行色谱分析,分别测定内标物和待测组分的峰面积(或峰高)及相对校正因子,按公式即可求出被测组分在样品中的百分含量。加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响,以提高分析结果的准确度。[align=center][img]http://www.gdkjfw.com/images/image/55461526982266.jpg[/img][/align] 内标法在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]定量分析中是一种重要的技术,是色谱分析中一种比较准确的定量方法,尤其在没有标准物对照时,此方法更显其优越性。 使用内标法时,在样品中加入一定量的标准物质,它可被色谱柱所分离,又不受试样中其它组分峰的干扰,只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值,即可求出待测组分在样品中的百分含量。 [url=http://www.gdkjfw.com/][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url][/url]外标法: 用待测组分的纯品作对照物质,以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。例如,在色谱法中,想知道被测样品浓度。可以用外标法首先用待测组份的标准样品绘制工作曲线,测出各峰的峰高或峰面积对应的样品浓度,绘制出标准曲线。实际应用时,测出峰高或峰面积对应标准曲线,就可以得到样品浓度。[align=center][img=,627,382]http://www.gdkjfw.com/images/image/25681526982266.jpg[/img][/align] 此法可分为工作曲线法及外标一点法等。 工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线,求出斜率、截距。在完全相同的条件下,准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液,根据待测组分的信号,从标准曲线上查出其浓度,或用回归方程计算,工作曲线法也可以用外标二点法代替。通常截距应为零,若不等于零说明存在系统误差。工作曲线的截距为零时,可用外标一点法(直接比较法)定量。 外标法方法简便,不需用校正因子,不论样品中其他组分是否出峰,均可对待测组分定量。但此法的准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。此外,为了降低外标一点法的实验误差,应尽量使配制的对照品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近。 外标法是色谱分析中的一种定量方法,它不是把标准物质加入到被测样品中,而是在与被测样品相同的色谱条件下单独测定,把得到的色谱峰面积与被测组分的色谱峰面积进行比较求得被测组分的含量。外标物与被测组分同为一种物质但要求它有一定的纯度,分析时外标物的浓度应与被测物浓度相接近,以利于定量分析的准确性。 [url=http://www.gdkjfw.com/][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url][/url]简单的说:内标法就是用在样品中定量加入要分析的物质,通过测得的实际样品量和加入样品量的比值来定量所要分析的样品含量。 内标法主要优点是简单,快速。 缺点是没有标准曲线法定量精确。[align=center][/align]
[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析样品时怎么判断是内标法还是外标法
高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url](HPLC)中外标法是一种常用的定量分析方法,其基本概念是通过测量已知浓度的标样(外标)和未知浓度的样品的色谱峰面积或峰高,从而计算出样品中目标物质的浓度。一般分为外标单点法和外标曲线法,现在对不同国家的外标法进行对比。 [size=18px][b][color=#595959]01.中国药典中的外标法(2025版的公示稿) [/color][/b][/size][b][size=16px][color=#595959]1)外标法的一般步骤:[/color][/size][size=16px][color=#ff4c41](可以理解为外标法) [/color][/size][/b][size=16px][color=#595959]a.按照各品种项下的规定,精确称取或量取对照品和供试品,配制成溶液; [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.分别精确量取对照品溶液和供试品溶液的一定体积,进行色谱分析; [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.记录色谱图,并测量待测物质的峰面积(或峰高); [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.使用公式 C[sub]X[/sub]=C[sub]R[/sub]×A[sub]X[/sub]/A[sub]R[/sub]计算含量,其中 C[sub]X[/sub]是供试品中待测物质的浓度,C[sub]R[/sub]是对照品的浓度,A[sub]X[/sub]是供试品溶液中待测物质的峰面积(或峰高),A[sub]R[/sub]是对照品溶液中待测物质的峰面积(或峰高)。 [/color][/size][b][size=16px][color=#595959]2)[/color][/size][size=16px][color=#595959]对于成分复杂或待测成分含量变化较大的药物体系,可以采用[/color][/size][size=16px][color=#ff4c41]外标标准曲线法[/color][/size][size=16px][color=#595959]进行含量测定。[/color][/size][/b][size=16px][color=#595959]a.精确称取适量的对照品,或从对照品储备液中精确量取,配制成不同浓度的系列溶液; [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.精确量取这些系列溶液,进行色谱分析,记录色谱图,并测量峰响应; [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.利用峰响应(或经转换)对浓度绘制标准曲线,并通过最小二乘法计算出回归曲线方程; [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.在相同的色谱条件下,精确量取供试品溶液,进行色谱分析,记录色谱图,并测量待测成分的峰响应; e[/color][/size][size=16px][color=#595959].根据待测成分的峰响应(或经转换)和回归曲线方程,确定供试品溶液中待测成分的含量。[/color][/size][size=16px][color=#ff4c41]简单理解就是做一条标准曲线,得出标准曲线方程,再将待测品的峰相应代入方程进行计算,得出样品浓度。 [/color][/size][size=16px][color=#ff4c41][b][color=#595959]02.欧洲药典中的外标法 [/color][/b][/color][/size][color=#ff4c41][b][size=16px][color=#595959]1)[b]多点校准(使用校准函数): [/b][/color][/size][/b][/color][size=16px][color=#595959]a.准备一系列含有不同梯度浓度的对照品溶液,这些浓度应该在已经证明可以得到线性响应的范围内; [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.取固定体积的这些对照品溶液进行色谱分析; [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.通过色谱图得到峰面积或峰高,并以此绘制校正曲线,横坐标是对照品的量,纵坐标是峰面积或峰高; [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.通常通过线性回归得到校准函数; [/color][/size][size=16px][color=#595959]e.按照各论中规定的程序准备待测样品溶液; [/color][/size][size=16px][color=#595959]f.在与制备校准函数相同的操作条件下进行色谱分析; [/color][/size][size=16px][color=#595959]g.测量待测组分的峰面积或峰高,并根据校准函数读取或计算组分的含量; [/color][/size][size=16px][color=#595959]2[b])单点校准: [/b][/color][/size][size=16px][color=#595959]a.在各论中,通常选择一个校准曲线线性范围内的对照品溶液,以及一个浓度接近该对照品溶液的待测样品溶液; [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.在固定条件下进行色谱分析,通过比较得到的响应来定量分析组分的含量; [/color][/size][color=#595959]c.在这种方法中,所有操作步骤,如进样程序,都必须在恒定条件下进行 [img=,690,801]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061421193322_2231_3203140_3.jpg!w690x801.jpg[/img] 图1.欧洲药典原文描述[b][color=#595959]03.美国药典中的外标法 [/color][/b][size=16px][color=#595959][b]1)校准函数法(多点校准): [/b][/color][/size][size=16px][color=#595959]a.制备一系列含有不同浓度的对照品标准溶液,这些浓度应在已知能够产生线性响应的范围内; b[/color][/size][size=16px][color=#595959].取固定体积的这些标准溶液进行色谱分析,并注射到色谱系统中; [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.通过色谱图得到的峰面积或峰高,绘制校准曲线,横坐标是对照品的量,纵坐标是峰面积或峰高; [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.通常通过线性回归方法得到校准函数; [/color][/size][size=16px][color=#595959]e.根据各论中规定的程序制备待测样品溶液; [/color][/size][size=16px][color=#595959]f.在与制备校准函数相同的色谱条件下分析样品,测量待测组分的峰面积或峰高; [/color][/size][size=16px][color=#595959]g.通过校准函数计算出样品中待测组分的含量。[/color][/size][size=16px][color=#595959][b]2)单点校准法:[/b][/color][/size][size=16px][color=#595959]a.在各论中,选择一个浓度在线性范围内的标准溶液,以及一个浓度接近该标准溶液的待测样品溶液; [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.在固定条件下进行色谱分析,通过比较得到的响应来定量分析组分的含量; [/color][/size][color=#595959]c.这种方法中,所有操作步骤,包括进样程序,都必须在恒定条件下进行,以确保分析结果的一致性 [img=,690,214]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061424187996_390_3203140_3.jpg!w690x214.jpg[/img] 图2.美国药典原文描述 [color=#595959][b]总结一下:[/b][/color][size=16px]1)中国药典提供了外标法的一般步骤和标准曲线法的详细描述,但没有明确描述单点校准法。 [/size][size=16px]2)欧洲药典和美国药典都详细描述了多点校准和单点校准的方法,并且强调了所有操作步骤需要在恒定条件下进行。(这两家基本是一 致的描述) [/size][size=16px]3)三种药典都强调了在色谱分析中保持操作条件的一致性,以确保分析结果的准确性和重现性 [img=,690,249]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061426098030_8014_3203140_3.jpg!w690x249.jpg[/img] [/size][/color][/color]