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全自动氨基酸分析

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全自动氨基酸分析相关的论坛

  • 超高速全自动氨基酸分析仪的应用

    超高速全自动氨基酸分析仪的应用

    [align=center][font='宋体'][size=16px][color=#000000]超高速全自动氨基酸分析仪的应用[/color][/size][/font][/align][font='宋体'][size=16px]中广测配备了日立超高速全自动氨基酸分析仪(LA8080),该仪器采用离子交换色谱分离和茚三酮柱后衍生技术,是分析检测氨基酸的专用设备,具有操作简便、灵敏度高、分离度好、稳定性强、检出限低、数据可靠性高等优点,短时间内可实现18~23种氨基酸的分离,分离度最少可达到1.62以上,各种氨基酸达到完全基线分离,定性强、定量准,同时配备含硫氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸)30min标准分析程序和6min高速分析程序,极大的提高了分析的速率,标配了Open LAB CDS 2控制软件,全面符合CFDA和FDA的要求。[/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310271146272196_9721_2862401_3.jpeg[/img][/align][font='宋体'][size=16px]一、仪器信息[/size][/font][font='宋体'][size=16px]1.仪器名称:超高速全自动氨基酸分析仪[/size][/font][font='宋体'][size=16px]2.英文名称:Ultra-high speed automatic amino acid analyzer[/size][/font][font='宋体'][size=16px]3.生产制造商:HITACHI/日立[/size][/font][font='宋体'][size=16px]4.型号:LA8080[/size][/font][font='宋体'][size=16px]二、主要技术参数[/size][/font][font='宋体'][size=16px]1.基线噪声≤0.02mV;[/size][/font][font='宋体'][size=16px]2.分离度≥1.62;[/size][/font][font='宋体'][size=16px]3.仪器线性≥0.999;[/size][/font][font='宋体'][size=16px]4.检出限:各氨基酸最少检测浓度可达到0.002nmol。[/size][/font][font='宋体'][size=16px]三、应用领域[/size][/font][font='宋体'][size=16px]氨基酸分析仪的应用领域可以归结为以下几类:在农业农产品的开发研究中,用于培养农作物优良的品种、饲料研发以及各类饲料氨基酸含量的分析、研制新型农药等。在食品轻工产品研究中,氨基酸分析仪可用于各种食品、保健品、口服液、牛奶及其奶制品、肉及肉制品等产品的研制开发、成分的分析, 在生物制药方面,用于药物开发以及各种药物氨基酸含量的测定,在石油化工、生物医学检测方面,氨基酸分析仪的应用也十分广泛。[/size][/font][font='宋体'][size=16px]四、服务范围[/size][/font][font='宋体'][size=16px]各类食品、保健品、农产品、饲料、医药样品中,各种氨基酸含量的测定,包括GB/T 5009.124-2016方法规定的各种水解氨基酸,GB/T 18246-2019 规定的水解氨基酸、游离氨基酸,各种含硫氨基酸以及色氨酸的测定。[/size][/font][font='宋体'][size=16px]五、应用案例[/size][/font][font='宋体'][size=16px]氨基酸作为生物体蛋白质组成的单体,在各种生物体中均有存在,氨基酸按照对生物体的需求来说,分为必需氨基酸和非必需氨基酸,非必须氨基酸不一定非要从食物直接摄取,生物体可自行合成;但必需氨基酸(指人体或其它脊椎动物)不能合成或合成速度远不能满足机体需要,必需氨基酸一定要从食物中获得,否则就不能维持机体的氮平衡并影响健康,对于成人而言,必需氨基酸有九种,即:赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、组氨酸;故准确定量食物中各种氨基酸的含量,特别必需氨基酸尤为重要,生物体可根据对各种氨基酸,特别必需氨基酸的每日需求,选择合适的食物,补充各种营养,达到营养摄入的均衡,保持身体机能的健康,故在各类食品、保健品、宠物食品、饲料中,氨基酸各组分的分析尤为的重要。[/size][/font][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310271146274484_2813_2862401_3.png[/img][/align][align=left][font='等线'][size=13px] 图1. 17种氨基酸标准图谱[/size][/font][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310271146277743_8653_2862401_3.png[/img][font='等线'][size=13px]图2. 肉制品17种氨基酸图谱 [/size][/font][/align]

  • L-8900全自动氨基酸分析仪 分离柱装填测试结果

    L-8900全自动氨基酸分析仪  分离柱装填测试结果

    近日,用了1年多了,实验室机器的L-8900全自动氨基酸分析仪的分离柱柱效下降了,所以自己动手重装,新手第一次,从清洗到装填完,耗时3.5小时,节省数万元的费用,下面上照片:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507060956_553606_2098687_3.jpg照片中红圈内就是装柱所用工具,拧几个螺钮即可,超级简答!软件有全自动功能,点击下,然后60min后分离柱就装填好了!http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507060959_553608_2098687_3.jpg纯国产试剂,最小分离度是1.40,机器使用进口试剂、进口柱子要求分离度大于1.2,现在自己装填柱子、自己配的国产试剂,分离度都远超进口的!http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09502.gif

  • 百康氨基酸分析仪

    跪求百康Biochrom全自动氨基酸分析30+的操作视频,科研小白啥也不会[img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/12/202312012213077671_2508_6258352_3.png[/img]

  • 【邀您来解析2】探秘氨基酸分析仪

    【邀您来解析2】探秘氨基酸分析仪

    原创帖:[url=http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100909/2772966/index.shtml]【第三届原创大赛】菜鸟级解构日立L-8900全自动氨基酸分析仪[/url]给了我们熟悉氨基酸分析仪的好机会。氨基酸分析在液相版块讨论比较少,现专开贴对氨基酸分析进行讨论!1、氨基酸分析仪可以分离和检测所有的氨基酸吗?分离氨基酸是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]法原理吗?2、氨基酸与反应液在反应柱中反应的原理是什么呢?反应柱里面有填料还是有特殊溶液做催化?这个过程也叫做柱后衍生吧?3、氨基酸分析仪也要专配一个紫外-可见分光光度计,对于DAD检测器有必要使用吗?也即对于检测多个氨基酸,波长不一致情况下,采用DAD可以一次采集到各个波长下的氨基酸吸收度。4、氨基酸分析仪有哪些部件组成?5、氨基酸分析仪流动相流路是怎么样的?6、氨基酸分析仪与LC的差异点在哪里?[color=#fe2419][font=SimHei]也欢迎大家提出还没有罗列到关于氨基酸分析仪的问题。[font=FangSong_GB2312]凡参与讨论者,均有奖励![img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/09/201009120029_243376_1600062_3.jpg[/img][/font][/font][/color]

  • 【原创】缺德:复合氨基酸片中氨基酸总量的85%都是味精(谷氨酸)!

    单位进了一台全自动氨基酸分析仪,刚安装好,练练手,同事拿了一瓶复合氨基酸(瓶上标注made in USA, 据说市面上很畅销),我们测了氨基酸含量,竞然主要成分是谷氨酸,占氨基酸总量的85%,我戏说以后烧菜不用放味精,放一片复合氨基酸就行,可这玩艺要几百元一瓶,一瓶(谷氨酸)要顶一大箱味精!

  • 【第三届原创大赛】菜鸟级解构日立L-8900全自动氨基酸分析仪

    【第三届原创大赛】菜鸟级解构日立L-8900全自动氨基酸分析仪

    维权声明:本文为dfldxt原创作品,本作者与仪器信息网是该作品合法使用者,该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为,我们将追究法律责任。 应版友要求,发几张图片比较一下氨基酸分析仪和普通液相的区别,让大家了解一下氨基酸分析仪的内部构造,如果有写的不对的地方,也请大家多多指教。先上氨基酸分析仪外观图一张http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/09/201009091119_242600_1691949_3.jpg把柜门打开,里面是这个样子http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/09/201009091120_242601_1691949_3.jpg图中若干个白色的塑料瓶是装缓冲液的,也就类似于液相中的流动相,那两个棕色玻璃瓶里是反应液,用于完成茚三酮反应。接下来看一下它的自动进样系统http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/09/201009091121_242602_1691949_3.jpg左边白色是进样板,可以放200个进样瓶,中间可以看到注射器和阀门,应该是控制进样量的,取样针在里面,看不到,右边有个白色的塑料瓶,是洗针液。然后看一下它的泵,http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/09/201009091123_242604_1691949_3.jpg是否觉得里面管路很多呢,那个连了很多塑料管的东东是缓冲液和反应液脱气机,左下角的塑料桶是废液桶,左上边是两个泵,泵1和泵2,泵1负责输送缓冲液,即流动相,泵2负责输送茚三酮反应液给个近景,这个是泵1,上面连了根短柱,是除氨柱,它的作用我目前也没有很明白,工程师说是用于除去缓冲液中带来的氨,http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/09/201009091125_242606_1691949_3.jpg这个是泵2,图中这个白色的阀门是用于排气的,连在它左边的那个不锈钢零件就是流路过滤器,如果泵压高,可以考虑把它拆下来超声http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/09/201009091126_242607_1691949_3.jpg再来看一下分离柱和反应器,http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/09/201009091127_242608_1691949_3.jpg分离柱就在右上角那个长方形盒子里面,给个近照看看,柱子很贵的哦,进样后通过缓冲液将氨基酸在分析柱(其实就是个离子交换柱中)分离,反应液是不进入分析柱的,http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/09/201009091128_242609_1691949_3.jpg反应柱近照见下图,里面有根反应柱http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/09/201009091130_242610_1691949_3.jpg最后说一下它的氮气保护体系,可以防止缓冲液和反应液变质,红色的数字是目前的压力值,左下角有个调节器,可以在仪器上调节气压大小,当然是在氮气瓶调好大小之后进行微调http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/09/201009091132_242613_1691949_3.jpg氨基酸分析仪主要的部件就是这些了,大家可以自行比较一下。

  • 【求助】氨基酸自动分析仪

    大家好! 我是一名新手,有很多地方都不懂.我使用的biochrom30型氨基酸自动分析仪最近测定的谷物氨基酸含量都很高,甚至比凯氏定氮测出的粗蛋白含量还高.我一直查不出是什么原因.请大家帮帮我! 还有前处理中,封管抽真空时,会有很多泡沫一直向上跑,该怎么办? 谢谢大家!

  • 氨基酸自动分析仪数据分析

    各位大佬,氨基酸自动分析仪的数据怎么分析啊,现在只知道名称,保留时间,面积,后面那个ng 我也不知道是什么,看文献里最后的图表是不同氨基酸含量(g/100g),不知道怎么变换成这样[img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/06/202306071931523369_7770_5993797_3.png[/img]

  • 氨基酸自动分析仪

    实验室要购买一台氨基酸自动分析仪,国产和进口的有什么区别,主要是功能上的还是使用年限上的呢?还有价格之类的。求解

  • 【资料】不同氨基酸自动分析仪氨基酸分析结果之比较

    近几年来由于饲料工业迅猛发展,对饲料产品的品质控制已经从常规的营养分析转到了微量分析,对饲料品质的评价已经从粗蛋白含量的高低,改为观测各种氨基酸含量是否符合要求,所以准确测定氨基酸含量就成了关键一环。本实验验证不同品牌的氨基酸分析仪在不同的实验室测定氨基酸含量是否有差别。

  • 全自动生化分析仪主要测的指标有哪些?

    全自动生化分析仪主要测的指标有哪些?1、肝功能系列如胆红素、总蛋白、白蛋白各种氨基转氨酶等2、肾功能系列参数有尿素、肌酐、尿酸等3、糖尿病系列参数有果糖胺、葡萄糖等4、血脂系列参数有胆固醇、甘油三酯、高低密度胆固醇、脂蛋白等5、心肌酶谱系列参数有肌酸激酶、肌酸激酶同功酶、乳酸脱氢酶等6、胰腺系列参数主要有阿尔法淀粉酶

  • 牛叉的实验室--农业部饲料工业中心 3台氨基酸分析仪

    http://www.instrument.com.cn/news/20110902/067338.shtml一大早上来看看,就发现一个牛叉的实验室-----------------“100家实验室”专题:访农业部饲料效价与安全监督检验测试中心(北京)http://bimg.instrument.com.cn/lib/editor/UploadFile/20119/201192181637380.jpg 整齐排列的日立L-8900 全自动氨基酸分析一台怎么也得七八十万吧?三台就接近个傻数了,同时也说明了该实验室样品之多啊,一个样品收费300-500元,赚大法啦!我们没买仪器前好像还送过样去检测呢。

  • 氨基酸自动分析仪的检测限一般可以达到多少?

    我有一批水稻伤流液样品需要测定其中的17种酸水解蛋白氨基酸,根据文献记载其含量范围应该在几十个PPM以上,不知用氨基酸自动分析仪可以保证质量地测出吗?谢谢各位老师的帮助了![em01] [em01] [em61]

  • 蛋白粉乳制品豆粕饲料调味料等中的氨基酸酸水解前处理的全自动化装置的介绍

    [align=center][b][font=楷体]全自动氨基酸水解前处理研究[/font][/b][/align][align=center][font=楷体]-[/font][font=楷体]上海港岸仪器技术有限公司-[/font][/align][align=left][font=黑体]一、背景介绍[/font][/align][font=宋体][color=#333333][back=white]蛋白质是生命的物质基础,没有蛋白质就没有生命。它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质水解成[/back][/color][/font][font=宋体][color=black][back=white]氨基酸,氨基酸是含有碱性氨基和酸性羧基的有机化合物,化学式是RCHNH2COOH。羧酸碳原子上的氢原子被氨基取代后形成的化合物。经蛋白质水解后得到的氨基酸都是α-氨基酸,而且仅有二十二种,包括甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸(蛋氨酸)、脯氨酸、色氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸,它们是构成蛋白质的基本单位。[/back][/color][/font][font=宋体][color=black][back=white]氨基酸是构成动物营养所需蛋白质的基本物质,比蛋白质更易于为动物消化系统吸收。因此食品中氨基酸的含量,是评价食品的品质的重要参数。对于某些特殊的群体,需要服用氨基酸功能食品或者药物来补充氨基酸,维持健康治疗疾病。[/back][/color][/font][font=宋体][color=black][back=white]在氨基酸功能食品和药物的研究和生产过程中,需要测定氨基酸的含量,用来评价和保证食品或者药品的功能疗效。[/back][/color][/font][align=left][font=宋体][color=#191919]测定蛋白质中的总氨基酸,必须先把蛋白质水解成游离氨基酸。[/color][/font][font=宋体][color=#333333][back=white]蛋白质在酸、碱或酶的作用下发生水解反应,中间产物是多肽,最后得到多种α-氨基酸,它是溶于水的[/back][/color][/font][font=宋体][color=#191919]。[/color][/font][font=宋体][color=#333333][back=white]加盐酸的作用是使蛋白质的肽键断裂,从而形成氨基酸。[/back][/color][/font][font=宋体][color=#191919]水解的方法有:酸水解、碱水解和酶水解方法,其中以酸水解法的应用最为广泛。[/color][/font][font=宋体]国标[/font][font=宋体]GB5009.124—2016[/font][font=宋体]对食品中氨基酸,[i][font=宋体][color=#333333]GB/T18246-2019[/color][/font][font=宋体][color=#333333]对饲料中总氨基酸和游离氨基酸[/color][/font][/i]进行测定,[/font][font=宋体]前处理都[/font][i][font=宋体][color=#333333]规定了先要对样品进行酸水解。[/color][/font][/i][/align][align=left][font=黑体]二、目前通常的做法有以下三种:[/font][/align][align=left][font=宋体]2.1 [/font][font=宋体]往水解管里面加入待测样品和试剂,充氮气,拧上盖。放入烘箱里面加热处理。[/font][font=宋体]水解后,使用氮吹浓缩仪或者平行蒸发仪进行浓缩或者减压蒸干。[/font][/align][align=left][font=宋体]2.2[/font][font=宋体]特殊水解管带气阀和气体接口。将气管先后分别连接真空泵和氮气瓶,通过气阀控制防止空气流入水解管。然后再放入烘箱加热水解。[/font][font=宋体]水解后,使用氮吹浓缩仪或者平行蒸发仪进行浓缩或者减压蒸干。[/font][/align][font=宋体]2.3[/font][font=宋体]利用酒精喷灯烧结水解管[/font][font=宋体],同时先抽真空,后充氮气。再放入烘箱水解。水解完了后,使用氮吹浓缩仪或者平行蒸发仪进行浓缩或者减压蒸干。[/font][font=黑体]三、上述常用方法的缺陷[/font][font=宋体]3.1 评价基础:[/font][font=宋体]蛋白质水解过程中要抽真空充氮气,排除空气。因为空气中的氧气会对蛋白质造成负面影响。这种影响被称为共价键修饰。具体来说,就是破坏蛋白质的分子结构,修饰蛋白质氨基酸侧链,蛋白质多肽链断裂,蛋白质分子间交联聚合等,因而影响消化等。[/font][font=宋体]水解过程是在高温(100~150℃)和强酸碱的环境下长时间(20~24小时)作用下进行的,以保证蛋白质在强酸碱的作用下充分水解成多肽片段并最终转化成溶于水的氨基酸产物。借以确保测试的结果准确。[/font][font=宋体]水解结束后,还需要用到浓缩仪或者平行蒸发仪对样品进行抽干浓缩操作。[/font][font=宋体]3.2 现在水解方法和设备评价:[/font][font=Symbol] [/font][font=宋体]残留氧气影响水解程度:方法一往水解管里面充氮气,势必有相当容量的氧气未被挤压出去。方法二插拔管接口和气管中残留了氧气,伴随着氮气注入了水解管。方法三也存在方法二相似的问题,酒精灯燃烧未必耗尽了水解管的氧气,可能有一定氧气残留量。如上所述,氧气会造成水解不充分,甚至失败。[/font][font=Symbol] [/font][font=宋体]加热不均匀影响水解程度:烘箱空间比较大,导致内部空间各点的温度有差异。引发水解管加热不均匀,导致水解不充分,甚至实验失败。[/font][font=Symbol] [/font][font=宋体]操作繁琐,效率不高:方法二和三,操作过程复杂,设计的设备众多。过程中按顺序需要插拔气管,开关气阀,控制真空泵开关,氮气开关,点灯,手持试管等。还要看气压参数。一个人难以独立完成,需要有人配合。[/font][font=Symbol] [/font][font=宋体]实验室及人身安全存在风险:频繁的插拔气管,开关阀门,使用明火,切开水解管取样等操作都存在危及实验室和人员安全的风险。烘箱的寿命,在长时间的高强度的使用中,有短路造成火灾的隐患。样品的安全也会受到威胁。[/font][font=Symbol] [/font][font=宋体]经济性探讨:水解处理中,要使用大量的设备:各种阀,专用水解管和烘箱的损耗,氮吹浓缩仪,旋转蒸发仪,平行蒸发仪等;人力资源的投入大,劳动强度大,风险系数高等。以上因素的综合影响,可能会导致成本高。[/font][font=黑体]四、新技术的研发探讨[/font] [font=宋体]本新技术主要实现了以下功能:[/font][font=宋体]1[/font][font=宋体]、抽真空和充氮气的全自动地无缝地切换,从根本上确保了对于氧气干扰的彻底排除。[/font][font=宋体]2[/font][font=宋体]、氨基酸水解管,及管盖的密封设计,使得各个管之间的并联密闭。氨基酸水解的整个过程,都在按压氮气的密封下进行。[/font][font=宋体]3[/font][font=宋体]、加热腔体一体成型,同时可以处理20个样品。[/font][font=宋体]4[/font][font=宋体]、温控设计,对功率进行了精确计算,保证安全和充分水解兼顾。[/font][font=宋体]5[/font][font=宋体]、触摸屏界面,操作简便,易学易用。[/font][font=宋体]6[/font][font=宋体]、整个水解处理的方法,完全符合国标的要求,较好地保证了结果的准确。[/font][font=黑体]五、技术效果[/font][font=宋体]1[/font][font=宋体]、样品充分加热水解:加热腔体的独特设计,底部球面加工,使得水解管底部侧壁充分均匀受热,对氨基酸水解管的全方位的包裹加热,确保样品的充分水解。[/font][font=宋体]2[/font][font=宋体]、排除了氧气的干扰:真空系统的精心设计,使得全部水解管及抽、充、排气的内部空间形成了一个密封空间;这样的设计,就可以保证完全按照国标要求来抽真空抽氮气。彻底保证了样品在无氧环境下充分彻底地完成水解。[/font][font=宋体]3[/font][font=宋体]、排除火灾风险:独特的温控设计,确保加热的温度可控;科学的加热块功率计算和设计,保证即使是加热块失控也不会发生火灾。彻底摒弃了明火烧结的方法,让水解实验室符合消防要求,杜绝了火灾的隐患。[/font][font=宋体]4[/font][font=宋体]、全流程操作的简化:抽真空,充氮气,加热,抽干等步骤按设置参数全自动次第完成,一气呵成。较大地简化优化水解过程。[/font][font=宋体]5[/font][font=宋体]、更加经济高效:该产品可以一机多用,替代了酒精灯,烘箱,氮吹或者旋转蒸发浓缩仪,平行蒸发仪等。节省设备采购维修费用。减少了劳动强度和人工的投入。水解过程的效率更高品质更好。[/font][align=left][font=宋体]6[/font][font=宋体]、确保操作人员的安全:如上所述该设备规避了火灾隐患,不再需要对试管烧结破开,水解过程的全密闭无异味等。这些优势,能较好的避免出现人员遭受伤亡的情况发生。[/font][/align]

  • 氨基酸分析技术的特点与内涵

    氨基酸分析技术的特点与内涵文章来源:国家产品质量安全与法信息中心网 添加时间:2009-7-19 3:13:19 点击:1510摘要:在传统蛋白质分析技术基础上,结合现代分析仪器技术发展优势,针对氨基酸分析技术难点及存在问题,概括比较分析评价当前氨基酸分析技术特点。关键词:蛋白质 氨基酸 分析技术 研究进展1 前言迄今为止,自然界中已发现180多种氨基酸,其中参与蛋白质合成的氨基酸只有20多种,称为基本氨基酸。氨基酸主要有两种存在形式,一种是以游离态存在于生理体液(血浆、尿)、食品(酒、饮料)中;另一种是以结合态存在于肽和蛋白质中。蛋白质在乳中含量为3.0%~3.5%,是乳的主要成分,对乳品的理化特性和营养价值有重要的影响。由于国标法对蛋白的检测是通过检测样品含氮量而得到的,实际上是将样品消化分解,经蒸馏碱吸收后,测定的挥发性“氨基氮”,因而部分不法商贩用添加外源动植物蛋白粉或脲等含氮化合物(虚“氮”)来增加原料乳的氮含量,钻传统检测方法表征“虚氮”的漏洞,以蒙混过关。这些掺入水解动物蛋白或者含氮化合物的乳粉因其氨基酸的组成不合理,根本不能代表动、植物蛋白,不易消化,所以营养价值低下,导致人体吸收利用率降低,严重地影响到婴幼儿的生长发育和智力水平。因此,对氨基酸分析方法的研究与改进逐渐得到各国家、全社会的高度重视。在一般情况下,质量监督检验单位在市场上抽到产品进行检验所得的数据中,蛋白质含量实际上是用总氮含量表示的,所以在加工企业常规检验时、含氮化合物、水解动物蛋白等杂蛋白是测不出来的,因此需要建立快速分析、测定乳制品中蛋白质、氨基酸的检测方法,保障乳制品的质量与安全。,1958年,Spackman等首先提出了用阳离子交换色谱与柱后茚三酮衍生结合的方法分析蛋白质中的氨基酸,实现了氨基酸分析的自动化。其后,人们不断地发展新的氨基酸分析方法,柱前衍生反相高效液相色谱法、高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培检测法、毛细管电泳法、蛋白质芯片技术等相继应用于氨基酸分析。现已是多种氨基酸分析方法并存、互补。本文就目前应用于氨基酸分析的主要方法作一比较分析。,,2 氨基酸分析技术的光谱分析优势及特点利用光谱探针方法定量分析蛋白质的研究在国际上十分活跃,其中,对有机染料(包括显色剂和荧光染料)结合分光光度法和金属离子-有机染料(包括显色剂和荧光染料)结合分光光度法的研究倍受重视。 2.1 有机染料结合分光光度技术因为有机染料结合分光光度法测定蛋白质操作简便,比较灵敏,又不需特别的仪器,方法应用比较广泛。现在研究较多的可作为探针的染料分子中,大部分都含有带正电荷的亲水性基团如羟基、磺酸基、酚羟基及不带电荷的疏水性基团,如苯环。这类方法的基础是在溶液pH小于等电点时,蛋白质的肽键亚胺和N端氨基质子化成阳离子,若有阴离子染料存在时,由于电荷作用,蛋白质便与染料结合沉淀或改变结合染料的光吸收特性,借染料颜色的减褪或变化的程度测定蛋白质的含量。已经应用的染料有酸性橙红、考马斯亮蓝G-250、溴甲酚绿、溴甲酚紫、埃铬青R和溴酚蓝。2.2金属离子-有机染料结合分光光度技术近几年发展了利用金属离子和有机染料特别是荧光染料形成配合物体系结合光光度法来测定蛋白质含量。金属离子与含有-OH或C=O的有机染料相遇时,氧原子中的孤对电子可顺利进人杂化轨道,形成稳定的配合体系,在酸性条件下,该体系遇到结构不对称的蛋白质分子时,互相极化产生静电作用而结合成新的大分子团,改变了原体系的光谱性能,从而能定量测定蛋白质的含量。该方法具有灵敏度高、线性范围广、干扰离子少、操作简单、快速及适用于常规应用等特点。2.3 荧光光度分析技术荧光法是定量测定蛋白质的另一种常用方法通常比分光光度法更灵敏。常用的方法有内源荧光法、荧光探针法、荧光偏振、时间分辨荧光法及激光诱导时间分辨免疫分析法。2.3.1 内源荧光分析技术蛋白质中存在着Tyr、Trp、phe残基,能够吸收270~300 nm的紫外光而发出紫外荧光。当测定体系中加入小分子配体(SM)时,SM与蛋白质发生相互作用,会导致蛋白质荧光的猝灭,利用SM对蛋白质内源荧光的猝灭这一现象可以确定蛋白质与SM的作用类型及其结合部位等。2.3.2 外源荧光分析技术对于蛋白质的研究仅利用其内源荧光是不够的,需要通过外源荧光性质的研究才能获得更多关于蛋白质分子的各种信息,这就使得荧光探针对蛋白质分析有着极其重要的意义,这已成为蛋白质微量检测及溶液的构相分析中不可缺少的手段之一。在外源荧光法中,又可分为有机荧光探针法和稀土荧光探针法。作为一个好的荧光探针应满足以下条件:探针分子与蛋白质分子的某一微区必需有特异性的结合,并且结合比较牢固;探针的荧光必须对环境条件敏感;蛋白质分子与探针结合后不影响其原来的结构和特性。在满足这些条件的基础上可进行蛋白质的测定和与金属离子结合的计量化学等。与光度法类似,蛋白质在和某些具有荧光特性的染料结合后,能引起荧光强度的变化,并且在一定浓度范围内与蛋白质浓度成正比,因此可用于蛋白质的测定。利用这些化合物在不同蛋白质分子中量子产率、峰位及谱带的变化,就可探测蛋白质分子结合区的极性、疏水性的大小,从而推论构象的稳定情况及变化等。2.3.3 荧光偏振分析技术利用荧光体在转动扩散速度上的差异而导致偏振荧光的差别,建立了荧光偏振测定法。利用荧光偏振还可以研究:酶与荧光底物的结合程度;蛋白质聚合与解离;蛋白质从螺旋到无规卷曲的研究。,3 氨基酸分析技术的色谱分析优势及特点3.1 柱后衍生高效阳离子交换色谱分析技术高效阳离子交换色谱(HPCEC)-柱后茚三酮衍生光度检测分离测定氨基酸是一种经典的氨基酸分析方法。此方法是利用氨基酸在酸性条件下形成阳离子而在阳离子交换柱中分离,分离后的氨基酸用茚三酮衍生、紫外可见光检测器检测。该方法以阳离子交换树脂为固定相、酸性缓冲液流动相,在柱后流出液中加入茚三酮使氨基酸生成具有可见光吸收的衍生物进行检测,具有重现性好、仪器稳定、结果可靠、适合于大量常规样品分析等优点。另外,由于衍生化反应发生在氨基酸与其物质分离之后,因而避免了其他物质的干扰,适合复杂样品中氨基酸的分析。其缺点是仪器复杂、体积大、费用高。此外,由于脯氨酸的测定波长在440nm,而其他氨基酸的测定波长为570nm,因脯氨酸不能和其他氨基酸同时测定。氨基酸分析自动仪就是基于阳离子交换色谱分离、柱后茚三酮衍生光度检测技术设计的。商品化的自动氨基酸分析仪是在20世纪60年代初问世,目前的自动氨基酸分析仪已实现了程控自动化和数据处理电脑化,分析时间已缩短至1 h以内。氨基酸自动分析仪实际上属专门用来分析氨基酸的高效液相色谱仪,其优点是高压、快速、灵敏,试剂和样品用量少、重现性好、分析结果稳定。广泛用于食品、医学、农业以及微生物等领域。3.2 柱前衍生反相高效液相色谱分析技术近20年来,柱前衍生反相高效液相色谱法(RP-HPLC)分析氨基酸得到了迅速发展,逐渐取代柱后衍生高效阳离子交换色谱(HPCEC)在许多领域中的应用。RP-HPLC分析方法更加快速灵敏。与专业氨基酸分析的自动分析仪不同,HPLC仪适用性更广、更灵活。RP-HPLC要求将氨基酸在柱前转化为适于反相色谱分离并能被灵敏检测的衍生物,柱前衍生的关键在于衍生试剂的选择。选择衍生试剂的标准是能与各氨基酸定量反应,每种氨基酸只生成一种化合物且产物有一定的稳定性,不产生或易于排除干扰物,操作简单,色谱分离分辨率高、检测灵敏度高,分析时间短,便于实现自动化和使产物能在不同型号的高效液相色谱仪上测定。目前比较常用的柱前衍生试剂有邻苯二甲醛(OPA)、异硫氰酸苯酯(PITC)、氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl)及丹酰氯(Dansyl-Cl)。衍生后的氨基酸一般键合在C18柱上,利用液液分配原理进行分离。流动相多以乙酸盐或磷酸盐缓冲液为主,以乙腈、甲醇或四氢氟喃为调节剂。由于氨基酸衍生物仍保留着两性化合物的特点,除改变调节剂之外,还可通过调节缓冲液pH值、离子强度、柱温等使之达到理想的分离。当然,不同衍生物所选用的柱型、流动相以及氨基酸的洗脱时间和顺序不尽相同。柱前衍生反相高效液相色谱法可用于分析蛋白质水解液、生理体液和食品等样品中的氨基酸。当与质谱技术结合时,采用电离喷雾质谱(ESI-MS)或电离喷雾串联质谱(ESI-MS/MS)联用技术方式,借助计算机的联机检索,可以实现高通量筛选和鉴定蛋白质混合体系。目前,,蛋白质组研究的高效液相色谱-质谱联用的方式有一维色谱-质谱联用技术、多维色谱-质谱联用技术以及亲和色谱-质谱联用技术等。一维色谱-质谱技术仅能分析一些不太复杂的蛋白质体系,而对复杂的多肽混合物常不能满足分离的要求。多维色谱分离的方法在某种程度上满足了对复杂蛋白质混合分离鉴定的要求。,,,3.3 两种氨基酸直接分析技术大多数氨基酸不具备生色团,因此无法利用分光光度法直接检测,故需采用化学衍生技术,使之生成可在紫外或可见光区有吸收的化合物,或者采用荧光法检测。但对于分析工作者来讲,尤其是在新化合物研制的过程中,面对多种未知的降解物,如采

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    本规程规定了氨基酸分析仪(以下称仪器)的检定方法。规程中所列检定方法适用于利用柱前衍生C18柱分离氨基酸,带自动恒温水解装置的高效仪器。仪器适合于分析含氨基酸的样品,可对水解氨基酸及游离氨基酸进行定性、定量分析。广泛用于生化、医药、食品、化工 及农业等领域。资料中心下载:http://www.instrument.com.cn/download/shtml/012547.shtml

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