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快速核酸纯化系统

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快速核酸纯化系统相关的论坛

  • 汉邦科技蛋白纯化仪

    汉邦科技蛋白纯化仪

    [size=18px] 汉邦全自动蛋白纯化系统是公司自主研发的一款高效、快速、可靠的全自动蛋白纯化系统。可用于微克到克级水平的蛋白、多肽和核酸等生物分子的快速高效纯化。该系统采用模块化设计、配套智能化软件并结合公司的各类层析柱，可满足实验室各类生物大分子的纯化需求。它的模块化设计、智能化软件并结合汉邦科技的各类层析柱，可以满足实验室中各类生物大分子的纯化挑战！ 欢迎来电咨询：18952338196 [img=,690,469]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/05/202205261525020323_4695_2788731_3.jpg!w690x469.jpg[/img][/size]

  • Waters 质谱/UV 引导的自动纯化系统 介绍

    Waters 质谱/UV 引导的自动纯化系统 介绍

    公司（上海********有限公司）现有waters 质谱/UV 引导的自动纯化系统一套。该系统具备：沃特世AutoPurification系统可以同时与UV，RI，ELSD，PDA，MS等多种检测器并联，从而一针进样可以同时得到多种检测信号，获得更多更完整的信息。并可以其中任何一个或多个信号触发收集。大大提高分离纯化通量和纯度。这套系统设计可以用单一指令来切换最多5根色谱柱（3根分析柱，2根制备柱）。 结合沃特世最佳柱床优化设计的OBD制备柱，可以对复杂的中药进行高效分离，并获得最佳的柱寿命。系统优势■ 是目前市面上唯一一款能够实现从粗品分析到馏分收MS/ UV 引导的自动纯化制备系统（AutoPurification system）在TCM中的应用集再到馏分纯度再分析的全自动化过程的纯化系统，具有独立的分析及制备进样阀及管路，可实现完全自动化的复杂物质的分析方法开发，制备方法开发，馏分纯度分析的功能■ 该纯化系统的二元高压梯度溶剂泵，具有专利的11条梯度曲线功能（梯度曲线：11条包括1条线性，2条阶梯，4条凹线，4条凸线）， 对于复杂化合物的分离，如中药等具有快速，高效分离的特点。且该泵具有完整的，自动的，可编程控制的泵密封冲洗程序，有效提高泵的使用性能■ 该系统标准配置分析方法到制备方法开发的计算器，可以实现从分析到制备的无忧放大，保证复杂化合物的制备效率■ 具备完全独立的纯化软件系统，能自动对色谱峰形进行切割、区分，同时可采用分子量及紫外光谱纯度，保留时间或模拟信号等设定多种触发模式进行收集设置http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109251936_319223_1929184_3.jpg

  • Waters 质谱/UV 引导的自动纯化系统 介绍(上海********二手）

    Waters 质谱/UV 引导的自动纯化系统 介绍(上海********二手）

    公司（上海************有限公司）沃特世AutoPurification 系统主要用于复杂基质中各种目标化合物的分析及制备。可以根据多种触发模式进行合成药，环境毒素，中药、天然产物、多肽等复杂基质组分的分离及纯化。众所周知中药成分复杂，采用传统分离制备方法，面临着上样量、分离度、回收率、分析到制备的无忧放大，高通量等多方面的挑战。沃特世AutoPurification系统可以同时与UV，RI，ELSD，PDA，MS等多种检测器并联，从而一针进样可以同时得到多种检测信号，获得更多更完整的信息。并可以其中任何一个或多个信号触发收集。大大提高分离纯化通量和纯度。这套系统设计可以用单一指令来切换最多5根色谱柱（3根分析柱，2根制备柱）。 结合沃特世最佳柱床优化设计的OBD制备柱，可以对复杂的中药进行高效分离，并获得最佳的柱寿命。系统优势■ 是目前市面上唯一一款能够实现从粗品分析到馏分收MS/ UV 引导的自动纯化制备系统（AutoPurification system）在TCM中的应用集再到馏分纯度再分析的全自动化过程的纯化系统，具有独立的分析及制备进样阀及管路，可实现完全自动化的复杂物质的分析方法开发，制备方法开发，馏分纯度分析的功能■ 该纯化系统的二元高压梯度溶剂泵，具有专利的11条梯度曲线功能（梯度曲线：11条包括1条线性，2条阶梯，4条凹线，4条凸线）， 对于复杂化合物的分离，如中药等具有快速，高效分离的特点。且该泵具有完整的，自动的，可编程控制的泵密封冲洗程序，有效提高泵的使用性能■ 该系统标准配置分析方法到制备方法开发的计算器，可以实现从分析到制备的无忧放大，保证复杂化合物的制备效率■ 具备完全独立的纯化软件系统，能自动对色谱峰形进行切割、区分，同时可采用分子量及紫外光谱纯度，保留时间或模拟信号等设定多种触发模式进行收集设置http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109251941_319224_1929184_3.jpg

  • 做核酸纯化分离的HPLC有什么样的要求呢？

    有个同学是做生物分子的，想买个液相，主要用于DNA和RNA纯化，我还不知道HPLC可以纯化核酸呢，不知道这个对仪器有没有什么要求，我只是知道会用到PEEK管的，用反向C18把杂链分离，不知道大虾们有没有做这个行业的，给小弟点意见啊。流量，压力这块有没有什么要求的，泵用那种比较好？检测器呢？

  • 【分享】溶剂纯化系统产品介绍

    溶剂纯化系统http://www.zhonghuida.com/imageRepository/367772f9-d0a6-4513-ad18-97358b20c4ff.png产品特点 新型醇和胺类溶剂干燥柱及过滤设计 各种配置和尺寸 取代传统热蒸馏除水方法 完全避免蒸汽间交叉污染 可隔绝空气提取超干燥和无氧溶剂 可同时接收所有溶剂 顶部空出通风位置 可集成手套箱 带可移动支架及阻燃柜 标准 5 加仑溶剂储存罐采用惯用的防泄漏螺 旋盖子和 Swagelok 快速拆卸阀，便于操作和溶剂续装。系统通过一个可伸缩夹子接地，防止静电危害，保证安全操作环境。系统纯化柱处理容量为 800L，柱子可以再生或者更换。可选择台式、可移动式和固定式几种型号。http://www.zhonghuida.com/imageRepository/67eb511e-fa32-476d-aea6-601ddeaa72e9.gif 在低氮压力下，溶剂从储液罐中被迫进入分别装有活性铝（activated alumina）及铜（Copper）的纯化圆管进行除氧脱水，并通过过滤器除去微小颗粒。处理后的溶剂会排到已抽真空并被氮洗涤过的玻璃器皿中。 每种溶剂包含两条纯化圆管，不锈钢，经压力测试，可净化800升溶剂（再生程序需要之前）。技术参数材料框架材料：铝 处理方法：阳极化抛光 管件材料：304 不锈钢接头和阀门：Swagelok 不锈钢泄漏率氦质谱仪法未检测到有泄漏分配器不锈钢 24/40-14/20-29/24-Luer Lock 针型阀通风可选排风管气体参数内部气体压力：5 PSI 惰性气体：N2 – Ar 气体连接：只需一个气体供应点，可同时分配给不同溶剂纯化柱参数纯化柱材料：依溶剂不同而不同微粒过滤：纯化柱配备 7micron 不锈钢微粒过滤器净化能力：吸水能力为 5%重量含量 最终水氧含量水平：低PPM 级可净化溶剂芳香和脂肪族碳氢化合物：戊烷，己烷，环己烷，正庚烷，甲苯，苯 醚类：乙醚，四氢呋喃，二甲醚 含氯溶剂：二氯甲烷，氯仿，氯苯 胺类溶剂：三乙胺，吡啶，二异丙基乙基胺 醇：甲醇，乙醇其他通用溶剂：乙腈，DMF，DMSO，丙酮 其他定制溶剂阀门导向阀门：每种溶剂皆有 五通阀门以控制溶剂、气体和真空 安全阀门：歧管在外露铝质框架内，包含真空显示表，调节器及安全阀，避免玻璃器皿过分受压计量阀门：利用 计量阀门来控制输出流量 对比内容 传统蒸馏新型溶剂纯化系统纯化结果（正己烷中的水）20PPM1PPm使用安全性需要加热沸腾，有危险无须加热，密闭安全使用便利性较复杂简便，易掌握纯化所需时间几小时几分钟综合使用成本较高较低

  • 深入解析蛋白质纯化系统的原理与应用

    [font=宋体]蛋白质纯化系统是一种用于从混合物中纯化目标蛋白的设备和方法。它结合了多种技术和步骤，可以有效地分离和纯化蛋白质，提供高纯度和高活性的目标蛋白。蛋白质纯化系统是实现蛋白质纯化的关键装置，它结合了各种分离、富集和纯化方法，帮助科研工作者实现蛋白质的高纯度提取。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]蛋白质纯化系统的基本原理[/b][/font][font=宋体]蛋白质纯化系统主要依据蛋白质的特性利用不同的物理化学方法进行分离和纯化。下面将介绍几种常见的蛋白质纯化系统的基本原理。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac][b]亲和层析[/b][/url][/font][/font][font=宋体]亲和层析是一种基于蛋白质的特异性与配体的亲和性相互作用来实现分离和纯化的方法。在亲和层析过程中，蛋白质溶液通过填充有配体的柱子，与配体结合形成复合物，而非特异性结合的其他组分被洗脱。最后，通过改变条件来破坏蛋白质与配体的结合，从而使得目标蛋白质得以纯化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②凝胶过滤层析[/font][font=宋体]凝胶过滤层析是一种基于蛋白质大小差异来进行分离的方法。在凝胶过滤层析中，待纯化的蛋白质溶液通过一系列的凝胶层析柱，大分子的蛋白质不能进入凝胶颗粒的内部，而小分子的蛋白质则可以进入凝胶颗粒内部。通过调整凝胶的孔径，可以实现对目标蛋白质的选择性分离和纯化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-iec][b]离子交换层析[/b][/url][/font][/font][font=宋体][font=宋体]离子交换层析是一种基于蛋白质与固定在柱子上的离子交换基的电荷相互作用来实现分离和纯化的方法。在离子交换层析中，蛋白质溶液通过带有离子交换基的柱子，与柱子上的离子交换基之间发生相互作用。通过改变溶液的离子浓度和[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值，可以实现对蛋白质的选择性吸附和洗脱。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④逆流层析[/font][font=宋体]逆流层析是一种基于分子质量和电荷差异来实现蛋白质分离和纯化的方法。在逆流层析中，蛋白质溶液通过填充有逆流层析介质的柱子，溶液在反向流动的情况下通过层析柱。由于不同蛋白质之间的分子质量和电荷差异，它们在逆流层析介质中的移动速度不同，从而实现对蛋白质的分离和纯化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]蛋白质纯化系统的应用[/b][/font][font=宋体]蛋白质纯化系统在生物医药领域有着广泛的应用，下面将介绍几个常见的应用场景。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①药物研发[/font][font=宋体]蛋白质纯化系统在药物研发中起到了非常重要的作用。通过蛋白质纯化系统，科研人员可以从复杂的生物样品中高效纯化出目标蛋白质，为药物研发提供了可靠的原料和工具。蛋白质纯化系统不仅可以提高药物研发的效率，还可以确保药物的纯度和质量，从而提高药物的疗效和安全性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②生物学研究[/font][font=宋体]在生物学研究中，蛋白质纯化系统被广泛应用于蛋白质相互作用研究、蛋白质结构解析和功能分析等方面。通过蛋白质纯化系统，科研人员可以从不同的细胞和组织中提取目标蛋白质，进一步研究它们之间的相互关系和作用机制。蛋白质纯化系统还可以用于蛋白质结构解析，帮助科学家揭示蛋白质的三维结构以及其功能。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③临床诊断[/font][font=宋体]蛋白质纯化系统在临床诊断中也起到了重要的作用。通过蛋白质纯化系统，医生可以从患者的生物样本中纯化出特定的蛋白质标志物，用于疾病早期诊断、病情监测和治疗评估等方面。蛋白质纯化系统在临床诊断中的应用可以帮助医生及早发现疾病，提高诊断的准确性和效率。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]蛋白质纯化系统是实现蛋白质纯化的重要装置，它结合了多种分离、富集和纯化方法，帮助科研人员高效地提取目标蛋白质。蛋白质纯化系统的应用广泛，不仅在药物研发、生物学研究和临床诊断等领域发挥重要作用，还为科学家揭开蛋白质的结构和功能提供了有力的支持。通过不断的技术创新和优化，蛋白质纯化系统将更好地满足科研和临床的需求，推动生物医药领域的发展。[/font][font=Calibri] [/font]

  • AKTA蛋白纯化系统操作

    AKTA蛋白纯化系统是当前重组蛋白表达与纯化服务中经常用到的一组设备，自动化程度很高。AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍AKTA蛋白纯化系统的一般操作。

  • GMP | 20个常见的纯化水设备系统GMP验证问题

    新版GMP认证出台后，许多制药企业在纯化水设备系统的GMP认证会遇到一些问题，以下是整理收集的20个常见的制药纯化水设备系统GMP认证问题。1.纯化水设备没有安装PID图；2.纯水设备没有贴取样点编号；3.纯化水系统中需要加上用水点编号；纯化水储罐上面管道无流向标识；4.纯化水理化检测记录中：不挥发物检测称重无原始打印记录；电导率的检测应加入单位；其整张记录太粗，可操作性不强；5.纯化水系统从EDI出来就是纯化水，但现场的管路及阀门、送水泵、压力表都没安照纯化水的标准做，存在污染风险；6.纯化水系统验证时没有验证自动电磁阀的动作是否准确无误；7.安装纯化水在线电导率监测时没有图纸；8.纯化水无管理设计图，管路非卫生连接，无日常监控，管路设计不利于取样；9.纯化水灌及焊接不符合要求，应该采用一面焊两面的成型工艺，并提供纯化水管道的内窥镜照片；10.纯化水设备系统无取样记录；纯化水回水处应安装流量计；11.纯化水系统需要对总送、总回、储罐、最远用水点进行每周全检，其余用水点每月全检；12.纯化水系统的验证，对纯化水设备系统的IQ\OQ\PQ等性能进行验证；13.纯化水的设计、安装、臭氧消毒依据、焊接、验证确认等部分不符合要求；14.纯化水设备的图纸与实际设计不相符，各控制阀应在图纸上注明；15.管道、储水罐、电焊问题；16.储备出水口，回水口应有温度计，以便对其温度变化进行控制，应有流量监控计；17.纯化水管道接口连接方式应该采用卫生级卡箍连接方式，并且杜绝使用丝牙连接方式；18.纯化水区段管线为应采用自动焊接工艺以及专业的切管工具；19.循环管线安装没有坡度，未设计最低点为排放点；20.纯化水系统管道存在死角，容易滋生微生物及细菌。

  • 【资料】优化反相HPLC纯化样品的回收率

    [img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=71345]优化反相HPLC纯化样品的回收率[/url]优化反相HPLC纯化样品的回收率在新药开发领域，研究人员面对成百上千的化合成化合物的纯化问题。本文着重讨论了如何在保持理想的纯度及回收率的情况下，快速进行HPLC纯化。并应用吉尔森分析/制备兼容HPLC系统达到样品的快速分离纯化

  • 温度对制药纯化水设备系统微生物控制的影响

    制药纯化水系统通常应用连续的方法控制微生物，并进行周期性消毒。以热系统、冷系统以及常温系统讲述制药纯化水设备系统在不同温度时对连续微生物控制的影响。1.“热”系统防止细菌生长的最有效和最可靠的方法是在高于细菌易存活的温度下操作。如果制药纯化水设备分配系统维持在热状态下，常规的消毒可以取消。有很多的历史数据表明系统在80℃的温度下操作，能防止微生物的生长。目前很多企业在70℃的温度下验证水系统。在较低的温度下操作的优点包括节约能源、对人体伤害风险低、减少红锈的生成。系统在这个范围内的较高温度下操作在微生物污染方面具有更高的安全性。但在80℃以下的有效性必须在实例的基础上用检测数据来证明，需要注意的是，这个温度范围不会去除内毒素。2.“冷”系统通常情况下，“冷”系统是在4～l0℃(我国药典附录中提及的是低于4℃)的温度下操作。在15℃ 以下，微生物的生长率明显降低，因此与常温系统相比，冷系统的消毒频率可能要降低。特定温度下的有效性与否，在任何特殊系统中相关的消毒频率必须在实例的基础上通过统计分析来确定。虽然“冷”系统被证明是有效的，但是其需要能耗及与其相关的成本很高。3.“常温”系统任何制药用水系统的循环温度都是通过需要达到的微生物标准或需要达到的使用温度来确定的。在行业中，“常温”的纯化水设备系统通常使用臭氧或热消毒，与“热”或“冷”系统相比，通常需要较低的生命周期成本，并且还减少了能量消耗。然而，在没有提高系统消毒水平的情况下，在储罐和分配循环中缺少温度控制会导致系统内生物膜的形成，偶尔或不可预测地产生微生物不符合规定的水，以及导致不在计划内的水系统停机。

  • 亲和层析纯化蛋白原理、步骤及优缺点

    [font=宋体][font=宋体]亲和层析是应用生物高分子与配基可逆结合的原理，将配基通过共价键牢固结合于载体上而制得的层析系统。这种可逆结合的作用主要是靠生物高分子对它的配基的空间结构的识别。常用的生物亲和关系有酶[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]底物、底物类似物、抑制剂、激活剂、辅因子，抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原，激素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]受体蛋白、载体蛋白，外源凝集素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]多糖、糖蛋白、细胞表面受体，核酸[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]互补核苷酸序列、组蛋白、核酸结合蛋白等，具有高效、简单、快速的优点，是当前最为理想的分离纯化蛋白的方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]亲和层析纯化步骤：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、捕获阶段[/font][/font][font=宋体]在样品捕获阶段，通过将速度和容量进行优化组合，使样品中的目标产物被有效的分离、浓缩和稳定化处理。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]捕获阶段一般选择亲和层析，离子交换层析或者疏水层析，通过吸附作用使样品和杂质实现分离。如果样品带有标签，第一步可以选择标签蛋白亲和层析；如果样品不带有标签，可以考虑使用离子交换[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]疏水层析。由于捕获阶段一般样品量较大，杂质较多，所以捕获阶段分辨率不是特别主要考虑的因素，可以主要考虑增加上样量和速度。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、中度纯化阶段[/font][/font][font=宋体]在中度纯化阶段，应将注意力集中于将目标样品和大多数大体积的杂质分开。在中度纯化阶段，速度不是最重要的因素，因为经过捕获阶段样品体积会缩减。中度纯化阶段一般建议使用离子交换层析或者疏水层析进一步提高样品的纯度。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、精细纯化阶段[/font][/font][font=宋体]在精细纯化阶段，关注的重点就是如何达到高分辨率，从而完成最终的纯化。在此前的步骤中已经去除了大部分的污染物和杂质。如果需要达到较高的分辨率，可能会在此步骤造成一些回收率的损失。精细纯化阶段一般建议使用高分辨率的分子筛或者高分辨率的离子交换层析柱。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]亲和层析纯化优缺点：[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]亲和层析法是分离蛋白质的一种极为有效的方法，它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来，而且纯度很高。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]是最有效的生物活性物质纯化方法，它对生物分子选择性的吸附和分离，可以取得很高的纯化倍数。此外蛋白在纯化过程中得到浓缩，结合到亲和配基后，性质更加 稳定，其结果提高了活性回收率。此外它可以减少纯化步骤，缩短纯化时间，对不稳定蛋白的纯化十分有利。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]除特异性的吸附外，仍然会因分子的错误认别和分子间非选择性的作用力而吸附一些杂蛋白质，另洗脱过程中的配体不可避免的脱落进入分离体系。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]载体较昂贵，机械强度低，配基制备困难，有的配基本身要经过分离纯化，配基与载体耦联条件激烈等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以参看义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac][b]亲和层析纯化蛋白[/b][/url]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac[/font][/font]

  • 【原创大赛】利用硅胶膜法提取纯化质粒DNA

    【原创大赛】利用硅胶膜法提取纯化质粒DNA

    利用硅胶膜法提取纯化质粒DNA摘要：系统的阐述了质粒核酸提取过程中针对裂解和核酸纯化两大关键步骤的研究，重点介绍了利用硅胶膜法提取纯化核酸，以及在实验过程中的一些经验。关键词：硅胶膜法；纯化；质粒DNA一、前言随着分子生物学技术的发展，核酸的分子生物学技术成为了药物研发、遗传病和感染性疾病的诊断、基因研究及物种鉴定等的常用研究手段之一。然而，核酸提取质量是进行下游一系列研究的关键，因此提取的方法会直接影响后续实验。细菌质粒是一类双链闭合环状的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份。质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子，重要的条件是可获得大量纯化的质粒DNA分子。硅胶膜法是一种应用最为广泛的提取纯化质粒DNA的方法，因硅基质材料可特异吸附核酸DNA，使用方便、快捷，不需要使用有毒溶剂如酚、氯仿等，使得提取质粒核酸像过滤一样简单。二、实验部分2.1 原理硅基质材料吸附核酸的原理主要利用DNA在高盐低pH值环境下与硅基质材料相结合，在低盐高pH值环境下与硅基质材料脱离的特征。其机理是带负电荷的DNA和带正电的二氧化硅粒子之间有很强的亲和力。在高浓度盐离子的作用下，盐离子打破水中的氢和二氧化硅上带负电荷的氧离子间的氢键，DNA与硅基质紧密结合，洗涤除去其他杂质；再用低离子强度的TE缓冲液或蒸馏水洗脱结合的DNA分子，机理是当盐被清除后，再水化的硅基质破坏了基质和DNA之间的吸引力，因而DNA从硅基质上被洗脱下来。2.2 主要试剂溶液Ⅰ:50mM葡萄糖，25mM Tris-HCl(pH 8.0)，10mM EDTA(pH 8.0）。溶液Ⅱ：0.2NNaOH，1% SDS。溶液Ⅲ：醋酸钾（KAc）缓冲液，pH 4.8。漂洗液：60mM 乙酸钾、10mM Tris-HCl (pH 7.5) 、60% 乙醇TE：10mMTris-HCl(pH 8.0)，1mM EDTA(pH 8.0)。2.3 主要步骤该步骤采用CommaPrePTM的质粒小提纯化柱。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171513_556042_3310_3.jpgCommaPrep™核酸小提柱可用在核酸提取过程中过柱结合、洗涤、洗脱步骤中http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171516_556043_3310_3.jpg1. 取1.5ml过夜培养的菌液，加入离心管中，使用常规台式离心机，12,000 rpm 离心1 min， 尽量吸除上清。 （注意：应根据所培养菌体的浓度与质粒的拷贝数，确定收集的菌液量。菌量过大可能导致溶菌不充分，纯化时会影响质粒纯度菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。2. 将细菌沉淀重悬于100uL溶液Ⅰ中，移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀，使菌体分 散混匀。 (注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。并且溶液Ⅰ中 要加入适量的RNA酶）3. 向离心管中加入200uL溶液Ⅱ，温和地上下翻转数次，并将离心管放置于冰上2-3min，使细胞膜裂解。（注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮，如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。）4. 加入150uL溶液Ⅲ，立即将管温和颠倒数次混匀，见白色絮状沉淀。12000rpm， 离心2分钟。 (注意：加入溶液Ⅲ后，要立即将管温和颠倒，避免产生局部沉淀。如果上清液中存在沉淀，可再一次离心。溶液Ⅲ为中和溶液，此时质粒DNA复性，染色体和蛋白质不可逆变性，形成不可溶复合物。）5. 吸取上清至吸附柱（内管）中（吸附柱在离心管中），尽量不要吸出沉淀，12000rpm，离心30秒。弃去废液，将吸附柱重新放入一个新的离心管中。6. 加入750uL的漂洗液（漂洗液要在实验前加入无水乙醇）12000rpm离心，1min。取出 DNA结合柱，弃废液，重新插入DNA结合柱到离心管中。7. 用500uL漂洗液重复冲洗过程。12000rpm离心，1min。（注意：重复一次可以增加质粒的回收效率。）8. 转移DNA结合柱到1个新的1.5mL离心管中，加入60uL的无核酸酶的水到DNA结合柱中，洗脱质粒DNA，室温条件下，12000rpm离心，1min。 （注意：不要转入DNA结合柱中的漂洗液，如果混有，就需要12000rpm离心，1min。洗脱缓冲液体积不少于50uL，体积小会影响回收效率。 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大的影响，若用水洗脱应保证pH值在7.0-8.5范围内， pH小于7会降低洗脱效率。如果长期保存DNA，洗脱液建议使用TE。）9. 加入100uL的无核酸酶水到结合柱中，洗脱质粒DNA，离心12000rpm，1min。（注意：重复一次，增加洗脱效率。）10.洗脱DNA后，从1.5mL离心管中取出DNA结合柱并废弃。11.取2uLDNA进行电泳，检测DNA质量。12.将纯化的DNA溶液于-20℃中。三、实验结果图为质粒DNA（10kb）的凝胶电泳图，说明提取效果较好。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171525_556044_3310_3.jpg

  • 蛋白纯化的目的、原理及蛋白纯化的4种方法详解

    [font=宋体]蛋白质是包括人类在内的各种生物有机体的重要组成成分，是生命的物质基础之一。生物体的生长、发育、遗传和繁殖等一切生命活动都离不开蛋白质。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]随着分子生物学、结构生物学、基因组学等研究的不断深入，人们意识到仅仅依靠基因组的序列分析来试图阐明生命活动的现象和本质是远远不够的。只有从蛋白质组学的角度对所有蛋白质的总和进行研究，才能更科学地掌握生命现象和活动规律，更完善地揭示生命的本质。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]由此许多学者将生命科学领域的研究焦点从基因转向蛋白质，使蛋白质成为揭示生命活动现象和分子生物学机理的重要研究对象。研究蛋白质首要的步骤是将目的蛋白从复杂的大分子混合物中分离纯化出来，得到高纯度具有生物学活性的目的物。因此，高效的纯化技术和手段是蛋白质研究的重要基础和关键之一。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]蛋白纯化的目的[/font] [/font][/b][font=宋体][font=宋体]蛋白纯化的目的是将目标蛋白质从细胞裂解液的全部组分中分离出来，同时仍保留蛋白的生物学活性及化学完整性。蛋白质的分离和提纯工作是一项艰巨而繁重的任务，需根据蛋白的特性选择合适的纯化方法来提高获得的蛋白制品的纯度。[/font] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]蛋白纯化的原理[/font] [/font][/b][font=宋体][font=宋体]不同蛋白质的氨基酸序列及空间结构不同，导致其在物理、化学、生物学等性质上存在差异，利用待分离蛋白质与其它蛋白质性质上的差异，即可以设计出一套合理的蛋白纯化方案。蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段两个阶段。粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如[/font] [font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]等分开，常用的方法为硫酸铵沉淀法。精细纯化阶段的目的是把目的蛋白与其他大小及理化性质接近的蛋白区分开来，[/font][/font][b][font=宋体][font=宋体]常用的方法有：凝胶过滤层析、离子交换层析、疏水层析、亲和层析等。[/font] [/font][/b][font=宋体] [/font][b][font=宋体]①[/font][font=宋体]凝胶过滤层析[/font][/b][font=宋体]凝胶过滤层析（又叫做分子筛）是根据样品的分子大小对样品进行分离的一种简单温和的层析技术。凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析，是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。不同于离子交换层析和亲和层析，凝胶过滤的层析样品不与层析柱料结合，因此，缓冲液成分不直接影响分辨率。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]原理：层析柱中的填料是球状颗粒的惰性的多孔网状结构的柱料，多是交联的聚糖[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如葡聚糖或琼脂糖[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]类物质。在加入样品之后，样品中的小分子物质能进入球状填料内部，在柱子中停留时间较长；而大分子物质不能进入球状填料内部，停留时间较短。所以当样品经过凝胶过滤层析柱分离后，样品中的不同分子大小的物质就可以被分离开了。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]特点：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]根据分子大小和形状进行分离[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]是一种非吸附的分离方式[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缓冲液成分不直接影响分辨率，只需要一种缓冲液[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]操作便捷[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]②[/font][font=宋体]离子交换层析[/font][/b][font=宋体]离子交换层析是目前蛋白质分离纯化中应用最广泛的方法之一。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]原理：不同蛋白等电点差异，分子大小差异，在同一个流动相中电荷密度分布不同，电荷量不等，与具有相反电荷的离子交换介质结合强度不同，在流动相洗脱时保留时间不同，从而得以分离。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]特点：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]根据分子大小和等电点差异进行分离[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]灵敏度高，重复性，选择性好，分析速度快[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]③[/font][font=宋体]疏水层析[/font][/b][font=宋体]原理：疏水层析是依据蛋白质疏水性差异分离的。即根据蛋白质和疏水介质表面的疏水基团的可逆相互作用进行分离。蛋白的疏水性在高离子强度下被增强，因此在高离子强度环境中结合，通常采用降低离子强度的方式进行洗脱。独特的吸附分离模式使得疏水层析成为硫酸铵盐析后或离子交换高盐洗脱后理想的纯化方式。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]特点：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]采用了盐的水溶液作为流动相，色谱条件温和，生物大分子的活性回收率很高。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白质在[/font][font=Calibri]HIC[/font][font=宋体]操作过程中是高盐上样，低盐洗脱（高盐浓度的样品不必作处理就可直接上样）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在一次色谱中可同时实现出去盐酸胍、蛋白质复性和分离三个目的。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]温度升高，蛋白质天然折叠伸展，暴露出更多内部疏水集团，使蛋白质的[/font][font=Calibri]HIC[/font][font=宋体]保留发生变化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]色谱填料稳定性好，盐水体系作流动相无环境污染。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]④[/font][font=宋体]亲和层析[/font][/b][font=宋体][font=宋体]原理：[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac][b]亲和层析[/b][/url]是应用生物高分子与配基可逆结合的原理，将配基通过共价键牢固结合于载体上而制得的层析系统。这种可逆结合的作用主要是靠生物高分子对它的配基的空间结构的识别。常用的生物亲和关系有酶[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]底物、底物类似物、抑制剂、激活剂、辅因子，抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原，激素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]受体蛋白、载体蛋白，外源凝集素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]多糖、糖蛋白、细胞表面受体，核酸[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]互补核苷酸序列、组蛋白、核酸结合蛋白等，具有高效、简单、快速的优点，是当前最为理想的分离纯化蛋白的方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以参看蛋白纯化技术[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]方法：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-techniques[/font][/font][font=Calibri] [/font]

  • 现在市场上的酸纯度堪忧！有了解酸纯化系统的朋友吗？

    本人主要测痕量元素，用了几种硝酸后发现，国药的硝酸铅含量很低，能满足日常使用。但是铬含量依然不够理想（7ml消化定容到25ml后接近5个ppb,），但已属国产酸中最好的（个人认为），后来买了默克优级纯硝酸，发现铬的本底极低，甚至可以忽略不计，但价格有点贵。不适合大批量检验。 下面切入正题，我们单位正在报明年的设备采购计划，所以我想买一台酸纯化系统，但是对品牌，不太了解，而且对其实际使用效果尚存疑惑，是否真的能将一些元素含量降低到零点零几个ppb，若真有那种效果，就很物有所值了。 请使用过、或略有了解的朋友不吝赐教啊，说说品牌和实际效果，只说一句半句的也行，确实很需要“酸纯化”相关的信息！

  • 【分享】水质纯化方法简介

    【分享】水质纯化方法简介

    离子交换法 　　 离子交换法是以圆球形树脂(离子交换树脂)过滤原水，水中的离子会与固定在树脂上的离子交换。常见的两种离子交换方法分别是硬水软化和去离子法。硬水软化主要是用在反渗透(RO)处理之前，先将水质硬度降低的一种前处理程序。软化机里面的球状树脂，以两个钠离子交换一个钙离子或镁离子的方式来软化水质。　　离子交换树脂利用氢离子交换阳离子，而以氢氧根离子交换阴离子；以包含磺酸根的苯乙烯和二乙烯苯制成的阳离子交换树脂会以氢离子交换碰到的各种阳离子(例如Na+、Ca2+、Al3+)。同样的，以包含季铵盐的苯乙烯制成的阴离子交换树脂会以氢氧根离子交换碰到的各种阴离子(如Cl-)。从阳离子交换树脂释出的氢离子与从阴离子交换树脂释出的氢氧根离子相结合后生成纯水。　　阴阳离子交换树脂可被分别包装在不同的离子交换床中，分成所谓的阴离子交换床和阳离子交换床。也可以将阳离子交换树脂与阴离子交换树脂混在一起，置于同一个离子交换床中。不论是那一种形式，当树脂与水中带电荷的杂质交换完树脂上的氢离子及(或)氢氧根离子，就必须进行“再生”。再生的程序恰与纯化的程序相反，利用氢离子及氢氧根离子进行再生，交换附着在离子交换树脂上的杂质。　　若将离子交换法与其他纯化水质方法(例如反渗透法、过滤法和活性碳吸附法)组合应用时，则离子交换法在整个纯化系统中，将扮演非常重要的一个部分。离子交换法能有效的去除离子，却无法有效的去除大部分的有机物或微生物。而微生物可附着在树脂上，并以树脂作为培养基，使得微生物可快速生长并产生热源。因此，需配合其他的纯化方法设计使用。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/03/200803211113_82042_1691940_3.jpg[/img]活性碳吸附法 　　 有机物可能是阳离子、阴离子或非离子性的物质，离子交换树脂可去除原水中一些可溶性的有机酸和有机碱(阴离子和阳离子)，但有些非离子性的有机物却会被树脂包覆，这过程称为树脂的“污染阻塞”现象，不但会减少树脂的寿命，而且降低其交换能力。为保护离子交换树脂，可将活性碳过滤器安装在离子交换树脂之前，以去除非离子性的有机物。　　活性碳的吸附过程是利用活性碳过滤器的孔隙大小及有机物通过孔隙时的渗透率来达到的。吸附率和有机物的分子量及其分子大小有关，某些颗粒状的活性碳较能有效的去除氯胺。活性碳也能去除水中的自由氯，以保护纯水系统内其他对氧化剂敏感的纯化单元。　　活性碳通常与其他的处理方法组合应用。在设计纯水系统时，活性碳与其他相关纯化单位的相关配置，是一项极为重要的项目。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/03/200803211114_82043_1691940_3.jpg[/img]

  • 【转帖】蛋白质提取与纯化技术

    [size=3]选择材料及预处理 　　以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于来同区域而达到分离目的，如电泳，超速离心，超滤等。在所有这些方法的应用中必须注意保存生物大分子的完整性，防止酸、硷、高温，剧烈机械作用而导致所提物质生物活性的丧失。蛋白质的制备一般分为以下四个阶段：选择材料和预处理，细胞的破碎及细胞器的分离，提取和纯化，浓细、干燥和保存。 　　微生物、植物和动物都可做为制备蛋白质的原材料，所选用的材料主要依据实验目的来确定。对于微生物，应注意它的生长期，在微生物的对数生长期，酶和核酸的含量较高，可以获得高产量，以微生物为材料时有两种情况：（1）得用微生物菌体分泌到培养基中的代谢产物和胞外酶等；（2）利用菌体含有的生化物质，如蛋白质、核酸和胞内酶等。植物材料必须经过去壳，脱脂并注意植物品种和生长发育状况不同，其中所含生物大分子的量变化很大，另外与季节性关系密切。对动物组织，必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料，先进行绞碎、脱脂等处理。另外，对预处理好的材料，若不立即进行实验，应冷冻保存，对于易分解的生物大分子应选用新鲜材料制备。 蛋白质的分离纯化 一，蛋白质（包括酶）的提取 　　大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中，因些，可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。 （一）水溶液提取法 　　稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂，通常用量是原材料体积的1-5倍，提取时需要均匀的搅拌，以利于蛋白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。一方面，多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大，因此，温度高利于溶解，缩短提取时间。但另一方面，温度升高会使蛋白质变性失活，因此，基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温（5度以下）操作。为了避免蛋白质提以过程中的降解，可加入蛋白水解酶抑制剂（如二异丙基氟磷酸，碘乙酸等）。下面着重讨论提取液的pH值和盐浓度的选择。[/size]

  • 【求助】蛋白质纯化系统的品牌型号和选购要点？

    各位老师，我们单位想要购买一套蛋白质纯化系统，用于分离、纯化一个以肽类为主的动物组织样品，类似于GE公司的AKTAprime或AKTApurifier 10/100什么的。在这里想请教大家：1.用于蛋白质、肽类分离纯化的仪器，除了GE，还有些什么品牌是比较好的？具体的规格型号是什么？各品牌型号在应用和性能方面有些什么区别？（实验室到中试规模）2.考虑到我们的短期要求并不高，而GE和国产的产品价格相差近10倍，是否可以先买个国产的仪器代替并练练手（毕竟像GE这种产品太贵了）？如果用国产的，有哪些品牌和厂家比较可靠？如果只能自己组装，该怎么选材？要注意些什么？（我几乎没找到有国产成套的）3.购买的时候有哪些仪器参数和选型要点是需要注意的？4.如果是在HPLC上面分析肽类成分，有些什么具体品牌型号的柱子可以推荐一下吗？以前几乎没学过生物方面的东西，问题比较多，也比较外行，请大家海涵，不吝赐教！非常感谢大家！[em0815]

  • waters 3767纯化系统 自动清洗问题

    waters 3767纯化系统 自动清洗问题

    有没有人留意过waters 2767/3767系列 纯化系统的自动清洗问题，这个系列的进样针是套管针，正常不应该是针内通过T7管路清洗，针外壁通过T8管路清洗吗？现在发现在灌注进样系统时，没有液体从T6流到T8，T7是有液体流出的，这样就导致针外壁没有洗针液清洗。尝试过调换wash path valve和wash select valve，还是同样的问题，T1/T2切换正常，T7有液体流出，T6没有液体，说明切换阀是正常的。想问问论坛的同行前辈，有没有人遇到这种问题，还是说我对于整个自动清洗管路的理解有误？[img=,690,326]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/07/202207071121586225_8237_5600108_3.jpg!w690x326.jpg[/img]

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