液相色谱理论实验

在制备液相色谱中，样品的上样量是影响分离效果的重要因素之一。要纯化分离的样品应以合适的浓度添加到色谱柱柱床上，以实现窄的水平谱带。如果上样量太大，则谱带变宽，分离效率降低。Flash和Prep HPLC的上样量有很大不同。由于Flash色谱通常用于预纯化，高分辨率不是优先考虑的因素，因此上样量往往比Prep HPLC高。在Prep HPLC中，主要目的是获得最高纯度的物质，故基线必须得到分离。正相和反相二氧化硅（如C-18、氨基或二醇基）的上样量也存在相当大的差异。由于非键合相二氧化硅的表面积大，故这种固定相的载样能力更高。正相二氧化硅的载样能力通常比键合二氧化硅的载样量高约10倍。标准二氧化硅（粒径40-60 μm）通常可接受10%的载样量；在使用较小颗粒（15-30μm）时可以达到30%。然而，重要的一点我们要知道，无论是反相还是正相，上样量由样品的复杂程度决定的。对于含有多种化合物的复杂样品，决定其复杂性的因素是纯化目标化合物与其邻近的洗脱组分的分离程度。通常情况下，复杂样品需要少量多次的上样方式来处理。接下来“小步”同学将分享给大家一篇关于Pure制备色谱上样量的应用文章，来让大家感受下色谱的魅力。?在液相色谱中，样品可以通过两种不同的方式上样：固体或液体。液体上样，是将样品溶解在溶剂中后，直接注入色谱柱上。固体上样，是将粗样品与载体材料（如硅胶）的固体均匀混合物放在色谱柱前面。图1：液体和固体样品每种技术都有其需要考虑的特殊方面，下面将进行更详细的讨论。液体上样是一种将样品很好地溶解在洗脱初始溶剂中的方法，可用于Flash和Prep液相色谱应用中。推荐使用弱极性溶剂，因为强极性溶剂会降低分离度。液体上样被认为是最简单、最快捷的方法，但可能会造成样品损失，需要考虑的因素如下：- 化合物在初始溶剂中的溶解度:样品需要完全溶解，因为进样系统或色谱柱顶部的沉淀可能在系统中产生过大的压力，并最终导致样品流失。- 溶解溶剂的极性：如果使用极性溶剂溶解样品，则它们可能会吸附在极性硅胶柱基质上，并对更多极性化合物（后来在硅胶材料上洗脱的化合物）的分离产生不利影响。- 样品溶剂的体积:体积越大，样品从一开始就迁移到填料柱床中的风险就越高，从而导致谱带变宽、分离度降低。理想的样品体积不应超过色谱柱体积的10%。样品的保留率越高，可装载的体积就越大。- 样品量：每根色谱柱都有规定的装载量。理想的样品量不应超过纯化柱的最大装载量。在Flash液相色谱中，通常是在注射器的帮助下将液体样品手动直接注入到色谱柱顶部（如下图）。由于高背压，无法在Prep液相色谱柱上进行手动上样。因此，它是通过专用的进样阀完成的，如图所示：图2：Flash和Prep HPLC中的液体上样固体上样是仅适用于Flash色谱分离应用的技术，用于只能在强溶剂中溶解的样品，或用于具有难以溶解的粘性或多杂质样品。该方法可以通过减少谱带展宽和随后的拖尾效应来改善分辨率。一般来讲，固体上样分离较慢，但与液体上样相比，分辨率更高。推荐的样品量不应超过色谱柱的最大载样量。固体上样通常通过以下步骤完成：- 将粗样品溶解在合适的极性溶剂中。- 然后，将该混合物在超声浴中超声几分钟，以提高溶解度。- 过滤混合物以除去尚未完全溶解的物质。- 将硅胶以粗样品重量的5倍添加到上述混合物中。- 溶剂通过旋转蒸发仪完全地减压蒸馏干。- 最后，将粗样品和硅胶的混合物装入固体装样器中，然后将其安装在色谱柱的前面。连接溶剂洗脱流路。- 待分离的组分不断地从固体装样器中洗脱到实际分离色谱柱中。图3：在Flash色谱分离中的固体上样支撑材料在固体上样技术中起到至关重要的作用：吸收粗样品，使洗脱的化合物能更好地转移和分配。它还可以将样品固定在适当的位置。这对于具有挑战性的样品（如油性提取物）非常有利。非键合的二氧化硅是最常用的吸附剂，但可能不是最佳的选择。通常，建议使用与色谱柱相同类型的硅胶作为支撑材料。这样可以避免不必要的化学相互作用或样品的不可逆吸附。一种有用的替代材料是 Celithe,由于其中性的化学特性，它不与任何物质发生相互作用。综上所述，液体上样和固体上样各有优劣、各有所长，可根据样品性质和试验目的来选择使用，差异化的操作来得到目标纯化合物。表1：固体上样和液体上样的差异好啦！本期“小步”同学关于Pure应用文章分享到此结束，我们下期再见！

为使广大液相色谱用户对液相色谱基础理论、基本操作、应用技术以及仪器常见故障的排除等方面有所提高，确保企业正常生产检验和新产品开发分析，福立公司北京分公司特举办2009年001期液相色谱操作使用培训班，本次培训聘请国内知名液相色谱专家和实际经验较丰富的技术工程师进行讲习。 培训主要内容： 1、理论部分 HPLC的基本理论；HPLC的分析计算与结果评价；FL2200系列高效液相色谱仪的结构、性能、使用注意事项与操作；固定相与流动相；HPLC实验技术；样品预处理技术；FL2200系列高效液相色谱仪的应用；HPLC的常见故障与维修；HPLC的常见异常现象与处理。 2、应用实习部分 HPLC法测定食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠；HPLC法测定辣味食品中苏丹红I、II、III、IV；HPLC法测定奶制品中的三聚氰胺；HPLC法测定土霉素。 培训时间：2009年4月20日～2009年4月28日 （2009年4月19日全天报到） 培训班名称：高效液相色谱综合班 计划人数：40人 培训费：1300元 联系地址及电话 单位名称：浙江福立分析仪器有限公司北京分公司 Http：//www.cnfuli.com.cn/ 单位地址：北京市海淀区上地金隅嘉华大厦B座707 邮编：100085 联系人：张之颖 李玲 联系电话：010-62973787 010-62480322 传真：010-62973372 010-62480322 问询邮箱：fl2200_2@163.com 坐车路线： 1、 北京站下车的用户，可坐地铁2号线到西直门站下车，换乘地铁13号线到上地站下车，然后换乘公交499路（出门右拐100米左右）至公交西北旺站，然后换成公交330（或651，或633）路至黑龙潭站下车（北京卫生局党校院内）。 2、北京西站下车的用户，可出北地道口右拐，坐公交特6线至公交西北旺站，然后换成公交330（或651，或633）路至黑龙潭站下车（北京卫生局党校院内）。 注意事项：如用户参加培训，请及时将回执单传真或邮寄本中心；培训期间食、宿统一安排，费用自理

生态链的建立需要各要素各司其职、环环相扣、相互作用。液相色谱产品也同样有着自己的生态链，仪器、耗材、软件、应用和售后缺一不可，也只有各元素紧密联系才能为客户提供完整的解决方案。液相色谱产品生态链华谱科仪（北京）科技有限公司（以下简称“华谱科仪”）目前已建立了以客户为中心，由（超）高效液相色谱仪、三重四极杆质谱仪、色谱柱/前处理耗材、色谱软件、应用和售后服务体系等形成的完整产品生态链，华谱科仪也是国内为数不多能够提供完整液相色谱产品生态链的厂家。华谱科仪公司创始人、董事长 王利春华谱科仪公司创始人、董事长王利春表示，具有产品生态链的企业不是用一条或几条产品线单打独斗，而是用一个生态链的闭环系统为客户提供一站式服务，这样的生态链能够像竹林一样延绵生长、生生不息。王利春董事长介绍到：“仪器的运行需要耗材支持，只有有了耗材产品才能建立应用体系，在这个基础上，才能建售后服务体系，几个要素之间环环相扣，才能形成液相色谱产品生态链。”目前，华谱科仪建立了丰富的HPLC（高效液相色谱仪）、UHPLC（超高效液相色谱仪）产品矩阵，检测器种类齐全，今年2月与国际质谱品牌SCIEX达成战略合作，并推出HPMS-TQ三重四极杆液质联用系统。公司针对制药、生命科学分析等不同场景分别开发的系列化色谱柱产品，在分离度、稳定性等性能上表现出色。基于网络版架构的合规软件，功能齐全，已取得软件著作权、双软认证等相关资质。公司兼具标准SOP方案开发和定制化技术服务能力，为用户提供高质量、低成本的应用服务。实验室搬家和仪器安装、维修、认证，色谱理论标准培训班和色谱理论定制班等为实验室提供整套的技术服务解决方案。华谱科仪发展历程王利春董事长说：“‘华谱’寓意中华色谱，公司的愿景是致力于将华谱打造成为色谱领域知名的民族品牌，具备和国际知名的色谱公司同台竞争的能力。”相信在国家对国产仪器的大力支持下，在华谱人的不懈努力下，华谱科仪液相产品生态链能让更多的用户受益，让大家感受到国产液相色谱的力量。华谱科仪将有重磅新品于近期发布，敬请期待！

从1903年，俄国植物学家Tsweet提出色谱法开始，色谱技术这一重要的分离分析技术已走过百年历史。经过长期技术沉淀，色谱仪器日臻成熟。如今，色谱仪因其样品适用范围广、分离效率高、检测灵敏度高、分析速度快、样品回收方便等特点，已成为最重要的分析仪器品类之一，在色谱技术在生命科学、食品安全、环境监测、化学分析等领域应用广泛。在我国，色谱仪器及服务每年市场规模已超百亿。虽然色谱理论及仪器技术渐已成熟，但为了满足当下细分市场应用需求及行业发展，相关仪器和方法仍在不断的创新发展中，众多色谱仪器及相关耗材配件等企业也在不断推出新的产品。特别是近年来，不少国产新锐企业崛起并加入色谱市场，产品技术更是百花齐放。通过仪器信息网不完全统计，2023年有不少色谱产品亮相国内市场。本文将分品类对色谱新品进行详细介绍。（信息主要来自于仪器信息网新品栏目，若有补充请联系本网编辑）一、气相色谱2023年气相色谱新品（以上市时间为序）仪器名称公司名称上市时间 GC-2200 气相色谱仪北京浩天晖仪器有限公司2023年1月一体化移动式燃料电池用氢气质量分析仪加拿大ASDevices2023年6月M8实验室气相色谱仪 Asicotech M8 GC上海炫一智能科技有限公司2023年9月F80气相色谱仪浙江福立分析仪器股份有限公司2023年9月GC4200 气相色谱仪北京东西分析仪器有限公司2023年9月2023年上市的气相色谱产品不多，共有5台。其中4台为实验室气相色谱仪，1台为专用式气相色谱仪。在实验室气相色谱仪领域，4台产品均为国产品牌。北京浩天晖推出的GC2200突出了实用性，具有较高的性价比；炫一科技则推出了梦系列的新作M8气相色谱仪，在提升整体技术性能的同时，融合了最新的人工智能技术；福立也与2023年9月推出了全新升级的气相色谱产品F80，在产品技术细节、仪器控制精度、操作系统等方面进行了革新；东西分析也于9月推出了GC-4200气相色谱仪，在EPC气路控制系统和温度控制系统以及仪器操作性等方面进行了优化。为了满足质子交换膜燃料电池汽车用氢气13种杂质的检测需求，加拿大ASDevices推出了一体化移动式燃料电池用氢气质量分析仪，用于氢气品质移动快速检测。该仪器一体化集成EPD、TCD、FID高精度检测器和在线吸收阴阳离子色谱系统，可实现13种杂质同步分析检测。二、液相色谱2023年液相色谱新品（以上市时间为序）仪器名称公司名称上市时间 Ecom中高压制备色谱一体机诚康鑫（上海）科技设备有限公司2023年1月ECS01 分析型液相色谱诚康鑫（上海）科技设备有限公司2023年1月Alliance iS HPLC System沃特世科技（上海）有限公司(Waters)2023年3月科诺美 Frontier 超高效液相色谱系统科诺美（北京）科技有限公司2023年6月INNOTEG EasyPrep MP 中压快速制备色谱系统德祥科技有限公司2023年8月EXPEC 5180 超高效液相色谱系统杭州谱育科技发展有限公司2023年9月EClassical 3200L 超高效液相色谱仪大连依利特分析仪器有限公司2023年10月LC5190超高效液相色谱仪浙江福立分析仪器股份有限公司2023年12月WelPrep2000制备型液相色谱仪器月旭科技（上海）股份有限公司2023年12月2023年上市的液相色谱产品共有9台。其中6台为分析型液相色谱仪，3台为制备型液相色谱仪；3台来自国外企业，6台来自国产品牌。首先看进口品牌，2023年1月，诚康鑫代理的捷克ECOM色谱，更新了其分析型和制备型色谱产品。2023年3月，沃特世推出了最新的Alliance iS HPLC System，主要面向QC实验室，通过智能化系统减少人为的误差和维修成本。2023年，国产液相色谱企业非常活跃，除了积极进行企业融资、市场开拓之外，还推出了不少新产品。几年前，超高效液相色谱还是进口品牌独有，而今国产品牌也都迎头赶上。今年推出的4款国产分析型液相色谱仪，清一色都是超高效产品。2023年6月，科诺美推出超高效液相色谱系统Frontier，是一款基于自主核心研发、完全国产化的UHPLC产品，最高耐压可达16000psi，该产品还斩获了2023年BCEIA金奖；2023年9月谱育也推出了超高效液相色谱系统EXPEC 5180 ，采用基于线性驱动的二元高压混合梯度泵技术，使得产品流速准确度误差达到了±0.5%水平；2023年10月，依利特对原有产品升级迭代为EClassical 3200L系统，在光路系统、进样系统、控温模块等方面都进行了升级，同时最大耐压也提升至90Mpa；2023年12月，福立时隔多年推出了LC5190低压超高效液相色谱仪，在常规液相色谱条件下，可同时实现高分离、高灵敏度、高通量分离分析。除了几款分析型液相之外，2023年，还有2款中低压制备液相色谱面世。2023年8月，英诺德推出EasyPrep MP 中压快速制备液相色谱系统，在自动化、智能化方面进行了大量设计；2023年12月，月旭科技推出WelPrep2000制备型液相色谱，在原来的WelPrep1000基础上做了一系列升级，包括重新设计的管路走线、进样阀布局以及操作开关位置等，在性能和易用性上都有不小提升。 除了气相色谱和液相色谱之外，2023年还有多台离子色谱产品面世，详情可见：2023年离子色谱新品盘点：自主DIY搭建多场景离子检测平台。

尊敬的用户 您们好！ 赛默飞世尔科技色谱质谱戴安DIONEX产品多年来一直秉承用户满意度第一的企业宗旨，为客户提供最佳期的售后服务。为提高客户使用液相的技能，能使客户更充分的使用液相色谱进行科研，质量控制，培训中心与中南民族大学药学院以及中国仪器仪表行业协会合作举行液相色谱应用技术培训班。适用对象： 适用于有意独立操作仪器，更进一步地学习方法开发及优化，解决实际仪器操作过程中出现的问题的液相色谱工作者（戴安及非戴安品牌的客户均可参加）。课程特色：（1）液相色谱应用技术培训班更侧重于实用的仪器操作，上机方法开发及色谱条件优化，色谱故障排除以及色谱操作过程中碰到的实际问题的解决。（2）小班教学，每3-4人为一组，最多不超过4组。培训期间每组培训学员配一台液相色谱仪以及有专门上机指导老师。（3）届时我们将邀请液相分析专家李效宽老师作为授课，上机指导老师。李老师长期从事液相色谱分析研究，具有丰富的理论知识和实践经验。参加液相培训的学员可在培训期间及培训结束后与专家沟通交流（建议学员将平时仪器使用过程中碰到的问题提前准备好）。（4）学员培训结束后可获得赛默飞世尔公司戴安产品培训部结业证书以及中国仪器仪表行业协会继续再教育证书的双份证书。具体的培训安排： 8月3日 9：00-12：00 液相色谱的基本理论和基本原理(讲解) 液相色谱条件的开发及优化（讲解） 答疑 1：30-5：00 色谱柱的选择和应用（讲解并答疑） 戴安仪器操作和软件使用（上机，SOP流程） 8月4日9：00-12：00 实际样品定量分析,线性，精密度（上机实验，现场指导） 1：30-5：00 实际样品含量测定分析（上机实验，现场指导） 8月5日9：00-12：00 实际样品色谱条件的开发和优化（等度）（上机实验，现场指导） 1：30-5：00 实际样品色谱条件的开发和优化（梯度）（上机实验现场指导）授课教师：李效宽（中南民族大学药学院）培训费用：3000元/人，（同一单位两人报名，培训费用为5700/2人）（包含培训教材、上机耗材费、培训费，赛默飞世尔公司戴安产品培训部结业证书以及中国仪器仪表行业协会继续再教育证书的双份证书）培训地址：中南民族大学药学院8号楼（见下图）519会议室 地址：武汉市洪山区民族大道708号 培训地点乘车路线：武昌火车站乘坐903，538路，经过15站，到达中南民族大学站下车，步行到达中南民族大学。（出租车约25元）汉口火车站步行约600米，到达复兴村站，乘坐715路，经过22站，到达下钱西村站，步行约800米，到达中南民族大学天河机场坐机场2线下行,在武昌傅家坡客运站下车, 步行至傅家坡换乘538，907，811，901路上行,在中南民族大学站下车,步行至中南民族大学住宿地点：瑞安大酒店 电话：67887188(24小时）67887166（08：30--17：30）住宿费用：标准间（双人）200元/天，包早餐酒店乘车路线：武昌火车站：乘坐529.538路，到达关西小区站下车，斜对面瑞安大酒店。（出租车约25元）汉口火车站：步行约600米，到达复兴村站，乘坐715路，经过22站，到达关西小区站，斜对面瑞安大酒店（出租车约50元）天河机场：从武汉天河机场出发，坐机场大巴，在武昌傅家坡客运站下车, 在傅家坡公交站换乘538，590，715，811路上行,在关西小区站下车，斜对面瑞安大酒店（从机场打出租车到酒店约120元） 该酒店距离中南民族大学步行约15分钟，公交车2站，出租车5元。其它：公司可代理安排住宿并负责培训期间工作午餐及晚餐，住宿费及其他费用自理。培训期间不安排游览等活动。----------------------------------------------------------------------------------------------------------------回 执联系人姓名：_____________ 科室：_____________ 联系电话：__________________传真：______________________ 邮箱：____________________________ 参加人数：______ 仪器型号： 是否要代为安排住宿： 住宿时间： 月 日到 月 日，共 天。----------------------------------------------------------------------------------------------------------------请您以传真或电子邮件方式将回执部分回传，以便于我们能充分准备此次培训。如若有其他问题，请在备注栏注明。联系人：陈晓芹 010-64436740-8213，13520975600E-mail： xiaoqin.chen@thermofisher.com传 真： 010-64432350、64434148赛默飞世尔科技色谱与质谱部戴安产品 培训中心

浙江福立北京分公司举办液相色谱操作培训班为使广大液相色谱用户对液相色谱基础理论、基本操作、应用技术以及仪器常见故障的排除等方面有所提高，确保企业正常生产检验和新产品开发分析，浙江福立公司北京分公司特举办2009年001期液相色谱操作使用培训班，本次培训聘请国内知名液相色谱专家和实际经验较丰富的技术工程师进行讲习。 培训主要内容： 1、理论部分 HPLC的基本理论；HPLC的分析计算与结果评价；FL2200系列高效液相色谱仪的结构、性能、使用注意事项与操作；固定相与流动相；HPLC实验技术；样品预处理技术；FL2200系列高效液相色谱仪的应用；HPLC的常见故障与维修；HPLC的常见异常现象与处理。 2、应用实习部分 HPLC法测定食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠；HPLC法测定辣味食品中苏丹红I、II、III、IV；HPLC法测定奶制品中的三聚氰胺；HPLC法测定土霉素。 培训时间：2009年4月20日～2009年4月28日 （2009年4月19日全天报到） 培训班名称：高效液相色谱综合班 计划人数：40人 培训费：1300元 联系地址及电话 单位名称：浙江福立分析仪器有限公司北京分公司 Http：//www.cnfuli.com.cn/ 单位地址：北京市海淀区上地金隅嘉华大厦B座707 邮编：100085 联系人：张之颖 李玲 联系电话：010-62973787 010-62480322 传真：010-62973372 010-62480322 问询邮箱：fl2200_2@163.com 坐车路线： 1、 北京站下车的用户，可坐地铁2号线到西直门站下车，换乘地铁13号线到上地站下车，然后换乘公交499路（出门右拐100米左右）至公交西北旺站，然后换成公交330（或651，或633）路至黑龙潭站下车（北京卫生局党校院内）。 2、北京西站下车的用户，可出北地道口右拐，坐公交特6线至公交西北旺站，然后换成公交330（或651，或633）路至黑龙潭站下车（北京卫生局党校院内）。 注意事项：如用户参加培训，请及时将回执单传真或邮寄本中心；培训期间食、宿统一安排，费用自理

p style="text-align: center "　　strong液相色谱柱进展及其在药品标准中的应用(二)/strong/pp style="text-align: right "strong　　——液相色谱填料技术进展/strong/pp　　2　液相色谱填料技术进展/pp　　近年来，液相色谱填料技术的发展主要在于快速液相色谱分析、多种色谱固定相及各种分离模式的应用。br//pp　　strongspan style="color: rgb(112, 48, 160) "2.1　基于亚2微米填料的高效液相色谱柱技术/span/strong/pp　　范氏(Van Demeter)方程是一个描述线速度与塔板高度(柱效)关系的经验式。在范氏方程中，填料粒径大小是影响塔板高度的变量之一(图2)，因此，提高分离效能的有效方法之一是减小填粒粒径。较小粒径的填料有利于降低涡流扩散及改变传质路径，不仅使柱效更高，而且即使在较高的线速度下，理论塔板高度也不会增大，使色谱柱的分离性能得以保持，并有效地缩短分析时间和减少溶剂消耗，更加绿色环保。2000年前，人们专注于键合相类型的开发。2003 年，在匹兹堡展会(Pittcon 2003)上展出了1.8 μm 的ZORBAX STM(亚2微米，SB-C18柱)快速分析色谱柱，该色谱柱柱效是常规3.5μm 色谱柱的2倍，开启了液相色谱更高效快速分析的新篇章。同时，耐压能力达60 MPa甚至120 MPa的超高效液相色谱仪的逐步推出，使得采用小粒径色谱柱，通过提高流速加快分析速度，能有效提高分辨率和灵敏度，从而使得诸多复杂体系的分离成为可能。如今，以亚2 微米填料为填充剂的高效液相色谱柱(粒径1.6~2 μm)正在得到更广泛的应用，例如，使用1.8 μm 的C18 色谱柱分析《中国药典》2015 年版一部中的复方丹参滴丸指纹图谱，其时间可以控制在10 min 以内，见图3。/pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201709/insimg/a8b0d0bc-de94-48df-9863-f2b9db74950a.jpg" title="图2_副本.jpg"//pp style="text-align: center "　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "图2　理论塔板高度与色谱柱粒径的关系/span/strong/ppstrongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "/span/strong/pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201709/insimg/29bf269a-5467-4844-9b2c-da972cb0bafa.jpg" title="图3_副本.jpg"//pp style="text-align: center "　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "图3　中国药典一部中复方丹参滴丸的高效液相色谱分析图谱/span/strong/pp　　中国药典对亚2 微米色谱柱技术革新和应用给予高度的关注，适时地修订了液相色谱法的相关内容。中国药典2015 年版四部通则0512 色谱法规定，若需使用小粒径(约2μm)填充剂，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配 如有必要，色谱条件也应作适当的调整。当对其测定结果产生争议时，应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。br//pp　　strongspan style="color: rgb(112, 48, 160) "2.2　表面多孔型填料技术/span/strong/pp　　表面多孔型颗粒填料(superficially porous particles，SPPs)又称核- 壳型填料(core shell particles)，商品化的产品有5μm的Poroshell 300 SB C18，该填料采用4.5 μm的硅胶实心内核，外面包裹一层0.25μm的多孔层，平均孔径为300 ，主要用于蛋白质和单抗的快速分析。由于表面多孔型填料具有极窄的粒径分布和扩散路径，同时可以减小涡流扩散，缩短传质路径和减弱传质阻力，即便使用较粗的填料颗粒也可获得较高的柱效。目前，一般使用亚3μm 的表面多孔型填料(2.6~2.7 μm)，即可获得亚2微米填料的柱效。这种颗粒一般采用1.7 μm 的实心核，外部为0.5 μm 厚度的全多孔层，它们具有亚2 微米全多孔填料色谱柱相当的柱效，而其柱压仅为亚2 微米全多孔填料的一半，见图2 中色谱柱柱效与颗粒粒径的关系。此类色谱柱一般操作压力在20 MPa 左右，故可以在耐压40 MPa 的普通液相色谱系统上运行，使得普通液相色谱仪实现高效快速分析成为现实。这种填料在过去5年里是液相色谱领域发展最快的一种填料类型，发展非常迅速，2010 年时只有3 家色谱厂商提供2.7μm 粒径的表面多孔型填料用于小分子化合物分析，2015年底则发展到了16家，键合相的类型超过了12 种，填料的粒径扩展为1.3、1.6、2.6、2.7、4 和5 μm，而生产用于大分子化合物分离的大孔径表面多孔型填料的厂商也增加到了9 家。/pp　　由于柱压与填料粒径的平方成反比，如图4 所示，在完成同一组化合物的快速分离时，相同柱尺寸条件下，2.7μm 表面多孔填料色谱柱的柱效与1.8μm 全多孔填料相当，而压力仅为亚2 微米填料的一半，这使得2.7 μm 的表面多孔型填料可以在普通高效液相色谱仪上实现超高效液相色谱的分析效率。故在近年的国际学术会议，包括2015 年12 月北京色谱年会上，讨论最多的话题也是表面多孔型填料。Ron Major 统计，在Pittcon 2014 上，关于SPP 的话题数量比亚2 微米填料的10 倍还多。/pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201709/insimg/2844cba5-fdd3-47a7-9b50-74c222a4a46f.jpg" title="图4_副本.jpg"//pp style="text-align: center "　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "图4　亚2微米全多孔填料与亚3 μm 表面多孔填料色谱柱分离结果和参数比较/span/strong/pp　　strongspan style="color: rgb(112, 48, 160) "2.3　整体化色谱柱填料技术/span/strong/pp　　整体化色谱柱(monolithic column)也是近年液相色谱柱填料研究的另一个重要方向。整体柱，又称为棒状柱，是一种用有机或无机聚合方法在色谱柱内进行原位聚合的连续床固定相。与常规装填的液相色谱柱相比，整体柱具有更好的多孔性和渗透性，可以使用高流速实现快速的传质分离。聚合物整体柱一般采用离子交换或亲和色谱方式，用于生物大分子如蛋白、抗体、DNA 的超快速分析，这样的色谱柱包括Bio-Monolith 离子交换柱和Protein A、Protein G 亲和色谱柱，以及ThermoroSwift IEX 离子交换柱和ProSwift RP 柱。使用此类整体化色谱柱分析大分子物质时，分离通常可以在几分钟内完成。无机基质的整体柱一般采用硅胶以及在硅胶表面键合的反相填料，柱床中既有供流动相流过的粗孔(约2 μm)，又有便于溶质进行传质的中孔(几十个纳米)，如图5(来源于Merck 的目录资料)所示。市场上商品化的整体柱产品不多，如Chromolithsup® /sup整体柱，该柱子具有非常低的柱压和较高的基质耐受能力，因此在普通高效液相色谱仪以及超高效液相色谱仪上都可以兼容。由于粗孔的存在，流动相流过整体化柱床时的压力非常低，这有利于提高流速来获得快速分析的结果，即使在9 mL· minsup-1 /sup的流速条件下，最高压力也不会超过20 MPa。/pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201709/insimg/658e3259-e0e5-441f-97c1-a21ecf590ff8.jpg" title="图5_副本.jpg"//pp style="text-align: center "　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "图5　整体化色谱柱Chromolithsup® /sup的表面电镜放大图/span/strong/pp　　strongspan style="color: rgb(112, 48, 160) "2.4　不同选择性的色谱固定相/span/strong/pp　　由于反相色谱分离基于多种作用力的结果，不同键合相或同一种键合相但不同的硅胶基质、封端技术和键合技术，其疏水作用、空间位阻、氢键作用、静电作用、π-π作用、偶极-偶极作用等能力不同，对化合物的分离能力不同，故而表现出不一样的选择性。比如，在碳链中嵌入极性的酰胺基团，不仅能够使键合相的水相兼容性增加，而且可以提高化合物与固定相之间的氢键作用能力，使之获得与普通C18 填料不一样的选择性。这样的色谱柱有ZORBAX Bonus RP 和Waters Symmetry shield 等。Huawei Gu等利用Bonus RP 色谱柱与其他常规碳链反相色谱柱选择性的不同，使用二维液相色谱实现复杂体系的分离。又如，苯基柱可以提供π-π 作用，用于含有苯环或能提供π 键作用的结构类似物分析 而五氟苯基(Penta Fluorophenyl Propyl，PFP)柱(则除了提供π-π 作用外，还可以提供偶极作用、静电作用等，提高了苯环上位置异构体的分辨能力。/pp　　一般硅胶基质填料的固定相其pH适用范围为2~8。为提高硅胶基质的填料键合相在酸性条件下的稳定性，一般在碳链的硅烷基侧链上采用大体积的有机基团进行保护，比如采用双异丁基或双异丙基的侧链保护，使得此类色谱填料能够稳定地用于pH0.8~8 的流动相体系中，而不会导致硅烷键的流失。如中国药典方法中，洛伐他汀、氢溴酸右美沙芬等在较低pH 条件下，使用这类的色谱柱可以获得较好的耐用性。/pp　　在提高硅胶基质填料碱性稳定性方面，除了使用致密键合、双配位键合以及双重封端等技术，还使用硅胶- 有机杂化颗粒，或者在硅胶表面进行聚合物包覆，提高硅胶在碱性条下的稳定性，同时降低硅　　醇基在碱性条件下的解离，避免碱性化合物拖尾。近期推出能够耐受高pH 稳定性的Poroshell HPH-C18(2.7 μm)和C8 填料(4 μm)，这种填料兼顾了表面多孔型填料和硅胶表面有机杂化的优势，具有高柱效、宽pH 耐受范围(2~11)的优势。/pp　　strongspan style="color: rgb(112, 48, 160) "2.5　多种分离模式的应用/span/strong/pp　　目前液相色谱中主要应用的依然是反相色谱，不过随着色谱技术的发展和分析要求的提高，其他一些分离模式正逐步得到更加广泛的应用，如亲水作用色谱(HILIC)、超临界流体色谱(supercritical　fluid chromatography，SFC)、临界点色谱(liquid chromatography at critical condition，LCCC)和多维色谱技术等。/pp　　HILIC 是近年来逐渐被认可的一种强极性化合物分离方法，它是基于极性化合物在色谱固定相表面水层和流动相之间进行的亲水分配作用达到保留的一种分离模式。在HILIC分离中，流动相中水的比例越小，则洗脱能力越弱 反之，洗脱能力越强。化合物的极性越小，则保留越弱 反之，则保留越强。HILIC 模式可以跟任何检测器兼容，并能提高质谱的灵敏度，避免使用离子对试剂，避免进行衍生化，是极性化合物分析最有潜力的分离模式。HILIC 模式一般采用高纯硅胶、硅胶表面键合二醇基、酰胺、两性离子基团等基团或极性聚合物等为固定相，而采用高比例的有机相为流动相。/pp　　SFC 是以超临界流体作为流动相的一种色谱技术，该技术具有高效、快速、操作条件易于变换等特点，非常适合于手性药物的分离。几乎所有的液相色谱柱都可以用于SFC，常用的有硅胶柱(SIL)、氨基柱(NH2)、氰基柱(CN)、2- 乙基吡啶柱(2-EP)等以及各种手性色谱柱，某些应用也会使用C18、C8等反相色谱柱和各种毛细管色谱柱。/pp　　LCCC 法是根据聚合物的功能基团、嵌段结构的差异进行聚合物分离的一种色谱技术。LCCC 法的原理是基于临界点之上、临界点之下以及临界点附近的标度理论。当使用多孔填充材料作为固定相时，分子排阻色谱(size exclusion chromatography，SEC)和相互作用色谱(interaction chromatography，IC)的分离机制在分离聚合物时同时发生作用。在某个特殊色谱条件(固定相、流动相组成、温度)下，存在2 种分离机制的临界点，被称为焓熵互补点或色谱临界条件(critical conditions)或临界吸附点(critical adsorption　point，CAP)。在这一点，聚合物分子按照分子末端功能基团的不同或嵌段结构的差异分离，与分子的聚合物摩尔质量(分子量)无关，聚合物的洗脱体积等于色谱柱的空隙体积。目前，这一技术成功用于脂溶性聚合物的分析，对于水溶性聚合物的应用研究有待深入和扩展。为适应大分子量聚合物的分离需要，比常规孔径、粒径大得多的填料和更宽柱径的色谱柱也应随之出现。/pp　　另外，当样品组分非常复杂时，使用一种分离模式进行分离变得非常困难，多维色谱应运而生。多维色谱又称为色谱/ 色谱联用技术，是采用匹配的接口将不同分离性能或特点的色谱连接起来，第1 级色谱中未分离开或需要分离富集的组分由接口转移到第2 级色谱中，第2 级色谱仍需进一步分离或分离富集的组分，也可以继续通过接口转移到第3 级色谱中。实际上，一般选用2 个合适的色谱联用就可以满足对绝大多数难分离混合物样品的分离或富集要求。因此，通常的色谱/ 色谱联用都是指二维色谱。/pp　　若2 种色谱的联用仅是通过接口将前一级色谱中某一(些)组分传递到后一级色谱中继续分离，这是中心切割式二维色谱(heart-cutting mode twodimensional chromatography)，一般用C+C 表示。但当2 种色谱联用，接口将前一级色谱中的全部组分连续地传递到后一级色谱中进行分离，这种二维色谱称为全二维色谱(comprehensive two-dimensional chromatography)，一般用C× C 表示。C+C 或C× C 2种二维色谱可以是相同的分离模式和类型，也可以是不同的分离模式和类型。接口技术是实现二维色谱分离的关键之一，原则上，只要有匹配的接口，任何模式和类型的色谱都可以联用。/pp　　常见的二维液相色谱(2D-LC)是将分离机制不同而又相互独立的2 支色谱柱串联起来构成的分离系统，通过柱切换技术实现样品在一维和二维色谱柱之间的流动。例如，将2D-LC 应用于复杂基质的中药材及中药复方制剂的分析，可显著提高色谱柱的峰容量和色谱峰鉴定的可靠性，降低色谱峰重叠，使分离效率与分析通量大大提高。通常会将反相/ 反相、正相/ 反相、离子交换/ 反相和手性/ 非手性等形成正交关系的色谱柱用于2D-LC 分离。使用反相/ 反相模式进行二维色谱分离时，使用不同pH或缓冲盐可以获得正交的分析结果。/pp　　因此，广大色谱工作者面临的问题是：如何选择合适的色谱柱以满足各种分析的要求，如何利用现有设备发挥更快的分析效率，如何利用不同色谱柱选择性的差异获得更好的选择性、分离度和柱效。/pp　　span style="font-family: 黑体, SimHei "注：近年来，液相色谱柱技术发展的非常迅速，这同时也促进了高效液相色谱法在药物分析中更为广泛的应用。据统计，一个典型的制药企业甚至可能会拥有成百上千支液相色谱柱，在一种药物分析方法的开发过程中，如何选择适当的色谱柱往往会给实验人员带来很多困扰。/span/ppspan style="font-family: 黑体, SimHei "　　本文献原文刊登于《药物分析杂志》2017年37卷第2期，作者为洪小栩、石莹、宋雪洁等八人，分别来自国家药典委员会、扬子江药业、安捷伦科技和江苏省食品药品监督检验研究院等单位。本文为该文献的第二部分，详细介绍了液相色谱填料近年来的技术进展情况。仪器信息网后续还将发布该论文其余内容，为广大色谱柱用户以及色谱柱供应商提供相关参考。/span/ppbr//p

在了解了华谱科仪液相色谱产品生态链、色谱质谱产品线和耗材产品线后，今天华谱科仪售后部总监陈浩先生带大家了解华谱科仪液相色谱产品生态链中应用支持和售后服务部分。液相色谱产品生态链华谱科仪售后部总监 陈浩应用支持“有了稳定可靠的仪器和满足客户需求的耗材，专业的应用支持也是非常重要的。”陈浩先生说。目前，华谱科仪已建成20人左右的应用支持团队，可全面覆盖各行业用户的需求，从液相色谱到液质联用，从谱图文集到应用解决方案。基于仪器、耗材和软件系统，华谱科仪应用支持团队建立了包括中药、化药、食品、环境等领域各类标准的SOP方案，确保实验方法的高重现性。另外对于客户实验中出现的应用问题和需要方法开发的项目，华谱科仪能够提供专业的应用支持，协助客户解决问题；针对特定领域、特定方案，华谱科仪能够提供驻场服务，让项目真正落地执行。目前华谱科仪和各领域专家合作开发了包括二维/三维液相色谱仪检测奶粉中维生素ADE、植物源性产品中木二糖的测定（亲水保留色谱法）等多个检测方法和国标方法，得到大家的广泛好评。在培训服务方面，华谱科仪也开设有液相色谱仪、质谱仪理论及定制化内容培训班，在基础应用领域满足客户一站式培训需求。售后服务“在有了硬件、软件、耗材和应用支持后，还需要售后服务来维系整个流程的正常运转。”陈浩先生说。目前，华谱科仪售后团队由30多名工程师组成，可以覆盖全国90%的地区，全国有5个配件库及固定维修点，以保证更快更有效的服务用户。经过几年的努力，华谱科仪售后团队建立了一套符合中国国情的服务标准和管理体系。2019年通过了ISO9001认证及售后五星级服务认证。华谱科仪售后服务分布情况华谱科仪售后团队一直以用户为中心，标准化服务为导向，致力于打造科学仪器售后服务第一品牌。多年来，扎根现场，深耕液相色谱、质谱及相关行业，急用户之所急，想用户之所想。对于工程师的现场服务，华谱科仪有一套科学、标准化的流程，力保每一位接受服务的用户都得到完美的体验。华谱科仪的售后服务内容包括仪器的安装、仪器的维修与保养、仪器的3Q认证、仪器搬家和软件合规性验证等内容。除标准的服务内容外，售后团队还根据不同用户需求，定制化的推出驻场服务等更偏向实际使用场景的相关业务。陈浩先生表示，应用支持和售后服务部门是最接近用户的部门，也是最了解用户需求的部门，是公司理念和产品优势的传播者和实施者。应用支持和售后服务在整条液相产品生态链中起到了承上启下的作用。未来，华谱科仪应用支持团队和售后服务团队将继续坚持以用户为本，以维护品牌形象为出发点，着眼于用户使用体验和满意度，为硬件、软件产品和客户之间架起一座稳固的桥梁。华谱科仪将有重磅新品于近期发布，敬请期待！

问什么是液相系统的梯度滞留体积？它对分析有什么影响？答：梯度滞留体积是梯度混合点到柱子进口之间的体积。这个体积导致梯度有一定延迟，因而也叫做梯度延迟体积。现在很多液相系统都是单泵低压梯度系统，就是说梯度是在泵的上游混合 的。梯度延迟体积的第一个部分是梯度混合器的体积。这样，你就要加上梯度混 合器和泵头之间的连接体积。第二个是泵头的体积，然后是进样器的连接管路。通常，这个体积增大一点来充分混匀流动相而使梯度平滑一点。进样器到进样器 和柱头之间的体积是另一个部分。看看在通常的低压梯度系统中，梯度滞留的地 方相当多… 也可以再高压一边产生梯度。这zui少需要2个泵，可以尽量减少梯度延迟体积。但是高压梯度系统不是这样设置的。通常，连接位置在进样器之前。好处是样品不管怎么样都能进入柱子，而不用依赖哪个泵的流速。zui好是用初始流动相来溶解样品，这样梯度延迟体积可以完全不记了。这个技术的一个小缺点就是样品会被流动相的第二个组分稀释一点点，但是如果初始流动相是90%的流动相A的话这个问题就很小了，只稀释了10%。另一个问题是通常大部分峰会聚集在柱头，这样在开始的等度洗脱中只有一小部分峰被洗脱下来。这时，我们要确保进样器与柱头之间的体积要足够小。高压梯度系统就没有这种问题。下面我们来讨论一下梯度延迟体积怎样影响分析！由于梯度到达柱子需要时间，因此梯度一开始就延迟了，开始这段时间就是跑等度。di一个影响就是前面 的峰换个系统后保留时间可能就不一样了。如果梯度延迟时间比较明显，那么色谱图中前期的峰就会明显不同，而梯度后期则与延迟体积不怎么相关。但是洗脱时间还是会随梯度延迟时间改变。这些情况都很让人头疼。这就是为什么在QC实验室中避免使用梯度的原因。毕竟样品时通过保留时间来定性的，如果换仪器后保留时间不一样，那么就不好判断了。当然也可以通过标准品的保留时间来判断，但是还是不叫复杂… .问我同意，那确实有点复杂，但也不是无法克服的。还有其他要考虑的吗？答：如果在低压系统中混合体积较大，那么你观察到的梯度图谱不会很尖锐。这通常不会影响标准线性梯度，但是如果是阶梯状的梯度就会影响洗脱了。通常用延迟体积小的梯度系统，现在很多HPLC系统的梯度延迟都很小。对于循环时间小的非常快速的梯度，即使延迟体积再小也不够。这时可以采 用延迟进样技术。理论上，梯度还是按通常的运行，但是直到梯度到达进样器时才进样。这样就想没有梯度延迟体积一样。当然进样环以及进样器到柱头的管路的体积还是有一定的延迟，但是小的可以忽略了。当梯度运行完后，柱子会重新开始平衡，也是有延迟。所以我们不用等到柱子重新平衡好后再开始新的梯度，我们只要知道设计的程序，泵的运行与柱头实际发生的不一样就行了。梯度运行和柱子再平衡被排空梯度延迟体积抵消了。这个解决方法让我们可以在单泵系统中实施没有延迟的快速梯度。另外，如果在不同的仪器上运行同样的梯度，延迟体积造成的影响会很小。这样我们就可以在不同的仪器上重复梯度。当然，以上都是假设梯度发生器稳定工作，可重复并且能确实按要求工作。问怎么测量梯度延迟体积呢？怎么确定系统的梯度确实是想要的呢？答：有个标准测试非常有用，参考《JJG 705 2014液相色谱仪检定规程》中对梯度检定的部分。不接柱子，在流动相B中加少量的UV吸收剂0.1%丙酮，然后运行梯度。这可以观察真实的梯度。从程序与实际的差别中可以检测到系统的梯度延迟体积。如果你采用延迟进样，你就必须要了解这点。对系统了解的越多，在梯度分析中浪费的时间就会越小。

p　　现代高效液相色谱分析中，色谱柱的选择直接影响了分离效果的好坏，选择合适的色谱柱可以缩短方法开发所需的时间，并且使方法更具稳定性。但是现在市场上色谱柱种类繁多，不同类型的色谱柱分离对象不同，因此，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。/pp　　色谱柱参数/pp　　物理性质/pp　　柱长，内径，如250*4.6mm。一般柱长在2—250mm，柱越长，分离度越高，但柱压更高，分离所需时间更长 但分离度与理论塔板数的平方根成正比，所以一昧增加柱长并不是最有效的分离手段，一般情况下，150mm、5um的填料可以提供足够的塔板数。/pp　　centerimg alt="最全的液相色谱柱知识分享和选择技巧 你值得拥有！" src="http://images.ofweek.com/Upload/News/2017-07/28/nick/1501205781977068668.jpg" width="640" height="195"//centerp/pp /pp　　粒径，影响色谱分离度。粒径越小，分离越快，柱效越高，但柱压力越高，柱容易被污染，导致柱寿命降低。常见分析柱通常使用5um填料，复杂的多组分样品分离一般使用3.5um粒径，更大内径的制备色谱柱通常使用更大的粒径。如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同条件下的5um填料的柱效提高近30% 然而，3.5um的色谱柱的背压却是5um的2倍，因此如何选择填料粒径需要根据现实情况而定。/pp　　centerimg alt="最全的液相色谱柱知识分享和选择技巧 你值得拥有！" src="http://images.ofweek.com/Upload/News/2017-07/28/nick/1501205794940065273.jpg" width="268" height="153"//centerp/pp /pp　　孔径，60A，120A，300A等。孔径小，则含孔率高，比表面积大，载碳量高 色谱柱填料孔径大小需和分子大小相匹配，保证分子自由进出填料孔并与孔内表面的键合相进行分离分配，通常要求孔径直径是分子直径的3倍以上，一般小分子使用80—120A，大分子使用300A。/pp　　centerimg alt="最全的液相色谱柱知识分享和选择技巧 你值得拥有！" src="http://images.ofweek.com/Upload/News/2017-07/28/nick/1501205810572019417.jpg" width="336" height="186"//centerp/pp /pp　　颗粒形状，一般有球形和不规则形，当使用黏度较大的流动相时，球形颗粒可以降低柱压，延长色谱柱寿命。/pp　　centerimg alt="最全的液相色谱柱知识分享和选择技巧 你值得拥有！" src="http://images.ofweek.com/Upload/News/2017-07/28/nick/1501205819292003604.jpg" width="428" height="166"//centerp/pp /pp　　比表面积，指的是每克填料的表面积，如180m2/g—350m2/g，与粒度和含孔率有关 比表面积大，会增加样品与键合相之间的反应，增加保留和分离度 比表面积小则可以缩短分析时间和平衡时间，并不是比表面积大或者小就更好，需要选择合适的比表面积。/pp　　化学性质/pp　　硅胶基质：最通用的基质，强度大，化学修饰容易，但使用的pH值范围有限(一般为2—8，特殊修饰的可以达到1—12)。/pp　　聚合物基质：多为聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂，化学稳定，应用pH范围宽，具有更强的疏水性，对蛋白质等样品分离效果较好 但强度较小，有机溶剂可能导致聚合物溶胀而受损，批次重复性较差，商品化色谱柱不多，一般价格较贵。/pp　　载碳量：基质表面键合相的比例，载碳量高，则保留增加，适合分析非极性化合物。/pp　　键合相：键合试剂不同，对化合物的选择性不同，一般长链的烷基键合相(C18 C8)比短链的(C4 C3)稳定 非极性的键合相比极性的键合相(-NH2)稳定。/pp　　封端：用短链将裸露的硅羟基键合后封闭起来，以减少残留的硅醇基，减轻待测组分与酸性硅羟基反应而引起的色谱峰拖尾现象。尤其对于极性样品而言，未封端处理的色谱柱分离效果较差。/pp　　正相& 反相色谱/pp　　目前市场上主要以反相色谱为主，约占80%的比例。 /pcenterimg alt="最全的液相色谱柱知识分享和选择技巧 你值得拥有！" src="http://images.ofweek.com/Upload/News/2017-07/28/nick/1501205763928073622.png" width="621" height="98"//centerp　　在了解了色谱柱的基本知识后，色谱柱的选择也就迎刃而解了。/pp　　柱长及内径的选择/pp　　长度的选择：柱越长，总柱效越高(n值越大)，柱越长，分析时间也越长。250—300mm是最普遍的柱长，实验室一半以上的工作都是采用此规格柱子，一般用来分离l0到50个组份的中等至复杂混合物 500—600mm，要求较高分辨率的应用，—般用来分离大于50个组份或包含有难分离物质的复杂样品程序升温分析。/pp　　内径：柱效率与柱半径平方成反比，内径越小柱效越高，但内径越大，柱容量也增加，允许进样量就越多。当进样量超过柱容量时，则因柱内每块理论板内不能建立真正的平衡，将会导致色谱蜂畸变，柱分辨率降低，重现性不好。因此对于复杂样品需要精确分离，必须使用小内径柱子。另一方面若样品中存在具有很不相同浓度组份化合物，为了增加样品容量就必须使用内径大的柱子，目前实验室使用最常见的柱子内径一般是4.6mm。/pp　　一般选择原则：分析大分子量化合物选择大孔径色谱柱 对于高pH值或者碱性化合物需要选择高封端或者特殊封端的色谱柱，以改善峰形，延长色谱柱使用寿命等。/pp　　现在商品化的液相色谱柱琳琅满目，根据色谱柱的参数可以给我们提供一个初步的选择，但由于各个仪器厂商的填料技术和键合技术都有差异，即使都是C18柱，同一品牌不同系列都有不同的功能，有能耐受低pH值的、有耐高温的、有适合碱性样品的等等。所以在选择色谱柱前要好好研究色谱柱参数，仔细阅读色谱柱说明书，才能找到合适的色谱柱和适宜的分离方法。/p/p/p/p/p

液相色谱常见问题及处理方法 HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法 1、样品量不足，解决办法为增加样品量 2、样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子 3、样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器 4、检测器衰减太多。调整衰减即可。 5、检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数 6、检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。 7、检测池中有气泡。解决办法为排气。 8、记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。 9、流动相流量不合适。调整流速即可。 10、检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。 为什么HPLC柱柱压过高 柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。 1、拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查； 2、把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查； 3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查； 4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。 一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne 7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。 液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？ 1、筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。 2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子 如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化 漂移现象 1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定 2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡 快速变化现象 1. 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定 2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。 3、流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合 HPLC 仪器问题 1、 我的HPLC泵压明显的偏高，请问可能的原因？ 答：流速设定过高；流动相或进样中有机械杂质，造成保护柱、柱前筛板或在线过滤器阻塞；流动相粘度过大；柱温过低；缓冲盐结晶；压力传感器故障。 2、 基线不稳，上下波动或漂移的原因是什么，如何解决？ 答：a.流动相有溶解气体；用超声波脱气15-30分钟或用充氦气脱气 　　b.单向阀堵塞；取下单向阀，用超声波在纯水中超20分钟左右，去处堵塞物 　　c.泵密封损坏，造成压力波动；更换泵密封 　　d.系统存在漏液点；确定漏液位置并维修 　　f.柱后产生气泡；流通池出液口加负压调整器 　　g.检测器没有设定在最大吸收波长处；将波长调整至最大吸收波长处 　　h.柱平衡慢，特别是流动相发生变化时；用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。 3、 接头处为何经常漏液，如何处理？ 答：接头没有拧紧；拧松后再紧，手紧接头以手劲为限，不要使用工具，不锈钢接头先用手拧紧，再用专用扳手紧1/4-1/2圈，注意接头中的管路一定要通到底，否则会留下死体积。接头被污染或磨损；建议更换接头。接头不匹配，建议使用同一品牌的配件。 4、 进样阀漏液是如何造成的？ 答：a.转子密封损坏；更换转子密封 　　b.定量环阻塞；清洗或更换定量环 　　c.进样口密封松动；调整松紧度 　　d.进样针头尺寸不合适，一般是过短；使用恰当的进样针（注意针头形状） 　　e.废液管中产生虹吸；清空废液管 谱图问题 1、 问：造成峰拖尾的原因是什么，如何消除？ 答：a.筛板阻塞；反冲色谱柱、更换进口筛板 　　b.色谱柱塌陷；填充色谱柱 　　c.有干扰物质的存在；使用更长的色谱柱、改变流动相或更换色谱柱 　　e.流动相PH值不合适；调整PH值，对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰 　　f.样品与填料表面的溶化点发生反应；加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂或更改色谱柱 2、 问：造成峰分叉的原因是什么，如何消除？ 答：保护柱或分析柱污染；取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。样品溶剂不溶于流动相；改变样品溶剂，如果可能采取流动相作为样品溶剂。 3、 问：K值增加时，拖尾更严重，这是为什么？ 答：反相模式，二级保留效应； 　　a.加入三乙胺（或碱性样品） 　　b.加入乙酸（或酸性样品） 　　c.加入盐或缓冲剂（或离子化样品） 　　d.更换一支柱子 4、 问：保留时间的波动有几种可能的原因？ 答：温控不当；调节好柱温。流动相组分变化；防止流动相蒸发、反应等，做梯度时尤其要注意流动相混合的均匀。色谱柱没有平衡；在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。 液相色谱常用符号与术语表 ACN 乙腈 Acetonitrile AUFS 满量程的吸光度单位 Absorbance units, full scale As 峰不对称因子 B 二元流动相中的强溶剂；例如：反相HPLC的甲醇/水混合液中的甲醇 BSA 牛血清白蛋白（一种蛋白质） Bovine serum albumin CAF 咖啡因（中性溶质） Caffeine CRF 色谱响应因子 Chromatographic response function；色谱图总分离度的定量指标 dc 色谱柱内径（cm） DMOA 二甲基辛胺 Dimethyloctylamine DNB 2,4-二硝基甲酰（基） 2，4-Dinitrobenzoyl dp 色谱柱填料的粒度（cm） DRYLAB 液相资源公司（LC Resources INC.)的计算机模拟软件。DRYLAB I用于等度预测，DRYLAB G用于梯度预测 F 流动相的流速（ml/min） FC-113 1，1，2-三氟-1，2，2-三氯乙烷 GPC 凝胶渗透色谱法 Gel-permeation chromatography HA 酸性溶质，能电离出A- Hex 己烷 Hexane hr 二相邻谱带之间的谷高 HVA 高香草酸 Homovanillic acid h&rsquo 峰高 h1,h2 相邻谱峰1和谱峰2的峰高 IEC 离子交换色谱法 Ion-exchange chromatography IP 离子对 Ion-pair IPC 离子对色谱法 Ion-pair chromatography J 色谱峰强度参数 K&rsquo 所给谱峰的容量因子，k&rsquo =(tR-t0)/t0=tR&rsquo /t0，tR=t0(1+k&rsquo ) k 梯度洗脱过程中，某溶质的k&rsquo 的平均值或有效值 kw 以水做流动相k&rsquo 的外推值 k1,k2 相邻谱峰1和谱峰2的容量因子 L 色谱柱长度（cm） Lc 检测器流动池光路的长度（cm） M 溶质的分子量 MC 二氯甲烷 Methylene chloride MDST 混合设计统计技术 Mixture-design statistical technique；一种优化流动相的软件 MeOH 甲醇 Methanol MTBE 甲基叔丁醚 Methyl-t-butyl ether MW 溶质的分子量 N 色谱柱塔板数 NAPA N-乙酰普鲁卡因胺 N-Acetylprocainamide（碱性溶质） N0 检测器的基线噪音 ODS 十八烷基硅烷 Octadecylsilyl P 色谱柱的压力降[通常以巴（bar）表示，也用psi；另外，也用作柱极性参数 PA 普鲁卡因胺 Procainamide（碱性物质） PAH 聚芳香烃 Polyaromatic Hydrocarbon PESOS 优化流动相的计算机软件（美国Perkin-Elmer产品） pKa 溶质酸性常数的负对数；当pH=pKa时，溶质中有一半是电离的 Rk 保留值范围，Rk=（最末谱峰k&rsquo ）/（最初谱峰k&rsquo ） RRM 相对分离度图（通常N=10000） Rs 相邻二谱峰的分离度 S 当流动相中的%B改变时，测量溶质保留值的变化速率的参数 SAL 水杨酸 Salicylic Acid SEC 尺寸排阻色谱法 Size-exclusion chromatography S/N 信噪比 Signal to noise ratio t 分离时间（min）（样品进样时t=0） tp 梯度系统的滞后时间（min） TBA 四丁基铵离子 Tetrabutylammonium ion TEA 三乙胺 Triethylamine THF 四氢呋喃 Tetrahydrofuran tk 在用于校正等度洗脱溶剂强度的流动相离开梯度混合器时，梯度洗脱的时间 TLC 薄层色谱法 Thin-layer chromatography TMA 四甲基铵 Tetramethylammonium（盐） TMS 三甲基硅烷 Trimethylsilyl t0 色谱柱的死时间（min） tR 溶质的保留时间（min） tG 梯度时间（min），即梯度开始至结束的时间 t1,t2 相邻谱峰1和谱峰2的保留时间（min） ti 色谱图中第一峰的保留时间（min） tf 色谱图中最末峰的保留时间（min） △tg tf-ti tx (tf-ti)/2 UV 紫外光 Vm 色谱柱的死体积（mL），Vm=t0F VMA 香草扁桃酸 Vanillymandelic acid wm 化合物的进样量 w1,w2 相邻谱峰1和谱峰2于半峰高处（W1/2）的宽度（min） W1,W2 相邻谱峰1和谱峰2的基线宽度（min） W1/2 半峰高处的谱带宽度 xd,xe,xn 溶剂选择参数，分别用于测定溶剂的酸度、碱度和偶极性的程度 ? 分离因子，?=k2/k1 △? 梯度洗脱期间流动相成分的变化 ?o 溶剂强度参数 ? 化合物的克分子吸收系数 ? 流动相的粘度（Pa?s) ? 流动相中强溶剂的体积份数%B 二元流动相中强溶剂的体积百分比（%v） 液相色谱法简介 气相色谱不能由色谱图直接给出未知物的定性结果，而必须由已知标准作对照定性。当无纯物质对照时，定性鉴定就很困难，这时需借助质谱、红外和化学法等配合。另外大多数金属盐类和热稳定性差的物质还不能分析。此缺点可高效液相色谱法来克服。在经典液相色谱的基础上，引入了气相色谱的理论与技术，在70年代初建立了高效液相色谱分析法（以HPLC表示）。在常压下操作的液相色谱，分离一个样品往往长达几小时至几十小时，因此工作效率很低。人们曾对这种经典液相色谱法试用了柱前加压或柱后减压的办法来提高流速，以缩短分离时间，但是结果失败了。根据液相色谱理论，因为随着载液（流动相）流速的提高，板高则增大，所以柱效会显着降低。随着生产技术的提高，人们制成了细小（10?m）而高效的填充物，从而使柱效大大提高。但是随着填充物粒度的减小，柱压降显着增大，为了得到合理的载液流速，使用了高压；输液泵，使流速达到1~10mL/min。从而使分析一个多组分样品只需几分钟到几十分钟时间。随着高效固定相、高压泵和高灵敏度检测器以及电子技术和计算机技术的应用，70年代以业逐步实现了液相色谱分析的高效、高速、高灵敏和自动化操作。因此人们常称它为高效液相色谱或现代液相色谱，以区别于经典液相色谱。高效液相色谱法的分类与经典液相色谱法一致。按固定相的聚集状态不同分为液固色谱法和液液色谱法。按分离原理不同分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶色谱法四类。 高效液相色谱所用基本概念： 保留值等色谱分析有关术语，以及分配系数、分配比、塔板高度、分离度、选择性等方面均与气相色谱相一致；高效液相色谱所用基本理论：塔板理论与速率理论也与气相色谱一致。因液相色谱以液体代替气相色谱中的气体作流动相，则速率议程H=A+B/?+C?。式中：纵向扩散项（分子扩散项）B/?对板高的影响与气相色谱不同，由于液相色谱中组分分子在流动相中的扩散系数Dm仅为气相色谱中的万分之一，因此纵向扩散项对板高的影响可以忽略不计。于是影响液相色谱的主要因素是传质项Cu。由图14&mdash 可知，气相色谱（GC）的流动相流速u增大时，板高H显着增大（即柱效显着降低），而液相色谱（LC）的流速增大时，板高增大不显着（即柱效降低不显着）。这说明高效液相色谱也有很高的分离效能，此外，气相色谱的载气权数种，其性质差别也不大，对分离效果影响也不大。而液相色谱的载液种类多，性质差别也大，对分离效果影响显着。因此流动相的选择很重要，并且在选择流动相对应注意以下几点：流动相对样品有适当的溶解度，但不与样品发生化学反应，也不与固定液互溶；流动相的纯度要高（至少分析纯）、粘度要小，以免带进杂质和组分在流动相中扩散系数下降；流动相应与所用检测器相匹配，不应对组分检测产生干扰作用。高效液相色谱不但具有高效、高速、高灵敏度的特点，还由于它的流动相（载液）种类比气相色谱的流动相（载气）多，因此可选用两种或多种不同比例的液体作流动相，从机时可提高选择性。此外，液相色谱的馏分比气相色谱易于收集。便于为红外、核磁等方法确定化合物结构提供纯样品。由于高效液相色谱法具有以上特点，它适于分离、分析沸点高、热稳定性差、分子量大（大于400）的气相色谱法不能或不易分析的许多有机物和一些无机物，而这些物质占化合物总数的75~80%。因此它已广泛用于核酸、蛋白质、氨基酸、维生素、糖类、脂类、甾类化合物、激素、生物碱、稠环芳烃、高聚物、金属螯合物、金属有机化合物以及多种无机盐类的分离和分析。但是，高效液相色谱的固定相的分离效率、检测器的检测范围以及灵敏度等方面，目前还不如气相色谱法。此外对于气体和易挥发物质的分析方面也远不如气相色谱法，因此高效液相色谱法和气相色谱法配合使用可互相取长补短，相辅相成。 1.分离原理 凝胶色谱，又称空间排阻色谱。它是利用某些凝胶对混合物各组分因分子量不同，其阻滞作用也不同而进行分离、分析的方法。凝胶色谱的分离要理和其它色谱法不同，它类似于分子筛的作用，但凝胶的孔径要比分子筛大得多，一般为几百至几千埃。色谱柱内填充具有一定大小孔穴的凝胶。当样品进入色谱柱后，不同大小的样品分子（图14&mdash 2中以黑点表示）随流动相沿凝胶颗粒（图14&mdash 2中以空心圈表示）外部间隙和凝胶孔穴旁流过，体积在的分子因不能渗透到凝胶孔穴里而得到排阻，因此较为顺利地通过凝胶柱而较早地被流动相冲洗出来。中等体积的分子产生部分渗透作用，小分子可渗透到凝胶孔穴里去而受阻滞，因有一个平衡过程而较晚地被流动相冲洗出来。这样，试样组分基本上按分子大小受到不同阻滞而先后流出色谱柱，从而实现分离目的。光凝胶色谱采用水溶液作流动相进，称为过滤凝胶色谱（HFC），而用有机溶剂为流动相时，称为凝胶渗透色谱（GPC）。 2．固定相 凝胶色谱的固定相凝胶，是含有大量液体（一般是水）的柔软而富于弹性的物质，是一种经过交联而具有立柱网状结构的多聚体。根据凝胶的交联程度和含水量的不同，分了软质、半硬质和硬质三种。软质凝胶（如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶等）交联度低，膨胀度大，容量大，可压宿，不能用于高压（使用压力低于3.5kg/㎝2或更低），主要用于含水体系的常压凝胶色谱，半硬质凝胶（如苯乙烯一二乙烯基苯交联共聚凝胶），容量中等，渗透性较高，压力可用到70kg/㎝2。适用于非水溶剂流动相；硬质凝胶（如多孔硅胶、多也玻球等），膨胀度小，不可压缩，渗透性好，可耐高压，适于高流速下操作。 3．流动相 在凝胶色谱中，为提高分率效率，多采用低粘度、与样品折光指数相差大的流动相。常用的流动相有苯、甲苯、邻二氯苯、二氯甲烷、1，2一二氯乙烷、氯仿、水等。 高效液相色谱仪操作步骤： 1)、过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。 2)、对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 3)、打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。 4)、进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。 5)、有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。 6)、调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。 7)、设计走样方法。点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。 8)、进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。 9)、关机时，先关计算机，再关液相色谱。 10)、填写登记本，由负责人签字。 注意事项： 1)、流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。 2)、柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。 3)、所有过柱子的液体均需严格的过滤。 4)、压力不能太大，最好不要超过2000 psi。

高效，准确，稳定的UHPLC，珂睿科技推出首款国产超高效液相色谱仪——UHPLC GEMINI系列，致敬专业而诚恳的实验室劳动者。（珂睿科技UHPLC GEMINI超高效液相色谱系统） 近三年的基础理论研究；1700余篇文献研读；近千个零件的精细打磨；第一台原型机联合调试，并完成14个月24小时不间断耐久性测试，耗时43个月，从这个角度看，我们并不算高效。（珂睿科技大事件时间表） 但是，也是在这段时间中，我们攻破了液相色谱超高压输液系统难关，成功研发生产超高压双柱塞串联泵，压力指标可达20000psi；自主研发的压力传感器，用超级计算机仿真优化获得最优几何结构，并掌握压力传感器弹性体特种钢材的处理工艺，配合智能动态调节算法最大限度降低压力脉动，实现了输液稳定性。 （珂睿科技UHPLC GEMINI超高效液相色谱仪输送单元） 进样单元：可选流通针式进样或定量环进样，采用针内外壁清洗，有效控制交叉污染。柱管理器：采用包覆盖式加热方式，准确调节色谱柱周围温度。检测器：PDA检测器，可靠光源，自主研发生产的光源控制器，保证光源稳定输出和使用寿命。高精度光栅，全反射流通池，使检测器性能稳步提升。（柱管理器实拍图和PDA检测器基线噪声图）色谱工作站：联手Data Apex，基于Clarity平台的色谱工作站，可采集、处理、分析色谱测试数据。 （色谱工作站操作示意图）目前，珂睿科技已经获得多所知名高校，国家重点科研单位的认可，成为他们科学研究中的必备工具。 珂睿科技

概述制备色谱（Prep-LC）以其高分离效率，重现性和低溶剂消耗而闻名，是一种纯化技术。来自中国的色谱专家团队应用了传质动力学建模和吸附等温线，以改善该技术的缺点之一，即超载导致的非线性，这是纯化工艺发展的重要问题。保持直率对于药物提取，纯化仍然是一个巨大的挑战，因为结构相似的化合物可以共存于基质中，特别是对于从生物发酵或多肽合成中获得的药物而言。Prep-LC广泛用作分离和纯化技术，但是由于过载导致的非线性（用于提高通量）对于开发高效的纯化过程一直存在问题。为了克服这个问题，来自中国西南医科大学的一组研究人员选择了羟基酪醇（与橄榄果和叶片中橄榄苦苷水解产生的其他成分同时生成）作为模型化合物，用于系统地开发纯化方法。甲醇和乙醇用作有机改性剂，并在三种商用色谱柱C8TDE，C18ME和C18TDE上确定了最佳流速。曲线用van Deemter方程拟合，并对A，B和C项进行了全面分析。然后研究了吸附等温线，并提出了最合适的基于制备液相色谱的羟基酪醇纯化方法。纯化方法的开发与优化使用Shimadzu Prominence-i9（LC-2030）系列仪器进行HPLC分析，该仪器配备有脱气器，低压梯度仪，混合器，自动进样器和柱箱，并与UV检测器相连。在配备P680A泵，低压梯度仪，带有500μL样品定量环的手动进样器，TCC 100柱温箱和PDA 100检测器的Dionex P680A系列仪器上进行馏分收集。色谱条件为5％甲醇或乙醇水溶液。进样量5μL 柱温40°C 检测波长为280 nm。使用三根色谱柱（C8TDE，C18ME和C18TDE）在0.1至1.5 mL/min的15种不同流速下以0.1 mL/min的增量比较羟基酪醇的传质动力学。为了精确确定变量对等效于理论塔板（HETP）的高度的影响，使用van Deemter方程，Gidddings方程，Horvath和Lin方程以及Knox方程计算了羟基酪醇的传质动力学。 van Deemter方程的三个项，即涡流扩散（A项；由于固定相色谱柱的存在而导致的峰展宽，与流动相的速度无关），分子扩散（B项）和传质阻力（C项） ），确定了三列中的两种有机改性剂。随后研究了吸附等温线，以探讨溶质在固定相和流动相之间处于平衡状态的分布。将浓度较高的羟基酪醇（10–160mmol/L）的标准溶液泵入C18TDE色谱柱，并记录穿透时间。在这项工作中，发现在5％甲醇-水条件下C8TDE和C18ME色谱柱的最佳线速度为6.37 mm/s（0.3 mL/min），在5％乙醇条件下为4.24 mm/s（0.2 mL/min）。以水为流动相。对于C18TDE色谱柱，发现5％甲醇-水的最佳线速度为14.85 mm/s（0.7 mL/min），而5％乙醇-水的最佳线速度为4.24 mm/s（0.2 mL/min）。发现C18TDE柱是最高效的色谱柱，传质动力学分析表明，乙醇是分离羟基酪醇的合适溶剂，因为带有甲醇流动相的B项极其敏感，因此在改变其他条件时很难稳定其性能。由于C18TDE的最小A项以及可接受的B和C值，因此它是最佳选择。因此，选择C18TDE和乙醇纯化羟基酪醇是因为这种组合对变化不敏感，具有最佳的A，B和C项，并且符合Langmuir等温线模型。羟基酪醇已成功纯化，样品量为1.6％，回收率为90.98％，纯度为98.01％，以5％乙醇-水为流动相，采用了优化的分馏方法，流速为0.2 mL/min。动力学使其线性在制备型液相色谱中，传质动力学建模和吸附等温线的使用证明对开发和优化羟基酪醇纯化方法非常有帮助。此方法应适用于其他制药和生物技术产品的纯化。未来将如何在行业中采用这种方法将是很有趣的。（编译：符斌 北京中实国金国际实验室能力验证研究中心研究员）根据下列两篇文章编写1. Nonlinear behavior in preparative liquid chromatography: A method-development case study for hydroxytyrosol purificationPublished:Dec 22, 2020Author: Ruting Xiao2. LEGO MINDSTORMS fraction collector: A low-cost tool for a preparative high-performance liquid chromatography systemPublished:Dec 20, 2020Author: Marco Caputo

01液相色谱产品研发和销售为什么那么难？①技术研发难在涉足液相色谱领域研发领域之前，一众大佬都觉得色谱尤其是国产液相色谱产品想超越国外竞品，其研发过程极具挑战。不仅需要机械、机电控制、软件开发等一众高手深度参与，还需要这些工程师掌握色谱分离理论，难度堪比研让空乘人员去研制国产商用大飞机。②零部件成本高，市场占有率低国产液相制造商在核心零部件的国产化过程中步履维艰，部分核心零部件外购成本奇高，国产液相综合成本高于与国外厂商。历经数年的坚持和努力，国产液相色谱终于走进应用工作者的视野。但这仅走出了第一步，解决了“有和没有”的问题，此外国产液相投放市场的时间毕竟相对较短，品牌缺乏影响力和议价权。2023年产销量排前的国产液相年销量仍不足千台，与国外品牌动辄万台的销量相比存在显著差距。③用户感到国产液相色谱软件的使用感受一般谈及一众国产液相色谱的使用感受，用过国产液相的业内人士多会谈及“仪器可以用，但使用感受和档次还是与进口同类产品存在显著的差异”。话里话外“可以用”只是初步实现了国产液相色谱有和无的问题，但“感受和档次”一词则意味深厚。用户的反馈呈现了国产液相色谱的使用现状：价格相比国外产品相当，但使用感受一般，甚至软件的兼容性和文件格式的通用性也会成为用户诟病的客观依据。02如何把握好液相色谱的产品定位？①国产分析仪器如何能够真正走进国人心里？竞逐利益和竞逐市场往往是相悖的。千元的茅台不能天天畅饮，但几十块的茅台咖啡却传遍街头巷尾。让更多的用户使用到性价比更高的国产液相是研发企业的核心目标。那么就要更加尊重市场规律，满足不同领域用户的产品要求，尤其是价格体系的深层次要求。高端主力产品要重视，低价优质的中档产品要做得更好。②平衡用户的购置经费和仪器性能是核心要求在实际的科研工作中经常遇到这样一些老师，手头科研经费紧缺，研发过程需要经常往返其他课题组的实验室借用仪器，获取实验结果的难度超远过常人想象。但对整个学校或科研院所来说常规的液相色谱并不在重点采购目录中，高校和研究院需要的是高端的大质谱、核磁等优势装备以提升其在领域内的“资历”。老师们自己可控的经费不足，无法独立采购液相色谱产品。在后续的科研活动中严重影响了创新研发团队的创造力，也压抑了老师们对基础研究拓展工作的积极性。唯有找到液相色谱性能和价格的平衡点才能实现：旧时帝王堂前燕，飞入寻常百姓家！的终极梦想。③满足科研市场需求不代表恶意低价销售唯有符合客观规律的合理定价才是未来企业可以长期良性发展的首要原则。如果部分国产制造商仅为了提振销量而盲目实施低价倾销，不但会搅乱分析仪器的市场规律，更加会因追逐利润而损失国内用户对国产仪器的信任，影响市场的健康发展。03若国产液相价格下探至10万元/套，就能够提升国产品的市场占比吗？①不但要有价格适宜的产品，更要有开放包容的国产色谱软件降价不是解决国产仪器销路的唯一方式 ，软件和数据格式的通用性更为重要。国家早在“十四五”期间就号召高端科学仪器平台要秉承开放的态度开发分析仪器的“共享端口”。但是实际操作起来的难度可想而知，其主要的障碍源于市场上的仪器的品牌、类型、配置太过复杂，很难用同一套通用软件进行控制，各大厂商的软件的数据格式不能接轨也是造成这个技术型“鸿沟”的客观原因。学会一种仪器分析软件所消耗的时间往往需要数周或数月。那么在未来的仪器研发中，制定统一的技术规范，研发可共享的国产液相色谱软件刻不容缓！②国外分析仪器行业的发展历程告诉我们只有合作才能共赢纵观国外仪器行业也曾经历多年的乱战。但他们最终发现只有互联互通才是和谐共生的关键。如今的Empower软件可以控制7890的色谱仪，变色龙系统可以操控1260的液相色谱，ACD Labs 甚至可以用来分析核磁的数据。为了实现更广泛的兼容能力，安捷伦率先开发了ICF（Instrument Control Frame，仪器控制框架）方案。一众龙头仪器外企的软件开发历史值得我们思考和借鉴。04如何重塑国产色谱软件的格局？①国产软件需对非商业用户免费并推行数据文件通用格式。目前在售的液相色谱适配软件有几十种，国产液相色谱仪的控制软件更加五花八门，难以实现仪器的互通互用。开发一款“开源”液相色谱软件就成为实现这一目标的必经之路：首先开源的液相色谱软件必须对非商业用户（如科研，高校用户）免费；第二，软件端口的共享必须无附加条件，并支持通用的文件格式。这样既能减少用户在软件上的学习成本，提升国产液相色谱的竞争力，又能从减少仪器厂商在软件开发上的资金投入。有利于国产仪器厂商将精力集中在提升仪器性能、产品质量等工作中，让中国自主研发的液相色谱“行稳致远”。②色谱软件的开源免费绝非一时冲动，而是对行业发展脉搏的精确把握。轰轰烈烈的去IOE中的O记甲骨文，其数据库Oracle也是挂在官网上可以自由下载的，且不附带加密狗或者密钥之类的影响体验的动作，纯靠使用条款的约束来完成商业用户的付费。经过多年的发展，我们对中国的法治环境有着充分的信心。05后记：如何破局？那么，在以上2方案的加持下，国产液相色谱产品才能够真正走上历史舞台，才能真正的被国内用户所认可。此外，液相色谱厂商也要在仪器性价比、稳定性以及创新性能上持续努力，共同迎接“国产替代”的大事记。稿件来源：成都珂睿科技有限公司

自2004年沃特世推出第一台商品化UHPLC产品&mdash &mdash Acquity UPLC，近几年液相色谱技术没有再出现革命性突破。如今，UHPLC已经成为标准的液相色谱平台，各主流液相色谱供应商都有3-5款UHPLC产品，耐压从15000psi-19000psi(1000-1250bar)。　　与当初刚推出UHPLC相比，关于UHPLC的各种争论已经消失，用户对于UHPLC已普遍接受，包括非常保守的质控部门。现在人们如果提起&ldquo HPLC&rdquo 可能很大程度上指的是&ldquo UHPLC&rdquo 。最早证明UHPLC理论的James Jorgenson教授预测，&ldquo 使用填充了更小颗粒的小内径色谱柱可以实现更快和更高分辨率，同时仪器的耐压能力也将进一步提升，达到50000psi。&rdquo 　　如果仪器耐压可以达到50000psi，几乎可以肯定是将采用亚毫米核壳的毛细管柱， 由于发热和散热的问题，这将不会很容易，但是就速度和分辨率而言，分离潜力诱人。　　2013年上半年各大厂商推出的液相色谱新品主要是产品的扩展或专用应用系统，以下是部分新产品介绍：　　整机系统：　　安捷伦1290 Infinity四元液相色谱系统　　低压混合的四元UHPLC泵许多供应商都可以提供，通常其价格更低，但不理想的是延迟体积较高。今年安捷伦推出的1290 Infinity四元泵配备了创新的Jet Weaver 混合器，从而实现仅350uL的延迟体积，专门为HPLC方法开发设计。该款四元泵价格比1290 Infinity 二元泵便宜近20%，并且可以用软件选择泵后混合操作以应对更高选择性的应用。【产品详细信息】　　安捷伦 1290 Infinity 二维液相色谱系统　　对于复杂样品，如蛋白质组学、代谢组学、生物制药、肽图、生物体液、植物提取物、食品基质、聚合物等，二维液相色谱(2D-LC)是一个有用的平台技术。有几家供应商已经有2D-LC产品，今年安捷伦加入进来。安捷伦2D-LC系统在第一维使用的是1260/1290 Infinity 硬件，在第二维使用1290 Infinity 二元泵。它采用专门的阀实现全二维或中心切割操作。系统可配备多个检测器，由安捷伦CDS单一软件控制。【产品详细信息】　　Bio-Rad NGC 色谱系统　　该系统是一个中压、基于peek管路的蛋白质纯化系统。它是一个灵活的、即插即用的模块化设计，易于使用的触摸屏软件，可以设置模块、控制系统或方法，数据处理和显示。两个泵模块可供选择，分别是压力极限3650psi、流速10ml/min及压力极限1450psi、流速100ml/min。可选模块可以插入到一个高度灵活的系统框架内，包括采样泵、混合器、检测器(单波长或多波长UV、电导率、pH监测器)，进样器或自动进样器，柱切换阀，馏分收集器。该系统的目标应用领域是研究阶段、工艺开发或实验室水平的生物分子纯化。　　岛津Nexera X2 UHPLC 系统　　这款第二代系统市场定位于需要复杂系统配置的特定环境的常规分析。新系统的改进和选择包括：改进的进样阀，增强的脱气单元，低延迟提及的四元泵，改进的光电二极管阵列检测SPD-M30A。SPD-M30A具有更高的热稳定性、灵敏度(噪声= 0.4× 10-5 AU)和光谱分辨率。该系统的标准流通池体积为1uL，光程10mm。一款高灵敏度流通池光程可达85mm。一个独特的iPDeA(智能峰值卷积分析)软件可以通过使用基于光谱特性的峰值卷积算法获得更好的定量共洗脱峰。【产品详细信息】　　赛默飞Dionex Ultimate 3000 BioRS系统　　设计用于在恶劣的高盐流动相下分析生物分子的生物惰性UHPLC系统，市场上已有供应商提供。这种新的钛基UHPLC系统旨在为生物制药研发和质量控制应用，在高达15,000 psi压力下火的更高分辨率。该系统引入一款新的离子交换和亲水作用液相色谱柱(HILIC)产品线，用于重组生物制药、单克隆抗体、蛋白质、肽和DNA分析。可选配置??包括泵、检测器和馏分收集器。【产品详细信息】　　赛默飞ICS-5000+ 免化学试剂 HPIC 系统　　该系统是第一个基于PEEK材质、免化学试剂，且连续运行压力高达5000psi系统，专门设计可使用毛细管柱、微孔柱或标准柱。该系统可支持阴离子、阳离子、有机酸、胺、碳水化合物和氨基酸快速、高分辨分析。与该系统一起推出的还有新的ICS-4000 QD电荷检测器 电荷检测器是一种低成本检测器，电荷检测器与抑制电导检测器联合使用时，可以作为一种验证工具或互补的检测器以提供额外的分析信息。【产品详细信息】　　沃特世Acquity APC系统　　这种低色散凝胶渗透色谱(GPC)系统为水相和有机相流动相中的有机聚合物分析进行了优化。该系统采用了全新设计的示差检测器，及一套新的亚3微米杂化聚合物柱。该系统的主要好处是更快的分析，更高的灵敏度、准确测量的分子量和分布。系统控制和数据处理由沃特世可选择GPC软件的Empower 3 CDS可来进行。【产品详细信息】　　　　系统模块：　　安捷伦1260、1290 Infinity蒸发光散射检测器 　　此蒸发光散射检测器(ELSD)系统可提供灵敏的检测，并对低或非发色基团有普遍的响应。该装置适用于高效液相色谱法和超临界流体色谱，并且具有半挥发物低温色谱检测模式，及较少氮消耗的待机模式 。　　珀金埃尔默Aurora二极管阵列检测器　　这种新的检测器改善了性能指标(更好的波长精度和低噪声、漂移、杂散光)和增提高了低散的流通池(1&mu L的光程为10毫米、5&mu L的光程为50毫米)。【产品详细信息】　　SSI HF系列泵　　此泵是专为制备液相色谱和填充柱操作而设计。性能高，成本相对低，双头泵能够提供精确的流速，在压力高达10,000 psi下，流速可达高达300毫升/分钟。 　　怀雅特Optilab UT-rEX示差检测器　　怀雅特以高分子表征创新仪器和软件而知名，其开发出一种新的示差检测器。公司声称这是第一款专为UHPLC 设计的示差检测。它配备了一个1.5&mu L流通池。它具有优良的灵敏度和线性范围，并且可以在温度范围4-50℃下操作。它兼容所有厂商的UHPLC系统。(编译：杨娟)

p style="text-align: justify line-height: 1.5em "　　从1903年，俄国植物学家Tsweet提出色谱法开始，色谱技术这一重要的分离分析技术已走过百年历史。上世纪60年代，由于气相色谱对高沸点有机物分析的局限性，为了分离蛋白质、核酸等不易气化的大分子物质，气相色谱的理论和方法被重新引入经典液相色谱，20世纪60年代末，世界上第一台高效液相色谱仪问世，开启了高效液相色谱的时代。如今，液相色谱仪因其样品适用范围广、分离效率高、检测灵敏度高、分析速度快、样品回收方便等特点，在制药、食品、环保、石化、农林、医疗卫生等领域有广泛的应用，已成为最重要的分析仪器之一。/pp style="text-align: justify line-height: 1.5em "　　为了解液相色谱技术及应用的最新进展内容，仪器信息网特别策划了a href="https://www.instrument.com.cn/zt/lc" target="_blank" style="color: rgb(0, 112, 192) text-decoration: underline "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong“包罗万象——液相色谱技术及应用大赏”/strong/span/a专题，并邀请液相色谱主流生产商来分享对液相色谱技术发展及最新应用进展的看法。此次，我们特别邀请到上海通微公司分析技术有限公司(以下简称：通微公司)产品相关负责人，就液相色谱技术的发展和优势，以及未来液相色谱技术和应用发展等进行了深入交流。/pp style="text-align: justify line-height: 1.5em "　　span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong仪器信息网：请回顾贵公司液相色谱的技术发展历程，以及当前公司主推的产品和技术?/strong/span/pp style="text-align: justify line-height: 1.5em "　　span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong上海通微：/strong/span通微公司成立于2002年，专注于液相色谱领域的技术研发和积累，研发注重常规液相色谱系统的实用性和耐用性，并力求为用户提供从仪器到色谱柱到应用开发全流程的帮助，目前已实现纳升级到制备级液相色谱的全线产品配备。公司今年还将推出最新的高效液相色谱系统EasySep® -3030，该系统具有浮动柱塞杆设计、蠕动泵自动清洗功能、实时漏液监测、全反控的操作模式，搭载Unimicro ChromStation 数据处理系统，符合相关法规要求的同时也可满足用户的实际需求。/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 600px height: 454px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201908/uepic/1b0a3960-629f-4266-831c-21b6488bedc2.jpg" title="通微easy3030.jpg" alt="通微easy3030.jpg" width="600" height="454" border="0" vspace="0"//pp style="text-align: center line-height: 1.5em "　　EasySep® -3030高效液相色谱系统/pp style="text-align: justify line-height: 1.5em "　　此外，通微公司也在积极探索下一代的液相色谱技术。为解决目前超高效液相色谱继续提高柱效所遇到的高反压、小粒径的瓶颈，通微公司在2004年提出全新的液相色谱解决方案，即TriSep® -3000高效微流电动液相色谱系统，兼备液相色谱和毛细管电泳双重原理，采用液相色谱固定相，以压力流和电渗流双重驱动流动相，样品分子因色谱行为和电泳速率不同而分离，此外，电渗流的塞型流型改善了样品分子在色谱柱内的流型和峰展宽，可获得远高于液相色谱的柱效。因此对于复杂样品的分析能力远远超越单独使用液相色谱仪和毛细管电泳仪。/pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201908/uepic/fcf9996e-2561-438d-bf1b-ded63aad4494.jpg" title="通微triSep3000.jpg" alt="通微triSep3000.jpg"//pp style="text-align: center line-height: 1.5em "　　TriSep® -3000高效微流电动液相色谱系统/pp style="text-align: justify line-height: 1.5em "　　该系统优越的分离原理可以使用户尽享高柱效、高分辨率、高选择性及快速分离的效果。毛细管柱内流量为0.2-1 μL/min, 消耗溶剂和样品量是常规液相色谱的万分之一，根据用户需求，可实现加压毛细管电色谱、纳流液相色谱和普通液相色谱三种不同的用途。更可与通微最新推出的MSD系列微型质谱联用，无需分流，显著提高分离效率。/pp style="text-align: justify line-height: 1.5em "　　span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong仪器信息网：对于目前的液相色谱技术，贵公司比较看好哪些?还有哪些问题亟待解决?未来液相色谱的技术发展趋势如何?/strong/span/pp style="text-align: justify line-height: 1.5em "　　span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong上海通微：/strong/span目前液相色谱的应用范围广布多个行业，但用户的基础和专业水平相差较大，制约了此类技术在行业内的深度推广。因此当前液相色谱整体解决方案的市场需求还有很大空挡，未来通微公司将继续更深入更广泛地探讨、开发行业专用的解决方案，让不同背景的客户能够快速便捷使用液相色谱技术来满足其需求。/pp style="text-align: justify line-height: 1.5em "　　随着食品安全、大健康产业以及环境保护等政策的推广渗透，将会催生更多细分领域对液相色谱的需求。当然，对于仪器的人机交互、数据完整性、可靠性以及智能化也会有更高水平的要求。/pp style="text-align: justify line-height: 1.5em "　　span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong仪器信息网：从整个行业的角度，您如何评价目前液相色谱的整体的应用情况?未来液相色谱应用将会如何发展?/strong/span/pp style="text-align: justify line-height: 1.5em "　　span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong上海通微： /strong/span纵观目前液相色谱技术的发展情况以及国家对环境保护的越发重视，我们认为将来的strong微流液相色谱/strong技术，可以在与常规技术相同的分离效果的基础上，实现更低的溶剂消耗量。另外，未来新兴领域必将涌现出更为复杂的样品体系的分离分析需求，这些也是目前高效液相色谱的瓶颈，因此通微作为专注于液相色谱技术的厂家，开发下一代液相色谱技术一直是我们在探索的方向。/pp style="text-align: justify line-height: 1.5em "　　span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong仪器信息网：您认为哪个应用领域还有拓展的空间?/strong/span/pp style="text-align: justify line-height: 1.5em "　　span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong上海通微：/strong/span制药领域是液相色谱的主要领域，也是目前需求最大的市场，随着中药和生物药的发展，该领域将会有更大的增长空间。而通微的液相色谱一直深耕在中药领域，目前已完成了《中国药典》所有HPLC-ELSD的案例对应，并开发出人参、薏苡仁、黄曲霉毒素等典型样品的专有分析方案包，便于用户使用。/pp style="text-align: justify line-height: 1.5em "　　此外，通微公司从2007年研制出中国第一台国产蒸发光散射检测器以来，已经推出了5代产品，并荣获包括BCEIA金奖、国家重点新产品、上海科技进步奖在内的多种奖项。UM5800一经推出，便以其高灵敏度、广泛的溶剂和梯度兼容性以及良好的环境适应性等诸多优点获得了市场和用户的认可，尤其在中药领域获得了广泛的支持。/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 600px height: 401px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201908/uepic/8005f753-1568-45de-bb2b-693a24eb7322.jpg" title="Um 5800.jpg" alt="Um 5800.jpg" width="600" height="401" border="0" vspace="0"//pp style="text-align: center line-height: 1.5em "　　UM 5800蒸发光散射检测器/pp style="text-align: justify line-height: 1.5em "　　span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong仪器信息网：当前液相色谱在制药领域的应用情况如何?您如何看待液相色谱在制药领域的应用前景?/strong/span/pp style="text-align: justify line-height: 1.5em "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong　　上海通微：/strong/span近期，生物医药领域遇到了很多对目前液相色谱系统来说颇具挑战的难题，主要表现在蛋白等电点、蛋白分离、更高峰容量的多肽谱图分析、多肽分离纯化等。而通微的微流电动液相色谱凭借着电渗流的独到优势，可以往更小颗粒填料和更长有效分离长度两个方面来提高柱效和峰容量，发挥色谱优势，并很好地解决目前困扰生物医药体系的分离分析难题。在多肽分离纯化方面通微公司具备稳定高压半制备液相色谱系统以及中低压制备双系统，配合近15年的制备色谱柱填充工艺和客户口碑，可以为多肽客户提供全方位服务。另外，通微公司近期还在生物领域推出多肽、多糖、蛋白专用超快速色谱柱，相信会给生物药领域客户不一样的体验。/pp style="text-align: justify line-height: 1.5em "　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "仪器信息网：与其他领域相比，制药领域对液相色谱技术有怎样的特殊要求?　　/span/strong/pp style="text-align: justify text-indent: 2em line-height: 1.5em "strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "上海通微：/span/strong制药关系人类健康、也关系一个国家的基础科研实力，所适应的法规要求比较高也比较全面，监管力度也大，因此对操作人员以及液相色谱等仪器的要求更高，也与目前很多准入许可挂钩。制药行业的仪器投入都很大，但国产设备占有率很低，作为一个关系民生的民族工业，急需可靠耐用又合规的国产分析仪器设备补充。这样一方面可降低药企的运营维护成本，让更多的中小药企也可以买得起、用得起、修得起液相色谱等分析仪器，来整体提高药品质量，降低药品成本，为老百姓解决大问题。另一方面，可以为中国药品行业的未来可持续和自主发展提供备胎和力量。/pp style="text-align: justify "br//p

为进一步提高技术人员和质量人员技能水平，建设一支专业能力强、业务精的技术团队，7月13日，西王食品邀请液相色谱专家就高效液相色谱的使用及维护和液相色谱常见问题等方面前来进行培训交流。西王食品技术副总孙淑华及公司质检、研发部门相关负责人等参加培训。专家从色谱理论知识、仪器实操技术等方面进行了专业讲解，重点讲解了高效液相色谱日常使用及维护要点，与大家共同讨论交流了在实际检测过程中遇到的问题，并提供了系统的解决方案。参训人员从专业技能和实操实验等方面全方位了解液相色谱的工作原理及注意事项。培训结束后，专家还走进实验室，对检测人员进行现场技术指导。“此次技术培训和现场指导，解决了我们在日常实验中遇到的有关难题和困惑，提升了理论认知。同时仪器维护能力的提升有助于增强实验室运行质量管理水平，可为实验室出具精准的检测数据提供更好的技术支持和实操保障。感觉此次培训收获颇丰。”西王食品研发处处长谢登玉如是说。　　此次技能培训，使西王食品技术研发中心人员进一步开拓视野，拓宽思路，对提升产品质量检验检测水平和研发新产品具有良好的借鉴意义，同时还有助于企业推进建设专业技能强、业务素质高的技术研发团队。

按照 GMP 的要求，需要对该仪器进行安装确认、运行确认、性能确认，即3Q认证，以确定目前的实验室环境能否满足该仪器的正常操作和使用，仪器是否具有良好的检测性能，能否满足验证可接受标准和我们日常分析测试工作的需要。 涉及到液相色谱仪可以详细分为以下几个方面： 1.输液系统：由储液罐、高压输液泵等组成。影响分析结果的关键是泵的性能：泵流量准确度测定泵流量设定值误差及泵稳定性误差符合相关标准泵梯度准确度测定以A、B溶剂执行梯度程序，计算梯度误差，一般小于2.0% 2.进样器微量注射器——微量注射器示值误差的测量流通阀、定量管——定量管残留量的测定自动进样装置 验证分两部分：某一进样量下，对样品连续进样多次，峰面积和保留时间相对偏差分别符合相关标准不同进样量下，进样量及峰面积的线性关系系数符合相关标准 3.色谱柱色谱柱温箱温度准确度测量，1h之内误差不超过正负2℃色谱柱柱效（理论塔板数）在特定范围色谱峰的不对称因子在0.8-1.6之间色谱柱性能验证可通过规定条件下，采用一组标准物质溶液进行测试，计算柱效及不对称因子完成。 4. 检测器液相色谱检测器有紫外一可见光检测器、 荧光检测器、 示差折光率检测器、 蒸发光散射检测器和电化学检测器等。不同的检测器有不同的测定方法。硬件整体符合一定的定性及定量标准 5. 色谱工作站可靠，安全，完整，可追溯?可靠性：软件设计及确认证明，如安装认证： 系统适用性试验 审计追踪： 安全性：设系统管理员和信息安全管理负责人，柱效等色谱柱信息可以进行详细设置并记录，支持SST功能 可以对用户设置类型即角色,不同角色有不同访问权限 完整性： 可追溯性： 主要依据： JJG705-2014 液相色谱仪检定规程 GB/T 26792-2011 高效液相色谱仪药品研究色谱数据工作站及色谱数据管理要求GB/T 25478-2010 色谱工作站

p style="text-indent: 2em "使用液相色谱仪的小伙伴肯定会遇到漏气和漏液的状况，流动相是造成液相色谱各种问题的最主要源头。液相色谱最常见的故障一是堵，二是漏。今天就这两部分别展开讨论(流动相以甲醇为例，色谱柱以C18为例) 。/pp　span style="color: rgb(192, 0, 0) "strong　span style="color: rgb(12, 12, 12) "首先，为何会堵?/span/strong/span/pp style="text-indent: 2em "“堵”的表现现象就是柱压异常升高，直接原因就是流路不畅。堵塞的主要位置就是在色谱柱的前端，最主要原因就是流动相里有杂质，杂质的主要来源就是细菌。/pp style="text-align: center "　　img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201812/uepic/d94e7fbd-9c1e-4cac-a7ef-d05afe223114.jpg" title="1.jpg" alt="1.jpg" style="text-align: center "//pp　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "1 /span/strongstrongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "纯水中的细菌污染/span/strong/pp　　首先我们要认识到，一般的国产甲醇其实不需要额外过滤处理，直接使用没有问题。即使是有些固态微粒杂质，也能在液相流路系统最前端的过滤头上排除，真正容易引起问题的，是水中的细菌。新制备的纯水在室内放置几天就会长菌，而这些细菌虽然肉眼不可见，却足以堵塞柱填料颗粒的空隙，造成柱子很快报废。这就是在配制流动相时造成的细菌污染的原因，解决它的方法很简单，就是确保水的可靠性。/pp　　解决办法：/pp　　(1)最理想的方式当然是购买实验室专用纯水机，既方便又可靠，质量也放心。唯一的缺点就是价格不菲。/pp　　(2)成箱购买市售品牌纯净水，如500ml的怡宝或娃哈哈，这些水的质量足以应付液相色谱的要求。先随机抽取一瓶做一下细菌平板实验，待菌落数合格方可使用。这样每次只要单独开一瓶即可，也很方便。每次成本2元左右。这里特别指出一个细节：在绝大多数书本上，凡谈到配制流动相都会谈到最后一个过滤的步骤。但是从我们长期使用的实际效果来说，只要能保证水的质量，这一步完全可以也应当去除。/pp　　水有保证，可以不过滤?/pp　　(1)流动相过滤在理论上有好处，但是实际操作时由于不可能做到专瓶专用，反而容易造成的交叉污染，对于配比复杂的流动相影响更大。/pp　　(2)流动相过滤在经济成本上不划算。买一套过滤装置要6000多元，且过滤器公认是比较容易损坏的设备。最主要是过滤片的成本太高，一片就要几十元。按一般液相柱的正常使用寿命计算，过滤片的成本会远远高于色谱柱的成本上升。/pp　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "2 /span/strongstrongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "流动相的细菌污染/span/strong/pp　　流动相刚开始不长菌，在使用时却产生了细菌污染。这主要是在使用多元液相色谱仪时的一种不良使用习惯造成的。举最简单的例子：50%的甲醇水流动相，有两种使用方式。一种方式是在上机前就配好混合在一起，另一种方式是在流路A放纯甲醇，流路B放纯水。从单纯实验效果来说，后一种有明显的优点：首先是简单，不需要实验者另个计算配比混合，其次就是比例准确，能得到保留时间重复性极好实验效果。/pp　　但是，它有一个致命的缺陷，就是纯水在流动相瓶中几天时间就会长细菌(很多情况下不仅仅用纯水作流动相，而是用缓冲盐溶液，本身就是优质肥料，细菌长得更迅速)，一旦有细菌柱子就坏得很快。所以这种方式要求操作人员每次实验都要用新制备的纯水，更要求在每次实验后把水相换掉，换成甲醇冲洗干净，这一点在实际工作中很多人意识不强，就是意识到了但多次使用中总有一两次会遗漏，但是往往这一两次就足以产生致命的影响。因为液相色谱柱的堵塞是不可逆的。/pp　　所以，宁可牺牲小小的保留时间的重复性，也不要用纯水溶液作为流动相。从实际实验效果来说，我建议用10%的甲醇水代替水溶液(以前我做过不同比例甲醇水的细菌总数实验，在5%就基本可以抑菌，在10%及以上就可以完全杀菌了)，这样可以有效排除长细菌的隐患，既可作流动相，也可冲柱。就算是在配制流动相时会计算得麻烦一些，但是一次麻烦，终身受益。/pp　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "3 /span/strongstrongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "不适当操作/span/strong/pp　　(1)在更换零件时选择的型号有误，接口不是很匹配，在拧紧的时候产生变形而使得管路堵塞。/pp　　(2)样品处理液净化得不干净，长期会在六通阀和柱之间形阻塞不畅。/pp　　(3)在使用用手动六通阀时，有些人可能由于手劲小的原因，转动的不到位，于是造成流路形成死堵，压力快速升高超过警戒值。/pp　　(4)在使用金属管路作出废液管时，应当注意最好废液瓶中先放一些水，并把废液管的出口端结晶成块并造成堵塞。这种情况不常见，但却的确发生过。/pp　　查堵的方法/pp　　在发生“堵”的现象后，就需要找出原因，主要是什么位置发生了“堵”。/pp　　注意，绝大多数情况下，整个系统只会有一个地方发生堵塞。查堵的方法是从尾向前逆向分段拆开，仔细观察压力数值，如果某一个部件(柱子除外)装上和拆下时的压力差别很大，可发展变化判断。至于柱的堵塞，可以通过换同样规格的柱的压力是否一致来判断。/pp　　img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201812/uepic/46ebc40a-78ec-483b-b5a4-ab7ed4cc72f4.jpg" title="2.jpg" alt="2.jpg" style="text-align: center "//pp　　strongspan style="color: rgb(12, 12, 12) "“漏” 分两种：漏液和漏气。/span/strong/pp　　strongspan style="color: rgb(12, 12, 12) "漏液/span/strong，液相色谱仪从流动相瓶到废液瓶之间的流路是一个全封闭体系，内部压力很高，但外部却能保证一滴不漏。如果某个部件发生漏液，那就是故障所在。漏液的原因分两种：/pp　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "　1 /span/strongstrongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "接触硬件不当/span/strong/pp　　在更换零件如流路管或换柱时，换的接头接口不匹配，造成漏液。要注意不同公司的柱子接头很多是不同的，甚至同一家公司在不同时期生产的液相柱接头也有很大区别。当然选项用PEEK接头是一较好是一个较好的解决方法，不仅通用性好，而且靠手拧就能保证不漏液。即使是接口本身是匹配的，但是如果操作不当也会漏液，一种不当就是力度把握不好，拧得太紧或太松 /pp　　另一种不当就是致命的错误：滑丝，这往往是动手能力不太强，螺丝钉很少拧的工作者犯的错误，滑丝的后果不仅是漏液那么简单，常造成重要部件的报废。解决这个问题只能靠恶补基本功来实验，那就是拧螺丝。/pp　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "2 /span/strongstrongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "使用仪器不当/span/strong/pp　　只要互相有10%比例就不会出现这个问题。另一原因是在用缓冲液盐溶液(不论甲醇含量有多少)作流动相时，实验结束后没有换甲醇水冲洗，使得微渗的流动相干燥形成晶体造成。不过，输送泵漏液并不是非得马上修不可，冲洗干净并在以后的使用中多加小心一般都可以正常使用。检测器漏液是个很麻烦的事，一般都是吸收池的问题，更换的费用相当高。但是并不是说一定要马上更换，还可以从实际实验效果看能否凑合使用。/pp style="text-align: center "　　img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201812/uepic/132decbe-0449-4949-9ecc-0d581d304950.jpg" title="3.jpg" alt="3.jpg" style="text-align: center "//pp　　strongspan style="color: rgb(12, 12, 12) "漏气/span/strong，漏液是从内部向外漏，而漏气则是外部了的气体进入液相色谱仪的流路内部形成气泡。下面按流路的方向逐个部件分析产生气泡的原因和相应解决方法。/pp　　span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong1 /strong/spanstrong style="color: rgb(0, 112, 192) "过滤头/strong/pp　　做油液时，在流路管中有不规则但持续的小气泡产生，这时考虑的是流动相有没有脱气(需要特别提醒即使是有了真空脱气机也是要先超声脱气的，起码可以减少脱气机的工作压力并提高工作效率)，如果已脱气，则要注意过滤头的污染也会造成这种现象。处理方法比较简单，拧下过滤头在稀硝酸中浸泡，超声半小时，洗净后装回去即可。/pp　　span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong2 /strong/spanstrong style="color: rgb(0, 112, 192) "透明流路管/strong/pp　　指的是在过滤头和输送泵之间的那一段管路。这一个部分往往不是有点气泡，而经常是整个管中全是空气而操作人员却浑然不知，以致输送泵工作了半天才发现流动相瓶里的液体一点也没少。这也是我们常说的液相色谱仪至少一周要开机一次的原因(我们做液相一定要有“微渗”的概论)。如果长时间不用，这一段管路的液体会彻底干掉，而充满空气的管路和充满液体的管路不仔细看是分辨不出来的。这种情况对于输送泵很危险，因为泵从设计来说是输送液体而不是输送气体，内部的液体对于活塞来说起到了机油的作用，如果活塞杆还残存了一些缓冲盐，则极易拉伤，造成不可逆转的影响。/pp　　对于这种情况，要突出“预防为主”如：液相色谱使用人员要相对固定和稳定，工作中合理搭配资源，每台机一周至少一次实验，如长期不用起码每周要冲流动相2小时。养成良好的工作习惯很重要。/pp　　如果流路管中真漏气了怎么办?/pp　　我的建议是用外力使管路中充满液体。/pp　　具体如下：/pp　　1、找到流路管进入输送泵的接头。/pp　　2、拧下来。/pp　　3、用一干净洗耳球的尖端对准管路的平整切口。/pp　　4、吸液体，看液面从流动相瓶里上升，至离洗耳球5cm左右时停止该动作。/pp　　5、快速把接头拧回输送泵上(这个过程可能会有少许流动相外泄，这是正常现象)。/pp　　6、开机，打开排液阀门，启动输送泵。/pp　　7、等排液管中流出的溶液没有气泡时，再关闭排液阀，仪器正常工作。/pp　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "3 /span/strongstrongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "输送泵和柱子/span/strong/pp　　这些部分进了气泡一般不怕，冲掉就行。/pp　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "4 /span/strongstrongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "检测器/span/strong/pp　　应该说，整个流路中只要有一个气泡都会在检测器上得到强烈的信号反映，检测器内部的气泡一般都能被冲走，但也有很难冲掉的残留气泡的情况。如果检测器内有残留气泡，会有特别明显的表现形式，就是在走基线时会时不时间隔出现直上直下信号很大的信号峰。这时先看普通流量能否冲走，如果冲不走，那唯一的办法就是拆柱，把检测器直接连接到输送泵的出口，加大几部流量冲洗，则肯定能冲走气泡。/pp　　根据接头处、泵、进样阀、色谱柱、检测器等常见故障的解决方法，特整理下表，便于大家收藏记忆。/pp　　液相色谱的漏液及处理方法：/pp　　1、接头处漏液/pp　　img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201812/uepic/2f90579c-b1e7-4362-8cf8-aee6854782e7.jpg" title="4.png" alt="4.png" style="text-align: center "//pp　　2、泵漏液/pp　　img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201812/uepic/8004e3f4-b880-4bf0-9f65-79776dcfe396.jpg" title="5.png" alt="5.png" style="text-align: center "//pp　　3、进样阀漏液/pp　　img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201812/uepic/d377b46c-cbc9-4055-847a-8865b2ec50fa.jpg" title="6.png" alt="6.png" style="text-align: center "//pp　　4、色谱柱漏液br//pp　　img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201812/uepic/e43dcfd5-d495-4a74-85b9-7c0271a46031.jpg" title="7.png" alt="7.png" style="text-align: center "//pp　　5、检测器漏液/pp　　img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201812/uepic/cd47993c-2c0e-4fee-b4fc-8cb26c6271b0.jpg" title="8.png" alt="8.png" style="text-align: center "//p

p 很多实验都非常需要操作员的耐心和细心，但即便全神贯注，仍会有不可避免的问题出现。比如，在液相色谱方法开发中优化添加剂/缓冲盐浓度。先预配好各种不同浓度的添加剂/缓冲盐溶液。实验过程中可能还会有其他浓度想要尝试，这时您可能从现有高浓度溶液稀释配置或者重新称量配置，称重或者量取时的偏差，都有可能影响实验结果。实验猿表示，这样“简单”的操作其实是最劳神费心的！/pp 安捷伦Agilent 1260 Infinity II Prime液相色谱系统完美地解决了液相混合的问题——内置的Blend Assist（混合助手）功能可以帮助使用者轻松调节添加剂/缓冲盐浓度，通过对两个通道溶剂的精准组合（高浓度添加剂和纯溶剂），可以获得各种不同添加剂浓度的流动相（如用1%TFA水溶液和纯水在线混合，最终得到0.1%TFA水溶液），无需手工配制，消除人为偏差，极大缩短了方法开发中的实验准备时间。/pp 提高效率，校准偏差，解放双手，可谓是实验猿的福音！/ppscript src="https://p.bokecc.com/player?vid=609F9AB2F36C726D9C33DC5901307461&siteid=D9180EE599D5BD46&autoStart=false&width=600&height=490&playerid=2BE2CA2D6C183770&playertype=1" type="text/javascript"/scriptp/pp /pp /p/p

近几年，我国各个行业对检验、检疫技术的需求突飞猛进，为较好地落实各种检验检疫技术和多种仪器分析技术的基础培训和技术普及工作，并提高技术人员的专业素质和技术水平，中国仪器仪表学会分析仪器分会与仪器信息网培训中心将于2008年5月在北京举办“液相色谱分析基础”两个培训班，特聘在理论与实践方面的资深专家教授进行讲解，着重理论和实际应用的结合，强调学员“学会”和“会用”两个培训重点。“液相色谱分析基础”培训班具体日程安排如下表：课程主讲专家内容5月26日8：30-17：00于世林 教授北京化工大学液相色谱基础知识 分离机理和色谱柱分离方法梯度方法液相色谱检测器5月27日8：30-17：00赵敏 研究员国家标准物质中心液相色谱仪器的使用以及保养液相色谱仪器维护和故障排除液相色谱检定规程液相色谱校准5月28日8：30-17：00袁彦华高级工程师液相色谱谱图提供的信息及常用的色谱术语液相色谱的定性分析液相色谱的定量分析液相色谱仪器及使用5月29日8：30-17：00袁彦华等真机演示实验仪器内部部件讲解仪器维护操作演示 　　详细内容请参见http://www.instrument.com.cn/training/100181/ 　　培训结束经考试合格，颁发中国仪器仪表学会分析仪器分会和仪器信息网共同颁发的结业证书。 　　培训费用每人1500元（含报名费、培训费、教材费、资料费、考试费、证书费）,食宿统一安排，费用自理。欢迎网上直接报名，可享受100元的优惠。 　　更多培训信息欢迎登陆：training.instrument.com.cn了解详细信息。 　　仪器信息网培训中心联系方式 　　电 话： 010-51299927-101（齐老师） 　　传 真：010-51299927-108　　网 址： www.instrument.com.cn/training 　　E_mail： training@instrument.com.cn

与红遍大江南北的“分析型”液相色谱相比，很多初接触色谱领域的朋友对“制备液相”这个名词还比较陌生。其实，增大“分析型”液相色谱的进样量，收集大量所需馏分的过程，就是制备。从混合物中得到纯物质，正是“制备液相”最根本的使命。而你最需要的制备方案，岛津全都准备好了： 岛津“分析型”液相色谱Family 从探讨条件到规模放大兼备 Prominence PrepProminence LC-20AR拥有出色的分析精度和可靠性，是半制备和常规分析兼顾的液相色谱仪。最高流量20 mL/min，最小流量步进0.001 mL，媲美“分析型”液相色谱仪的送液精度。单次制备量可达数百毫克，完美契合实验室的制备需求。此外，Prominence LC-20AP应对实验室大体积制备需求，流量高达150 mL/min。具备从低流量开始的卓越送液性能，可从分析流量开始使用分析柱探讨分离条件，简便地转移到制备柱进行规模放大，制备后可进行纯度确认，支持制备全工作流程。 灵活、便捷的生力军 Essentia PrepEssentia LC-16P沿袭了岛津Essentia LC-16备受好评的卓越性能和外观设计，最高流量25 mL/min，从半微量分析、常规分析，到半制备领域分析，都可轻松对应。可根据用户的需求、针对不同的应用和分析方法，通过模块的灵活组合，实现丰富系统配置。当增加新的应用需求时，只需追加相应的模块即可应对，不仅省时省力，更可节约成本。模块化制备液相色谱Essentia Prep系列 循环分离制备系统 将基线分离进行到底对于弱极性或难分离组分，即使通过优化色谱条件，也难以提高分离度。岛津全线“制备液相”均支持循环制备，即通过输液泵加载循环组件，将色谱柱洗脱的未分离组分再次导入色谱柱，进行闭合流路再循环分离。该技术在不用更换或加长色谱柱的情况下，达到如同增加色谱柱长度的效果，低成本、高效地增加理论塔板数，从而提升各组分的分离效果。无论是谁都能轻松进行手动/自动循环制备 复杂组分目标物制备平台 Prominence Prep LCMS近年来，随着LCMS的普及，为了准确地制备目标化合物，以MS为导向的制备方式受到青睐。利用LCMS的高选择性，提高制备分离效率，由质谱引导从复杂组分中制备目标化合物。同时，利用Open Solution开放式访问软件，实现平台共享，只需简单操作即可完成分析、制备。以MS为向导实现高效制备 制备、净化一体化解决方案新时代Prominence UFPLC可在线完成从分馏、浓缩、净化到回收的制备全过程，显著减少制备净化所需时间。目标化合物回收于易挥发的有机溶剂中，与常规制备色谱手段相比，仅需十分之一的时间即可完成去溶剂过程。同时，岛津独有的捕集浓缩和净化技术，可实现合成目标物中痕量组分的高浓度、高纯度回收。此外，Crude2Pure采用划时代的纯化方法，可对液相分离得到的馏分进行捕集、浓缩、精制和粉末化，为分离纯化提供了全新解决方案，为研究者提供简单方便、轻松获取粉末化目标成分的先进技术。不止于高纯纯化的在线制备净化技术 如此狂拽炫酷的在线全自动制备平台，只此岛津一家独有。最后，学而不厌的岛津Vedio带你领略Crude2Pure的黑科技！ C2P视频下载链接http://pan.baidu.com/s/1qY7F1aW 分分钟搞定“制备液相”的超能表现后，让我们一起期待色谱新锐“超临界流体色谱”的精湛武义吧~ 关于岛津 岛津企业管理（中国）有限公司是（株）岛津制作所于1999年100%出资，在中国设立的现地法人公司，在中国全境拥有13个分公司，事业规模不断扩大。其下设有北京、上海、广州、沈阳、成都分析中心，并拥有覆盖全国30个省的销售代理商网络以及60多个技术服务站，已构筑起为广大用户提供良好服务的完整体系。本公司以“为了人类和地球的健康”为经营理念，始终致力于为用户提供更加先进的产品和更加满意的服务，为中国社会的进步贡献力量。

使用液相色谱仪的小伙伴肯定会遇到漏气和漏液的状况，流动相是造成液相色谱各种问题的最主要源头。液相色谱最常见的故障一是堵，二是漏。今天就这两部分分别展开讨论（流动相以甲醇为例，色谱柱以C18为例） 。首先，为何会堵?“堵”的表现现象就是柱压异常升高，直接原因就是流路不畅。堵塞的主要位置就是在色谱柱的前端，最主要原因就是流动相里有杂质，杂质的主要来源就是细菌。1纯水中的细菌污染首先我们要认识到，一般的国产甲醇其实不需要额外过滤处理，直接使用没有问题。即使是有些固态微粒杂质，也能在液相流路系统最前端的过滤头上排除，真正容易引起问题的，是水中的细菌。新制备的纯水在室内放置几天就会长菌，而这些细菌虽然肉眼不可见，却足以堵塞柱填料颗粒的空隙，造成柱子很快报废。这就是在配制流动相时造成的细菌污染的原因，解决它的方法很简单，就是确保水的可靠性。解决办法：（1）最理想的方式当然是购买实验室专用纯水机，既方便又可靠，质量也放心。唯一的缺点就是价格不菲。（2）成箱购买市售品牌纯净水，如500ml的怡宝或娃哈哈，这些水的质量足以应付液相色谱的要求。先随机抽取一瓶做一下细菌平板实验，待菌落数合格方可使用。这样每次只要单独开一瓶即可，也很方便。每次成本2元左右。这里特别指出一个细节：在绝大多数书本上，凡谈到配制流动相都会谈到最后一个过滤的步骤。但是从我们长期使用的实际效果来说，只要能保证水的质量，这一步完全可以也应当去除。水有保证，可以不过滤？（1）流动相过滤在理论上有好处，但是实际操作时由于不可能做到专瓶专用，反而容易造成的交叉污染，对于配比复杂的流动相影响更大。（2）流动相过滤在经济成本上不划算。买一套过滤装置要6000多元，且过滤器公认是比较容易损坏的设备。最主要是过滤片的成本太高，一片就要几十元。按一般液相柱的正常使用寿命计算，过滤片的成本会远远高于色谱柱的成本。2流动相的细菌污染流动相刚开始不长菌，在使用时却产生了细菌污染。这主要是在使用多元液相色谱仪时的一种不良使用习惯造成的。举最简单的例子：50%的甲醇水流动相，有两种使用方式。一种方式是在上机前就配好混合在一起，另一种方式是在流路A放纯甲醇，流路B放纯水。从单纯实验效果来说，后一种有明显的优点：首先是简单，不需要实验者另外计算配比混合，其次就是比例准确，能得到保留时间重复性极好的实验效果。但是，它有一个致命的缺陷，就是纯水在流动相瓶中几天时间就会长细菌（很多情况下不仅仅用纯水作流动相，而是用缓冲盐溶液，本身就是优质肥料，细菌长得更迅速），一旦有细菌柱子就坏得很快。所以这种方式要求操作人员每次实验都要用新制备的纯水，更要求在每次实验后把水相换掉，换成甲醇冲洗干净，这一点在实际工作中很多人意识不强，就是意识到了但多次使用中总有一两次会遗漏，但是往往这一两次就足以产生致命的影响。因为液相色谱柱的堵塞是不可逆的。所以，宁可牺牲小小的保留时间的重复性，也不要用纯水溶液作为流动相。从实际实验效果来说，我建议用10%的甲醇水代替水溶液（以前做过不同比例甲醇水的细菌总数实验，在5%就基本可以抑菌，在10%及以上就可以完全杀菌了），这样可以有效排除长细菌的隐患，既可作流动相，也可冲柱。就算是在配制流动相时会计算得麻烦一些，但是一次麻烦，终身受益。3不适当操作（1）在更换零件时选择的型号有误，接口不是很匹配，在拧紧的时候产生变形而使得管路堵塞。（2）样品处理液净化得不干净，长期会在六通阀和柱之间造成阻塞不畅。（3）在使用手动六通阀时，有些人可能由于手劲小的原因，转动的不到位，于是造成流路形成死堵，压力快速升高超过警戒值。（4）在使用金属管路作出废液管时，应当注意最好废液瓶中先放一些水，并把废液管的出口端放在液面下。如果位于在液相上且实验使用较高浓度的缓冲盐溶液，在停机时可能在出口端结晶成块并造成堵塞。这种情况不常见，但却的确发生过。查堵的方法在发生“堵”的现象后，就需要找出原因，主要是什么位置发生了“堵”。注意，绝大多数情况下，整个系统只会有一个地方发生堵塞。查堵的方法是从尾向前逆向分段拆开，仔细观察压力数值，如果某一个部件（柱子除外）装上和拆下时的压力差别很大，可根据变化判断。至于柱的堵塞，可以通过换同样规格的柱的压力是否一致来判断。“漏” 分两种：漏液和漏气。一.漏液液相色谱仪从流动相瓶到废液瓶之间的流路是一个全封闭体系，内部压力很高，但外部却能保证一滴不漏。如果某个部件发生漏液，那就是故障所在。漏液的原因分两种：1接触硬件不当在更换零件如流路管或换柱时，换的接头接口不匹配，造成漏液。要注意不同公司的柱子接头很多是不同的，甚至同一家公司在不同时期生产的液相柱接头也有很大区别。当然选用PEEK接头是一个较好的解决方法，不仅通用性好，而且靠手拧就能保证不漏液。即使是接口本身是匹配的，但是如果操作不当也会漏液，一种不当就是力度把握不好，拧得太紧或太松；另一种不当就是致命的错误：滑丝，这往往是动手能力不太强，螺丝钉很少拧的工作者犯的错误，滑丝的后果不仅是漏液那么简单，常造成重要部件的报废。解决这个问题只能靠恶补基本功来实验，那就是拧螺丝。2使用仪器不当如果是输送泵漏液，最常见的原因就是在活塞位置缓冲盐析出造成。析出的原因有两个：一是使用缓冲盐溶液时突然加入了纯甲醇而析出，这种错误很容易避免，就是尽量不要用纯的甲醇和纯水。只要互相有10%比例就不会出现这个问题。另一原因是在用缓冲液盐溶液（不论甲醇含量有多少）作流动相时，实验结束后没有换甲醇水冲洗，使得微渗的流动相干燥形成晶体造成。不过，输送泵漏液并不是非得马上修不可，冲洗干净并在以后的使用中多加小心一般都可以正常使用。检测器漏液是个很麻烦的事，一般都是吸收池的问题，更换的费用相当高。但是并不是说一定要马上更换，还可以从实际实验效果看能否凑合使用。二.漏气漏液是从内部向外漏，而漏气则是外部的气体进入液相色谱仪的流路内部形成气泡。下面按流路的方向逐个部件分析产生气泡的原因和相应解决方法。1过滤头做样时，在流路管中有不规则但持续的小气泡产生，这时考虑的是流动相有没有脱气（需要特别提醒即使是有了真空脱气机也是要先超声脱气的，起码可以减少脱气机的工作压力并提高工作效率），如果已脱气，则要注意过滤头的污染也会造成这种现象。处理方法比较简单，拧下过滤头在稀硝酸中浸泡，超声半小时，洗净后装回去即可。2透明流路管指的是在过滤头和输送泵之间的那一段管路。这一个部分往往不是有点气泡，而经常是整个管中全是空气而操作人员却浑然不知，以致输送泵工作了半天才发现流动相瓶里的液体一点也没少。这也是我们常说的液相色谱仪至少一周要开机一次的原因（我们做液相一定要有“微渗”的概论）。如果长时间不用，这一段管路的液体会彻底干掉，而充满空气的管路和充满液体的管路不仔细看是分辨不出来的。这种情况对于输送泵很危险，因为泵从设计来说是输送液体而不是输送气体，内部的液体对于活塞来说起到了机油的作用，如果活塞杆还残存了一些缓冲盐，则极易拉伤，造成不可逆转的影响。对于这种情况，要突出“预防为主”。如：液相色谱使用人员要相对固定和稳定，工作中合理搭配资源，每台机一周至少一次实验，如长期不用起码每周要冲流动相2小时。养成良好的工作习惯很重要。如果流路管中真漏气了怎么办？我的建议是用外力使管路中充满液体。具体如下：1、找到流路管进入输送泵的接头。2、拧下来。3、用一干净洗耳球的尖端对准管路的平整切口。4、吸液体，看液面从流动相瓶里上升，至离洗耳球5cm左右时停止该动作。5、快速把接头拧回输送泵上（这个过程可能会有少许流动相外泄，这是正常现象）。6、开机，打开排液阀门，启动输送泵。7、等排液管中流出的溶液没有气泡时，再关闭排液阀，仪器正常工作。3输送泵和柱子这些部分进了气泡一般不怕，冲掉就行。4检测器应该说，整个流路中只要有一个气泡都会在检测器上得到强烈的信号反应，检测器内部的气泡一般都能被冲走，但也有很难冲掉的残留气泡的情况。如果检测器内有残留气泡，会有特别明显的表现形式，就是在走基线时会时不时间隔出现直上直下信号很大的信号峰。这时先看普通流量能否冲走，如果冲不走，那唯一的办法就是拆柱，把检测器直接连接到输送泵的出口，加大几倍流量冲洗，则肯定能冲走气泡。

2013年4月23-25日，为提升广大用户HPLC理论知识水平，帮助用户更好、更高效地使用日立高效液相色谱，在天美公司上海办事处成功举办了日立L-2000高效液相色谱仪应用技术培训班。江南大学食品科学与技术国家重点实验室、复旦药学院放射性实验室及中科院福建物质结构研究所等22位用户参加了本次培训。 2013年4月23-25日，为提升广大用户HPLC理论知识水平，帮助用户更好、更高效地使用日立高效液相色谱，在天美公司上海办事处成功举办了日立L-2000高效液相色谱仪应用技术培训班。江南大学食品科学与技术国家重点实验室、复旦药学院放射性实验室及中科院福建物质结构研究所等22位用户参加了本次培训。 上海办事处维修工程师冷云伟为大家详细介绍了D-2000工作站的规范操作流程，包括方法创建、样品采集及数据处理等，数据处理在演示紫外检测器数据处理基础上增加了DAD数据处理，满足了不同客户对于软件操作要求，帮助大家更好地提高工作效率。 此外，冷工还为大家演示了HPLC常见故障的排查、处理，以及常用消耗品的更换，鼓励用户亲自动手操作，为面对仪器会&ldquo 胆怯&rdquo 的用户提供很好的锻炼机会，并让大家更加深入了解仪器内部结构。 培训期间，大家就平常所遇到应用问题和仪器故障积极讨论，相互之间进行了热烈的交流互动，不仅帮助大家解决了实际问题，也加强了日立高效液相色谱用户群之间的交流。今后，我们将举行更多此类应用培训班，为提高用户的技术水平而持续不懈努力！公司介绍：天美（中国）科学仪器有限公司（&ldquo 天美（中国）&rdquo ）是天美（控股）有限公司（&ldquo 天美（控股）&rdquo ）的全资子公司，从事表面科学、分析仪器、生命科学设备及实验室仪器的设计、开发和制造及分销；为科研、教育、检测及生产提供完整可靠的解决方案。天美（中国）在北京、上海、等全国15个城市均设立办事处，为各地的客户提供便捷优质的服务。天美（控股）是一家从事设计、研发、生产和分销的科学仪器综合解决方案的供应商。 继2004年於新加坡SGX主板上市后，2011年12月21日天美（控股）又在香港联交所主板上市（香港股票代码1298），成为中国分析仪器行业第一家在国际主要市场主板上市的公司。近年来天美（控股）积极拓展国际市场，先后在新加坡、印度、澳门、印尼、泰国、越南、美国、英国、法国、德国、瑞士等多个国家设立分支机构。公司亦先后收购了法国Froilabo公司、瑞士Precisa公司、美国IXRF公司和英国Edinburgh等多家海外知名生产企业，加强了公司产品的多样化。更多详情欢迎访问天美（中国）官方网站：http://www.techcomp.cn

p style="line-height: 1.5em text-align: justify " 从1903年，俄国植物学家Tsweet提出色谱法开始，色谱技术这一重要的分离分析技术已走过百年历史。上世纪60年代，由于气相色谱对高沸点有机物分析的局限性，为了分离蛋白质、核酸等不易气化的大分子物质，气相色谱的理论和方法被重新引入经典液相色谱，20世纪60年代末，世界上第一台高效液相色谱仪问世，开启了高效液相色谱的时代。如今，液相色谱仪因其样品适用范围广、分离效率高、检测灵敏度高、分析速度快、样品回收方便等特点，在制药、食品、环保、石化、农林、医疗卫生等领域有广泛的应用，已成为最重要的分析仪器之一。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　为了解液相色谱技术及应用的最新进展内容，仪器信息网特别策划了“a href="https://www.instrument.com.cn/zt/lc" target="_blank"span style="color: rgb(192, 0, 0) "strong包罗万象——液相色谱技术及应用大赏”/strong/span/a专题，并邀请液相色谱主流生产商来分享对液相色谱技术发展及最新应用进展的看法。此次，我们特别邀请到沃特世公司分离产品相关负责人以及制药和食品领域的市场经理，为我们分享一下沃特世液相色谱技术的发展和优势，以及对未来液相色谱技术和应用发展的看法。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　span style="color: rgb(31, 73, 125) "strong专注分离分析领域 沃特世液相色谱发展史/strong/span/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " 1963年，沃特世开发出世界首台商品化的高压凝胶渗透色谱GPC-100，自此走上液相色谱技术不断创新的历程。 /pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201908/uepic/6959e252-1830-49b4-9535-6de6aecfa718.jpg" title="图片 1.png" alt="图片 1.png"//pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " 1967年，沃特世采用UV检测和液固填料，开发了第一台自动化液相色谱仪ALC-100。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " 1973年，用于HPLC系统的M6000高压泵诞生，这款可以精准控制0.1-9.9 mL/min流体的6000 psi高压、高精度泵送系统，是沃特世高效液相色谱技术史上的里程碑，使得高效液相色谱仪器在全球范围内的实验室中推广开来。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " 1996年，沃特世Alliance HPLC问世，该系统达到了当时HPLC 仪器所能达到的最高性能，至今Alliance仍然是最受欢迎的HPLC仪器。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " 2004年，沃特世推出世界首款超高效液相色谱——ACQUITY，具有超低扩散体积可将亚2μm色谱柱性能发挥到极致。使用UPLC结合小颗粒色谱柱可以获得更好的分离度、灵敏度，更快的分析速度。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " 2015年，沃特世发布了ACQUITY Arc HPLC/UHPLC系统，对传统的方法转换工作流程产生了革命性的影响。ACQUITY Arc、Alliance HPLC及ACQUITY UPLC，形成了目前沃特世液相三大产品线。/pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201908/uepic/a92d5eb3-452a-41a5-b05b-d4081c674785.jpg" title="2.png" alt="2.png"//pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " 近年来，沃特世一直在液相色谱领域不断推陈出新。2018年，沃特世发布了第一台生物惰性HPLC/UHPLC系统—— ACQUITY Arc Bio，同时针对UPLC系列发布了全新超高效液相ACQUITY UPLC PLUS系列；2019年，发布了ACQUITY H-Class PLUS binary二元系统。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify text-indent: 2em "span style="color: rgb(31, 73, 125) "strong独具优势的液相色谱技术和特点/strong/span/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " 目前沃特世主流的液相色谱产品而言，其特色技术及技术特点主要有：/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " strong泵（独立柱塞直线驱动色谱泵）: /strong沃特世输液泵内的双柱塞杆，具有独立的线性柱塞驱动马达、双压力传感器，能够进行柱塞内压力调整，保证平稳的送液，无需脉冲阻尼器，减少系统体积，有效保证极佳的保留时间重现性和极低的基线噪音水平。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " strongAuto-blend plus自动盐/pH混合功能：/strong可避免流动相配置的手动操作，减少人为误差，节省大量时间。Auto-blend plus技术结合四元溶剂混合系统，可通过软件直接设置流动相的pH值，仪器将自动根据该pH值或pH值的变化梯度配置流动相/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " strong Multi-flow path技术（Arc及Arc Bio系统）：/strong独特的Multi-flow path技术，只需一个切换开关即可实现HPLC和UHPLC方法的转换。通过在软件界面选择Path1（HPLC）Path2（UHPLC），即可实现已有LC方法的简单重现或改进为UHPLC方法。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " strong内置集成式真空脱气机：/strong溶剂高性能脱气机组件用于去除流动相和进样针清洗液中溶解的空气。每个脱气管路有单独的脱气马达，脱气效率高，任意单个脱气管路故障不影响其他管路的使用。脱气机能够提高溶剂输送系统的性能，同时提高整个系统的可靠性。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " strong6路溶剂选择阀选件：/strongD流路可替换为带6路溶剂选择阀的流路。可用于多方法序列切换或者是自动方法开发。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " strong FTN专利进样清洗流路： F/strongTN专利进样系统可以耐受15000psi的系统压力，进样后进样针连在色谱系统流路中，针内壁由流动相不断清洗，针的外壁由专门流路清洗，清洗液从废液排出，不循环使用，有效避免交叉感染。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " strong梯度模式：/strong预编11种梯度曲线，分为1个线性、2个步进、4个凹线、4个凸线四种类型梯度，可适用于各种复杂化合物的分离/pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201908/uepic/0852e36a-98df-4a56-89a0-e38c674b020c.jpg" title="3.png" alt="3.png"//pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " span style="color: rgb(31, 73, 125) "strong 液相色谱技术在制药和食品领域不可或缺/strong/span/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " 液相色谱的应用行业十分广泛，尤其在制药、食品等领域较为深入。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " 在制药领域，从早期化合物库建立、药物筛选、药物研发、CMC、质量控制，都能看到液相色谱技术的大量使用。液相色谱在制药实验室已经变成了一个基本的工具，包括分析型液相色谱、半制备到制备色谱都有非常好的应用前景。沃特世液相色谱在制药领域的应用包括以产品为导向的整体解决方案，如用于蛋白质和肽分析的专用系列色谱柱；以及UPLC超高效液相色谱产品线的进一步拓展，为药物分析实验室提供多维度的选择。同时，沃特世超高效合相色谱UPCsup2/sup也推出了包括众多包括中药、药用辅料质量研究和控制的方案。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " 制药市场的应用热点主要是由药典、ICH指导原则以及工业界对于药物安全和质量控制标准的提升来影响的。对于未来液相色谱在制药领域的热点需求，沃特世认为主要有以下几个方面：方法现代化，即药物分析实验室为提高分析效率和分析方法的灵敏度和耐用性将传统HPLC方法转移到UHPLC和UPLC平台；互补的分离技术，特别是超临界流体色谱，以其与液相色谱互补的分离选择性以及方法开发的灵活性将拓展到更多的应用领域；抗体和重组蛋白等生物技术药物以及肽类药物也会是未来的应用热点；同时，二维液相色谱的应用也会越来越热。随着USP 621 的发布，制药实验室在选择亚2微米色谱柱以及超高效液相色谱方面具有了更多的法规依据。未来，分离度和灵敏度更高的超高效液相色谱以其绿色环保、分离度高、节省样品和溶剂、且普适性好的优势会得到越来越广泛的应用。!--621--!--621--!--621--!--621--/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " 合规性对于制药行业来说是一个至关重要的问题，也是保障药品质量和安全的根本。沃特世Empower软件及服务是制药QC实验室的金标准，在市场上久经考验的产品以及专业的服务，为制药用户的数据完整性保驾护航。结合Nugenesis信息学方案，沃特世为制药企业提供包括色谱类以及非色谱类的科学数据管理方案，帮助满足日益严格的合规性要求。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify text-indent: 2em "span style="line-height: 1.5em "此外，食品领域也是液相色谱的重要应用领域之一。从目前食品检测方法的标准来看，液相色谱与液相色谱质谱方法的应用基本为1：1，可见色谱在食品领域应用非常普遍。在很多从事食品安全检测的基层实验室，包括新成立的食品第三方检测实验室，液相色谱仪是检测农兽药残留、生物毒素、人工合成色素、非法添加等的主要手段。在食品企业QC实验室，液相色谱也是食品配方成分和营养物质检测的主要手段之一。/span/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " 近来，特殊食品领域的检测，包括保健食品、特殊医学用途配方食品和婴幼儿配方食品等；以及普通食品中的营养成分，例如维生素，糖等物质的检测是食品领域的检测热点。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "span style="color: rgb(31, 73, 125) "strong 液相色谱技术展望/strong/span/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " 液相色谱发展至今，虽然技术日趋成熟，但仍有一些问题需要解决。液相色谱仪器对环境要求相对较高，售后维护的花费不菲；同时，色谱分析，尤其是定量分析，需要标准品进行对照，而制备对照品的技术有待提高；现有的前处理手段多费时费力，更有效、更简便的前处理技术亟待发展；液相色谱尤其是超高效液相色谱对用户操作要求较高，而目前很多用户操作水平仍需提升；除了目前常规的液相色谱的应用之外，液相色谱在生产及原材料监控等领域也有广泛的应用价值，但检测手段技术繁琐，尚难以普及。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " 对于目前液相色谱领域比较有前景的技术，沃特世表示主要有如下几点：首先，快速、高通量、超高效的液相色谱技术；其次，可以减轻实验员的负担，实时在线监测，远程操控的技术手段；第三，在线前处理技术；第四，针对微量物质的检测相关技术以及灵敏度的提升；第五，检测器技术，包括光学检测器灵敏度、非光学检测器的补充性能等方便的提升等。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify " 未来，液相色谱性能将会不断提升检测的灵敏度，提高对复杂基质的分离能力并提供更多正交选择性；仪器也将向超小型化、自动化和智能化迈进。/ppbr//p

2012年3月，资生堂（中国）投资有限公司先端科学事业推进部在广东区域的两家著名医药企业进行了两场液相色谱应用技术讲座。议题包括&ldquo 高效液相色谱基础理论&rdquo ，&ldquo 液相分析中常见问题及解决方法&rdquo ，&ldquo 蛋白质、多肽分析及制备色谱简介&rdquo ，&ldquo 资生堂色谱体系简介&rdquo 等。讲座中精辟的讲解，实用的例证和独到的分析得到了参会人员的高度评价。参会人员的积极响应是对我们工作最大的肯定，我们将把讲座推向全国，欢迎感兴趣的各企业和机构与我们联系，讲座不收取任何费用。更多信息将在公司主页发布http://hplc.shiseidochina.com

日立高新技术公司继常规高效液相色谱仪Chromaster以及Primaide后，于今日隆重发布一款全新超高速液相色谱仪（UPLC）ChromasterUltra Rs，简称CMU。通过永无止境的技术创新与高超的产品制造技术，CMU实现了业内最高的140MPa系统耐压与超过50,000的超高理论塔板数！通过CMU，您可以实现复杂样品的高分辨率、高灵敏度、高通量分析。 自即日起，该产品可通过天美（中国）科学仪器有限公司咨询订购。 众所周知，药物和化学领域的研发部门对仪器性能、分辨率和灵敏度的要求是非常高的,而ChromasterUltra Rs超高速液相色谱仪可完全满足这些用户的要求。现在典型的前沿分析，如：对化学性质相似物和合成化合物中的杂质进行高分辨分析，对跟日常生活密切相关的有害物质等杂质成分进行高灵敏度检测，这些都对仪器性能提出了很高的要求,而日立最新的超高速液相色谱仪（CMU）可完全满足这些要求。 特点超高速分析 目前世界最高的耐压水平：140 MPa，可真正实现超高速分析。因系统耐压增强，有些会导致压力升高的流动相也可使用，这样扩大了可选分析方法的范围，非常适合复杂成分的检测和分析方法的开发。高分辨分析 ●新开发的色谱柱（LaChromUltra II ODS C18，填料粒径1.9 μm，长250 mm），理论塔板数高达50,000以上,耐压高达140MPa，实现了真正的超高分辨率分析。 ●新型二元泵配有冲程可变独立柱塞，除了日立特有的LBT技术（Liquid Beat Technology，液体压缩技术），还标配低容量双螺旋混合器，这些都确保输液时的混合效果和稳定性更好。 ●10 mm全反射型毛细管流通池，可有效减小光散射，获得更高分辨率。高灵敏度分析 ●二极管阵列检测器的65 mm流通池（选配），灵敏度极高，对痕量物质的检测尤为突出。 ●二极管阵列检测器的新型光学系统有效地减小了噪音和漂移,保证了高灵敏度的分析结果。 ●自动进样器配有多种清洗模式,标配进样口反冲功能，极大降低了样品残留。产品详细介绍链接：http://www.instrument.com.cn/netshow/SH100322/C191867.htm

p style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　从1903年，俄国植物学家Tsweet提出色谱法开始，色谱技术这一重要的分离分析技术已走过百年历史。上世纪60年代，由于气相色谱对高沸点有机物分析的局限性，为了分离蛋白质、核酸等不易气化的大分子物质，气相色谱的理论和方法被重新引入经典液相色谱，20世纪60年代末，世界上第一台高效液相色谱仪问世，开启了高效液相色谱的时代。如今，液相色谱仪因其样品适用范围广、分离效率高、检测灵敏度高、分析速度快、样品回收方便等特点，在制药、食品、环保、石化、农林、医疗卫生等领域有广泛的应用，已成为最重要的分析仪器之一。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　为了解液相色谱技术及应用的最新进展内容，仪器信息网特别策划了span style="color: rgb(255, 0, 0) "strong“包罗万象——液相色谱技术及应用大赏”专题/strong/span，并邀请液相色谱主流生产商来分享对液相色谱技术发展及最新应用进展的看法。此次，我们特别邀请到赛默飞世尔公司液相色谱产品市场经理李卉芳，请她谈一谈赛默飞液相色谱技术的特点，及对目前液相色谱技术发展趋势及热点应用的理解。/pp style="line-height: 1.5em "　span style="color: rgb(79, 129, 189) "strong　UltiMate+Vanquish/strong/span/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　作为中国液相色谱市场主要的竞争者，赛默飞加入这场角逐的时间，比其他厂商要晚一些。1975年，戴安公司(后被赛默飞收购)在美国成立，随后在1978年，其液相色谱工厂在德国成立，开启了戴安液相色谱的发展历史。发展初期，戴安公司开发了包括支持预压缩的等度色谱泵、第一台能够被32位色谱管理系统变色龙完全控制的二极管阵列检测器以及整合了对液质联用进行数据处理的变色龙软件等诸多产品。/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 338px height: 450px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201907/uepic/c75ade28-0dc1-4a84-8461-7e73d644d00a.jpg" title="1.jpg" alt="1.jpg" width="338" height="450" border="0" vspace="0"//pp style="line-height: 1.5em text-align: center "　　span style="color: rgb(192, 80, 77) "UltiMate3000型液相色谱/span/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　在2006年匹兹堡展会上，戴安推出了UltiMate3000型液相色谱全线产品，从纳升级到半制备到特色双三元液相色谱系统，涵盖全部液相流速范围，多种组合方式。2009年，戴安推出特色的CAD电雾式检测器，这款通用型检测器具有检测范围广、灵敏度高、响应一致性等优势，可检测任何非挥发性和部分半挥发性物质，尤其适用于检测那些无紫外吸收的化合物。同时不论是何种化学结构，CAD检测器可以对不同组分提供一致的响应，在没有标准物质的情况下，也可以通过其峰面积用其它物质的标准曲线回归对样品进行半定量分析。2011年，戴安公司加入赛默飞大家庭，经过多年发展，液相色谱已成为赛默飞色谱质谱部门核心产线之一。/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 600px height: 366px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201907/uepic/f125ee54-adc5-4ef2-983b-59cb1e3f17ac.jpg" title="2.jpg" alt="2.jpg" width="600" height="366" border="0" vspace="0"//pp style="line-height: 1.5em text-align: center "　　span style="color: rgb(192, 80, 77) "CAD检测器原理图/span/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　目前，赛默飞液相色谱主要有UltiMate和Vanquish两大系列，其中UltiMate提供常规、稳定的液相色谱技术 而Vanquish平台凝结了赛默飞40多年液相色谱产品经验，提供更高效的液相色谱体验。其中2018年赛默飞推出的Vanquish Duo UHPLC 系统，是一款专门为提升实验室生产力而设计的一款超高效液相色谱产品。该产品可以整合三套工作流程，两套流路，使用一个集成式解决方案。可串联液相或液质工作流程，双泵设计，可以通过双柱切换，节省了洗柱时间，尤其适合高通量分析。而双液相工作流程，赛默飞具有独有的双针、双检测器、双泵的方法，可同时运行两套分析方法，双倍提升效率。反梯度工作流程，搭配CAD检测器，可以使得进入检测器之前的流动相比例恒定，无需标准品即可定量。/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 450px height: 450px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201907/uepic/dd130d71-21eb-4285-80ca-101bae3f498b.jpg" title="3.jpg" alt="3.jpg" width="450" height="450" border="0" vspace="0"//pp style="line-height: 1.5em text-align: center "　　span style="color: rgb(192, 80, 77) "Vanquish Duo UHPLC 系统/span/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　span style="color: rgb(79, 129, 189) "strong极限性能、可靠易用是两大方向/strong/span/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　从诞生开始，液相色谱技术发展始终以分离为中心，而对液相色谱分离性能的革新目前主要集中于三个方向。第一是提升分析速度，如超高效液相色谱的诞生和发展，使得色谱分析时间缩短，速度多倍提升。第二是提高灵敏度，如现在光纤流通池的DAD检测器，灵敏度比传统检测器提升数倍 第三是增加选择性，如二维液相色谱，通过第二维度的再分离，可用于更复杂样品的分析。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　近年来，超高效液相色谱技术已经得到了广泛认可，但目前市场上常见的超高效液相色谱柱粒径多为1.6-1.8微米，而超高效液相色谱的最大耐压也大多集中在1200-1500bar，粒径大小、系统压力及上限成为了超高效液相色谱发展的瓶颈。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　除了进一步追求极限的分离性能之外，液相色谱技术的另外一种趋势是追求性能普通但是更可靠、易用的产品。液相色谱发展到今天，分离基本都能满足要求，主流厂商的仪器性能差异也不大。所以如何让液相色谱成为更方便易用，更适合大众常规实验室的需求的产品，也是目前各家厂商追求的大趋势。而在这方面，赛默飞液相色谱UltiMate 3000系列，性能稳定、皮实耐用，主打常规实验室，而Vanquish系列液相主要追求极限分离的性能，多层次、多角度满足客户需求。另一方面，赛默飞提供如维生素A、D、E的同时测定、室内空气的醛酮测定等液相色谱方法包等易用方案，旨在提升日常检测的便捷性。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　同时，未来液相色谱与多种技术的联用，提供更多的分析技术也会是液相色谱应用的一个趋势。如液相与ICP-MS联用，进行元素形态分析 与核磁共振波谱技术联用，从事组学或结构的分析等。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　strongspan style="color: rgb(79, 129, 189) "制药仍是液相色谱最大市场 生物药、中药空间巨大/span/strong/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　制药领域一直是液相色谱的主要目标市场，占比超过50%。近期，国家制药整体大环境是提升药品质量，淘汰落后产能企业，存留下来的优势企业必然面临着提升药品质量的强烈需求。所以，更精准、更全面、更高效率的超高效液相色谱需求仍然旺盛。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　除传统的化学药物之外，近年来，生物制药、中药快速发展，带来液相色谱需求增长迅速，增速远超制药整体增速。国家目前以立法形式明确中药是要重点传承与发展的领域，同时中药经典名方和中药配方颗粒的相关政策，也为液相色谱在中药领域带来了一些采购机会。而未来几年，注射剂一致性评价及2020版中国药典的更新，都会给液相色谱带来新机遇，包括超高效液相色谱、二维液相色谱以及CAD检测器等。针对热点领域，赛默飞先后推出了化学药物和中药复杂体系等全流程的整体解决方案。同时也在积极致力于与相关行业用户搭建合作平台，提供更多地技术交流培训。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　制药领域对合规要求超过了其他领域，在新的监管要求下，药品企业对分析工作流程的质量控制要求变得日益严格，以确保满足数据完整性法规和原始数据归档的需求。赛默飞的变色龙色谱数据系统，能够智能化管理实验室海量数据，可以在不牺牲效率的情况下，满足实验室合规要求。在数据完整性等合规方面，变色龙色谱数据系统通过用户管理、全局性策略、归档策略以及具有时间戳的审计追踪等功能，确保实验室的数据安全性。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　span style="color: rgb(79, 129, 189) "strong关注大健康 临床检测是液相色谱新蓝海/strong/span/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　健康是人类永恒关注的话题，生命科学及医学与人类健康息息相关，一直是科研的热点。目前，液相色谱已经被广泛应用于生命科学与医学相关的应用，如寡糖、氨基酸、多肽、核酸等分析测定发挥了重要的作用。近年来，代谢组学和脂质组学成为生物医学研究的主要推动力。赛默飞Vanquish Duo UHPLC凭借双针、双泵、双流路的独特设计，可以在一次分析中实现极性代谢物和非极性脂质高覆盖和高通量分析，提供了全新的同时测定代谢组学、脂质组学研究新手段和新思路。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　在临床医学检测中，液相色谱技术，由于分离和定量同时进行，可以同时检测不同种类药物，一次进样可以同时分析原药和代谢产物，具有高准确性和精确度，在治疗药物监测研究中占了非常重要的地位。目前，赛默飞在双三元液相色谱上已经建立了二十余种临床常用药物方法，已广泛应用于治疗药物监测中如抗癫痫药、抗真菌药、抗精神类病药、呼吸系统平喘药、抗生素等测定上。双三元梯度液相凭借独特的双泵设计，拥有诸多可能性，不仅可以轻松实现常规的应用，也可满足各种特殊功能需求。如在线净化SPE-LC全自动样品制备和分析的方案，无需复杂前处理，自动化程度高，重复性好，操作简便，受到医院工作者的青睐。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　与其它领域相比，对样品高通量的追求是生命科学及医学领域的特殊要求。因此，赛默飞提供适用于临床的自动化在线样品制备和Transcend多通道液相系统，系统无需耗时的协议创建、数据分析和昂贵试剂，就可以实现对多种复杂样品的高选择性和灵敏度分析。针对目前热门的临床医学检测领域，赛默飞将与合作伙伴推出临床体外诊断(IVD)液相色谱仪，通过OEM战略，将高效液相色谱平台快速提供给市场，拓展临床领域的布局。/pp style="line-height: 1.5em text-align: center " strong 扫码加小编微信，拉您进液相色谱用户群，交流学习液相色谱技术~br//strong/pp style="line-height: 1.5em "strong/strong/pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201907/uepic/c04d7282-f803-4e8e-bacf-66c535f01dc2.jpg" title="254335965074655087.jpg" alt="254335965074655087.jpg"//pp style="line-height: 1.5em "strong/strongbr//ppbr//p

药物分析方法开发共性难点岛津技术团队在与行业用户专家和用户交流中，收集以下共性难点反馈：1、基质化合物组成极性范围宽，色谱峰容量不够。2、中药基质复杂，在对特征峰鉴定时可能受到目标物附近其他峰干扰，影响鉴定准确度。3、聚合物杂质检测通常采用排阻色谱法，对聚合物杂质进行笼统的总量控制，定量不准确，且无法鉴定聚合物杂质的结构。4、采用HPLC-UV法进行杂质测定，但该方法无法将HPLC中使用的不挥发性流动相直接应用到LC/MS分析中，或者流动相与质谱不匹配。针对以上行业分析难点，岛津多年来持续致力于多维色谱质谱联用解决方案开发，将多类型色谱分离优势和质谱分析优势进行结合。岛津多维液相色谱质谱解决方案全二维液质联用系统&中心切割1二维液质联用系统Nexera-e 全二维液相色谱仪《中国药典》0512高效液相色谱法通则：二维液相色谱可以分为差异显著的两种主要类型：中心切割式二维色谱和全二维色谱。中心切割式二维色谱是通过接口将前一级色谱中某一（些）组分传递到后一级色谱中继续分离，面对复杂基质环境时，将一维目标峰切到二维进行更好的分析。全二维色谱是通过接口将前一级色谱中的全部组分连续地传递到后一级色谱中进行分离，如此两个独立的分离模式正交组合可实现尽可能高的峰容量。二维色谱可以是相同的分离模式和类型，也可以是不同的分离模式和类型，二维色谱可以和质谱联用。详情参考：https://www.shimadzu.com/an/products/liquid-chromatography/hplc-system/nexera-e/index.html2全谱二维液质联用系统极性覆盖范围宽:可一针实现宽极性多目标物的同时分析，可以胜任绝大多数分析项目中宽极性、多组分分析的要求。该系统和岛津最新推出的LCMS-9050高分辨质谱正负极离子同时采集功能结合，能得到4in1技术优势--相比岛津前一代方案，可以节省3/4的样品、分析时间，并减少3/4的质谱污染。3 SEC-RPLC-QTOF二维液相色谱-高分辨质谱为了解决前述聚合物杂质鉴定难题，岛津与北京新领先医药科技发展有限公司合作搭建了SEC-RPLC-QTOF二维液相色谱-高分辨质谱检测平台。基于该平台二维杂质动态上样、在线脱盐等技术，以及岛津高分辨质谱仪的高质量准确度和高质量稳定性等性能特点，目前双方的研发人员共同参与完成了十四种β-内酰胺类抗生素的聚合物杂质的全面解析，并建立质谱数据库。详情参考：https://mp.weixin.qq.com/s/etytDIXLjrICzsNfHOKgAw。4 Trap-Free 二维液质联用系统Trap-Free 2DLC系统是一套支持在线流动相转换的二维液相与色谱-质谱联用仪的组合系统，系统结构示意图见图 1。本系统的第一维液相色谱系统，可使用非挥发性流动相或者与质谱分析不匹配的流动相体系，通过系统中切换阀、程序命令的组合,对第一维液相色谱系统分离的组分进行分馏。本系统的第二维液相色谱系统,可以采用适合 LCMS 分析的液相色谱条件，针对分馏的组分，进行针对性的质量分析。详情参考：https://support.shimadzu.com.cn/pdfweb/web/viewer.html?file=https://support.shimadzu.com.cn/an/downa/AP_News_LCMS-QTOF-053.pdf全谱二维液相色谱与四极杆飞行时间质谱联用分析不同产地当归的活性成分a) 正模式火山图结果 b)负模式火山图结果根据多元统计分析OPLS-DA 结果的 VP 值，可以初步筛选出甘肃产当归和云南产当归的差异活性物质，进一步筛选则通过结合单变量统计火山图结果(P-value 与Fold change) 进行。最终正模式下筛选得到 1351 个差异物质，负模式下筛选得到1716 个差异物质。通过 MSDIAL软件，对化合物进行鉴定，共鉴定出 43种差异性化合物,包括藁苯内酯类有机酸类等天然活性物质，下表为部分差异性化合物鉴定结果表。详情参考：https://support.shimadzu.com.cn/pdfweb/web/viewer.html?file=https://support.shimadzu.com.cn/an/downa/AP_News_LCMS-QTOF-073.pdf岛津携手阳光诺和揭示头孢西丁钠新颖聚合方式图1 头孢西丁钠破坏样品检测色谱图本方案一维采用HPSEC系统，磷酸盐流动相定位头孢西丁钠中的聚合物杂质，然后采用阀切换技术，使用500 μL定量环将聚合物峰全部转移至二维反相色谱，脱盐、分离并质谱鉴定。其中聚合物C1分子量较2分子头孢西丁少2个H（Mr. 852.09），根据其同位素比例和特征碎片离子信息，推断其为一分子头孢西丁7-位侧链与另一分子头孢西丁7-位噻吩环联结形成的，该新颖聚合方式尚未见文献报道。本研究建立了注射用头孢西丁钠聚合物检测的反相色谱方法，并探索其用于日常检验的可能性。C1一级质谱图（A）和母离子m/z 870的二级质谱图(B)（ESI+）详情参考：《Characterization of polymerized impurities in cefoxitin sodium for injection by two-dimensional chromatography coupled with time-of-flight mass spectrometry》.https://doi.org/10.1016/j.talanta.2023.125378二维液相色谱联用四极杆飞行时间质谱仪对赤芍配方颗粒特征图谱2号峰鉴定配方颗粒特征图谱（1D） 配方颗粒特征图谱（2D）一维液相特征图谱中的2号特征峰切入至 50 μL定量环进行收集，再由二维流动相进行洗脱，该组分在二维液相上的保留时间为 35.267 min。采用岛津 2DLC+LCMS-QTOF对赤芍配方颗粒特征图谱中2号特征峰进行了高分辨质谱定性研究。经 MS1、MS2质谱图信息、相关文献信息以及标准品确认，最终鉴定2号特征峰为原花青素 B1。本研究为中药配方颗粒特征成分研究提供了思路，为赤芍中药配方颗粒特征图谱标准制定提供参考依据。Trap-Free 2D LC Q-TOF 定性分析宫缩抑制剂阿托西班中的多聚体杂质阿托西班二聚体的[M+3H]3+峰分子式预测结果 阿托西班二聚体解卷积分析结果阿托西班三聚体的[M+2H]2+峰分子式预测结果 阿托西班三聚体解卷积分析结果针对多肽药物中的由两个或多个多肽组成的稳定的多聚体杂质，可利用体积排阻色谱法(SEC)分离相关杂质。本案例采用岛津Trap-free 2DLC+LCMS-9030，既能避免SEC的色谱条件与质谱离子源不匹配，也能有效解决液相色谱分析浓度过高而导致的质谱信号饱的问题。结果显示阿托西班二聚体和三聚体的 MS1的离子质荷比同理论值均小于1mDa。使用 Insight Explore 软件中解卷积功能预测目标物的分子量，预测分子量和理论分子量的误差小于3ppm。详情参考：https://support.shimadzu.com.cn/pdfweb/web/viewer.html?file=https://support.shimadzu.com.cn/an/downa/AP_News_LCMS-QTOF-053.pdf注：本文中所用数据均为岛津实验室特定条件下的测试数据，结果可能随实际情况变动文中涉及最佳、最低类描述，限于实验组别对比结果。本文内容非商业广告，仅供专业人士参考。

液相色谱多元高压泵与低压泵的区别与比较 我们在使用高效液相色谱仪做分析时通常会接触到多元泵。所谓几元，指的是能同时控制流路的多少。多元泵又分为高压混合与低压混合。高压混合又叫泵后混合，多元高压泵由多个泵构成，有几元则有几个泵，例如LabAlliance的PC2001型二元高压梯度泵、Series 4000系列的四元高压梯度泵等。低压混合又称泵前混合，其实就是一个泵，几元就是安装几路电磁阀，例如Agilent 1200型四元低压梯度泵等。为方便理解，附图如下（以四元泵为例）：如图所示，四元高压梯度：配置有四个可独立工作的泵+在线混合器。工作方式为四个泵并联，可同时有四个流动相，按照预先设定的配比进入，分别送液到泵后的混合室内，在高压下进行混合，混合配比更准确，不易产生气泡，不用为了转换流动相而反复清洗，不仅节省溶剂，也提高了工作效率。无需增加真空脱气机，降低了混合死体积（泵前混合时、混合管、泵头等体积，脱气机内死体积）。同时，可以做梯度洗脱：当待测样品成分复杂，用一个固定的流动相配比无法将样品中成分完全分开时，就需要用到梯度洗脱，在同一个分析过程中由仪器自动改变流动相配比，将样品中前期无法分离的物质进行洗脱，在同一谱图中得到分开的峰的效果。有助于提高分析准确性，避免了遗漏重要物质或对其进行错误定性定量。 然而，四元低压梯度：配置比较繁琐：由单泵+低压混合比例阀（电磁阀）+在线脱气机+混合器构成，它的工作方式也与高压梯度泵有很大区别：最多可同时有四个流动相进入流路，按照预先设定的配比进行混合，是依靠电磁阀的切换使泵分段输送不同流动相，由于在常压下混合，气泡很容易从溶剂中析出，较易产生气泡，因此必须配备在线脱气机，可消除气泡影响。可以做梯度洗脱，在仪器上进行设定之后，在同一样品分析工程中，相隔一段时间后，按照用户的设定自行改变流动相配比，将样品中组分分离开来。目前HPLC仪器制造厂家大都推出四元低压梯度（带在线脱气）系统，而在数年前大都是二元高压梯度，以往四元低压系统通常是进口仪器的专属产品，国内大多采取高压混合的方式，并没有涉及到低压系统的应用开发，在国内有些招标项目中也有明确提出选用四元低压的案例，广大客户可能会误以为四元低压是进口仪器的先进技术，实则不然，四元低压实际上是对二元高压的补充，也就是说当比例发生改变的流动相数量较多，二元高压不能满足分析的时候，四元低压弥补了这一不足。但如果比例发生改变的流动相数量在2个以内，包括2个，应该来说二元高压梯度系统在作高精度分析时优势明显。从目前的售价看，四元低压的泵比二元高压的并低不了太多，但他们节约的成本是不少的。四元低压梯度系统采用单泵加梯度比例阀来实现，因为比例阀是在泵前的，并且各流路的溶剂在比例阀里就混合在一起了，所以是泵前、低压混合。一般地，对于常规分析来说，四元低压梯度也可以满足需要；如果分析样品成份复杂、对重现性要求较高，或者需要在低流量下进行梯度分析，还是选择高压梯度好一些。当然，现在美国SSI（LabAlliance）公司推出的四元高压梯度泵，在保证高精度分析的同时，也解决了流动相数量受限制问题。液相色谱从性能上比较，四元高压肯定优于四元低压。四元高压的混合比例是通过改变泵的流速来获得的，通常泵的流速都是很准的，所以混合的精度也是很高的。四元低压梯度的混合比例是通过控制不同流路的电磁阀的开闭时间长短来控制的，理论上混合的比例也是准确的，但是实际上电磁阀的开闭会有一个延迟，无论它动作多么快，总还是需要一点时间的。比如A路和B路各50%混合，在单位时间内，A路和B路的电磁阀各开通50%的时间，这时问题不大，电磁阀的延迟影响可以通过调整补偿系数来尽量弥补。但是如果极端一点的情况，A路99%，B路1%，这种情况下单位时间内，A路的电磁阀开通99%的时间，B路只占 1%，时间是很短的，这时B路电磁阀的延迟就影响很大了，甚至可能延迟的时间比工作的时间还要长。这是两个管路的情况，假如四个管路同时工作，其结果可想而知。高压梯度就不会存在这种问题了。此外，低压还应注意清洗，尤其使用缓冲盐时，电磁阀送液管路很容易堵住。