快速蛋白纯化系统

对于重组蛋白的分离纯化，一般都会在进行载体构建时，选择N端或C端加上一个标签，如GST，HIS6，FLAG和MBP等，带了这些标签的蛋白就可以通过亲和吸收的填料来到达初步纯化的目的，亲和纯化相对简单，带有标签的蛋白就会吸附到相应的填料上，而不带标签的蛋白会直接流出，简单的清洗杂蛋白后，只需要再把吸附在上面的蛋白洗脱下来即可，几乎不需要摸索分离纯化的条件。含有所需蛋白的分泌液或者裂解液一般体积都相对比较大，最好使用蛋白存化系统（Clear First 2000）的上样泵上样；进完样后，进行杂蛋白的清洗，再用特异的洗脱液将蛋白洗脱，通过自动接收器接收分离后样品即可，整个过程基本可以实现自动化操作。

蛋白质的产率和纯度是衡量纯化是否成功的重要指标。除有效的色谱分离外，配置良好、可靠的仪器也能影响纯化的成功。制备型反相(RP)液相色谱由于具有高分离能力，经常被用做多肽和小分子亲水蛋白纯化流程的最后一步。虽然大家都知道反相液相色谱所用的溶剂条件会使蛋白结构变性，但也能通过调节适当的条件再使其复性，特别是小分子蛋白。Agilent 1100系列纯化系统是设计良好、合适的反相色谱的系统。

仪器：Clear-First蛋白3000。样品：BHb（牛血红蛋白）、BSA（牛血清白蛋白）、脂肪酶的混合样品，3种蛋白均为2mg/mL。其中BHb购自国药，BSA购自世泽生物，脂肪酶购自沃凯。上样量：1 mL。色谱柱： Hitrap™ DEAE FF，5mL。缓冲液：A管路为20 mM Tris-HCl（pH8.5），，B管路为20 mM Tris-HCl（pH8.5）其中含0.5 M NaCl。流速：1 mL/min。检测波长：280nm，385nm。

仪器：蛋白3000样品：乳清蛋白粗品上样量：3 mL色谱柱：60 cm× 26 mm填料：Sephacryl S-200（GE）缓冲液：50 mM Tris-HCl（pH6.8），0.1 M NaCl流速：1 mL/min

Opentrons OT-2 磁珠蛋白质纯化工作站基于磁珠提取原理，可以自动化完成小规模蛋白质纯化和蛋白质组学样品处理。磁珠蛋白质纯化工作站可以支持多种工作流程。

免疫球蛋白G，即抗体，是免疫系统用来识别和中和病原菌和病毒等异物的Y型大蛋白，在生物学上十分重要。Protein G可以结合哺乳动物IgG，与其蛋白结构上的Fc片段进行特异性识别。因此可以选用月旭Welchrom? Protein G Tanrose 4FF(5mL，00081-12012)来分离纯化牛初乳粉中的IgG蛋白、Welchrom? BC-10重力柱(8.3mL，00051-32022)提高纯度，并采用月旭Xtimate? SEC-300（7.8*300mm，5um）进行色谱检测分析实验结果。

使用MST技术检测跨膜蛋白TRKB与脑胆固醇和抗抑郁药物的结合。其中跨膜蛋白TRKB并未纯化，直接将过表达GFP-TRKB的HEK293T细胞裂解后取上清。以GFP-TRKB融合蛋白作为荧光信号源，进行MST检测。

以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于来同区域而达到分离目的，如电泳，超速离心，超滤等。在所有这些方法的应用中必须注意保存生物大分子的完整性，防止酸、硷、高温，剧烈机械作用而导致所提物质生物活性的丧失。蛋白质的制备一般分为以下四个阶段：选择材料和预处理，细胞的破碎及细胞器的分离，提取和纯化，浓细、干燥和保存。

基于蛋白水解酶的催化机制以及蛋白酶抑制剂的结构特点，作者提出了一个长效肽的设计思路。选择了LRHR拮抗剂为模拟化合物，为别再N端和5位，N端和6位进行了氨基酸的修饰和替换。耐士科技作为Biotage中国区总代理，以最优质的服务提供Biotage全系产品。Biotage Isolera 系列是世界上最智能的快速纯化系统，它拥有自己独创的智能参数设置，共有3个系统，多种配置可选。可以让化学家们轻松地完成对从mg级到150g以上样品 的更好的分离。创新的TLC-to-gradient专利技术可以根据薄层层析色谱的数据自动产生适合样品的溶剂洗脱梯度，并建议适合该样品量的色谱柱。通过双波长检测收集馏分，最多可以在单一梯度下同时使用四种溶剂进行洗脱，以达到最大限度提高纯度和收率的目的。通过梯度优化功能，可以实现加大上样量同 时减少溶剂使用量。

?肌动蛋白是真核细胞骨架蛋白的重要组成部分，具有多种重要的细胞功能，包括细胞分裂、细胞极性、伤口愈合、肌肉收缩等。本篇文章介绍了一种改进的肌动蛋白表达和提纯方法，使用SPEX 冷冻研磨仪研磨法破碎酵母细胞，适用于所有配备分子生物学设备的实验室中，这将极大地促进肌动蛋白细胞骨架的升华和细胞生物学研究。

本应用简报介绍了如何像生物分析科学家在典型生物药理学环境下进行纯度分析那样，使用 Agilent Easy Access 软件来分析模式治疗性蛋白的批次间纯度。分析模式治疗性蛋白的批次间纯度时，将 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统与 Agilent 6530 精确质量Q-TOF LC/MS 联用，并通过 Agilent Easy Access 软件进行数据分析。LC/MS 平台拥有卓越的色谱分离度和质量精度，结合强大的数据处理能力，可简便、快速地分析批次间的蛋白纯度。本应用简化了工作流程，使用者可以快速做出决策，以作进一步的下游处理。该软件可用于比较蛋白谱图，从而确保监管机构要求的批次一致性。此外，该软件还有助于了解工艺放大或生产过程中纯化后蛋白的杂质谱图。该数据可帮助开发生物仿制药的公司在产品上市前评估其产品与原始药物的相似度，重要性不言而喻。

聚乙二醇化的多肽和蛋白质为生物治疗药物的详细结构表征带来重大挑战，这主要是由于聚乙二醇 (PEG) 具有异质性。本应用简报描述了一种联用 Agilent HPLC 及 Agilent 6520精确质量数 Q-TOF LC/MS 系统分析聚乙二醇及聚乙二醇化蛋白的方法。其使用了一种电荷剥离剂（三乙胺）作为柱后添加剂，这样有助于简化质谱图，因此可更好地阐释结果。结果表明聚乙二醇和聚乙二醇化蛋白质的质谱图质量均得到显著改善。

在蛋白纯化过程通常使用三氟乙酸作为沉淀剂，或者在纯化过程用作淋洗液，或者在合成过程最后洗脱合成的多肽。而这可能导致三氟乙酸最终在成品中残余，而这种残余是非常有害的，因此必须进行检测；另外一种常用的蛋白沉淀剂硫酸铵也需要检测。使用离子色谱是高效高灵敏的检测手段（图-）（戴安应用注解AN）。

液质联用鉴定肽段的样品制备，通常由多步骤工作流程组成，包括溶液内蛋白酶解、肽段纯化，以及肽段分馏。该过程通常需要根据样品特性及分析目的（ 即定量或表征）定制为具体的应用方法。样品制备工作流程的自动化可提高样品处理能力、降低差异性，并且无需熟练操作人员执行重复工作。然而，自动化平台通常并不用于最初的分析开发，这是因为分析开发者很少具有开发复杂自动化方案的经验。相反，分析通常是采用湿式工作台相关技术进行开发，然后在自动化专家的帮助下移植到自动化平台。采用 AssayMAP 肽段样品制备解决方案，无需掌握专门的技术也能实现自动化操作。开发者可通过一个简单的软件用户界面和灵活的实验方案对关键实验变量进行完全控制，从而能够专注于科学分析研究。如今，分析开发者、科学家或技术员无需具备自动化专业知识也能实现可扩展、精确的自动化操作。采用 AssayMAP 平台，整个工作流程可直接在相同的硬件上进行开发，如需实现高通量样品前处理，也易于对硬件进行扩展，从而可减少或避免已有实验方案实现自动化所需的额外时间和资源。本文将介绍发现（鸟枪法）蛋白组学研究的一种常规液质联用工作流程，包括溶液内酶解、反相肽段纯化，以及肽段的强阳离子交换分馏 (SCX)，所有这些操作均由 AssayMap Bravo 液体处理器完成。采用 SCX 小柱通过增加 pH 或离子强度对大肠杆菌蛋白裂解液进行逐步洗脱，在六个 SCX 馏分中鉴定出 15000 多条特定肽段序列，其中 64-67% 的肽段可专属性地在其中一个馏分中得到鉴定。

人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)检测试剂盒人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)抗原、生物素化的人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

通过聚乙二醇化能够改变治疗性蛋白质的物理化学和生物性质（如提高溶解度、降低免疫原性、延长半衰期以及防止蛋白酶破坏），从而显著提高其价值。体积排阻色谱法 (SEC) 是检测分子量大于聚乙二醇化蛋白质杂质的首选方法。由于聚乙二醇介导的与硅胶固定相的相互作用会导致回收率降低、峰形变差以及过度拖尾，因此聚乙二醇化蛋白质的 SEC 分析面临着很大挑战。本应用简报描述了一种用于检测聚乙二醇粒细胞集落刺激因子 (PEG GCSF) 的简单而灵敏的 SEC 方法。采用 AdvanceBio SEC, 130Å , 7.8 × 300 mm, 2.7 μ m 色谱柱在水相流动相下进行 PEG GCSF 的分离和定量分析。线性曲线在 12.5-2000 μ g/mL 的范围内具有优异的相关系数，表明该方法适用于定量分析。该方法具有出色的保留时间和峰面积精度，证明了该方法的适用性。此外，AdvanceBio SEC 还可对强制应激研究中得到的聚集体进行分离与定量分析。

Opentrons 双流色谱 (DFC) 蛋白质纯化工作站，可以使用 BiotageⓇPhyTip Ⓡ 色谱柱对多达96个样品进行小规模蛋白质纯化。

人视黄醇结合蛋白(RBP)检测试剂盒人视黄醇结合蛋白(RBP)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人视黄醇结合蛋白(RBP)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人视黄醇结合蛋白(RBP)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人视黄醇结合蛋白(RBP)抗原、生物素化的人视黄醇结合蛋白(RBP)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人视黄醇结合蛋白(RBP)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

抗原和抗体的高水平生产中，上游表达系统的合理选择和优化是核心技术。默克密理博Novagen的大肠杆菌/昆虫细胞/哺乳动物细胞表达工具各有特点，是特定蛋白表达的最佳选择。而蛋白抽提、纯化、浓缩/除盐/换液、复性、高通量操作等也可以通过选择MM的合适产品提高效率。

人硫氧化还原蛋白(Trx)检测试剂盒人硫氧化还原蛋白(Trx)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人硫氧化还原蛋白(Trx)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人硫氧化还原蛋白(Trx)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人硫氧化还原蛋白(Trx)抗原、生物素化的人硫氧化还原蛋白(Trx)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人硫氧化还原蛋白(Trx)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人胆固醇酯转移蛋白(CETP)检测试剂盒人胆固醇酯转移蛋白(CETP)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人胆固醇酯转移蛋白(CETP)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人胆固醇酯转移蛋白(CETP)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人胆固醇酯转移蛋白(CETP)抗原、生物素化的人胆固醇酯转移蛋白(CETP)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人胆固醇酯转移蛋白(CETP)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人视黄醇结合蛋白4(RBP-4)检测试剂盒人视黄醇结合蛋白4(RBP-4)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人视黄醇结合蛋白4(RBP-4)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人视黄醇结合蛋白4(RBP-4)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人视黄醇结合蛋白4(RBP-4)抗原、生物素化的人视黄醇结合蛋白4(RBP-4)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人视黄醇结合蛋白4(RBP-4)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

通过在LC系统中加入液体处理器，建立了一种仅需放入样品溶液，即可完成纯化、及无缝对已分取馏分进行重新分析的体系。对已确定目标物的常规样品的分析，也可重新分析所需馏分。并且通过追加色谱柱切换阀，增加色谱柱，可进行多阶段纯化。此外，通过使用96孔板，还可在SDS-PAGE和ELISA等后续各种分析中直接使用。

人血白蛋白是由健康人血浆，经过低温乙醇蛋白质分离法或经批准的其他分离法分离纯化，并经60℃10小时加温灭活病毒后制成。其中蛋白质含量是其需要检定的指标之一。本实验参照《GB 5009.5 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定》使用杜马斯定氮仪对人血白蛋白中的蛋白含量进行测定。

随着“一小时酵母蛋白质组”的实现, 短梯度下实现蛋白质组深度覆盖成为可能.本文利用全新 Q-OT-qIT 三合一质谱系统进行“一小时蛋白质组”分析与优化. 50 min 有效梯度, 单次实验分别从1 μ g和50 ngHeLa全蛋白中鉴定到20860和14100条肽段, 对应到3865和 2877 个非冗余蛋白, 而目前的文献报道至少需要 2~3 h. 同时, 本文考察了 Q-OT-qIT 碎裂模式、检测方法、最大注入时间和自动增益控制等参数对蛋白质组快速分析的影响, 证明了不同采集方法间的互补性, 阐述了不同扫描参数对鉴定结果的影响. 此外, 还讨论了Q-OT-qIT 的并列运行原理和扫描组合模式, 为不同实验目的和样本类型的蛋白质组快速分析奠定了基础.

摘要：用比较简便的方法提取苦瓜籽蛋白，并通过硫酸盐沉淀、透析、柱层析等步骤对蛋白进行纯化。关键词：苦瓜籽 粉碎抽提 离心 盐析 透析

制备出效价高，特异性强，稳定性好的抗体是免疫学实验取得成功的基础，抗体质量的好坏直接影响着研究者研究的成败，不同的免疫学实验方法（如ELISA，IHC，IP，ICC,SDS-PAGE, WB等）对抗体的效价，浓度和纯度有不同的要求。我们知道，一般免疫血清中含有特异性抗体和非特异性抗体，血清蛋白以及其他各种杂蛋白等，在制备特异性抗体过程中当抗体的效价达到实验预期之后，我们所制备的抗体的纯度关键取决于所选择的纯化方法。

海白菜蛋白的提取及纯化-要克服的挑战Extraction and purification of seaweed protein from Ulva sp. - Challenges to overcome冻干样品的总氮使用格哈特DUMATHERM全自动燃烧法快速定氮仪测定，蛋白质系数为5，1.4毫升氧气/毫克样品氧气流量300毫升/分钟

分析型尺寸排阻色谱与多角度激光光散射仪联用（SEC-MALS）测定样品的绝对分子量，结果表明在37 度下，每一组成蛋白的分子量都与预测的一致，包括纯化后的LcrV 单体和二聚体。

人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)检测试剂盒人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)抗原、生物素化的人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度