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液相色谱开发方法

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液相色谱开发方法相关的论坛

  • 液相色谱方法开发求助——12月加5钻石币

    液相色谱方法开发时经常会遇到两种情况： 1.在谱图的最末端会起一个高高的峰，但实际里面并不含物质。 2. 物质没有被检测出，溶剂峰后并没有出，改变方法后会出峰。 3. 梯度洗脱时基线出现漂移甚至跳跃？ 这种情况为何出现，如何避免？

  • 【我们不一YOUNG】+新手小白如何进行液相色谱方法开发？

    [color=#666666][font=宋体][back=white][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱[/url]（[/back][/font][font='Times New Roman',serif][back=white]LC[/back][/font][font=宋体][back=white]）方法开发是一个涉及多个步骤的过程，旨在确保分析结果的准确性和可靠性。以下是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱[/url]方法开发的一般流程：[/back][/font][font='Times New Roman',serif][back=white]1.[/back][/font][font=宋体][back=white]了解分析物的理化性质：在为分析物制定分析方法时，了解其理化性质至关重要。考虑的因素包括分析物的[/back][/font][font='Times New Roman',serif][back=white]pH[/back][/font][font=宋体][back=white]值、极性、溶解度和[/back][/font][font='Times New Roman',serif][back=white]pKa[/back][/font][font=宋体][back=white]。这些参数在[/back][/font][font='Times New Roman',serif][back=white]HPLC[/back][/font][font=宋体][back=white]方法开发中至关重要，影响着溶剂的选择和整个方法的成功与否。[/back][/font][font='Times New Roman',serif][back=white]2.[/back][/font][font=宋体][back=white]色谱条件优化：包括检测器、[/back][/font][font=宋体][back=white]色谱柱和[/back][/font][font=宋体][back=white]流动相的选择，并生成样品的“初始”色谱图。决定是开发[/back][/font][font='MS Gothic'][back=white]?[/back][/font][font=宋体][back=white]梯度方法还是等度方法，这两种方法都具有不同的优势，具体取决于分离要求和分析物的性质。[/back][/font][font='Times New Roman',serif][back=white]3.[/back][/font][font=宋体][back=white]色谱柱的选择：色谱柱是色谱仪的核心，在实现可靠、准确的分析中起着举足轻重的作用。选择好的色谱柱可确保良好的色谱分离效果，从而获得值得信赖的结果。反之，色谱柱选择不当会导致分离不充分和混乱，使结果无效或难以解释。[/back][/font][font='Times New Roman',serif][back=white]4.[/back][/font][font=宋体][back=white]流动相的选择：流动相的选择对于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱[/url]方法的开发至关重要。一般来说，反相[/back][/font][font='Times New Roman',serif][back=white]LC[/back][/font][font=宋体][back=white]的流动相包括水和作为改性剂的乙腈或甲醇。改性剂还有四氢呋喃[/back][/font][font='Times New Roman',serif][back=white](THF)[/back][/font][font=宋体][back=white]和异丙醇。反相色谱中流动相中水相的[/back][/font][font='Times New Roman',serif][back=white]pH[/back][/font][font=宋体][back=white]和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。[/back][/font][font='Times New Roman',serif][back=white]5.[/back][/font][font=宋体][back=white]方法验证：对最终的方法进行验证，检查它是否满足预期的分离效果与分析目的。这包括启动阶段的信息搜集、方法使用的目的明确、以及通过实例展示系统策略来进行方法筛选。[/back][/font][font='Times New Roman',serif][back=white]6.[/back][/font][font=宋体][back=white]优化和改进：根据初始实验结果，可能需要调整色谱条件以优化分离效果。这可能包括改变流动相的比例、调整[/back][/font][font='Times New Roman',serif][back=white]pH[/back][/font][font=宋体][back=white]值、改变温度等，以获得最佳的分离度和分辨率。[/back][/font][font='Times New Roman',serif][back=white]7.[/back][/font][font=宋体][back=white]样品制备：确保样品以适当的方式准备，以便在色谱分析中获得最佳结果。这可能包括样品的溶解、稀释、过滤等步骤。[/back][/font][/color]

  • 谈谈液相色谱定量方法学开发（定量）

    谈谈液相色谱定量方法学开发（定量）

    今天读到傅若农教授的文字，感到很温暖。想想我这个分析化学战线的逃兵，将彻底地和分析化学说再见了。但是，我还是讲我的一些思路做一个总结，希望能给我们90后的分析工作者有点启发。接着去年我那个帖子。《谈谈液相色谱方法开发》，有网友希望我写点定量方面的内容。那么，今天，我权当抛砖引玉。当然，我写的很不成熟，希望大家批评指正。http://bbs.instrument.com.cn/topic/5957822在做好了分离方法之后，我们需要对我们的目标物进行定量分析。定量分析的思路一般是http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/06/201606241414_597987_1626663_3.png一般来说，通过这套思路来进行定量方法学的验证。这个是一个通用的方法。当然，这也是十五多年前我做课题时候。 我导师教我的，现在也许也有发展了吧。

  • 【原创大赛】谈谈液相色谱方法开发

    【原创大赛】谈谈液相色谱方法开发

    在沉寂了2年之后，qingqingcao再次探讨高效液相色谱。这次和大家探讨一些关于HPLC方法学开发的问题。当然，这是很久以前的思路，在今天看来是比较幼稚的，但是，如果能够给大家一点哪怕一点点启示也是好的。当然文章有很多缺陷，也希望大家批评。高效液相色谱在极性的角度可以分成正相色谱分析和反相色谱分析。反相色谱分析一般使用水-甲醇-乙腈体系，一般选用C8，C10，C18 柱子，主要使用C18键合相柱子。非极性物质一般用氯仿-正己烷体系。因为qingqingcao没有做过正相HPLC分离，所以，我们主要关注反相HPLC分析。色谱柱的选择当然，选用的色谱柱一般就是C18柱。长度呢？如果分析的物质复杂，那么可以选取长一些的，比如250mm╳4.6mm╳5μm。保证其分离度。 如果物质不是很复杂，那么选取150mm╳4.6mm╳5μm的色谱柱，可以有效地缩短分析时间。检测器的选择紫外检测器是最通用的检测器之一，所以，本文均以紫外检测器做说明。对于需要分析的物质，做全波长扫描，由于物质的不同官能团，他们会在不同的地方有吸收。通过综合选取大家都有吸收的波长。选择波长需要有权衡。同时也可以用一些特殊的波长，避免杂质的吸收，也可以提升测试准确度。或者使用双波长的方法。流动相的选择对于选取流动相，首先实验一下样品的溶解度。样品在水中，甲醇，乙腈中溶解程度。如果，很容易溶解在水中，这就告诉我们，流动相选取，可能有机相要少些，比方说测试维生素C，其极性很强，流动相中有机相比例不能多。（为了保护色谱柱，有机相比例一般不少于8% ）如果，样品不太容易溶解在水中，那么有机相的比例应高些，比方像维生素E，就可以用90% -95% 的甲醇体系。其次是样品的酸碱度。我们知道，C18色谱柱流动相pH在2-8 之间。太酸，太碱都可能损坏色谱柱。流动相pH值对于分离有一定作用，所以，酸性物质，一般流动相酸一些，碱性物质可能碱一些。对于几种物质的分离。如果不是太多的物质，用等度方法会比较好。流动相一般开始选用20mM磷酸缓冲盐-乙腈体系。（pH一定，流速一定）。因为乙腈洗脱好，而且粘度低。通过水相-有机相的比例的改变，观察各色谱峰的分离情况。这样可以运用无限夹逼法找到最合适的值。比方说，35：65（ACN：磷酸盐）达到分离，但是还是有部分叠加，那么就微调即可。当然还要考虑到分析时间问题。不要为了完全分离而牺牲了分析时间。所以，在色谱分析，有一个k值（容量因子）。κ∈（2，20）如果真的无法改变，那么可以试着微调pH值，来分离。当然，由于乙腈毒性强，所以通过一定计算，用甲醇同等地接替乙腈。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509251447_567900_1626663_3.jpg如果有些物质很靠近死体积，那么需要考虑添加0.02mM离子对试剂，加强物质的保留能力。流速一般液相流速在0.8-1.4ml/min。首选1.0ml/min柱温柱温不影响色谱的分离，但是，相对稳定的温度，可以使得保留时间稳定。进样量手动进样，只有进样环。一般也就是20μL。自动进样的选择很多。但是，最好不要超过80μL。因为进样多，容易造成展宽。分离物质的浓度：分离物质，不能够太浓也不能太稀。太浓，容易过载；太稀检测不出。具体还是根据检测器的响应来调整。总结一下HPLC分析，首先要找到合适的流动相。流动相既要保证分离，又要关心分析时间。流动相尽量使用毒性小一点的甲醇。根据样品和标准品的PH值进行调节流动相溶液酸碱度。检测波长很重要，要懂得合适的波长。也就是说，这个单一波长可以分析出所有需要分析的物质。可以通过波长的调整，规避杂质峰的干扰。温度和流速都对分离，影响不大。分离条件摸索好后，就可以开展1）线性浓度测试2）精密度测试3）样品测试4）回收率测试5）空白测试。6）最小检测限，最小检测量定量的工作比较简单，就是按照以上的思路去操作。那么一个项目就这么完成了。当然，这些需要我们的工程师们的努力和智慧。也许，qingqingcao也不再写色谱方面的文章了；因为我没有机会去碰HPLC仪器了。那么，就拿这篇文章作为一个纪念吧。想想从2002年春天，还是一个大学生，去做HPLC，笨手笨脚的，导师也经常批评我。后来又接触了不少的HPLC仪器，也做过维修维护，开发过方法，做过常规工作……这么多年了，一个生手，变成一个熟练工，也能做一点点方法开发，青春就贡献在HPLC上了。看着论坛上有许多HPLC高手，他们的文章，让我觉得，我们时代的发展。后浪推着前浪。后浪必定会超过前浪的。我也希望，我在论坛上写的这些东西，能够给初学者一点点启示，当然，如果有错误的话，希望不会误导大家。如果能够记住qingqingcao做了一点事情，曾经在HPLC上做过点事情，我也欣慰了。也谢谢仪器信息网官人们的努力工作，为我们搭起这样一个平台。

  • 液相方法开发和色谱柱选择，检测糖的仪器方法和色谱柱选择

    液相方法开发和色谱柱选择，检测糖的仪器方法和色谱柱选择如你们喜欢，可以加入我们的小团队。 名为：shooter 团队里面有大学的教授（帅气的老外教授（我们的最终决策人）），各个地方的检验人员，和对液相感兴趣的年轻朋友。我们团队现在的进程是讨论液相色谱的条件，通过我们来把一些在液相上分析时间长的旧方法改为快速高效的方法（必须要成为实例）。 希望你们的加入，具体方法在论坛留言给我，我会尽快回复你们。 我们需要的你是能和我们融合为一个Team！

  • 16种塑化剂的液相色谱分析方法终于开发完成，累死我了

    16种塑化剂的液相色谱分析方法终于开发完成，累死我了

    16种塑化剂的液相色谱方法开发终于算是完成了，整整一个月的时间，换过不同的柱子，尝试过各种不同的流动相种类和配比，250多次方法摸索和进样，一针一个多小时啊，项目逼得紧，周末无休，简直都快疯掉了。这16种塑化剂同时分离太难了，好不容易把这两个挨得很近的化合物分开，那两个又并一块儿去了，特别是第三组的四个峰DIBP、BBP、DBP和DBEP，真的是按下葫芦浮起瓢，如果流动相中乙腈多一点前两个峰分得开，可后两个峰却粘得更紧了，而甲醇多一点则前两个峰又粘一块儿去了，而且水的多少也是一个不可忽视的变量。由于是同时分析，所以每个峰必须都要能看得到，头大啊，一个月中大概有3/4的时间都是在解决这四个峰的分离度问题，最后把流动相调成A相是水：乙腈＝60：40、B相是甲醇：乙腈＝60：40的情况下才实现了这四个峰各自1.0以上的分离度。邻苯二甲酸二辛基酯和二壬基酯在C18上根本分不开，选择性不行，在C8上却很好的实现了基线分离，看来C8和辛基（也是8个碳原子）确实体现了比较好的选择性的一面。以下是谱图和数据，与大家一起分享。液相色谱仪：WUFENG LC100 二元高压梯度系统色谱柱：PntulipsTM BP-C18, 5um, 4.6×250mm流动相：梯度时间（min）A相：水/乙腈＝60/40B相：甲醇/乙腈＝60/4001000310002150[align=cent

  • 【第三届网络原创大赛】液相色谱方法开发的一般规则

    【第三届网络原创大赛】液相色谱方法开发的一般规则

    液相色谱方法开发的一般规则 高效液相色谱方法的开发是一个繁复的过程，但不管再繁复，也有其规律可寻。方法开发过程中，一个总的原则是：先找到目标化合物的峰，然后调整峰形，再是进一步完善。1. 找到目标化合物的峰：要找到目标化合物的峰，我们该如何开展工作，先举一个例子，下面是分析氟康唑氯化钠注射液的一个谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/07/201007081805_229421_1896702_3.jpg谱图上的内容主要包括：色谱柱、波长、流动相、温度、流速和进样量这几项。这意味着如果这几个色谱条件都确定下来了就可以基本认为这个方法已经开发成功，所以开发方法时我们可以通过逐一的考查这几个色谱条件来进行。 考查色谱条件是需要通过在色谱仪上进样来进行的，这就需要我们首先确立一个初始条件，即回答从何开始的问题。在回答好“从何开始”这个问题之前，我们先要了解我们的被分析物，就像一场战争，首先要知道自己的敌人是谁一样，我们要了解它的物理、化学性质，特别是化学结构式非常关键。所以，色谱方法开发工作可以通过如下的步骤来展开：1）收集资料：对它的分子量、结构式，以及在水、甲醇、乙腈、四氢呋喃、正己烷和异丙醇中的溶解度有一个初步的了解。对分子量的了解在选择色谱柱的过程中是非常重要的，因为色谱柱填料的孔径对化合物的分离具有重要的影响，例子如图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/07/201007081807_229422_1896702_3.jpg 由此可以看出填料孔径对分离度和峰形是有一定影响的，120A的色谱柱通常适用的范围为分子量10000的，如果分子量太大，在填料为120A孔径的柱子上分离度会比较差，因为样品分子在色谱柱上有较好的保留是由于可以进入到填料的微孔里面，与键合在表面上的C18长链相互作用，通常孔径直径需要大于分子直径的3倍以上才不会对分析造成影响。因此一般分子量10000一下的化合物建议用120A的柱子来分析，分子量大于1W小于20W的用300A的来分析，分子量大于20W的就要用凝胶柱了。 结构式对于分子极性大小的预测以及后续调整峰形时具有非常重要的作用，如－COOH、－NH2、－NHR、－NR2、－OH等都是极性基团，而苯环、己环、－CH＝、－CH2－CH3等都是非极性基团，根据经验大致对其极性做一下判断，估计一下可能在C18上（用得最多，我们最熟悉）的保留性能如何，再结合目标化合物在上述所说的几种溶剂中的溶解度状况，对方法开发时可能用正相柱还是反相柱来作一个粗略的判断，以及方法开发完成后的认证有作用。2）选择色谱柱 I）填料孔径的选择：根据所查资料获得的化合物分子量信息来确认色谱柱填料的孔径； II）填料键合相（键合相是指C18、C8、苯基柱等）的选择：在没能查到做过该样品的相关资料之前，或者并不了解其极性之前，通常最好选择C18柱作为初始的色谱条件。因为C18柱是我们用得最多的，也是对其色谱保留性能最了解和熟悉的，在C18柱上获得的信息我们可以预测其极性，以及为解决遇到的问题问题下一步可能将采取的措施。 III）填料粒径、色谱柱型号的选择：在没有特别指明之前，最好使用我们常用的5um、4.6×150mm或250mm，和前面首选C18作初始条件一样，是为了方便预测其保留性能。3）检测器和波长的选择 目前使用最为普遍的是UV检测器，因此，在不了解其是否有紫外吸收的情况下，我们先要了解其这一性能，用标准品配成合适的溶液进行紫外扫描，收集目标化合物最大吸收波长的数据，确定波长；或者是在有DAD检测器的条件下进几针标准品溶液，通过DAD的三维谱图可以获得化合物最大吸收波长的相关信息。如无紫外吸收，则需选用合适的检测器。因为检测器是我们监测化合物是否出峰的工具，是我们的能看到化合物的“眼睛”，也是我们开发方法的基础，因此非常重要，需认真选择。[font=Times New

  • 【原创】7月18日液相色谱群友聚会-液相色谱学术沙龙-方法开发和仪器维护维修

    因7月10-12日赴青岛参加仪器仪表学会[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]专业委员会理事会议，活动改到7月18日，本活动由液相色谱爱好者自发组织，自愿演讲，没有报酬，不代表任何厂家。活动时间：2009年7月18日，9：30-16：30，星期六一天。 活动地点：上海市梅陇路130号 华东理工大学 实验十五楼7楼726会议室。参加人数：根据场地的大小，建议不超过35人。活动费用：这次不收费，但午餐费用自理，暂定10元/人。报 告 人： 恐龙、 amian、小k，spb_tang等。报告内容：(暂定，等补充） 恐龙：奶粉中三聚氰胺色谱分析方法的比对（采用离子对色谱、亲水色谱以及离子交换色谱三种不同的液相交换机理，比较各自方法的优缺点） 恐龙：实用HPLC方法的建立 amian：An Efficient Approach to Column Selection in HPLC Method Development spb_tang：液相色谱手性分离（手性化合物液相色谱分离的方法建立） 小K：液相色谱仪的维护和保养请准备参加的人员，在发帖处回复，同时发站内短信给我，姓名，电话，单位以及e-mail。同时提出对这次沙龙的要求。在确定日程后发通知给大家如有谁愿意进行上台交流的，请积极报名。

  • 液相色谱的问题解决：方法开发，峰形不正，干扰峰

    [color=#3e3e3e] 问题：我们开发了一种方法来检测食物样品中的苯二甲酸，此法是先对样品进行皂化处理，然后用反相离子对色谱法来分析。经皂化后，基体的酸性非常强。在所有分析方法中，是液相色谱（LC）法最好，还是离子交换色谱法更加适合呢？[/color][color=#3e3e3e][/color][color=#3e3e3e]　　解答：对于如苯二甲酸的酸性样品，离子对色谱法是可取的，离子交换色谱法也是可行的，但我选择了从一种较为传统的技术开始。通常我喜欢使方法简洁一些。方法越是简单，引出的问题也就越少。因此，我从反相色谱法开始研究，它使用低pH值的流动相。（如果你决定用离子对或离子交换色谱法，在本节的末尾部分我就这两种方法如何进行添加了一些论述。）[/color][color=#3e3e3e]　　从15或25cm×4.6mm，5um的C-8或C-18色谱柱开始。我比较喜欢用新型的碱灭活硅烷作为柱填料，而不喜欢旧型的色谱柱，因为碱灭活硅烷对拖尾较不敏感，并且在较宽的pH范围内稳定。为了在离子抑制的环境下操作，流动相的pH值应低于酸的pKa1-1.5个pH单位。苯二甲酸的第一个pKa为2.9，则需要在pH=1.4-1.9的环境下操作。一般情况下，除非你知道色谱柱在什么环境下是稳定的，否则我们应该尽量避免在pH〈2的环境下操作。我从pH=2.0开始，用25mM的磷酸盐缓冲液作为流动相的水溶液部分，同时用乙腈或甲醇作为有机溶剂。在这些条件下，苯二甲酸未能充分离子化而得不到好的峰形，并且表现得像中性化合物。因为芳香烃的特性，所以用UV检测在255nm应该有可能。[/color][color=#3e3e3e]　　我较喜欢用搜索梯度来准确本身的流动相强度，正如以前的“液相色谱的确问题解决”和参考文献2所述。用有选择地逐步处理作为方法开发，开始时用90%有机溶剂作为起点，然后有机溶剂含量逐渐下降10%，直到得到合理的保留时间为止。在样品注射前可调节其pH值，使之与流动相的pH值接近。[/color][color=#3e3e3e]　　低pH值流动相中的离子抑制比在高pH值流动相中的有更多优点。低pH值时，苯二甲酸的离子化受到抑制，所以会表现得像中性分子而其保留时间可预测且得到可接受的峰形。低pH值也抑制固定相中硅醇基团的离子化，这有助于减少峰拖尾。所有的反相色谱柱在3〈pH〈7的范围内是稳定的，而较新型的色谱柱可在2〈pH〈8甚至更宽的范围内操作。[/color][color=#3e3e3e]　　如果你想在高pH值下操作，你应该知道pH值大于8时柱填料中的碱性硅会溶解。有些色谱柱比其它色谱柱稳定一些，较高的pH值下，封尾的色谱柱比没有封尾的色谱柱更加稳定。在碱性条件下，当用有机缓冲液（如柠檬酸）替代无机缓冲液（如磷酸盐）时色谱柱的稳定性得到改善。一种选择是使用聚合物反相色谱柱。这些聚合物色谱柱对pH值不敏感，但它们趋向于产生比硅胶色谱柱较低的理论塔板数和较宽的峰。[/color][color=#3e3e3e]　　你提议的离子交换色谱法是在高pH值分离的另一个可能。离子交换相附着在聚合物小球上，具有你寻找的pH值稳定性，但与相应的反相色谱柱比较，其理论塔板数较低。[/color][color=#3e3e3e]　　[b]峰变形[/b][/color][color=#3e3e3e][/color][color=#3e3e3e]　　[/color][color=#3e3e3e]问题：上一部分就苯二甲酸开发分析方法时，我们发现了如果制备苯二甲酸标准溶液时用水代替甲醇则其峰形得到改善。是什么原因导致这样的结果呢？我们使用的流动相是20：80（V/V）的甲醇-5mM磷酸盐缓冲液，并加入10mM四戊铵溴化物作为离子对。[/color][color=#3e3e3e]　　解答：这样的结果是由注射入太大量的过强的溶剂引致的。图1解析了这个问题。图1a所示是变形峰，是将30ul样品注射入流动相的结果，样品用乙腈溶解，而流动相是含乙腈18%的水溶液。图1b所示的是正常峰，是用流动相作为注射溶剂溶解相同的样品。如果样品用不同于流动相的溶剂溶解，当被注射入时，样品溶液与流动相混合，并被稀释。如果注射的溶液比流动相强度大，则样品像在较强溶剂中一样会立即移动，并且较快地通过色谱柱，正如图1a所示，其保留时间比较短。当注射入的溶液与流动相混合时，有些分子与流动相的混合比其它分子更快，则它们穿过色谱柱的速率将发生改变，则谱带发生变形。如图1a所示，峰变形现象对较早洗脱的峰影响较大。解决将注射溶液量减至最少的问题的关键是使稀释在瞬间发生或者用强度不大于流动相的溶剂来溶解样品。较弱的溶剂在色谱柱中将样品浓缩，因此得到的峰往往是比注射入较强溶剂时更窄。[/color][color=#3e3e3e]　　因此作为一般规律，如果样品溶于比流动相强的溶剂，则注射体积应少于25ul。注射容积取决于注射溶剂与流动相之间到底存在多大的差异，此差异很容易凭经验判断――只是等体积地增加注射的量直到峰开始变形，然后返回两个单位就可以了。在读者的问题中，样品溶于甲醇，但甲醇比流动相强得多，所以他得到变形的较宽的峰。当他用水代替甲醇时，则样品溶液弱于流动相，峰形就得到了改善。在离子对色谱法中，总是用流动相作为样品溶剂以减少基线后移现象。[/color][color=#3e3e3e][/color][color=#3e3e3e]　　[b]干扰峰[/b][/color][color=#3e3e3e]　　问题：在反相LC分离法中，怎样避免溶剂前置峰对分析峰产生的干扰呢？[/color][color=#3e3e3e][/color][color=#3e3e3e]　　解答：有些化合物不具保留性，在开始分离时就被洗脱下来，避免这些物质的干扰的最好的方法是增加待分析化合物的保留时间。通常如果保留因子（k）大于1，则其色谱法和分离效果都会比较好。利用溶剂前沿作为规则可估计出k的值。色谱图的第一个峰通常是溶剂前沿峰或杂质峰，此峰的洗脱时间为色谱柱的死时间（t0），此时间表示一个在色谱柱中不保留的化合物通过色谱柱的时间。紧跟着死时间出来的是与色谱柱作用很小，并且很难从溶剂前沿和其它化合物的杂质峰中分离开来的物质。为了获得k值大于1，被检测的化合物的保留时间必须是死时间的两倍以上。例如，图1b中9.03min处的峰，其k值大约为1。[/color][color=#3e3e3e]　　你可以通过使用较弱的溶剂来增加保留时间。对于反相LC，弱溶剂一般是水或缓冲溶液。每改变溶液中的有机溶剂含量的10%，则保留时间大约变化3倍。为了获得期望的保留时间，你可以利用这个“3倍规则”来估计需要改变多少有机溶剂。[/color][color=#3e3e3e]　　如何开始？[/color][color=#3e3e3e][/color][color=#3e3e3e]　　问题：就反相LC分离而言，我看了很多关于选择初始条件的文献，但总体来说觉得很混乱，C-8好还是C-18好呢？我需要一根长为15cm的色谱柱还是25cm的色谱柱呢？我应该用乙腈还是甲醇那一种作为有机溶剂呢？就初始条件的选择你能给我一些指引吗？[/color][color=#3e3e3e]　　解答：让我们单独地分析每一个参数吧。首先，C-8好还是C-18好，又或者是其它固定相更好呢？就大多数的应用而言，你选择任何一种固定相都只有很少的差异。对于某些物质，C-18比C-8更具保留性，所以极性较小的样品选用C-8柱比较适合，同时，极性越强的物质在C-18柱中的保留性就越强。对大部分物质而言，这样选择色谱柱是正确的。填料物质的特性是一个更重要的选择。新型的、洁净的、碱性去活硅（B型）有利于新方法的开发。在我的经验中，这些固定相比旧型的固定相总是产生更好的峰形和更少的拖尾。我坚信，你为色谱柱付出多少就有多少收获--$200一根的色谱柱不可能给你$400一根的色谱柱的运行水平。当然例外是存在的，但对大部分情况而言，当你在方法的开发上花费了数千美元并在分析上花费了数万美元时，色谱柱的分离能力有可能很差吗？[/color][color=#3e3e3e]　　色谱柱长度是另一个反复选择的内容。大部分微粒的分离需要8000-10000的塔板数，填充5um微粒的15cm长的色谱柱或含有3um微粒的7.5-10cm长的色谱柱对实际样品会产生这个塔板数。所以仅从塔板数来看，长为15或25cm的色谱柱都是合适的。我比较喜欢用15cm×4.6um，3.5-um的色谱柱，因为它们能在流速为2ml/min，同时柱压为2500psi的条件下操作。较长的25-cm的色谱柱对于相同的柱压要求较低的流速。较长的色谱柱产生大约3倍的通过时间，这是因为柱长和流速大约影响整个分析结果的30%。使用一根新型的7.5cm×4.6um，3.5-um的色谱柱是另一个选择。这些色谱柱在大约一半的时间内产生与15cm的色谱柱相近的塔板数。你必须使用较短的、小微粒色谱柱避免产生柱外带加宽现象。你也可以使用窄孔柱（1-2mmi.d.），但他们也对由柱外因子引起的带加宽非常敏感。[/color][color=#3e3e3e]　　最后，有机溶剂也是经常选择的内容。溶剂应该与水完全混溶，与分析物及色谱柱均不起反应，粘度低，适用于所使用的检测器。最常用的三种溶剂是乙腈、甲醇和四氢呋喃。四氢呋喃是平时最坏的选择―操作时令人感觉不适，化学不稳定（放置一段时间后会形成过氧化物），平衡速度慢。甲醇是基本无毒的，并且对于检测波长高于220nm的物质是一个好的选择。然而，我的第一选择是乙腈，因为我的实验开发的许多方法都是需要在低波长检测的。[/color][color=#3e3e3e]　　总而言之，我喜欢的初始条件是15cm×4.6mm，5um的C-8或C-18色谱柱，流速为2ml/min，乙腈-水或乙腈-缓冲溶液作为流动相。我也成功使用过7.5cm×4.6mm，3.5-um的色谱柱。这些色谱柱中的任何一根都会提供一个好的出发点，因为它们对于大部分的分离而言都提供了足够多的塔板数，能在较低波长下检测，并且移动速率快。说到这，我认为使用长为15或25cm的C-8或C-18色谱柱，选择乙腈或甲醇作为流动相，这里的任何一个组合都是非常可行的―这就是你的选择。[/color][color=#3e3e3e][/color][color=#3e3e3e]　　[b]结论[/b][/color][color=#3e3e3e]　　为一个新方法选择初始条件，包括选择色谱柱、流动相和注射溶剂。虽然这些因素的许多组合都是可行的，但使用低pH值的流动相、反相色谱柱以及与流动相相似的注射溶剂，会给你开始的成功带来最大的可能。[/color]

  • 【分享】液相网上培训课件……液相色谱应用及方法开发（上）

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  • 【分享】液相网上培训课件……液相色谱应用及方法开发（下）

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  • 【原创大赛】利用紫外和荧光光谱扫描技术开发高效液相色谱-荧光检测方法全过程

    【原创大赛】利用紫外和荧光光谱扫描技术开发高效液相色谱-荧光检测方法全过程

    利用紫外和荧光光谱扫描技术开发高效液相色谱-荧光检测方法全过程荧光是光致发光中的一种，荧光过程是物质吸收入射光进入激发态，从激发态回到基态并发出波长更长得光的过程，在此过程中，物质吸收的光为激发光，发出的光为发射光（这个定义并不准确，有兴趣的版友可以参照相关教科书）。荧光检测在高效液相色谱中是比紫外检测更灵敏的检测方法，但是能够发出荧光的物质并不多，如何判断分析物有没有荧光特性并优化荧光检测器参数是荧光检测方法开发过程的重要内容。荧光检测方法优化的最重要两个参数是确定激发波长和发射波长。二极管阵列检测器（DAD）可以提供分析物在流动相的紫外吸收光谱，基于提取的紫外吸收光谱在日常高效液相色谱分分析中主要有两大作用：1.发现并确定紫外检测器的最佳检测波长；2进行进一步的运算做峰纯度检查，判断有没有共流出物。在这里通过实例向大家介绍二极管阵列检测器的另一用处：二极管阵列检测器辅助荧光检测器开发分析物的高效液相色谱-荧光检测方法。1实验设备和基本实验条件：Waters 2695分离单元Waters 2996 二极管阵列检测器Waters 2475 荧光检测器二极管阵列检测器和荧光检测器串列，荧光检测器在后（检测池耐压较差）二者之间死体积为1ml/min×0.1min。分析物为两种原料药色谱柱：C18，4.6×150mm，5μm柱温：30℃流动相：乙腈：醋酸盐缓冲溶液=65:352实验A：二极管阵列检测器获取紫外吸收光谱，荧光检测器扫描发射光谱实验仪器设置 :2996 3D采集模式，获取210-400nm紫外吸收谱图2475 3D采集模式，固定激发波长220nm（一般有紫外吸收的物质在210-230nm都有吸收），获取250-650nm发射光谱。利用二极管阵列检测器来判断化合物的出峰时间，图1是在254nm下提取的分析物1和分析物2的色谱图，信号很弱。依照二极管整列检测器提取的色谱图，根据连接二极管阵列检测器和荧光检测器的管路体积，推算二者之间死时间约为0.1min。在荧光检测器中调出发射波长3D图，在250-650nm每间隔50nm提取一次色谱图（即250nm，300nm，350nm…），根据紫外色谱图的分析物保留时间，确定荧光色谱图中分析物的出峰时间。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112130845_337609_2265735_3.jpg图1 二极管阵列检测器色谱图和提取的分析物紫外吸收色谱图在提取的荧光色谱图中，分析物1有荧光（300nm，图2），而分析物2没有。在荧光检测中，会有很多杂质峰出现（图3，在发射400nm提取的色谱图），而紫外检测器中不一定会发现，利用二极管阵列检测器获得的谱图有利于准确定位分析物在荧光色谱图出现的位置，排除杂质干扰（图3）。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112130846_337610_2265735_3.jpg图2 从激发波谱300nm发射光提取的色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112130848_337612

  • 纳谱分析技术（苏州）有限公司正在寻找研发应用工程师（液相色谱方法开发）职位,坐标苏州市,谈钱不伤感情！

    [b]职位名称：[/b]研发应用工程师（液相色谱方法开发）[b]职位描述/要求：[/b]液相色谱产品：色谱柱、固相萃取柱(SPE)、QuEChERS等产品岗位职责：负责新型液相色谱产品的评估工作，并及时撰写相关报告；负责液相色谱分析方法和解决方案等开发工作，并撰写相关报告；负责液相色谱产品生产SOP的建立并培训质检人员；负责实验的记录工作并定期向直属领导汇报工作；可以承担公司内部新产品技术培训工作；公司安排的其他任务。岗位要求：本科及以上学历，化学、化工、材料或生物等相关专业；有分析实验室/第三方检测行业工作经验，熟悉液相色谱仪的操作，或有应用方法开发工作经验者优先考虑；工作认真细致，责任心强，耐压能力强；具有良好的沟通能力和学习能力；熟练掌握办公软件的使用（如EXCEL、WORD、PPT等）。福利待遇：周末双休，五险一金，餐饮补贴，年终奖，法定节假日，节日礼金，年度体检，高温补贴，生日福利，年度旅游，加班费，定期培训等关于纳谱纳谱分析技术（苏州）有限公司是一家从事液相色谱产品研发、生产、销售为一体的初创型科技公司。公司背景雄厚，发展迅速目前仍处于快速发展的前期阶段。公司重视研发型人才的培养，提供共同学习成长进步的机会。 团队年轻，工作氛围良好，期待您的加入！[b]公司介绍：[/b] 纳谱分析技术（苏州）有限公司是一家研发，生产和销售液相色谱耗材产品并提供相关技术服务的中外合资企业，由苏州纳微科技股份有限公司投资成立，服务对象主要涉及化工、制药、生物技术、食品安全和环保等行业领域。纳谱公司的产品是在纳微科技研发生产的国际领先的UniSil单分散硅胶微球和UniCore单分散聚合物微球的基础上结合先进的微球表面处理和键合封端修饰技术而推出的新一代色谱分离材料产品，性能优异，稳...[url=https://www.instrument.com.cn/job/user/job/position/74676]查看全部[/url]

  • 液相色谱讲义，PPT

    跟大家分享一下液相色谱讲义，里面包括（1）液相色谱基础知识（2）液相色谱的方法开发-分离机理及色谱柱（3）分离方法，离子抑制及离子对方法介绍（4）梯度方法的开发及梯度分离时的注意事项（5）液相色谱的实用技术，色谱柱的保养、样品前处理（6）液相色谱的定性、定量分析（7）色谱泵和进样器的原理及操作（8）检测器的原理及操作

  • 【问&答】专版二：RIGOL L-3000系列高效液相色谱系统-产品应用及方法开发-幸运儿产生了！

    【问&答】专版二：RIGOL L-3000系列高效液相色谱系统-产品应用及方法开发-幸运儿产生了！

    http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/08/201008180948_237157_2099632_3.jpgL-3000新品发布会视频地址：http://www.instrument.com.cn/custom/SH101945/=====================================================================================================RIGOL L-3000高效液相色谱仪是一套完整的高效液相色谱系统，精心设计的各个组件充分保证了其优良的性能，高度的兼容性保证整机的重复性及稳定性，即使长期运行在超常规HPLC的压力条件下也能保持稳定良好的工作状态和结果输出。L-3000高效液相色谱仪因其优良的性能在分析化学的各个领域都有着广泛的应用，尤其是社会普遍关注的药品质量控制、食品安全，以及环境监测等热点问题方面。同时RIGOL的应用技术支持中心也以其下属的标准化应用实验室和应用技术人员为平台不断研究开发HPLC应用方法，并致力于为客户提供科学有效的分析应用方案。=====================================================================================================版主在这里将带大家了解RIGOL L-3000，感受L-3000在应用与方法上优异的体现！并解答大家对L-3000应用与方法方面的有关问题！（此贴长期保留）--------------------------------------------------------------------------------------------------------关于产品性能请转至：http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100818/2724500/关于RIGOL请转至：http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100818/2724513/=====================================================================================================问题：1、 如需应用RIGOL L-3000完成某中草药有效成分含量的分析实验，那么至少需配备哪些必要的组件？2、 在应用高效液相色谱进行分析实验时，为保证数据的可靠性，要求检测器必须提供更真实的色谱峰形，而峰形的真实程度则由检测器的灵敏度和采样频率来决定，RIGOL L-3500紫外-可见检测器提供可选的采用频率，其可选的最大采样频率是多少？3、 RIGOL L -3000系列高压输液泵采取主副双凸轮设计，精心计算凸轮曲线，从而全面减小了压力脉动，同时采用特殊结构设计的混合器，该混合器结合了阻尼器抑制压力脉动的作用，同时避免增加系统的延迟体积。那么在色谱分离过程中，延迟体积对分析结果会产生什么样的影响？=====================================================================================================答案公布：1、必要组件是L-3200高压输液泵，L-3400柱温箱，色谱柱，L-3500紫外-可见检测器，进样器（L-3300自动进样器或手动进样阀任选其一）2、100Hz3、延迟体积大则影响梯度的精度，进而影响分析的灵敏度。同时还会使运行时间周期延长，在低流速下尤其如此。====================================================================================================幸运儿产生了！恭喜恭喜~http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09505.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09505.gif第一个回答正确者：注册ID：sunmei抽取中奖者：注册ID：lhg088注册ID：liuyuan198815注册ID：laohutushen

  • 【转帖】高效液相色谱发展历史

    以下资料是转自其它网站：1960年代，由于气相色谱对高沸点有机物分析的局限性，为了分离蛋白质、核酸等不易气化的大分子物质，气相色谱的理论和方法被重新引入经典液相色谱。1960年代末科克兰（Kirkland）、哈伯、荷瓦斯（Horvath）、莆黑斯、里普斯克等人开发了世界上第一台高效液相色谱仪，开启了高效液相色谱的时代。高效液相色谱使用粒径更细的固定相填充色谱柱，提高色谱柱的塔板数，以高压驱动流动相，使得经典液相色谱需要数日乃至数月完成的分离工作得以在几个小时甚至几十分钟内完成。 　　1971年科克兰等人出版了《液相色谱的现代实践》一书，标志着高效液相色谱法（HPLC）正式建立。在此后的时间里，高效液相色谱成为最为常用的分离和检测手段，在医`学教育网搜集整理有机化学、生物化学、医学、药物开发与检测、化工、食品科学、环境监测、商检和法检等方面都有广泛的应用。高效液相色谱同时还极大的刺激了固定相材料、检测技术、数据处理技术以及色谱理论的发展。 　　1960年代前，使用的填充粒大于100μm，提高柱效面临着困境，后来的研究人员便采用微粒固定相来突破着一瓶颈。科克兰、荷瓦斯制备成功薄壳型固定相，这种在固定相在玻璃微球表面具有多孔薄壳，实现了高速传质，为高效液相色谱技术的发展奠定了稳固的基础。随着填料粒径的降低，更高的柱效也得以实现。 　　1960年代研制出气动放大泵、注射泵及低流量往复式柱塞泵，但后者的脉冲信号很大，难以满足高效液相色谱的要求。1970年代，往复式双柱塞恒流泵，解决了这一问题。1970年代后科克兰制备出全多孔球形硅胶医`学教育网搜集整理，平均粒径只有7μm，具有极好的柱效，并逐渐取代了无定形微粒硅胶。之后又制造出的键合固定相使柱的稳定性大为提高，多次使用成为可能。1970年后，适合分离生物大分子的填料又成为研究的热点。1980年后，改善分离的选择性成为色谱工作者的主要问题，人们越来越认识到改变流动相的组成事提高选择性的关键。

  • 有没适用于新手的液相方法开发的文件啊，谢谢

    接触了一段时间[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]，想了解一下[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]方法的开发方法，怎么选择色谱柱，怎么选择流动相啥的。想要这方面的资料，谢谢

  • 在液相色谱分析过程中，遇到问题如何优化方法？

    液相色谱分析过程中，我们通常以标准和药典为准绳，进行方法的确定和开发，但是在实际的分析过程中，如果按照标准操作，不出峰或者出峰情况不理想，该如何对方法进行优化和完善？有些时候我们会束手无策，希望各位搞方法开发的朋友提供宝贵的参考意见！这里的讨论前提为理想情况，不涉及仪器问题。

  • 【求助】液相色谱测VFA的条件及方法

    [center]液相色谱测VFA的条件及方法[/center] 本人在做厌氧发酵实验，实验过程中产生的VFA是本实验的重点，因此需测其VFA组分，现在恳请各位高手帮忙教我如何通过液相色谱测其VFA组分，条件及步骤等，十分感谢！

  • 【推荐】液相色谱资料--11月4日推荐免费下载--色谱方法开发/

    【推荐】液相色谱资料--11月4日推荐免费下载--色谱方法开发/

    11月4日免费下载资料（当日有效） 色谱方法开发http://www.instrument.com.cn/download/Paper_detail.asp?id=4924 高效液相的“校正”－验证http://www.instrument.com.cn/download/Paper_detail.asp?id=20532 为帮助积分少的用户和新用户，资料中心现在每天从资料库中随即提供50篇资料免积分供用户下载！无论是普通会员还是认证会员只要登陆都可以不消耗积分的下载这些资料。由于这50篇免积分资料每天都会更换，错过了就没有了哦，所以建议大家把免积分下载资料列表的页面放在收藏夹中，每天都去看看，有没有你需要的资料。资料中心免费下载页面：http://www.instrument.com.cn/download/free_down.asp或按下面方式进入：[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/03/200803300938_83173_1608254_3.jpg[/img]或在仪器社区（论坛）首页进入：[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/03/200803300939_83176_1608254_3.jpg[/img]版主提示：如果你错过了免费下载的日期，可以点击查看下载超过100次，VIP用户就有免费的资格，可以免费下载。如果你发现有的资料提供的地址不能下载，可在资料中心投诉版投诉。

  • 液相色谱仪填料的发展史

    高效液相色谱(HPLC)不仅是一种有效的分析分离手段,也是一种重要的高效制备分离技术。色谱柱是HPLC系统的核心,不同性能的填料是HPLC广泛应用的基础。液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。　　正相柱：多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种，其颗粒直径在3—10 μm的范围内。另一类正相填料是硅胶表面键合—CN，-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。　　反相柱：主要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。　　常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等，其颗粒粒径在3—10 μm之间。1960年代，由于气相色谱对高沸点有机物分析的局限性，为了分离蛋白质、核酸等不易气化的大分子物质，气相色谱的理论和方法被重新引入经典液相色谱。1960年代末科克兰（Kirkland）、哈伯、荷瓦斯（Horvath）、莆黑斯、里普斯克等人开发了世界上第一台高效液相色谱仪，开启了高效液相色谱的时代。高效液相色谱使用粒径更细的固定相填充色谱柱，提高色谱柱的塔板数，以高压驱动流动相，使得经典液相色谱需要数日乃至数月完成的分离工作得以在几个小时甚至几十分钟内完成。　　1971年科克兰等人出版了《液相色谱的现代实践》一书，标志着高效液相色谱法（HPLC）正式建立。在此后的时间里，高效液相色谱成为最为常用的分离和检测手段，在医`学教育网搜集整理有机化学、生物化学、医学、药物开发与检测、化工、食品科学、环境监测、商检和法检等方面都有广泛的应用。高效液相色谱同时还极大的刺激了固定相材料、检测技术、数据处理技术以及色谱理论的发展。　　1960年代前，使用的填充粒大于100μm，提高柱效面临着困境，后来的研究人员便采用微粒固定相来突破着一瓶颈。科克兰、荷瓦斯制备成功薄壳型固定相，这种在固定相在玻璃微球表面具有多孔薄壳，实现了高速传质，为高效液相色谱技术的发展奠定了稳固的基础。随着填料粒径的降低，更高的柱效也得以实现。　　1960年代研制出气动放大泵、注射泵及低流量往复式柱塞泵，但后者的脉冲信号很大，难以满足高效液相色谱的要求。1970年代，往复式双柱塞恒流泵，解决了这一问题。1970年代后科克兰制备出全多孔球形硅胶医`学教育网搜集整理，平均粒径只有7μm，具有极好的柱效，并逐渐取代了无定形微粒硅胶。之后又制造出的键合固定相使柱的稳定性大为提高，多次使用成为可能。1970年后，适合分离生物大分子的填料又成为研究的热点。1980年后，改善分离的选择性成为色谱工作者的主要问题，因此改变流动相的组成提高选择性是关键。如今利用基于亚2μm填料的超高压液相色谱技术、基于核-壳型填料的快速分离技术、基于杂化硅胶填料的高温液相色谱技术等。硅胶经表面化学键合、聚合物包覆等有机改性可制得先进的大分子限进填料、温敏性填料、手性填料等,大大扩展了HPLC的应用范围，随着科学技术的进步填料的发展朝着多样性多功能的综合型方向发展。

  • 液相色谱方法开发

    [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]小白用的是岛津[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]，色谱柱是C18柱，检测的物质是多肽产品，一开始设置流动相的比例是乙腈：水=90：10，分析时间26min。出峰时间在2分钟左右，现在想要把保留时间延后到6min，改如何调节流动相的比例？一般调节流动相比例的思路是怎样？什么时候该等度或者梯度？关于流动相什么时候该加酸或者缓冲盐？麻烦大神们救救孩子吧！

  • 液相色谱讲座全集

    1. 戴安公司制作的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]培训PPT文件。包括基本原理、仪器的基本组成和特点，使用注意事项等。http://www.sepu.net/Soft_Down.asp?UrlID=1&SoftID=16。2. 高效液相色谱方法及应用：http://202.207.208.30/bkkj/wlkj/yqfx/gxyxsp.ppt3. 高效液相色谱技术：http://166.111.30.161/kejian/material/ppt/7.%20hplc.ppt4. 高效液相色谱法在大气环境中的应用：http://www.ces.pku.edu.cn/laes/HPLC/HPLC.PPT5. 色谱法基础理论讲座：http://www1.ctgu.edu.cn/hsxy/kejian/yqfx08.ppt6. 圆二色谱的原理及应用http://mdl.ipc.pku.edu.cn/course/StructureChemistry2003/course9/CD.ppt7. [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]法基本原理http://www.sytu.edu.cn/bumen/fenxiceshi/%C0%EB%D7%D3%C9%AB%C6%D7%B7%A8%BB%F9%B1%BE%D4%AD%C0%ED.doc8. 浙江大学液相色谱讲义一：液相色谱基础知识http://www.chem.zju.edu.cn/~imas/resource/download/hplc/LC1_BSC.ppt9. 浙江大学液相色谱讲义二：液相色谱的方法开发：分离机理及色谱柱http://www.chem.zju.edu.cn/~imas/resource/download/hplc/LC2_Col.ppt10. 浙江大学液相色谱讲义三：分离方法，离子抑制及离子对方法介绍http://www.chem.zju.edu.cn/~imas/resource/download/hplc/LC3_MTH.ppt11. 浙江大学液相色谱讲义四：梯度方法的开发及梯度分离时的注意事项http://www.chem.zju.edu.cn/~imas/resource/download/hplc/LC4_GRA.ppt12. 浙江大学液相色谱讲义五：液相色谱的实用技术，色谱柱的保养、样品前处理http://www.chem.zju.edu.cn/~imas/resource/download/hplc/LC5_App.ppt13. 浙江大学液相色谱讲义六：液相色谱的定性、定量分析http://www.chem.zju.edu.cn/~imas/resource/download/hplc/LC6_QUT.ppt14. 浙江大学液相色谱讲义七：色谱泵及进样器：原理及操作http://www.chem.zju.edu.cn/~imas/resource/download/hplc/LC7_PUM.ppt15. 浙江大学液相色谱讲义八： 检测器：原理及操作http://www.chem.zju.edu.cn/~imas/resource/download/hplc/LC8_DET.ppt

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