液相色谱百分含量

高效液相色谱法检测中药材栀子中栀子苷含量 《栀子花开》，多么动听的歌声，打动多少人的心怀。《栀子花开》，多么精彩的剧情，吸引着多少人的情哀。 大家都知道栀子花很美丽，却可能不知道栀子的果实还是中药材，还有很多药物功效。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508262335_563082_2536753_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508262335_563083_2536753_3.png 栀子果实气微，味微酸而苦，是传统中药，属卫生部颁布的第l批药食两用资源。具有泻火、护肝、利胆、清热、除烦、凉血、降压、镇静、止痛、解毒、止血、消肿、消炎等多种药效。在中医临床常用于治疗黄疸型肝炎、扭挫伤、热病心烦，淋证涩痛，血热吐衄，目赤肿痛，火毒疮疡高血压、糖尿病等病症。 栀子中的栀子苷是赋予栀子药物疗效的主要成分，栀子苷的含量从某种意义上决定着栀子品质和价值，检测必不可少。下面我们就迫不及待的介绍高效液相色谱法检测中药材栀子中栀子苷含量。【实验部分】【原理】 取适量栀子样品经甲醇溶解，超声提取后注入高效液相色谱系统，C18色谱柱分离，紫外检测器检测，外标法（保留时间定性，峰面积定量）计算，得出栀子中栀子苷含量。【仪器及试剂】 仪器：高效液相色谱仪（紫外检测器+高压泵+柱温箱等），超声波清洗仪，溶剂过滤器，电子天平（0.001），四号筛（药典筛）等。 试剂：甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），超纯水等。【样品溶液制备】 对照品溶液制备：精密称取栀子苷对照品1.5mg于50ml容量瓶中，加甲醇溶解定容，制成30μg/ml栀子苷对照品溶液，备用。 供试品溶液制备：取样品栀子成熟、干燥果实适量，充分粉碎后过药典筛四号筛，精密称取过筛粉末0.1g置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理20分钟后，放冷，再次称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，0.45μm有机相微膜滤过，待测。【色谱条件】检测器：紫外检测器检测波长：238nm色谱柱：Promosil C18 ( 250 mm X 4.6mm，5μm )流动相：乙腈：水=15：85（V：V)流速：1.0ml/min柱温：30℃进样量：10μl【色谱图】对照品溶液色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508262336_563084_2536753_3.png供试品溶液色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508262336_563085_2536753_3.png【计算】样品中被测物含量计算公式：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508262336_563086_2536753_3.pngD----供试品中被测物百分含量，以（%）表示V----供试品稀释的总体积，单位（mL）P3----供试品中被测物峰面积值P4-----对照品中被测物峰面积值ρ2----对照品被测物浓度。单位为mg/mlm2----样品质量，单位（mg）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508262336_563087_2536753_3.png【结果】 通过以上公式计算，栀子中栀子苷的含量近似为4.48%，远高于药典要求的不小于1.8%，该栀子中栀子苷含量满足药典要求，该项目检测合格。【结论】 以上方法检测栀子中栀子苷含量方便、快捷，结果准确、可靠，操作简单、易行，该方法适合该类样品检测。

今天去给客户安装了液相色谱仪，客户主要用它来检测血浆蛋白粉中免疫球蛋白G的含量，对于液相色谱仪安装已经有一些小小经验，所以仪器送到之后很快的我们就把仪器安装好了，仪器安装好之后呢肯定是要调试和验收的，验收中的安装已经完成，接下来我们运行确认和性能确认，既然要检测血清蛋白，那我们就通过检测它来完成后面的任务吧。首先我们完成运行确认，准备我们实验需要的流动相，流动相A：称取5．6765g磷酸氢二钠和4．6478g磷酸二氢钾至1000mL容量瓶中，加水定容至l000 mL，配制成pH-6.5，浓度为0.05 mol/L的磷酸盐缓冲液。流动相B：称取甘氨酸3．7535g与1000mL容量瓶中，加入800 mL水溶解，再加入4．75 mL6 mol/L的盐酸，用水定容至1000 mL，配制成pH-2.5,浓度为0.05 mol/L的甘氨酸盐酸缓冲液。[img=,255,340]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908060953502175_13_3763765_3.jpg!w690x920.jpg[/img] [img=,248,340]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908060945498254_8247_3763765_3.jpg!w690x945.jpg[/img] 将两种流动相经过过滤和脱气处理后，连接到我们的输液泵上，输液泵在第一次使用时要打开排液阀，将注射器安装到废液口，用注射器进行手动吸液当衍生试剂进入注射器内，观察并确定进液管内无明显气泡后关闭排气阀，换上废液管后开始运行输液泵。此时必须要确定泵腔内有液体且无气泡才可以运行泵，否则运行泵时会损坏泵头。两个泵都要经过此操作后才可以开始运行。打开我们的泵，查看机器是否可以顺利通过自检，检测泵的流速和流动相混合比例的准确度。随后打开检测器和工作站，我们用的色谱柱是HiTrap[sup]TM [/sup] Protein G HP柱，1mL。设置好实验所需参数：流动相梯度洗脱程序[table][tr][td][align=center]时间(min)[/align][/td][td][align=center]流速(mL/min) )[/align][/td][td][align=center]流动相A(%)[/align][/td][td][align=center]流动相B(%)[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]0.4[/align][/td][td][align=center]100[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4.5[/align][/td][td][align=center]0.4[/align][/td][td][align=center]100[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]5.5[/align][/td][td][align=center]0.4[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]100[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]15.0[/align][/td][td][align=center]0.4[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]100[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]15.5[/align][/td][td][align=center]0.4[/align][/td][td][align=center]100[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]22.0[/align][/td][td][align=center]0.4[/align][/td][td][align=center]100 0[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][/tr][/table]检测波 长280nm。让流动相冲洗整个系统，查看基线，等待基线平稳。[img=,306,340]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908060949079532_4842_3763765_3.jpg!w690x765.jpg[/img] [img=,316,340]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908060949585645_8170_3763765_3.jpg!w690x742.jpg[/img] [img=,268,340]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908060957536288_7365_3763765_3.jpg!w690x874.jpg[/img][img=,321,340]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908060944094564_753_3763765_3.jpg!w690x730.jpg[/img] [img=,285,340]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908060944599785_6578_3763765_3.jpg!w690x822.jpg[/img] 在这该阶段我们可以把标准品配制出来，首先我们来了解一下免疫球蛋白G，它是血清主要的抗体成分，占血清免疫球蛋白的百分比较多，大约占75%，但它只有40%-50%在血清中，其余在组织当中。它的主要功能是在机体免疫中起到保护作用，它也是唯一可以通过胎盘的免疫球蛋白。通过胎盘获取的母体免疫球蛋白G在出生后数月对防御白喉、[url=https://baike.baidu.com/item/%E9%BA%BB%E7%96%B9][color=#000000]麻疹[/color][/url]、脊髓灰质炎等感染起着重要作用。它的结构想一个“Y”字型，如图：[img=,357,340]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908060948093745_2090_3763765_3.jpg!w440x418.jpg[/img] [img=,255,340]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908060953036898_4160_3763765_3.jpg!w690x920.jpg[/img] [img=,190,340]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908061003393034_7645_3763765_3.jpg!w690x1230.jpg[/img] 称取免疫球蛋白G标准品0.0102g（纯度=97%）置于10mL容量瓶，并用流动相A定容到10mL，摇匀，脱气。浓度为1mg/mL。取配置好的标准溶液母液，用流动相A稀释成浓度为0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL的标准工作液。检测进样阀的精密度：将标准溶液母液取20μL在检测波 长280nm条件下进样，连续进样6次，计算其相对标准偏差RSD=0.94%。依次进样标注品工作液20μL，由时间进行定性，峰面积进行定量。得出其平均相关系数r=0.9999。免疫球蛋白G检出质量浓度以3倍信噪比(s/N=3)计算，最低检出质量浓度为0．1 mg/mL。原本还有一步已知浓度样品的检测，前处理方法如下：称取0.1g精确至0.0001曲血浆蛋白粉于15mL的塑料离心管中，准确加入10mL流动相A，涡旋振荡10min，4 000 r/min离心5 min，取上清液经微孔膜(0．22μm)过滤，滤液待测。但是由于今天已知浓度的样品没有到，所以我们无法进行样品进样，但是建议大家在安装仪器时最好用已知浓度的样品进样验证仪器的准确性。好了，今天就到这里啦！