液相色谱进样系统

第九课 液相色谱仪－进样系统，分离系统 进样系统一般高效液相色谱多采用六通阀进样。先由注射器将样 品常压下注入样品环。然后 切换阀门到进样位置，由 高压泵输送的流动相将样品送人色谱柱。样品环的容积 是固定的，因此进样重复性好。 分离系统 分离系统包括色谱柱、连接管、恒温器等。色谱柱是高 效液相色谱仪的心脏。它是 由内部抛光的不锈钢管制成 ，一般长10—50cm，内径2—5mm，柱内装有固定相。液 相色谱的固定相是将固定该涂在担体上而成。担体有两 类：一类是表面多孔型担体；另一类是全多孔型担体。 近年来又出现了全多孔型微粒担体。这种担体检度为5 —10 um，是由nm级的硅胶微粒堆积而成，又叫堆积硅 珠。由于颗粒小，所以柱效高，是目前最广泛使用的一 种担体。 在高效液相色谱分析中，适当提高柱温可改善 传质，提高桂效，缩短分析时间。因 此，在分析时可以 采用带有恒温加热系统的金属夹套来保持色谱拄的温度。 温度可以在室温到60℃间调节。

[em04] 求助各位大哥：请问液相色谱仪的进样系统漏液怎么办？是不是密封圈坏了啊？维修大概要好多ＭＯＮＥＹ？谢了

不同牌子液相色谱仪能否与自动进样器的搭配使用，能行得通否?如water高效液相色谱仪系统与岛津液相色谱仪的自动进样器搭配可否

液相色谱进样浓度太高会导致以下主要问题?： 液相色谱进样浓度过高会导致色谱峰拖尾、柱效降低，甚至可能造成色谱柱过载。这是因为高浓度样品会导致固定相饱和，进而影响分离效果和柱子的使用寿命?。 具体表现为： ?色谱峰拖尾?：高浓度样品会使峰形拖尾，影响峰形的对称性和分辨率。?柱效降低?：固定相的饱和会导致柱效下降，分离效果变差。?色谱柱过载?：长期高浓度进样会导致色谱柱的载样量超过极限，造成不可逆的损害。 解决方法和注意事项： ?稀释样品?：通过稀释高浓度样品来降低进样浓度，避免对色谱柱造成过大压力。?控制进样量?：合理控制每次进样量，避免超过色谱柱的承载能力。?定期维护?：定期对色谱柱进行清洗和维护，延长其使用寿命。?平衡进样顺序?：在进样高浓度样品后，进样低浓度样品以平衡系统，减少误差?。

群友提问: 各位老师，液相色谱在进样的时候发现流动相不够，在没有停止系统的情况下添加流动相，会不会引起系统压力升高？有人回复: 1. 这个不会，不过你还是要重新进样，你的流动相已经更换了，就需要重新完整的跑一遍，包括标准样2. 系统压力升高是不是进气泡了啊，添加流动相需要排气的，3. 金气泡不一定会导致压力升高4. 压力高，是被堵住了才压力高大家有什么想法呢？

液相色谱除了检测器外还有其他的零件我们在日常工作的时候很容易忽视的，譬如泵、进样器等。对这些我们在操作仪器的时候又了解多少呢？[color=blue]◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆[/color][B][size=4][center]液相色谱仪器常见参数之二：泵和进样器[/center][/size][/B]◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇[B][center]邀请您来解析液相色谱的泵和进样器及相关参数[/center][/B][color=teal]〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓[/color][B]泵[/B]１）泵系统滞后体积Ｘ　ul且不受系统反压影响２）耐压≥n（psi）３）流量范围n　（ml）-m　（ml/min），以0.001ml/min递增４） 流量准度和精度５）比例准度：≥±0.5%，比例精度：≤RSD 0.2%[B]进样系统[/B]１）自动进样器２）手动进样器[color=teal]〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓[/color][color=red][size=4][B]请您来解析：[/B][/size][/color][color=blue]1）泵的相关问题：①泵的结构和原理是什么？②怎么才能辨别泵的好坏？③泵的材质是什么？④泵的最大耐压是多少？根据什么来计算的？psi是什么单位？压力越大越好吗？⑤“泵系统滞后体积Ｘ　ul且不受系统反压影响”有什么作用？滞后体积的大小对检测有什么意义？越大越好吗？⑥流量范围是根据什么来的？越大越好？对分析物质有何影响？⑦流量准度和精度一般各是多少？流量准度和精度越大越好吗？一般是什么范围？⑧比例准度和比例精度是怎么计算的？数值是越大越好还是越小越好？有何意义？2）进样器的问题①自动进样器的结构是什么？②自动进样器与手动进样器谁的检测误差大？③自动进样器和手动进样器的优点和缺点分别是什么？[/color]◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇[color=red][B][size=4]欢迎大家前来解析液相色谱仪器的参数——泵和进样器篇，参与有奖，也欢迎大家提出没有列出的液相色谱泵和进样器的其他参数。参与有奖的喔～[/size][/B][/color]◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇[URL=http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20081016/1535298/]【解读样本参数—LC篇】液相色谱仪器检测器篇样本参数（有重奖）[/URL]

液相色谱进样原理

液相色谱进样量一般在10微升到20微升之间，这是最常见的进样体积。如果分析对象的灵敏度较低，进样量可以增加到50微升甚至100微升。此外，超高压液相色谱的进样量通常在0.5微升到1微升之间，这是因为超高压液相色谱的柱子与普通液相色谱的柱子不同，进样量少且不好取样。? 进样量的选择需要考虑色谱柱的容量和溶剂效应。进样量一般与色谱柱的容量有关，过多的进样量可能会导致色谱峰的扩散，影响峰面积的准确性。因此，在选择进样量时，需要综合考虑分析物的性质、色谱柱的类型和容量以及实验的具体要求。

各位色友：大家好！现在我遇到一个很纠结的事情，就是用液相色谱检测有关物质的进样次数是几次（是单样单针，还是单样双针，还是双样双针，甚至更多），有关物质检测中系统适应性又该进几次？我们有很多客户审计提出的说法都不一样，所以现在我很纠结，到底该如何整改这件事情，也请各位帮帮忙，教教我该如何解决，有法定的标准最好，那样更有说服力。

弱弱的问一下哦。各位在对高效液相色谱仪进样时预先应该如何处理样品，如何使液谱仪的柱子不被堵塞？

我们用的是安捷伦1100的高效液相色谱仪，在做一个软膏剂的时候，标准规定的浓度进样10μl，峰形有前延峰，把浓度稀释一半，进样10μl，峰的对称性在1.0左右，如果再把浓度稀释一半，进样20μl的话，峰形又不对称了。大家分析一下是什么原因？液相色谱的进样量与峰形之间的关系怎样？（药品名字是“复方地塞米松乳膏”，内标法测定地塞米松含量，内标物是甲睾酮）

我用的是Aglient 1100液相色谱,带柱后衍生,用自动进样器进样.请问,编好序列以后让机器连续自动进样好不好? 进完一次样后要冲多长时间?

有一台Agilent 1200的半制备型液相色谱，配了最大可达900微升的进样器。如果该液相色谱配备了150×9.4mm的色谱柱，单次最大进样体积是否可以达到900微升？如何计算最大进样体积？记得液相色谱分离上有一个什么效应来着，限制了最大进样体积（进样体积太大时分离效果变差）。以前用过一根250×4.6mm的色谱柱，如果进100微升样品，根本出不了峰，只会出一些起伏；换成20微升的进样环后，就能出分离效果非常好的峰。很少使用液相，望多多指教，非常感谢。

液相色谱仪使用时间久了必须进行清洗，仪器在使用过程中会出现各种故障，以下是色谱仪的常见故障及清洗。 色谱仪器控制的冲洗要比手动冲洗更好，进样阀切换到进样位置后，要在此位置上保持一段时间，使流动相充分冲洗样品定量管，这样可以保证有较高的精确度，而且不用另外再冲洗样品定量管。 每进样10次，或20次最好冲洗一下注射针导入口，这样可以保证注射针导入管内充满流体。在注射针插入或拔出的过程中，清洗注射针头或稀释污染这一区域的样品的同时也使注射针导入口和样品溢出口充满流体，从而防止空气进入样品管。 当样品定量管经过充分的冲洗后，可以将旋柄转回取样位置（Load），也可以继续保持在进样位置，到下次取样前才切换回取样位置。在切换回取样位置时，将样品进样针或微量样品进样针从进样阀中拔出。 如果已发现有严重的交叉污染现象，请检查是否有下列原因造成： 1.注射针没有充分插入注射针导入口。2.使用的注射针头长度不够（针头的长度至少5cm），注射针末端不能到达定子表面。3.注射针导入口的污染物或针头密封磨损下来的削片，使注射针末端不能接触定子表面。

液相色谱-质谱联用仪工作站中会有故障的列表，具体内容每家仪器公司会有些不同，但当进样中断时可以首先查看故障列表，可以得到问题的第一手资料，然后顺藤某瓜查找原因。 进样中断常见的原因有： a.气源问题：保护气或碰撞气压力不满足工作需求，这种情况对于采用液氮罐的用户较为常见，可能气罐中气体含量太低，或者气罐阀未开等，解决办法：更换气体或打开气罐阀，同时在工作站中重新打开气体控制开关，有些工作站还需要重置一下，按照不同仪器公司的要求操作即可；对于采用氮气发生器的用户，当发现进样中断是因为保护气流量不够导致时，则需要查找氮气发生器的原因。 b.进样问题：进样过程中是否样品瓶位编辑错误或者未放置样品瓶，导致找不到样品瓶；仪器室控温不当，室温过热，进样臂的机械马达过热自动停止进样操作。 c.系统压力问题：第一种是系统压力过高情况较多，查找系统流路中可能堵塞的环节，常见的有进样针堵塞、泵头堵塞等，可以重点关注；第二种是系统压力过低情况，大部分是由于系统有漏点，当前仪器基本在容易漏液的模块均添加了传感器，可以根据各模块的状态指示灯查看。 d.工作站与仪器间通讯不畅：仪器长时间使用中，因各种原因导致的接口处连接不紧密，或者是因为连接传输线的质量、距离等原因，导致的工作站与仪器的通讯不畅，导致由工作站发出的指令，仪器接收不到。

溶液是用蒸馏水配置的，进样前先过滤，过滤后是否可以直接进水样进行分析呢？除了过滤还有什么要注意的吗？如果同样的浓度，但是用有机溶剂甲醇配置的，这两个样进行液相色谱分析后的峰有区别吗？我的流动相是甲醇-乙腈-草酸谢谢！

[color=#444444]如题，液相色谱进样器动作正常，但不吸样品，进样针不堵，不漏液，六通阀也拆过超声了，还是进样动作正常，但吸不上样品，求助液相高手，急急急[/color]

制备型高效液相色谱系统的应用领域制备型高效液相色谱系统主要应用在植化、合成、制药、生物及生化等领域的产品的提取及纯化工作中。在不同的工作领域中，组份的提取和纯化量的差异是很大的。在生物技术领域中，酶的分离是微克级；在植化和合成化学领域中，为了鉴别未知成份并进行结构测定，需要得到一至若干毫克的纯品；在药品和医药学测试中，需要克级的标准品和对照品；在当今的工业级提纯中，制药成份往往需要千克级的提取。制备型高效液相的应用领域可以归纳在下表中。 成份量:所在领域 微克: 生物技术领域的酶的分离、生物学和生化学测试 毫克: 结构描述和特征鉴定，包括：生产中的副产品、生物矩阵的新陈代谢产物、天然产物 克级: 对照品（分析标准）毒物学分析所需组份：高纯品中的主要成份、副产品的分离提取 千克级:工业规模生产，活性成份，药物 制备方法的发展和扩大规模的计算　　在分析液相中色谱柱的典型进样量是微克级，甚至更低。样品量和固定相之比有的甚至小于1:100000。进样体积一般来说都大大小于色谱柱体积（小于1:100）。 在这种条件下，会达到很好的分离效果，峰形尖锐并且很对称。而在制备液相中，最大的区别就是超量进样。其结果，超量进样的方法和分析方法的放大将在下章内介绍。 吸附变化线　　分析液相的目的是给一种组份定性、定量。重要的色谱参数有溶解度、峰宽和峰的对称性。如果进样量越来越多，峰高和峰面积会增加，但峰的对称性和容量因子保持不变。如下图。 　 在分析液相中，最佳的峰形应是一条高斯曲线。峰的标准背离 бV 描述了其对称性和与高斯曲线的相似性。容量因子是与一种不保留物质的保留时间t0相关的保留时间。　 如果将超过一定量的样品注射进色谱柱，吸附变化线就会成非线性。这意味着峰形会变的不再对称，表现为严重的拖尾和容量因子的缩小。如下图。在制备液相中，这种效果称作浓缩超量进样。在一些情况中，根据进样量的增加，容量因子也相应变大，并造成很强的前峰。既然吸附变化线取决于组份的多少，那么液相色谱柱的载样能力就必须根据不同的制备液相实验来决定。 色谱柱载样和超量载样　　大样品量的纯化有两种可行的方法：分析系统的放大或色谱柱超量载样。分析系统的放大意味着使用直径更大的制备柱、更高的流速和根据色谱柱的长度增加进样量并保持样品浓度不变。峰形仍会保持尖锐而对称。这种方法需要大型的色谱柱和大量的溶剂来分离较少的样品，因此这种方法是不经济的。 因此色谱柱超量载样，暨在相同的分析条件下超量进样通常是一种很好的选择。使用色谱柱超量载样的方法，在分析柱上甚至可以进行毫克级的分离。但更大 量的样品分离就需要整个系统的放大。色谱柱超量载样可以通过两钟方法进行— 浓缩法和体积超载法。　在浓缩法中，样品的浓度会提高，但进样体积保持不变。容量因子k’降低，同时峰形从高斯曲线变为矩形。如下图。浓缩法超量载样只有在样品组份在流动相中具有良好的溶解性的条件下才有可能采用。 　　如果样品组份的溶解性很差，浓缩法超量载样不能使用。同时更多的样品体积注射到色谱柱中，这种技术称作体积法超量载样。超过一定的进样体积，峰高不变，但峰变宽并且呈矩形。在制备液相中浓缩法超量载样比体积法超量载样更受欢迎，因为可被分离的样品量更高。既然组份的溶解性通常是一个限制因素，所以两钟超量载样技术通常被结合起来使用。两种技术的概览浓缩法超量载样 　 体积法超量载样 取决于组份在流动相中的溶解性 　 取决于进样体积 吸附变化线的制备部分 　 吸附变化线的分析部分 生产效率决定于选择性 　 生产效率决定于制备柱直径 受固定相粒度大小的影响不大 　 需要小颗粒填料 方法的放大　浓缩法超量载样和体积法超量载样都会导致组份溶解性的降低。既然组份的分离需要一定的溶解性，那么在放大分析方法的时候，优化溶解性、特别是选择性就是一项很重要的工作。 　　因为选择性和超量载样潜力是相互依靠的，选择性的提高会提高一次运行中所分离的样品量，因此从分析方法到制备方法的放大和方法的优化需要三个步骤。 1. 优化分析方法的选择性。2. 在分析柱上进行超量载样。3. 放大到制备柱 制备型高效液相色谱的目的　　判断制备型高效液相色谱使用的结果有三个重要参数：产品的纯度、产量和生产效率。三个参数之间是相对独立的，因此很难同时使用这三个参数来优化制备型高效液相色谱方法。见图形6。 色谱图1显示在制备型高效液相色谱的使用中有很高的生产效率，但是两种组份的分离效果却是很差的。这种方法很可能得到两种组份的高纯品，但是产量和收率却是很低的。　 在色谱图2中峰有很好的分离，因此这种方法可以得到两种组份的高纯品和高产量，但是生产效率却很低。　 色谱图3中的情况是三个参数综合后得到的最优化的结果。峰在基线上被完全分开，这使得产品纯度、产量和生产效率都达到最高。　 在实际应用中，每个参数的重要性都是不同的。如为了进行活性或药物测试，某种组份必须被完全单独提取，那么组份的纯度是最重要的参数，产量和生产效率是其次的。如果某种合成中间体必须被纯化，并且需要有足够的量为下一步合成作准备，那么纯度就不是最重要的了。而生产效率在这种情况下就是个首先需要解决的问题，因为其直接关系到完成整个合成工作的进程和速度。同时产量也是很重要的，因为高价值组份的损失需要控制在最少的范围内。

目前，在一些液相色谱仪仪器或者液相色谱-质谱联用装置中使用后进样方式的阀。操作基本类似，介绍如下。液相色谱1 注射样品的步骤第一，将手柄板至进样位置，将注射器插入针管到底，此时注射器针头与定量环的末端直接相连，样品在没有任何连接物的阻碍下直接进入定量环，准备进样；第二，迅速将手柄扳至注射“进样”位置进样；第三，拔出注射器；第四，等到贮备注射下一个样品，将手柄扳回取样位置。2 进样体积与定量环体积如果进样体积等于定量环体积，漏出放空管的样品损失会高达20%，使得进样精度大幅度下降，所以进样体积应小于定量体积的50%（部分进样）或大于200%（完全进样）。3 使用合适的注射器针头针头规格一般为22号，外径0.7mm，长5.1cm（2英寸）平头。不可使用斜面、尖端或锥形的针。4 冲洗进样阀冲洗步骤：手柄切换到进样位置后，要保持在此位置一段时间，使得流体充分冲洗定量环，这样可以保证高精度，而且不用额外冲洗定量环。注意冲洗需要的流动相体积至少为样品体积的10倍。

1月23日，安捷伦科技推出了该公司最新一代Agilent 1200系列液相色谱系统，该系列将是安捷伦科技著名的1100系列液相色谱的换代产品。作为一种常规的分析测试手段，全球有超过250，000家的用户在使用液相色谱产品，其市场规模约为二十亿美金，这也是安捷伦科技LSCA部收入的主要来源之一。 自从1995年1100系列液相色谱问世以来，安捷伦总计售出了大约60，000套液相色谱系统（如果按单个系统模块计算，则超过400，000），使得1100系列成为液相色谱市场最为成功的产品之一。最新推出的1200和现在的1100具有良好的兼容性，从而最大限度地保障了用户单位在资金和时间方面的投入不受损失。用户单位可以根据自己的需要，选择新的模块和现有的模块进行组合，也可以继续使用已有的分析方法而无需花费资金去开发新的方法以及重新培训操作人员。对于那些暂时使用非安捷伦操作软件的用户，安捷伦科技还可以专门为他们提供一种1100仿真模拟模式。 据安捷伦科技有关人士介绍，Agilent 1200是一款功能极其完善的液相色谱系统，其可选的仪器模块数量超过60个，可以灵活组合以满足液相色谱不同应用领域的需要，包括：快速分离液相（最新推出）、制备液相、标准液相、窄柱液相、毛细管液相、纳升级液相以及安捷伦科技开创性的芯片液相等。目前，芯片液相技术既可以用于小分子领域也可用于大分子领域，即可用于色谱分离，也可作为进样装置。而采用纳流喷雾离子化的HPLC-Chip/MS技术，其灵敏度较之常规的LC/MS提高了1000倍。

在液相色谱仪使用过程中，我们经常遇到液相色谱仪用户正反相色谱系统互相现象，但由于使用操作不当，常常不注意间损坏了色谱柱，同时加重了液相色谱系统的污染，导致分析工作出现麻烦，现在将置换工作的基本流程列出，供用户参考：1. 首先用正己烷(硅胶柱)将色谱系统包括正相柱平衡好(保证20分钟内基线平直,无峰出现)；2. 卸掉硅胶柱，封好保存；3. 将进样阀与检测器短路，用异丙醇冲洗色谱系统10分钟(流速1ml/min).在这期间空拨进样阀三次；4. 换甲醇(或已睛)冲洗系统20分钟(流速2ml/min) ，此期间空拨进样阀三次；5. 安上反相色谱柱， 流速调到1ml/min,用甲醇(或已睛)冲洗系统，直到系统平衡；6. 进三针标准品,检验面积 ﹑保留时间是否重复,若不重复,继续冲洗直到重复。

如果[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]的系统压力过低的一般操作是：1、拧开排液阀，设置流速2ml/min后开泵，观察有无液流，若有再观察液流是否有倒吸现象2、上述若无液流，多数为主动阀的问题，可以尝试拆下主动阀阀芯超声波清洗，或出口球阀超声清洗，若仍有问题，可考虑更换阀芯。注意不要讲整个主动阀放入超声波清洗，会损坏主动阀。3、若上述问题没出现，再仔细检查有无漏液，包括色谱柱，泵，进样阀等。

大家都知道，液相色谱仪及色谱柱、进样阀等仪器或部件使用维护很重要，使用完后进行系统的冲洗也很必要。一是延长仪器或部件的寿命，二是冲洗后仪器能保持良好的状态，稳定的性能。

最近，研究二维液相色谱系统，发现岛津和湖南德米特的二维液相色谱系统，几乎独家垄断，价格比两套lc20还高。

请您来解析液相色谱的进样器及相关参数。进样系统１）自动进样器２）手动进样器问题：①自动进样器的结构是什么？②自动进样器与手动进样器谁的检测误差大？③自动进样器和手动进样器的优点和缺点分别是什么？

凝胶液相色谱1260进样器原理

请问液相色谱进样量过大对色谱柱有损害吗