气相色谱糖分析

离子色谱是液相色谱的一种，但常规中低端主机系统配置的均是等度泵，配合淋洗液发生器可实现复杂样品中阴阳离子的梯度洗脱。但糖和氨基酸类的分析需要用到水、NaOH和NaAc三种不同种类流动相的比例混合梯度，此时，需要用到类似于液相的四元梯度泵系统。对于四元梯度系统来说，保留时间的漂移原因相对比等度系统要多。本文仅介绍在一次寡糖分析时碰到保留时间漂移时的故障排查思路。一次用Thermo的CarboPac PA20做单双糖和寡糖分析实验中碰到保留时间不稳定的现象。通常情况下用PA20做糖分析时，如果洗脱程序是低浓度NaOH（小于100mM）等度洗脱，还需要在洗脱程序后面加5-10min的清洗程序（一般用200mM的NaOH溶液），然后再恢复到初始洗脱浓度平衡，否则，系统中残留的由样品或流动相引入的CO2会影响待测糖的保留时间。本次实验由于需要做寡糖，在流动相中加入了洗脱能力更强的NaAc溶液，足以消除CO2对保留时间的影响，但在系统充分平衡后仍存在如图1所示的漂移现象，难道哪里出问题啦？http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016092822311007_01_1766730_3.png图1，保留时间漂移谱图首先检查氮气减压阀，看压力指数是否在正常范围内。在此次分析用到的三种不同的流动相中，由于NaOH溶液是强碱性溶液，在空气中放置时容易吸收空气中的CO2，使洗脱效果发生变化。为防止NaOH受空气中CO2的干扰，常常需要在盛NaOH溶液的流动相瓶口加氮气保护（如图2，瓶口蓝色管路为氮气管线），氮气减压阀一般调到3-6psi为宜，当压力过大时会影响泵的正常工作，从而导致保留时间漂移。但检查减压阀，压力指数正常啊。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016092822325302_01_1766730_3.png图2、加氮气保护的流动相瓶接下来怀疑是流动相没有混匀或流动相配制原因，重新用新的50%NaOH溶液和NaAc配制并充分混匀后仍有漂移。既然不是氮气和流动相的原因，会不会是比例阀出了故障呢？于是手动配了份NaOH和NaAc混合溶液，走100%的A通道，重复进了几针标准品，重复性竟然很好，见图3.基本可以断定是比例阀出了问题，于是打了400报修电话，维修工程师第二天就上门了，工程师换好比例阀以后，配制了新的流动相梯度洗脱走出的谱图见图4，终于恢复了良好重现性，心情大好，接着实验，顺便赞一下赛默飞的售后响应速度哈。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609282234_612516_1766730_3.png图3、100%A通道谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609282234_612517_1766730_3.png图4、新换比例阀之后的谱图

关于JJF1383-2012《便携式血糖分析仪校准规范》可行性的分析 便携式血糖分析仪简称血糖仪，主要用于糖尿病患者对自身血糖值的监测，目前部分医疗机构也将血糖仪用于临床诊断。按照卫生局的要求用于临床诊断的血糖仪需每半年校准一次，但对于血糖仪国家却一直缺少相应的检定规程或校准规范。直到2012年才颁布了《便携式血糖分析仪校准规范》，并于2013年3月开始实施。但该规范的可行性却值得思考。 一、概念问题 血糖仪按检测技术可以分为电化学法和光反射技术两大类，根据《规范》第4项概述所描述内容，我们可以认为该《规范》适用于这两类血糖仪。但概述的最后一句话却存在问题，《规范》将血糖仪定性为：主要用于新鲜毛细血管全血的葡萄糖含量的快速测量，也可用于静脉全血、血清(浆)的葡萄糖含量的快速测量。首先该句话中最明显的错误在于也可用于静脉全血、血清(浆)的葡萄糖含量的快速测量。血糖仪应该是用于测量毛细血管全血的葡萄糖含量的，虽然也可用于测量静脉全血的葡萄糖含量，但会存在着较大误差。因为血糖仪主要用于患者自我监控，采血时采集的是指端的血，属于毛细血管全血。毛细血管全血的血糖值相对于静脉全血的血糖值要偏高10%-20%，为了真实的体现人体的血糖含量生产厂家多会对该数值进行修正。所以血糖仪在测量静脉全血血糖值时会存在较大的误差，必须进行修正才能进行测量。而对血清(浆)的葡萄糖含量的快速测量，应该仅仅是适用于光反射法的血糖仪，而不适用于电化学法的血糖仪，这从血糖仪的原理上看也是显而易见的。 最早的光反射法血糖仪也称为水洗式血糖仪，该种仪器使用时先将血液涂抹在试纸条上，待反应完成后，再将试纸条上的血液清洗干净后进行测量，此时的试纸条多数变色为蓝色。现在这种血糖仪的试纸条上多有一层网膜用于过滤血液的颜色，免去了清洗步骤，使用更加方便。可见这种血糖仪是利用试纸与葡萄糖反应后颜色发生更改变进行测量的，由于要将血液的颜色清除，所以基本不受血液中其他物质的干扰，所以可以用于血清(浆)的葡萄糖含量的测量。而电化学法血糖仪的工作原理是建立在电化学葡萄糖传感器的基础上的，是电化学酶法测定葡萄糖，其反应过程如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307010733_448531_1638093_3.jpg在检测血液时，血液中的葡萄糖在葡萄糖氧化(脱氢)酶的催化下发生反应释放出电子， 改变试纸条电阻值，达到改变检测电路中电流强弱的效果，最终实现对人体血液中葡萄糖含量的检测。血糖仪主要用于人体全血血糖值的测量，全血中包含血浆，红细胞，白细胞，血小板，血浆是水，糖，脂肪，蛋白质，钾盐和钙盐的混合物。由于血糖仪使用时不会对血液进行任何前处理，所以血液中的所有成分均会对试纸条电阻值产生一定的影响。所以血糖仪在设计制造时，一般都是使用全血来绘制仪器的测量曲线的。所以很明显，使用全血绘制出的曲线是不适用于血清(浆)葡萄糖含量的测量的，如果使用会产生极大误差。该情况通过使用GB/T19634-2005《体外诊断检验系统自测用血糖监测系统通用技术条件》所推荐的回收试验法可以轻松验证。 二、测量标准 《规范》第6.2.1条规定需要使用血糖标准物质，但是截至目前由于电化学法血糖仪仅适用于全血血糖值的测量，所以尚无专用于血糖仪的标准物质，而通过查阅《规范》附录C发现，这里所说的血糖标准物质实际上是冻干粉血清标准物质，该标准物质实际是用于校准用于血糖测量的生化分析仪的标准物质，由于是血清标准物质所以不适用于电化学法血糖仪的检测。 三、建议使用的校准方法 在对血糖仪进行校准时，我建议还是应该将仪器部分和试纸部分分开检测，因为根据GB/T19634-2005《体外诊断检验系统自测用血糖监测系统通用技术条件》的要求，我们可以推断试纸还可能存在着15%的批间差，而血糖仪的试纸误差最大仅为20%，如果仅仅整体判定，血糖仪容易受试纸误差的影响而出现误判。这里我仅简单介绍一下血糖仪整体性能的校准。 在校准中我建议还是应该参照GB/T19634-2005《体外诊断检验系统自测用血糖监测系统通用技术条件》规定的方法，使用人体全血，或模式生物(如：兔子、小白鼠等)的全血，采用比对法和回收试验法进行校准。开始校准前采集全血，加入制造厂商建议的抗凝剂(如：肝素锂、肝素钠)，静置12小时，此时该血样的血糖值将下降到2mmol/L附近。此时分别用血糖仪和生化分析仪测量该血样，记录数据。之后向该血样加入葡萄糖溶液，调整血样的血糖值到预期浓度后，再用血糖仪和生化分析仪对血样进行测量。上述步骤重复数次，直到测得值涵盖低值、中值、高值，中值应适当增加测量点。然后将使用血糖仪测量的一组数根据制造商提供的换算公式计算得到的静脉血果与生化分析仪测量的结果进行比较，以生化分析仪测得的结果作为参考值，计算误差。 四、结束语 计量检测应该是一项十分科学、严谨的工作，而我们的校准规范却出现了如此明显的问题不能不让我们深思。只能说在规范的起草过程中，我们的技术人员过于浮躁，缺少了试验的严谨性，如果在起草的过程中多做了几组试验，多征求了几个知名生产

[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/05/201005181838_219314_1640957_3.jpg[/img]上图为流动相为乙腈：水（90：10）的标准空白（乙腈：水=1：1）的谱图，流速为1.5ml/min.RID[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/05/201005181840_219317_1640957_3.jpg[/img]该图是一个浓度为200mg/ml的麦芽糖的谱图，溶剂为乙腈：水（1：1），色谱柱为安捷伦公司的糖柱子（Zorbax Carbohydrate Analysis ,4.6mm ID*150mm,5um)，以前用此柱子测样挺好的，流动相为75：25的乙腈：水，流速为1ml/min,5mg/ml的麦芽糖都能检测出来，峰还挺高，但现在不行了，出的峰如下图所示，请大侠帮我分析分析，谢谢！[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/05/201005181848_219319_1640957_3.jpg[/img]

一、仪器微课堂背景 仪器微课堂由仪器论坛官方（http://bbs.instrument.com.cn/）推出，采用微信群直播的方式来给大家分析仪器及分析检测行业技术或行业知识！此前，线上讲座是仪器论坛主推的栏目之一，主要是邀请业界专家就某一技术领域以图文的形式进行系统讲解，同时回答用户的提问，进行互动交流。2016年，线上讲座与微信直播相结合，推出仪器微课堂！免费哦~二、本期仪器微课堂【仪器微课堂第三期】气相色谱法检测农残中的常见问题及分析方法http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/05/201605301437_595255_2984502_3.jpg1、嘉宾介绍http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/05/201605301438_595256_2984502_3.jpg 张艳丽，鹤壁市农产品质量安全监测检验中心高级农艺师，长期从事农产品检测工作，在省农产品检测技术比武大赛中多次得奖，并于2014年获得河南省五一劳动奖章。仪器论坛IDzyl3367898，气相色谱与农残检测版面版主，参加多届原创大赛，并多次获得年度奖励，2015年获得原创达人，并获得小蜜蜂奖励金。2、分享内容（1）气相色谱检测农残常用条件。包括前处理方法与气相条件。（2）气相色谱检测农残常出现的问题。包括峰重合、基质效应、衬管影响、色谱柱污染等。（3）如何判断样品结果为假阳性？（4）如何分离同分异构体？3、分享形式微信群直播：PPT图片+语音，分享结束后为问题解答时间。4、报名方式转发此主题帖到微信朋友圈，截图发给仪休哥（微信号：wayqsq）。审核成功后，仪休哥拉您进群听课哦~http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/05/201605301439_595257_2984502_3.gif三、往期回顾【仪器微课堂 第1期】气相色谱的维护与保养，参与人数500人【仪器微课堂】第二期：过程分析技术在中药制药品质均一性评价研究与应用，参与人数357人http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/05/201605301448_595259_2984502_3.jpg