酶联免疫斑点技术(Enzyme Linked Immunospot Assay,ELlSPOT)是细胞免疫学研究中最敏感的检测方法之一,可以在单细做水平对抗体分泌细胞(ASC)及细胞因子(CK)分泌细胞进行检测。由于是单细胞水平检测,ELISPOT 比ELISA和有限稀释法等具有更高的灵敏性。能从20万-30万细胞中检出1个分泌该蛋白的细胞。并且该方法能够对抗原刺激后的活细验进行功能性检测,具有较高的特异性、直观可信度高,并且易操作,已被广泛用于分泌CK细胞检测或ASC测定中,在国内外免疫学界获得了广泛的应用。AID EliSpot Reader Classic酶联免疫斑点分析仪 德国艾迪(AID)是全球领先的专业研发并生产酶联斑点分析仪的厂商,最早在全球上市酶联斑点分析仪,自AID EliSpot Reader上市以来,已经有超过1500多家实验室正在使用AID的EliSpot Reader- 酶联免疫斑点分析仪。 AID EliSpot Reader硬件和软件完全符合欧盟CE 认证,FDA 21CFR part11规范、GMP/GLP标准。 AID EliSpot Reader Classic 主要配置:&bull 德国制造高分辨率科研级别相机,彩色CCD芯片,清晰捕捉微小斑点 &bull QuadPack高精度电动载物台:全自动控制,精确位移,各孔自动居中&bull LED环形无影照明光源:照射均匀,可清晰分辨因孔侧壁反光造成的幻影现象,准确识别孔底边缘&bull 专业水准的电动光学镜头:镜头自动聚焦,自动曝光调节,保证清晰捕捉微小斑点&bull 独立高配置计算机系统:与分析仪独立,有效减少故障率,预装正版Win7及Office软件等&bull ELISPOT软件:全自动读板,自动计数分析;同步完成斑点图像扫描、斑点计数与结果分析; AID EliSpot Reader 软件功能: 斑点图像采集与计数:全自动读板,自动采集各孔图像;自动计算斑点数量和斑点相关信息如大小、面积、光密度等。内置不同因子参数设置,直接调用;CountAID 功能协助优化读数参数,并具有智能参数记忆功能。 结果分析:直接判断阴阳性检测结果;诊断模块AIDiagnostic,适用于临床诊断用ELISPOT实验的结果判读,单独输出每例病人斑点图像和结果报告;统计分析各孔斑点分布、对比免疫反应强弱、细胞因子分泌量化比较等。 数据输出与质控:可输出单孔图像、任意孔及整板图像;多种保存格式,Excel, Txt, PPT等;输出数据可自定义包含斑点数,SFU,光密度强度, Activities,斑点分布图表等;包含质控模块,操作历史自动记录,符合GLP规范。 Applications - 酶标ELISPOT应用文献 :Science 1998, 279: Quantitation of HIV-1–Specific Cytotoxic T Lymphocytes and Plasma Load of Viral RNA.Graham S.Ogg, Xia Jin,et al.Science 1998, 281: Identification of LFA-1 as a candidate autoantigen in treatment-resistant Lyme-Arthritis. Gross DM, et al.Nature 2005,433,887-892.Toll-like receptor 3 promotes crosspriming to virus-infected cells. Oliver Schulz1*,et al.Lancet 2005, 366: 1443-1451. Effect of BCG vaccination on risk of Mycobacterium tuberculosis infection in children with householdtuberculosis contact: a prospective community-based study. Ahmet Soysal,et al.Lancet 2003 Apr 5 361(9364):1168-73. Comparison of T-cell-based assay with tuberculin skin test for diagnosis of Mycobacterium tuberculosis infection in a school tuberculosis outbreak. Ewer K, et al.Blood 2009,114: 4089-4098. Interleukin-21 restores immunoglobulin production ex vivo in patients with common variable immunodeficiency and selective IgA deficiency. Stephan Borte, et al. AID iSpot Reader荧光酶联免疫斑点分析仪(可见光/荧光双重检测功能的ELISPOT分析仪) AID iSpot Reader 主要配置:&bull 德国制造光学系统高分辨率科研级别相机,彩色CCD芯片,高品质成像,保证微小斑点及斑点晕的识别&bull 专业水准的电动光学镜头:镜头自动对焦,自动曝光调节,保证清晰捕捉微小斑点&bull 荧光照明系统:高能氙灯,激发效率高,波谱范围广250-1000nm,是最适合荧光成像的激发光源&bull 4-8位滤光片轮,全自动切换,至少标配FITC和Cy3荧光滤光片,其他波长可加配 &bull 独立高配计算机系统:与分析仪独立有效减少故障率,配置实时更新&bull ELISPOT软件:全自动读板,自动计数分析;自动叠加不同荧光通道图像,找出共染色斑点(共分泌细胞) AID iSpot Reader 专利的软件功能及技术先进性: 专利的荧光图像Overlay技术保证多色因子共分泌斑点准确识别, 避免酶标双色检测中因不同细胞因子分泌量不均而引起的误判 全自动判读:iSpot对板上每孔的各种颜色荧光斑点分别成像,例如 检测FITC标记的IFN-γ分泌情况和Cy3标记的IL-2分泌情况,软件再自行将不同荧光图像叠加(Overlay),准确识别共分泌(IFN-γ&IL-2)细胞。整个过程全自动,无需人工干预;性能稳定, 兼容扩展性好:高能激发保证微弱荧光信号检测,窄带滤光片保证特异性信号检测,多色扩展只需加配滤光片;技术先进性:最早在全球上市酶联斑点分析仪,1996年发明《应用Elispot方法检测血液细胞活性》的专利;唯一拥有《以荧光滤光片为基础进行荧光多色ELISPOT的检测系统》的专利PCT/EP2008/009112‐FluoroAID; 学术发表权威性:从荧光款2007年上市到现在,80% 荧光EliSpot应用SCI文献是由 发表的,被公认作荧光检测的最佳选择 ;国际认可度高:与牛津大学Oxford免疫学实验室密切合作开发是其用于结核的酶联斑点(T-Spot)诊断的专用工具;国际艾滋病、疫苗行动组织(IAVI)指定品牌;全球知名Elispot试剂盒开发实验室(如瑞典Mabtech)专用品牌。 Applications - 荧光ELISPOT应用文献 :Nature Medicine. 2013 Oct 19(10):1305-13. Cellular immune correlates of protection against symptomatic pandemic influenza.Saranya Sridhar, &Ajit Lalvani,et al. Infection, 2014 Jan. IGRA-positive patients and interferon-gamma/interleukin-2 signatures: Can the FluoroSpot assay provide further information? P. Bittel, et al.Journal of internal medicine, 2013. Decreased functional T lymphocyte-mediated cytokine response in patients withchemotherapy-induced neutropenia. ?hrmalm L., et al.Methods Mol Biol. 2012 792:77-85. Dual- and triple-color fluorospot. Ahlborg N, Axelsson B.ELISPOT 应用领域(Application):免疫学基础研究:T细胞和B细胞,Th0/Th1/Th2细胞转换分析疫苗研究:ELISPOT是检测和评价疫苗的细胞免疫的有效方法。国际上普遍采用ELISPOT方法监测HIV疫苗研究中的免疫应答反应,在国际艾滋病疫苗行动计划中,采用ELISPOT法对T细胞功能进行评价。药物筛选:化合物和药物免疫学反应的筛选感染性疾病诊断与研究:例如结核病的临床诊断,莱姆病、艾滋病等传染病的研究肿瘤免疫研究:已用于分析和评价在癌症病人中诱导肿瘤特异的T细胞的疫苗试验。治疗前后特异性细胞免疫应答水平的检测,可有效的评估治疗效果,对于治疗和用药提供重要的参考信息。自身免疫病研究:调整机体免疫调节功能,对自身免疫病的治疗揭供更有效的措施过敏研究:参与过敏机制的细胞因子研究,如IL-4 移植免疫研究:移植中排斥反应的预测
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