标记生物活性物

[font=宋体][font=宋体]义翘神州开发了丰富的生物素标记蛋白产品，拥有[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]定点标记和化学标记两种类型的生物素标记蛋白，覆盖细胞治疗、抗体药、疫苗等热门靶点。产品具有高批间一致性、高活性等优势，适用于[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Biopanning[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR / BLI[/font][font=宋体]等实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Avi-Tag[/font][font=宋体]生物素标记蛋白：[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]重组蛋白融合一个额外的[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸序列，即[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]，通常连接至蛋白的[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]末端。 [/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]肽段被大肠杆菌生物素连接酶[/font][font=Calibri]BirA[/font][font=宋体]所识别，[/font][font=Calibri]BirA[/font][font=宋体]连接酶通过酶促反应将生物素连接到[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]序列内的单个赖氨酸残基。因此，[/font][font=Calibri]Avi[/font][font=宋体]标签蛋白以特定位点的方式进行生物素化，从而实现标记均一。 这使固定在亲和素包被表面的蛋白方向具有一致性，并且由于[/font][font=Calibri]Avi[/font][font=宋体]标签位于蛋白的末端，因此对蛋白活性的影响通常很小，有助于保持生物素化的蛋白与未标记的蛋白保持相同的特性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]生物素与链霉亲和素[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]亲和素（[/font][font=Calibri]SA[/font][font=宋体]）之间的强非共价相互作用，具有高灵敏度和高特异性。义翘神州开发了多种[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]生物素标记的重组蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]产品优势：[/font][font=宋体][font=宋体]? 高生物活性，经[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]BLI[/font][font=宋体]等验证[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 多种属，覆盖细胞治疗、抗体、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体等热门靶点[/font][/font][font=宋体]? 高批间一致性[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]化学标记生物素蛋白：[/font][font=宋体][font=宋体]化学标记法，是将蛋白[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]末端游离胺基及内部的赖氨酸侧链上的胺基与生物素分子结合，通常一个蛋白质分子会被标记上多个生物素分子。化学标记法具有灵敏度高、[/font][font=Calibri]tag free[/font][font=宋体]等特点，是常用的生物学方法之一。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]产品优势：[/font][font=宋体]? 高信号强度，每个蛋白分子通常平均含有多个生物素，有助于对其检测。[/font][font=宋体]? 标记方法简单，检测灵敏度高。[/font][font=宋体][font=宋体]? 高生物活性，[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR[/font][font=宋体]等验证，批间一致性高[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]生物素标记蛋白应用：[/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、用于生物素标记的三种天然产物分子探针的设计与合成研究[/font][/font][font=宋体]从中药中提取分离得到的天然产物具有结构多样、药理作用广泛的特点，常被用来作为先导化合物开发新药，因此需要对其具体作用机制进行研究。天然产物药理作用广泛对应着多靶点的特性，但其靶标蛋白的难以确定也阻碍了人们对其的进一步研究与开发。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]基于亲和性蛋白组学分析方法（[/font][font=Calibri]Affinity-based Protein Profiling,ABPP[/font][font=宋体]）是基于活性小分子与靶标蛋白之间的亲和作用，在活性小分子上引入报告基团，利用亲和层析技术可以将靶标蛋白进行分离的一种方法，其作为一种十分有效的工具被广泛应用于天然产物靶标蛋白的发现。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]选取三个从中药中提取分离得到的活性天然小分子，设计合成相应的小分子探针，旨在为它们靶标蛋白的发现以及作用机制的研究提供一个有效的工具，具体内容如下：[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、对目前主要的用于天然小分子的靶标蛋白鉴定方法进行了介绍，且着重介绍了[/font][font=Calibri]ABPP[/font][font=宋体]方法及其在天然产物靶标蛋白鉴定的应用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、以薯蓣皂苷元和生物素为原料，经过酯化、酰胺化、取代、水解反应等步骤分别合成含有长臂亲脂性链和亲水性链的薯蓣皂苷元生物素标记探针[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]8,[/font][font=宋体]并以[/font][font=Calibri]MTT[/font][font=宋体]法对其进行抗肿瘤活性评价。实验得到的探针分子、重要中间体用[/font][font=Calibri]MS[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]1H-NMR[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]13C-NMR[/font][font=宋体]表征，确认所得化合物结构与目标化合物一致。细胞活性实验结果表明合成的探针分子[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]具有与薯蓣皂苷元相当的抗肿瘤活性，且对探针分子标记的靶标蛋白进行电泳分析，发现了三条薯蓣皂苷元可能特异性作用的蛋白条带，这些结果都为后续薯蓣皂苷元抗肿瘤靶标蛋白的发现奠定基础。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]生物素标记蛋白[/b][/url][/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite[/font][/font]

[b][font=宋体]一、引言[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]在生物学和医学的研究中，抗体标记技术已成为一种重要的研究手段。其中，生物素标记抗体凭借其独特的优势，在许多领域中得到了广泛应用。本文将详细介绍生物素标记抗体的原理、应用及发展前景。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]二、生物素标记抗体的原理[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]生物素，又称维生素[/font][font=Calibri]H[/font][font=宋体]，是一种存在于自然界中的小分子有机物质。它可以通过化学反应与抗体结合，生成生物素标记抗体。这一过程通常是在抗体的氨基基团上连接一个生物素衍生物，形成共价键。这种连接方式不会改变抗体的免疫活性，同时使得生物素标记抗体能够与相应的抗原结合。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]三、生物素标记抗体的应用[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫分析：生物素标记抗体在免疫分析中发挥了重要作用。通过将生物素标记抗体与相应的抗原结合，可以实现对抗原的灵敏检测。这种方法被广泛应用于生物学、医学及食品安全等领域。[/font][font=宋体]蛋白质组学研究：在蛋白质组学研究中，生物素标记抗体可用于蛋白质的分离和纯化。通过生物素标记抗体与抗原的特异性结合，可以从复杂的蛋白质混合物中分离出目标蛋白质。[/font][font=宋体]细胞生物学研究：生物素标记抗体在细胞生物学研究中具有广泛的应用价值。例如，通过生物素标记抗体追踪细胞内蛋白质的分布和动态变化，有助于深入了解细胞的生命活动。[/font][font=宋体]疾病诊断与治疗：生物素标记抗体在疾病诊断和治疗中也发挥了重要作用。例如，针对癌症的免疫治疗中，生物素标记抗体可以用于识别和攻击癌细胞，从而达到治疗目的。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]四、发展前景[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]随着生物学和医学技术的不断进步，生物素标记抗体的应用前景日益广阔。未来，随着技术的不断创新和完善，生物素标记抗体的性能将得到进一步提升，从而推动其在更多领域中的应用。同时，随着人类对生命现象认识的深入，将有更多具有挑战性的研究课题需要借助生物素标记抗体这一强大工具。[/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]五、结语[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]生物素标记抗体作为一种重要的研究手段，在生物学、医学及其他相关领域中发挥着不可或缺的作用。随着技术的不断进步和应用领域的拓展，我们有理由相信，生物素标记抗体的未来将更加光明，为人类探索生命奥秘提供更多可能性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]生物素标记蛋白[/b][/url]相关产品，详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[font=宋体][font=宋体]生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素系统 [/font][font=Calibri](biotin-avidin system[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]BAS)[/font][font=宋体]，是[/font][font=Calibri]70[/font][font=宋体]年代后期应用于免疫学，并得到迅速发展的一种常用的生物反应放大系统。它具有高度特异性、敏感性、稳定性的特点，两者的亲和常数（[/font][font=Calibri]K=1015 mol/L[/font][font=宋体]）比抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体（[/font][font=Calibri]K=105[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]1011 mol/L[/font][font=宋体]）至少高[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]万倍，是目前已知强度最高的非共价作用，这使得生物素标记的蛋白成为研究蛋白质相互作用和筛选抗体或小分子潜力药物的强大工具。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州开发了丰富的生物素标记蛋白产品，拥有[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]定点标记和化学标记两种类型的生物素标记蛋白，覆盖细胞治疗、抗体药、疫苗等热门靶点。产品具有高批间一致性、高活性等优势，适用于[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Biopanning[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR / BLI[/font][font=宋体]等实验。下面为大家提供生物素蛋白标记常见问题及注意事项：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]生物素蛋白标记常见问题：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、什么是生物素标记蛋白[/font][font=Calibri]?[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在生物化学中，生物素化蛋白质就是生物素与蛋白质等大分子物质共价结合的产物。生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素亲和常数至少比抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体高一万倍[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]是目前发现的自然界中具有最强亲和力的物质。因此，生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素系统已被广泛地应用于免疫诊断技术。生物素化蛋白的出现，也为类似于[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]实验简化了流程，提高了效率。此外，由于生物素的小尺寸（[/font][font=Calibri]MW = 244.31g / mol[/font][font=宋体]），不太影响蛋白质本身的天然功能。所以它同时具备了高亲和力、高特异性、高灵敏度的优点。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、生物素标记蛋白有哪些应用？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]生物素标记蛋白广泛的应用在生物技术的众多领域。如透析，将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中，当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时，与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附，直接流出，从而与被分离的蛋白质分开，然后选用适当的洗脱液，[/font] [font=宋体]改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来。怎么释放所需蛋白呢？这需要非常严苛的条件（例如，[/font][font=Calibri]pH=1.5[/font][font=宋体]的 [/font][font=Calibri]GuHCl[/font][font=宋体]），这种极端条件下的蛋白是会变性的。如果需要分离标记的蛋白质，最好用亚氨基生物素标记的蛋白质。该种生物素在碱性条件下与抗生物素蛋白结合紧密，但是在降低[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]以后，亲和力降低。因此亚氨基生物素标记蛋白可以通过降低[/font][font=Calibri]pH([/font][font=宋体]约[/font][font=Calibri]pH=4)[/font][font=宋体]从柱子上释放。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫检测中的应用：在常规[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]原理的基础上，结合生物素[/font][font=Calibri](B)[/font][font=宋体]与亲和素[/font][font=Calibri](A)[/font][font=宋体]间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。生物素很易与蛋白质[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如抗体等[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]以共价键结合。这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗体[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]分子的目的。 这可以用于通过荧光或电子显微镜定位的[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]测定，[/font][font=Calibri]ELISPOT[/font][font=宋体]测定，[/font][font=Calibri]western[/font][font=宋体]印迹和其他免疫分析方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]生物素标记注意事项：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、依抗原或抗体分子所带可标记基团的种类（氨基、醛基或巯基）以及分子的酸碱性，选择相应的活化生物素和反应条件；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、标记反应时，活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当的比例；生物素：[/font][font=Calibri]IgG [/font][font=宋体]用量比[/font][font=Calibri](mg/mg)[/font][font=宋体]宜为[/font][font=Calibri]2:1, IgG[/font][font=宋体]应用浓度[/font][font=Calibri]0.5~5[/font][font=宋体]μ[/font][font=Calibri]g/ml [/font][font=宋体]生物素[/font][font=Calibri]1~3[/font][font=宋体]个[/font][font=Calibri]/Ag[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]3~5[/font][font=宋体]个[/font][font=Calibri]/Ab[/font][font=宋体]；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、为减少空间位阻影响，可在生物素与被标记物之间加入交联臂样结构；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后，不影响后者的免疫活性；标记酶时则结果有不同。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多关于[url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]生物素标记蛋白[/b][/url]详情可以参看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite[/font][/font][font=宋体] [/font]

[b][font=宋体][color=#060607]前言[/color][/font][/b][font=宋体][font=宋体]在生物医学研究领域，蛋白质的功能性鉴定及其在各种生物过程中的作用机制一直是科研人员关注的焦点。近年来，质谱技术因其高分辨率和高灵敏度在蛋白质组学研究中发挥着越来越重要的作用。然而，传统的质谱策略在鉴定具有特定生物功能的蛋白质亚群时，常常受到标记物与非标记物区分困难的限制。为了解决这一问题，科学家们开发了一种名为[/font][font=宋体]“直接检测含生物素标签的蛋白质”（[/font][font=Calibri]Direct Detection of Biotin-containing Tags, DiDBiT[/font][font=宋体]）的新技术，显著提高了生物素化蛋白质的直接检测效率。[/font][/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]技术检测方法[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]主要是利用质谱技术（[/font][font=Calibri]MS/MS[/font][font=宋体]）来直接检测含生物素的肽段，无需额外的实验步骤即可直接鉴定生物素化蛋白质。与传统的生物素蛋白质鉴定方法相比，[/font][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]技术显著提高了检测的灵敏度和效率。[/font][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]技术通过优化样品的预处理和质谱分析步骤来提高生物素化肽段的检测灵敏度。首先对细胞裂解物进行蛋白质消化，然后使用[/font][font=Calibri]NeutrAvidin[/font][font=宋体]珠子富集含生物素的肽段，最后进行质谱分析。这种方法的关键在于通过降低样品复杂性，提高了生物素标记肽段的检出率。[/font][/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]技术的应用[/font][/font][/b][font=Calibri]Lucio Matias[/font][font=宋体][font=宋体]等人采用[/font][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]技术，在啮齿动物的神经系统中标记新合成的蛋白质，结果表明使用[/font][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]技术提高了生物素标记新合成蛋白质的检测，与传统方法相比，检测灵敏度提高了约[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]倍。他们还成功地应用[/font][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]技术在成年大鼠视网膜中直接检测新合成的蛋白质，显示出前所未有的时间分辨率，短至[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]小时。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]此外，[/font][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]技术具有高度的灵活性和可扩展性。它可以与其他蛋白质组学技术相结合，如蛋白质相互作用研究、蛋白质翻译后修饰分析等，从而为我们提供更为全面和深入的蛋白质功能信息。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]技术的应用展示了其在蛋白质组学研究中的广泛潜力，尤其是在快速鉴定特定细胞类型或生物学状态下新合成蛋白质的能力。此技术不仅提高了实验的准确性和效率，而且通过直接检测生物素化肽段，显著简化了实验流程，降低了实验的复杂性和成本。[/font][/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]结论[/font][/b][font=宋体][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]技术提供了一种强大的工具，用于在复杂生物样本中直接鉴定和分析含生物素的蛋白质。这种高灵敏度和高分辨率的策略适用于广泛的生物标记策略和样本准备，显著提高了从样本中区分真实候选物和污染物的能力。此技术特别适用于含量较少的生物素化蛋白质的研究，为蛋白质组学和细胞生物学提供了新的研究工具。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]本篇文章由义翘神州编辑整理，同时义翘神州提供[/font][url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][u][font=宋体][color=#0000ff][b]生物素标记蛋白[/b][/color][/font][/u][/url][font=宋体]，更多详情可以点击查看！[/font][font=宋体]参考文献：[/font][font=宋体][font=Calibri]Schiapparelli LM, McClatchy DB, Liu HH, Sharma P, Yates JR 3rd, Cline HT. Direct detection of biotinylated proteins by mass spectrometry. J Proteome Res. 2014 13(9):3966-3978. doi:10.1021/pr5002862[/font][/font]

[font=宋体]抗体经过酶标记、铁蛋白标记或通过胶体金标记获得标记抗体，是免疫电镜样品制备的一种方法，用于观察抗原抗体免疫复合物方面研究的手段。免疫标记技术是将一些既易测定又具有高度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体分子上，通过这些标记物的增强放大效应来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含量。抗体标记主要是用于抗原的定位分析，在某些情况下，也可以对混杂有大量其他分子的样本中的抗原进行定量检测。由于抗体与其相应抗原具有很高的亲和力，因此带有易识别标记物的抗体可以定位分析抗原，并且是一种理想的快速价廉的定量测定方法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]荧光素标记[/b][/font][font=宋体]荧光色素是最常用于标记抗体的标记物之一。荧光素经恰当的激发可发光，从而得知抗体的定位和待测抗原的分布情况，主要用于细胞分选或高分辨率免疫染色，是一种非常好的亚细胞水平精确定位的方法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]酶标记[/b][/font][font=宋体]酶标记抗体是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成，其应用范围非常广泛，结果即时可见、敏感性高，但较难应用于定量分析。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]生物素标记[/b][/font][font=宋体]生物素标记反应简单、温和且很少抑制抗体活性，将生物素与抗体共价结合是一种非常简便、直接的标记方法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州开发了丰富的[url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]生物素标记蛋白[/b][/url]产品，拥有[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]定点标记和化学标记两种类型的生物素标记蛋白，覆盖细胞治疗、抗体药、疫苗等热门靶点。产品具有高批间一致性、高活性等优势，适用于[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Biopanning[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR / BLI[/font][font=宋体]等实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]除了为客户提供抗体开发，义翘神州还可以提供[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation][b]抗体标记服务[/b][/url]，可提供的标记物包括[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]、生物素、荧光基团等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以查看[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation[/font][/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体][font=宋体]抗体标记，作为生物学和医学领域的关键技术，它的核心在于将标记物（如酶、荧光素、生物素等）以共价的方式连接到抗体上。这一过程犹如赋予抗体一双[/font][font=宋体]“魔法眼睛”，使其能够精准地识别并结合特定的抗原。抗体与标记物的结合，再与待检测抗原发生特异性反应，形成一种多元复合物。这种复合物的形成，不仅增强了检测的灵敏度，也提高了识别的特异性。这一特性使得抗体标记技术在生物学、医学和生物工程领域中发挥着举足轻重的作用。借助高端的仪器设备，如荧光显微镜、射线测量仪、酶标检测仪、电子显微镜和发光免疫测定仪等，我们能够直接观察或自动化测定试验结果。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]这不仅在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上对抗原、抗体反应进行深入的定性和定位研究，还为各种[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]和固相免疫分析方法提供了强大的技术支持，从而在体液中的半抗原、抗原进行精准的定性和定量测定。如今，抗体标记技术已经成为医学病理学、免疫组织化学、分子生物学、生物制药等领域不可或缺的分析与研究工具。而酶标记法、生物素化标记法、荧光素标记法和胶体金标记法等常见的抗体标记技术，更是推动了相关领域的飞速发展。抗体标记技术，不仅为我们打开了一扇探索生物微观世界的大门，更为相关领域的研究与应用提供了强大的技术支持。在未来的生物学、医学和生物工程研究中，抗体标记技术无疑将继续发挥其无可替代的作用。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]常用的抗体标记技术[/font][/b][font=宋体][b][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]抗体的酶标记法[/font][/b][/font][font=宋体]通过共价键经适当方法将酶联结在抗体上，制成酶标抗体，再借酶对底物的特异催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，这些有色产物可用肉眼、光学显微镜和电子显微镜观查，也可以用分光光度计测定，呈色反应显示了酶的存在，从而证明发生了相应的免疫反应。[/font][font=宋体][font=宋体]实验中使用偶联剂使酶与抗体结合，即通过应用单、双或多功能试剂，分别与大分子的抗体所存在的功能性基团发生反应，生成酶[/font][font=宋体]—抗体偶联复合物。不同的酶—抗体复合物制备方法中，最广泛应用的戊二醛法，本法与其它偶联方法相比，具有操作简单、反应条件温和，及实用面广等长处。[/font][/font][font=宋体]酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。高质量的抗体则可通过提取纯化而获得。在制备方法上，宜选用产率高、不影响结合物的活性和不混杂干扰性物质且操作简便易行的方法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1) [/font][font=宋体]辣根过氧化物酶[/font][font=Calibri](HRP)[/font][/font][font=宋体][font=宋体]辣根过氧化物酶（[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]）标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。其原理是[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]的糖基用过碘酸钠氧化成醛基，加入抗体[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]后该醛基与 [/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]氨基结合，形成[/font][font=Calibri]Schiff[/font][font=宋体]氏碱。为了防止[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]中糖的醛基与其自身蛋白氨基发生偶合，在用过碘酸钠氧化前先用二硝基氟苯阻断氨基。氧化反应末了，用硼氢化钠稳定[/font][font=Calibri]Schiff[/font][font=宋体]氏碱。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2) [/font][font=宋体]碱性磷酸酶（[/font][font=Calibri]AKP[/font][font=宋体]）[/font][/font][font=宋体][font=宋体]碱性磷酸酶（[/font][font=Calibri]AKP[/font][font=宋体]）用于标记抗体，常用戊二醛一步法，将酶和单抗混合，再加入适量戊二醛，使酶和抗体蛋白的[/font][font=Calibri]NH2[/font][font=宋体]分别与两个醛基结合，制备成结合物。该法简便，但所得产物不均一，抗体活性损失大，酶标记率低。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]抗体的生物素化标记[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]亲和素与生物素都可与蛋白质[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]包括抗原、抗体、酶等[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、荧光素等分子结合而不影响后者的生物活性，是理想的标记剂。一个抗体分子可偶联数十个生物素或亲和素分子，而亲和素或生物素分子又可与酶或荧光素结合，从而组成一个生物放大系统，显著提高检测的灵敏度。常用的有亲和素–生物素标记法[/font][font=Calibri](Labeled avidin biotin[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]LAB)[/font][font=宋体]、亲和素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]生物素桥法[/font][font=Calibri](bridged avidin biotin, BAB)[/font][font=宋体]和亲和素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]过氧化物酶复合物法[/font][font=Calibri](avidin biotin peroxid ase complex[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]ABC)[/font][font=宋体]。本实验可使抗体或其它蛋白质的ε[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]氨基通过手臂与酰化的生物素共价结合。其后，生物素化的分子可应用酶标[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素或荧光染料[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]链霉亲和素复合物来检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]抗体的荧光标记法[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]荧光抗体标记技术是将荧光素以化学方法与特异性抗体共价结合，形成荧光素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]蛋白质结合物（即荧光标记抗体），此结合物仍保留着抗体活性，同时具有荧光素的示踪作用。当它与相应的抗原特异结合后，借助于荧光显微镜观察呈现明亮的特异荧光。实验中常用异硫氰基荧光黄（[/font][font=Calibri]fluorescein isothiocyanate, FITC[/font][font=宋体]）作为标记物，在碱性溶液中，[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]上的化学基团异硫氰基（[/font][font=Calibri]-N=C=S[/font][font=宋体]）与抗体蛋白自由氨基（主要是赖氨酸的ε[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]氨基）结合，形成荧光抗体，以测定细胞相应抗原的存在。[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]具有很高的量子产量（发射光与吸收光的比值[/font][font=Calibri],0 .85[/font][font=宋体]），而且形成的偶联物的稳定性很好。[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]是应用最广的荧光染料，流式细胞仪就按[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]的特性，设计了激光波长为[/font][font=Calibri]488 nm,[/font][font=宋体]很接近于[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]的最大激发波长[/font][font=Calibri]492nm[/font][font=宋体]）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]免疫胶体金标记抗体及检测抗原[/font][/b][/font][font=宋体]胶体金是一种常用的标记技术，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，有其独特的优点。近年已在各种生物学研究中广泛使用。在临床使用的免疫印迹技术几乎都使用其标记。同时在流式、电镜、免疫、分子生物学以至生物芯片中都可能利用到。[/font][font=宋体][font=宋体]胶体金在光镜和电镜中均为有效的标记物，可以检测单一和多重抗原。胶体金在电解质中不稳定，但被蛋白质包被的胶体金是稳定的。一般常用免疫球蛋白或蛋白[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]包被胶体金，可作标记二抗进行免疫检测，本方法应用范围广，染色后的样品可以长期保存。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation][b]抗体标记[/b][/url]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

一般化合物的生物活性都是怎么测的？

吖啶酯以及相关化合物通过简单的加入氢氧化钠以及过氧化氢就可以使吖啶酯标记的抗原或抗体发光，这种抗原或抗体采用一种活性标记物[2',6'-dimethyl-4'-(N-succinimidyloxycarbonyl) phenyl 10-methylacridinium-9-carboxylate]来获得。发光过程非常短暂，只是快速的一闪，持续时间小于5s。这么短暂的发光过程给反应的起始与测量带来了一定的限制(Weeks et al．1983，Law et al．1989)。通常是将试剂直接注入放在光度计暗仓内光探测器前面的试管内来检测发光。吖啶酯以及氨甲酰吖啶类似物[acridinium-9-(N-sulronyl) carboxamide](Kinkel et al．1989，Mattingly 1991)是用于免疫分析的主要化学发光标记物(可从Assay Designs lnc，Athens，GA；Behringwerke AG，Marburg，Germany；Ciba Coming Diagnostics，Medfield，MA以及Molecular Light Technology Research Ltd，Cardiff，UK等处获得)。这类标记的检测的最小量为~0.5attomol(0.5X10-18mol)。基于杂交保护的非分离DNA探针分析(nonseparation DNA probe assay)方法已被设计出来(Arnold et al．1989)。这种类型的分析无需将结合与未结合的标记物分开，因而分析可方便的一步完成。这种杂交保护分析利用已与互补DNA杂交的吖啶酯标记探针与溶液中游离探针之间水解速率相差百万倍的特性，在pH7.6的硼酸缓冲液中破坏游离探针的化学发光特性，从而使水解后的化学发光仅仅来源于已杂交的标记探针(可从Gen-Probe，San Diego，CA获得)。 鲁米诺及其类似物鲁米诺(Luminol)是第一个用于免疫学分析标记的化学发光化合物(Schroeder et al．1978)。在合适的催化剂(辣根过氧化物酶、微过氧化物酶(microperoxidase)、铁氰化物)存在的情况下，通过加入氧化剂(如：过氧化氢)可导致发光。然而，通过鲁米诺的5-氨基进行标记会使发光量减少10倍。异鲁米诺，一种鲁米诺6氨基异构体，其发光效率较鲁米诺低(量子产额0.1％)，但当通过第6位进行标记时可使发光量增加10倍。因而，这种化合物以及其氨基取代类似物，比如ABEI(N-(4-aminobutyl)-N-ethylisoluminol)，已在免疫分析应用中成为最受欢迎的标记物(Kohen et al．1979；Pazzagli et al．1982)。吡啶哒嗪(Pyridopyridazines)代表另一类化学发光化合物。早期的数据显示这些化合物，尤其是8-氨基-5-氯-7-苯基和8-羟基-7苯基衍生物，可作为检测过氧化物酶标记的标记和协同底物(co-substrates)。与鲁米诺相比，这类化合物具有很强的化学发光特性(约为50倍)(Masuya et al．1992)。 碱性磷酸酶磷酸金刚烷基1,2-二氧杂环丁烷(如：AMPPD；disodium 3-(4-methoxyspiro[1,2-dioxetane-3,2'-tricyclo[3.3.13,7]decan]-4-yl)-phenylphosphate)以及5-位取代类似物(如：5-choro：CSPD；可从Tropix Inc获得)已成为碱性磷酸酶标记的最为广泛使用的化学发光底物(Bronstein et al．1989，1990，1991；Schaap et al．1989)。这种酶的检测极限是1 zeptomole(10-21摩尔)并且其发光持续时间超长(1h)，因而特别适合与基于膜的分析。这个反应的发光强度可被尼龙膜表面以及特定的多聚物增强，如：聚氯苄(苄基二甲基铵)乙烯(polyvinylbenzyl(benzyldimethylammonium)chloride)。对尼龙膜来说，这种增强作用是用于其疏水性基团对去磷酸化的反应中间体的螯合作用；从而稳定和减少中间体的非发光性降解。碱性磷酸酶标记的化学发光分析目前被广泛地用于印迹试验以及DNA序列测定(Beck and Koster 1990，Tizard et al．1990)。 beta-半乳糖苷酶AMPGD(Adamantyl 1,2-dioxetane aryl galactoside)做为这种酶的底物现已越来越流行。这种酶从芳香环的第3位裂解半乳糖苷基团产生一种苯氧化物中间体，这种中间体的降解可导致发光。对这种酶采用这种分析方法的检测极限为30zeptomol。 辣根过氧化物酶鲁米诺以及其他环状二酰基酰肼(cyclic diacylhydrazides)化合物是辣根过氧化物酶的化学发光协同底物。采用鲁米诺、过氧化氢，以及一种增效剂(如：4-碘苯酚或4-羟基肉桂酸)，辣根过氧化物酶的碱性同工酶可被检测出的最小量96h)。 葡萄糖氧化酶目前已经发展了几种用于葡萄糖氧化酶的法学发光分析。异鲁米诺或鲁米诺在微过氧化物酶催化剂存在的情况下可用于分析葡萄糖氧化酶与葡萄糖反应所产生的过氧化物(Sekiya et al．1991)；另一种方法是采用化学发光荧光基团致敏的bis(2,4,6-trichlorophenyl)oxalate反应来检测(Arakawa et al．1982)。 商业试剂、试剂盒及光度计对于可获得的化学发光试剂和试剂盒以及用于发光测定的光度计的全面的评述已有发表(请参见Stanley 1992，1993)。一系列关于化学发光在基础及应用领域的当前进展的资料汇编也同样可以得到(请参见Kricka and Stanley 1992，Kricka et al．1993，Wilkinson 1998)。化学发光可采用一系列的检测设备来进行检测，包括光电倍增管(采用光子计数或灵敏度较低的光子流模式(photon current mode))、硅光电二级管、CCD照相(Wick 1989)摄影或胶片摄影(Kricka and Thorpe 1986)。CCD照相由于是检测二维光源(如膜以及96孔微板)的方便且灵敏的方法而被广泛使用。除此以外，它还能容易的监测发光动力学、可通过图像增强以及背景减影来改善结果质量。

各位朋友，请问荧光定量PCR的标记物具体都有哪些？详细的。量子点可否用于PCR的标记物？荧光素属于哪类，荧光素的衍生物可以作为PCR的标记物吗？谢谢！

[font=宋体]什么是抗体结合？抗体结合也被称为[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation][b]抗体标记[/b][/url]，是一种可将特定标记物共价连接到抗体分子上的抗体修饰技术。这些标记抗体可用于从细胞，组织，或者整个个体的混合物中分离和纯化的目的蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]辣根过氧化酶（[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]）是最常见的抗体酶标记类型。[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]上仅有[/font][font=Calibri]6[/font][font=宋体]个赖氨酸，而且它们的修饰并没有较多的影响酶活性。常见的荧光染料有[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]APC[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]PerCP[/font][font=宋体]等，均可用于标记抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]除了为客户提供抗体开发，义翘神州还可以提供抗体标记服务，可提供的标记物包括[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]、生物素、荧光基团等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]标记方法：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）标记抗体、抗原：常用于标记抗体的活化生物是[/font][font=Calibri]BNHS[/font][font=宋体]；对于偏酸性的抗原，标记时多采用[/font][font=Calibri]BHZ[/font][font=宋体]；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）标记酶：以生物素标记[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]为例。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]标记注意事项：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]待标记物的蛋白浓度不能过低，如若浓度过低需经超滤浓缩等手段提高浓度至[/font][font=Calibri]0.1mg/mL[/font][font=宋体]以上。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]一个蛋白质可能被多个生物素标记，标记时，生物素与待标记物应有合适的比例，确保标记后不影响待标记物的活性。推荐生物素：抗原蛋白比例为[/font][font=Calibri]1~3[/font][font=宋体]：[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]，生物素：抗体比例为[/font][font=Calibri]5~20[/font][font=宋体]：[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]或根据标记试剂盒说明书推荐比例。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]为减少空间位阻影响，基于检测灵敏度特异性等要求，可在生物素与被标记物之间加入交联臂结构。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]如果偶联基团为氨基，待标记物的系统不得含有游离的氨基（[/font][font=Calibri]Tris,[/font][font=宋体]氨基酸）、载体蛋白（[/font][font=Calibri]BSA[/font][font=宋体]）或者其他干扰物，若有干扰物需要用标记缓冲液反复超滤确保其去除干净，若采用其他基团偶联试剂，待标记物系统亦不能有含对应的游离基团的物质。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5. [/font][font=宋体]如果待标记物为分子量较小的物质，在纯化过程中注意超滤管、脱盐柱、透析袋的截留分子量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6. [/font][font=宋体]标记反应后的体积量至少在[/font][font=Calibri]100[/font][font=宋体]μ[/font][font=Calibri]L[/font][font=宋体]以上，以达到纯化时的最小上样量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]7. [/font][font=宋体]标记反应完成后（氨基偶联体系），可在体系中加入适量的含游离含氨基小分子物质，中和游离的生物素活化试剂，提高纯化效率，减少后续反应的假阳性和高背景。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]8. [/font][font=宋体]纯化后的标记蛋白可采用[/font][font=Calibri]A280[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]BCA[/font][font=宋体]法测定蛋白含量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]9. [/font][font=宋体]标记纯化后的蛋白可根据蛋白性质进行分装长期保存，减少冻融次数。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多抗体标记详情可以参考：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation[/font][/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

生物活性测定中活性曲线拟合中四参数和五参数的有啥区别，那种情况下应该用哪个

结核病（tuberculosis，TB）是世界第二大致死性感染疾病，近年来由于结核感染与艾滋感染的协同作用、全球人员的不断流动、不合格的公共卫生项目、耐药性及感染的持久性等原因，使开发新型抗结核药物的需求更为迫切。中国科学院微生物所张立新实验室使用带有绿色荧光蛋白（GFP）表达载体的牛型结核分支杆菌Mycobacterium bovis减毒株bacillus Calmette-Guérin，即BCG 菌株作为测试菌株，建立了BCG高通量筛选模型作为抗TB活性成分的筛选，该方法高效直观且操作相对安全，为抗结核化合物的发现提供了快速通道。 通过筛选课题组自主建立的微生物天然产物库，发现海洋疣孢菌Verrucosispora sp. MS100128的粗提物具有抗BCG活性。通过与澳大利亚昆士兰大学Robert Capon教授合作，获得了一系列结构新颖的微生物次级代谢产物abyssomicins，包括3个新化合物abyssomicin J、K、L和4个已知化合物abyssomicin B、C、D、H。其中abyssomicin J为首次发现的含硫原子二聚体结构的该类化合物，其显示出良好的抗BCG活性，MIC值为3.125 µg/mL。 在过去的研究表明，在这类化合物中，仅结构中含有α,β-不饱和酮活性基团的atrop-abyssomicin C与abyssomicin C才起生物学作用。张立新课题组发现，新颖结构含硫原子同源二聚体结构显示出更好的活性，论文通过化学半合成的方法发现了abyssomicin C可以通过迈克加成反应（Michael addition）转化为abyssomicin J、K、L，促进了对abyssomicin类化合物的化学反应性、稳定性和生物活性的深入理解。 同时，本研究进一步通过细胞水平的实验验证了abyssomicin J在BCG细胞内会自发转变为atrop-abyssomicin C而发挥其抗结核活性的初步假设，并揭示了该类化合物可以克服atrop-abyssomicin C不稳定的缺点，本论文的发现这为将此类化合物开发成成为新一代稳定的抗结核前体药物提供了理论依据。这些研究成果首次揭示了abyssomicin类化合物的硫醚迈克加成产物是更加稳定的且具有定高反应活性的Michael acceptor，具有更高的生物利用率和药效潜力，为研制新一类抗TB的临床药物奠定了基础。 相关论文：WANG Qian, SONG Fuhang, XIAO Xue, HUANG Pei, LI Li, Aaron Monte, Wael M. Abdel-Mageed, WANG Jian, GUO Hui, HE Wenni, XIE Feng, DAI Huanqin, LIU Miaomiao, CHEN Caixia, XU Hao, LIU Mei, Andrew M. Piggott, LIU Xueting*, Robert J. Capon*, ZHANG Lixin*. Abyssomicins from a South China Sea deep-sea sediment Verrucosispora sp.: Natural thioether Michael addition adducts as potential antitubercularprodrugs. Angewandte Chemie International Edition, 2012, DOI: 10.1002/anie.201208801 and 10.1002/ange.201208801（IF=13.455, 5-Year IF=13.195） http://www.cas.cn/ky/kyjz/201211/W020121121340012619619.jpghttp://www.cas.cn/ky/kyjz/201211/W020121121340012612849.jpg微生物所等发现抗结核活性新型abyssomicins化合物

我是用一种环糊精的衍生物做手性分离，但是现在试了好几种中性标记物在90分钟内都不出峰，在中性，碱性，酸性下都试了找不到电渗流，正压，负压都试过了都不出峰，怀疑是电渗流太小了，不知道怎么办，请求大家帮帮忙吧

[font=宋体]抗体标记是一种生物技术，通过将标记物（如酶、荧光素、生物素等）共价连接到抗体上，使其与待检测物（如特定抗原）特异性反应，形成多元复合物。随后，借助相关仪器，可以直接观察试验结果或进行自动化测定，从而对抗原、抗体反应进行定性和定位研究，或进行定性和定量测定。下面为大家介绍几种高质量的标记抗体：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]①荧光色素标记抗体[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]这种标记方法是将荧光素与相应的抗体[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗原[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]结合，将荧光标记的抗体[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗原[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]与标本中相应的抗原形成荧光标记的抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原复合物，用荧光显微镜观察。在显微镜若存在荧光则意味着存在抗原抗体复合物，因此可根据已知的抗体[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗原[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]推断出另一种未知抗原[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗体[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]的存在。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]②[/b][url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]生物素标记抗体[/b][/url][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗体标记中生物素的引入使整个过程灵敏度大大提高！这种方法可使抗体或其它蛋白质的[/font][font=宋体]ε[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]氨基与酰化的生物素共价结合，生物素化的分子可以通过酶标记的抗生物素蛋白或荧光染料[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]链霉抗生物素蛋白复合物来检测。小分子水溶性生物素对链霉亲和素的高亲和力是该方法的设计基础。[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]③放射性碘标记抗体[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]蛋白质的碘标记方法有很多种，比如我们常用的化学法或酶促法通过氧化对蛋白质分子进行碘化等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]④[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]标记抗体是指将[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]荧光染料与特定抗体结合而成的复合物，这种技术常用于生物医学研究中的荧光标记。[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]荧光染料是从红藻属藻类中提取得到的一种特殊色素，具有较高的荧光强度和稳定性。[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]标记抗体主要应用在流式细胞术和免疫组化等实验中。在流式细胞术中，[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]偶联抗体可以用于检测细胞表面标记物的表达情况，如[/font][font=Calibri]CD4[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CD8[/font][font=宋体]等，可以实现对免疫细胞亚群的研究。在免疫组化和免疫组织化学等实验中，[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]偶联抗体可以用于检测细胞内标记物的表达，如细胞因子、转录因子等，可以深入研究细胞内信号传导通路及相关的生物学功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]⑤[/font][font=Calibri]PerCP[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]PerCP-Cy5.5[/font][font=宋体]标记抗体是一种荧光标记的二抗，通常是在单抗上进行标记，具有很强的荧光强度和稳定性。[/font][font=Calibri]PerCP-Cy5.5[/font][font=宋体]标记抗体可以与细胞或细胞组分中的特定抗原结合，用于细胞表面标记、蛋白质定量分析、细胞周期和细胞凋亡研究等领域。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]⑥[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]标记抗体是将[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]（异硫氰酸荧光素）与特异性抗体经适当方法连接而成的复合物。[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]是一种荧光染料，能够与各种抗体蛋白结合，并产生强烈的荧光信号。这种标记技术常用于生物医学研究中的荧光标记，特别是在免疫学、细胞生物学和分子生物学等领域。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州除了为客户提供抗体开发，还可以提供[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation][b]抗体标记服务[/b][/url]，可提供的标记物包括[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]、生物素、荧光基团等。更多关于抗体标记及抗体标记方法详情可以参看[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation[/font][/font]

求助写出两种用于免疫分析的荧光标记物和化学发光标记物，写出它们的标记反应。

[align=center][b]中药生物活性测定[b]指导原则起草[/b]说明[/b][/align][b]一、生物活性测定指定原则[b]起草[/b]的背景情况1.1 生物检定和生物检定在药品质量控制中的运用[/b]生物检定是利用生物体包括整体动物、离体组织、器官、细胞和微生物等评估[b]药物[/b]生物活性的一种方法。它以[b]药物[/b]的药理作用未基础，以生物统计为工具，运用特定的实验设计，在一定条件下比较供试品和相当的[b]标准品[/b]或对照品所产生的特定反应，通过等反应剂量间比例的运算，从而测得供试品的效价或毒性。[b]药物[/b]质量控制的根本目的是控制[b]药物[/b]的生物活性，保证临床用药的安全性和有效性。对单一而结构稳定的分子，如果标准物质也是纯度很高、与测定目标分子结构一致的[b]药物[/b]制剂，任何试验系统的测定结果都是一致的，包括生物反应的试验系统和物理化学测定，当然应采用精度和经济性最好物理化学测定方法，可以用mg、g等绝对或相对重量表示其量值。对组分的分子结构是未知的或是多组分的不均一的混合体的[b]药物[/b]，就不能用mg、g等绝对或相对重量表示其量值；或者是其重量等量值不能与其临床效应相关的[b]药物[/b]，如不同构型不同活性的激素、酶等[b]药物[/b]，只能从其药理作用中选择一种能代表临床疗效或毒性反应的指标，根据生物检定的方法建立能控制其质量的检定方法。因此，可以认为生物检定是一种测量的工具，尽管相对来说不如重量测定那样精确。目前，针对药效成分不明确、药效成分太多或制剂中非药效杂质多的[b]药物[/b]制剂，如各种激素、疫苗、免疫血清及毒素、人免疫球蛋白及凝血因子、细胞因子、抗生素、洋地黄制剂等，各国药典都规定了相应的生物检定方法来控制质量。广义的生物检定，包括使用活生命体的生物检定，和不使用活生命体的受体检定、免疫检定等。受体检定和免疫检定的犯法操作简便、费用低、精度高，但其反应值不完全代表整体动物的生物反应。从试验方法来看，分为体内、体外试验。体内试验的受试对象一般是整体动物，这时的反应代表了药品对整个动物或整个在位组织的反应。体外试验的受试对象一般指细胞、酶、受体等，体外试验仅表达了与受体结合的能力，不完全表达其生物反应。由于生物检定的前提或方法特点，包括目标物的结构成分不确定，或反应值不完全代表整体动物的生物反应，所以生物检定的结果存在一定的不确定性。生物检定的有效测量是建立在若干假设基础上的：假设1：标准物质与被测样品是同质的，至少应认为被测样品是标准物质稀释或浓缩的倍数。假设2：规定的生物试验方法中的生物效应指标，是测量相当于标准物质中的目标物或相似物。假设3：标准物质与供试品所用的剂量符合实验设计的要求。因此，生物检定是一种复杂的测量形式，它所采用的标准物质、方法系统、单位含义和试验设计，都需要建立在一定的前提和假设的基础之上，需要借助生物统计的工具及概率的解释，需要随着科学技术的发展而不断完善。生物检定虽复杂而不够精确，但因为其反应生物效应的特点，仍然在药品、生物制品的质量控制中发挥着不可替代的作用，尽管在建立生物检定方法后我们会千方百计找出更适合的方法来取而代之。[b]1.2、中药进行生物活性测定的意义和可行性[/b]1.2.1 中药质量控制尴尬现状体现出生物活性测定的重要性目前，化学成份的定性、定量测定是现行中药质量控制的常用方法。这种方法，通常针对已知的1~2种指标成分或活性成分，进行定性鉴别和定量测定，众所周知，仅是单味中药所含的化学成分超出百种之多，而一个由4~5味中药组成的复方所含化学成分更是成倍增长，现有的研究越来越多地证实，中药发挥疗效的物质基础常常是多种成分组合产生，因此通过检验l~2个成分控制质量有着非常大的局限，而且常常不能与其生物效应形成关联[sup][1][/sup]。甚至造成了一种化合物在许多不同类别的药品标准中使用，例如，槲皮素的含量测定，在现有不用用途中药制剂中出现的频率之高，成为了中药质量控制尴尬现状的一个典型例证。这个尴尬现状造成了现在中药质量控制存在很大的局限性。首先，含量测定的指标成分不一定是该药品的有限成分或主要有效成分，即使是主要成分其低微的含量限度与临床有效剂量间也缺乏相关性，因此测定指标成分不能代表控制了[b]药物[/b]的生物活性。其次，低含量的成分测定，造成了上市前药品和上市后药品，甚至不同基源的药品，甚至生产工艺的微小改变，甚至来源生产一致的不同批药品，尽管都符合现在低含量成分测定的质量标准，但是其活性成分却存在很大变数，临床效应没有重现性。这样的问题长久了，引来的是病人和医生对[b]药物[/b]有效性的担心，反过来是对中医药的一种伤害。第三，某些不法分子，在伪劣药品中加入指标成分，可以达到以次充好、以假乱真，欺骗了医生和患者，欺骗了质量检验机构，严重影响临床的用药安全有效。这些现状反映了在中药的质量控制中，单纯依赖化学成分测定方法，难以达到有效控制制剂疗效的目的，中药注射剂也不例外。中药注射剂改变了中药传统的给药方式，有着快速、高效的特点。但在目前国家批准的109个品种中，其中大部分为上世纪七八十年代研制的品种，有效成分含量不明确（只有下限），未知的非定量成分的比例相当高[sup]【[/sup][sup]2[/sup][sup]】[/sup]。2006年6月国家药监局在全国范围内停止鱼腥草注射液等7个注射剂后，引发了对中药注射剂的安全性和质量标准的关注热潮。近年来发展的中药指纹图谱技术，虽能较好地反映中药多组分现状，可以检测几十种成分，但也并不能直接与临床效应相关。但是仍然无法与疗效建立直接的联系[sup]【[/sup][sup]2[/sup][sup]】[/sup]。作为直接进入血液循环的药品，质量标准必须应充分地说明制剂应有的生物效应，并尽可能设定安全控制指标。2005年版中国药典明确提出，中药制剂质量标准应以准确检测[b]药物[/b]有效成分为目标，建立有效的方法测定中药中的物质群。现在，中药注射剂在临床中运用的最大阻碍来自对其安全性和有效性的担心和不信任，有文献显示对10个城市37家医院66位医生进行调查，近六成医生认为中药注射剂比抗菌[b]药物[/b]更不安全，近七成医生认为清热解毒类注射剂疗效不如抗生素。因此，中药生物活性测定是作为直接体现生物效应的方法，能够较好体现出中药临床运用的安全性和有效性，在中药质量标准中设定相应的项目已经刻不容缓。

[font=宋体]什么是[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation][b]抗体标记[/b][/url]？[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]抗体结合也被称为抗体标记，是一种可将特定标记物共价连接到抗体分子上的抗体修饰技术。这些标记抗体可用于从细胞，组织，或者整个个体的混合物中分离和纯化的目的蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]辣根过氧化酶（[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]）是最常见的抗体酶标记类型。[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]上仅有[/font][font=Calibri]6[/font][font=宋体]个赖氨酸，而且它们的修饰并没有较多的影响酶活性。常见的荧光染料有[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]APC[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]PerCP[/font][font=宋体]等，均可用于标记抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]除了为客户提供抗体开发，义翘神州还可以提供抗体标记服务，可提供的标记物包括[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]、生物素、荧光基团等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]高质量的标记抗体：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]①[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②[/font][font=Calibri]PerCP[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/font][font=宋体][font=宋体]④[/font][font=Calibri]APC[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/font][font=宋体][font=宋体]⑤[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/font][font=宋体]⑥生物素标记抗体[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]常见的抗体标记方法：[/b][/font][font=宋体]和所有蛋白质一样，抗体也是由氨基酸组成的。理论上，通过大多数氨基酸可以实现生物偶联。以下内容介绍了几种基于赖氨酸残基的抗体偶联和标记技术。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]（琥珀酰亚胺）酯法[/font][/font][font=宋体]应用广泛的荧光染料（如罗丹明衍生物）是采用这种方法对抗体进行偶联。通常在磷酸盐缓冲液中进行，随后与未标记的染料在柱上进行分离。该方法的主要缺点是，由于酯类对水分敏感，酯类的稳定性差。因此，反应结束后，标记抗体应立即使用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]吉妥珠单抗（[/font][font=Calibri]Gemtuzumab ozogamicin, Mylotarg[/font][font=宋体]）是全球范围内首个获批上市的抗体偶联药物（[/font][font=Calibri]ADC[/font][font=宋体]）。半合成的卡奇霉素衍生物具有[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]酯，以便将卡奇霉素与人源化[/font][font=Calibri]IgG4[/font][font=宋体]的赖氨酸残基偶联。然而，由于患者的临床获益不足，[/font][font=Calibri]Mylotarg[/font][font=宋体]已于[/font][font=Calibri]2010[/font][font=宋体]年退市。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②异硫氰酸盐法[/font][font=宋体][font=宋体]这种方法主要用于异硫氰酸荧光素（[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]）染料的偶联，广泛用于荧光标记蛋白和抗体的制备。异硫氰酸盐比[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]更稳定，但也更难制备，而且利用该方法，标记的反应效率可能会降低。与[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]法一样，应在反应结束后通过层析法去除多余染料。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③碳二亚胺法[/font][font=宋体][font=宋体]碳二亚胺衍生化合物将蛋白质上的羧基转换为反应中间体，可与赖氨酸发生反应。碳二亚胺的高反应性意味着它们可用于使用相对惰性的材料（如磁性或金颗粒）标记抗体。最常用的碳二亚胺为[/font][font=Calibri]EDC[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]有时可被添加至反应中，以辅助产生相对稳定的中间体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]该方法操作简单，但与[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]一样，[/font][font=Calibri]EDS[/font][font=宋体]具有吸水性，因此，标记后抗体需立即使用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④高碘酸盐法[/font][font=宋体][font=宋体]这种方法可用于制备特异性的[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]标记抗体。高碘酸盐通过产生与赖氨酸残基相互作用的醛分子来激活[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]本身只有少量的赖氨酸残基，因此酶聚合的影响不大。[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]和抗体之间的键是可逆的，可通过添加氰基硼氢化钠使其保持稳定。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情抗体标记详情可以参看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation[/font][/font]

柑橘中含有黄酮类化合物、类柠檬苦素、维生素、类胡萝卜素、有机酸、生物碱等多种生物活性成分。其中主要的生物碱有辛弗林、章鱼胺及酪胺。辛弗林是芸香科植物酸橙枳实提取物中的有效成分。2004 年,美国 FDA 禁止在减肥产品中添加麻黄碱,由于辛弗林和麻黄碱在化学结构类似,副作用较小,因此成为其替代品,具有广泛的应用市场。辛弗林减肥作用机理是由于刺激脂肪分解,提高代谢速率和促进脂肪氧化,

关于举办“第二届功能蛋白、生物活性肽的开发、应用与大健康产业发展高峰论坛”通知各有关单位： 2017年1月5日国家发展改革委与工业和信息化部联合发布《关于促进食品工业健康发展的指导意见》指出“十三五”期间将积极研究开发功能性蛋白、生物活性肽等保健和健康食品，为功能性蛋白、生物活性肽开发应用带来新的高度。 为进一步推动这一产业健康顺利发展，交流功能性蛋白、生物活性肽有关研究的新技术、新成果和应用新领域，搭建“产学研”之间交流与合作的平台，我单位定于2017年 4月 25日-27日在北京市举办“第二届功能蛋白、生物活性肽的开发、应用与大健康产业发展高峰论坛”。邀请国内外知名专家，为参会者答疑解惑，同时进行科技新成果、新产品展示推介。热忱欢迎全国行业界新老朋友莅临本次论坛。 一、组织机构主办单位：全国医药技术市场协会 国家食品行业生产力促进中心 协办单位：中国化工企业管理协会医药化工专业委员会 支持单位：征集中..........二、时间地点：时间：2017年 4月 25日-27日（25日全天报到）地点：北京市（具体地点、报名后通知）三、会议主要内容及拟邀专家：（采取专场会议形式）* 大会报告1.功能性蛋白、生物活性肽“十三五”相关政策解读2.功能性蛋白、生物活性肽应用的未来发展趋势3.蛋白质组学与质谱分析* 健康食品行业专场1.生物活性肽、功能蛋白配方食品领域研发项目的立项、申报2.生物活性肽、功能蛋白新产品工艺与工程研发3.我国蛋白和生物活性肽食品需求及市场发展趋势分4.功能蛋白、生物活性肽与疾病、保健及免疫作用研究5.蛋白基因组学、微生物学、生物化学及分子生物学6.活性肽功能蛋白营养作用及营养支持7.生物活性肽和蛋白质配方食品安全性研究及评价8.生物活性肽的消化吸收及分布 9.功能性研究、功能性成分分离鉴定10.天然蛋白质资源开发和深加工利用11.食源功能肽产业化技术转化与营养保健开发 12.生物活性肽、功能蛋白检测方法及研究进展13.功能蛋白肽食品生产工艺及安全管理与质量控制/标准建设14.新产品加工工艺开发中的选择及过程控制中关键点15.工艺确认和评价及生产工艺开发的关键步骤* 药品行业专场1.《生物产业发展“十三五”规划》中蛋白质和肽药物发展思路2.“生物类似药研发与评价技术指导原则（试行）”解读3.我国蛋白和多肽药物需求及市场发展趋势分析4.肽及蛋白质类药物传输系统研究5.蛋白和小分子药物设计研究 6.肽和蛋白类药物结构稳定性的研究 7.肽和蛋白质药物临床前安全性研究及评价 8.蛋白质药物构象及生物学活性检测技术9.结构改造的化学策略及生物活性功用、肽合成策略及肽药剂型的应用10.肽和蛋白质类药物微粒制剂的研究和应用 11.毛细管电泳技术在蛋白质及多肽药物研发中的应用 12.蛋白质药物的分离纯化与PEG化学修饰技术 13.蛋白质药物生产工艺 14.多肽、蛋白质药物的大规模生产与制备、成套工艺技术用拟邀嘉宾：　　谷瑞增 中国食品发酵工业研究院蛋白功能肽产业研发部 主任 刘新旗 国家“千人计划”专家、北京工商大学 博士 何 梅 北京营养源研究所副所长乐国伟 江南大学食品学院殷腊生 时代(中国)生物活性多肽研究所所长 罗永章 清华大学蛋白质药物北京市重点实验室主任 梁 伟 中科院生物物理研究所蛋白质与多肽实验室任副主任 屈 锋 北京理工大学教授 相关专家报告继续预约中，敬请持续关注！ 最终专家日程安排将在会前一周发给报名参会者！四、参会对象：1、健康食品及保健特医食品企业从事开发研究、质量管理的人员、注册专员等高级技术和管理人员；2、新药及仿制药企业从事开发研究、质量管理的人员，负责药品注册文件的编写、审评和注册申报的管理人员；联系人: 马超 电话/传真：010-52706606 手 机：13240487419 电子邮箱：1683101345@qq.com

我需要在酸性条件下分离物质，pH值在4到5之间。请问我应该选择什么作为中性标记物？

我需要在酸性条件下分离物质，pH值在4到5之间。请问我应该选择什么作为中性标记物？

[font=宋体]抗体标记技术是一种广泛应用于生物学、医学及免疫学等领域的重要技术。它通过将特定的标记物与抗体结合，实现对抗体及其所识别的抗原的检测、定位和定量等操作。本文将介绍抗体标记技术的原理、方法及实际应用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]一、抗体标记技术的原理[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]抗体标记技术是将特定的标记物与抗体结合，使抗体带上示踪基团，从而实现对抗体及其所识别的抗原的检测、定位和定量等操作。根据标记物的性质，抗体标记技术可分为放射性标记、荧光标记、化学发光标记和生物发光标记等。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]二、抗体标记技术的方法[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]放射性标记[/font][font=宋体][font=宋体]放射性标记是将放射性核素与抗体结合，通过放射性衰变产生的射线实现对抗体及其所识别的抗原的检测和定量。常用的放射性核素包括[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]14C[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]35S[/font][font=宋体]等。该方法具有灵敏度高、特异性强等优点，但存在放射性污染的问题。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]荧光标记[/font][font=宋体][font=宋体]荧光标记是将荧光染料与抗体结合，利用荧光信号实现对抗体及其所识别的抗原的检测和定量。常用的荧光染料包括异硫氰酸荧光素（[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]）、藻红蛋白（[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]）和罗丹明等。该方法具有灵敏度高、特异性强等优点，但存在光漂白和光干扰等问题。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]化学发光标记[/font][font=宋体]化学发光标记是将化学发光剂与抗体结合，利用化学反应产生的光信号实现对抗体及其所识别的抗原的检测和定量。常用的化学发光剂包括吖啶酯类、过氧化物酶和碱性磷酸酶等。该方法具有灵敏度高、特异性强等优点，但存在化学反应的不稳定性等问题。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]生物发光标记[/font][font=宋体]生物发光标记是将生物发光物质与抗体结合，利用生物发光产生的光信号实现对抗体及其所识别的抗原的检测和定量。常用的生物发光物质包括萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶等。该方法具有灵敏度高、特异性强等优点，但存在生物发光的不稳定性等问题。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]三、抗体标记技术的应用[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫组化染色[/font][font=宋体]免疫组化染色是一种用于检测组织中特定抗原的定位和定量技术。通过抗体标记技术将特异性抗体与组织中的抗原结合，再利用组织化学方法显示抗原的位置和分布。该技术可用于诊断疾病、研究组织结构和功能等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]流式细胞术[/font][font=宋体]流式细胞术是一种用于检测细胞表面抗原的表达水平的技术。通过抗体标记技术将特异性抗体与细胞表面抗原结合，再利用流式细胞仪对细胞进行计数和分选。该技术可用于研究细胞分化、免疫应答和肿瘤发生等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫沉淀[/font][font=宋体][font=宋体]免疫沉淀是一种用于分离和纯化特异性抗原的技术。通过抗体标记技术将特异性抗体与抗原结合，再利用蛋白[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]或蛋白[/font][font=Calibri]G[/font][font=宋体]等亲和层析方法将抗原与抗体分离。该技术可用于研究抗原的性质、结构和功能等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总之，抗体标记技术是一种广泛应用于生物学、医学及免疫学等领域的重要技术。它通过将特定的标记物与抗体结合，实现对抗体及其所识别的抗原的检测、定位和定量等操作。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]同时义翘神州还可以提供[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation][b]抗体标记服务[/b][/url]，可提供的标记物包括[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]、生物素、荧光基团等。详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]辣根过氧化酶（[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]）是最常见的抗体酶标记类型。[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]上仅有[/font][font=Calibri]6[/font][font=宋体]个赖氨酸，而且它们的修饰并没有较多的影响酶活性。常见的荧光染料有[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]APC[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]PerCP[/font][font=宋体]等，均可用于标记抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]辣根过氧化物酶标记二抗通常用于如免疫印迹、酶联免疫吸附试验以及免疫组织化学等应用。无论在化学发光法中、在比色法中还是在荧光法中，[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]标记二抗需要结合高信噪比的底物。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]除了为客户提供抗体开发，义翘神州还可以提供抗体标记服务，可提供的标记物包括[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]、生物素、荧光基团等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]常见的抗体标记方法[/b][/font][font=宋体]和所有蛋白质一样，抗体也是由氨基酸组成的。理论上，通过大多数氨基酸可以实现生物偶联。以下内容介绍了几种基于赖氨酸残基的抗体偶联和标记技术。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①[/font][font=宋体][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]（琥珀酰亚胺）酯法[/font][/font][font=宋体]应用广泛的荧光染料（如罗丹明衍生物）是采用这种方法对抗体进行偶联。通常在磷酸盐缓冲液中进行，随后与未标记的染料在柱上进行分离。该方法的主要缺点是，由于酯类对水分敏感，酯类的稳定性差。因此，反应结束后，标记抗体应立即使用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]吉妥珠单抗（[/font][font=Calibri]Gemtuzumab ozogamicin, Mylotarg[/font][font=宋体]）是全球范围内首个获批上市的抗体偶联药物（[/font][font=Calibri]ADC[/font][font=宋体]）。半合成的卡奇霉素衍生物具有[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]酯，以便将卡奇霉素与人源化[/font][font=Calibri]IgG4[/font][font=宋体]的赖氨酸残基偶联。然而，由于患者的临床获益不足，[/font][font=Calibri]Mylotarg[/font][font=宋体]已于[/font][font=Calibri]2010[/font][font=宋体]年退市。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②[/font][font=宋体]异硫氰酸盐法[/font][font=宋体][font=宋体]这种方法主要用于异硫氰酸荧光素（[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]）染料的偶联，广泛用于荧光标记蛋白和抗体的制备。异硫氰酸盐比[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]更稳定，但也更难制备，而且利用该方法，标记的反应效率可能会降低。与[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]法一样，应在反应结束后通过层析法去除多余染料。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③[/font][font=宋体]碳二亚胺法[/font][font=宋体][font=宋体]碳二亚胺衍生化合物将蛋白质上的羧基转换为反应中间体，可与赖氨酸发生反应。碳二亚胺的高反应性意味着它们可用于使用相对惰性的材料（如磁性或金颗粒）标记抗体。最常用的碳二亚胺为[/font][font=Calibri]EDC[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]有时可被添加至反应中，以辅助产生相对稳定的中间体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]该方法操作简单，但与[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]一样，[/font][font=Calibri]EDS[/font][font=宋体]具有吸水性，因此，标记后抗体需立即使用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④[/font][font=宋体]高碘酸盐法[/font][font=宋体][font=宋体]这种方法可用于制备特异性的[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]标记抗体。高碘酸盐通过产生与赖氨酸残基相互作用的醛分子来激活[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]本身只有少量的赖氨酸残基，因此酶聚合的影响不大。[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]和抗体之间的键是可逆的，可通过添加氰基硼氢化钠使其保持稳定。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可关注义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation][b]抗体标记[/b][/url]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation[/font][/font]

稳定同位素标记药物在临床药代动力学研究中的应用 临床药代动力学(Clinical Phamacokinetics)研究提示了众多药物体内命运的奥秘，丰富了人类临床合理用药的知识。无疑对避免药物不良反应的发生、提高药物治疗水平起着重要的指导作用。临床药代动力学研究的关键是能否获得准确的、能反映客观规律的生物样本中药物及其代谢物的浓度（含量），它与所采用检测方法的灵敏度(Sensitivity)、精密度(Precision)、选择性(Selecivity)和专属性(Specficity)等密切相关。体内药物分析有高效液相色谱法(HPLC)、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法(GC)、免疫分析法(IA)、放射同位素示踪法(RIT)、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]-质谱联机法(GC-MS)、液相色谱-质谱联机法([url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url])等。这些方法都有较高的灵敏度和专属性，特别是GC-MS和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]，具有GC、LC分离，MS检测的独特优势，检测限可达pg/ml水平。由于这两种方法的可利用性，近二十年来，稳定同位素标记(Stable isotope-labelling，SIL)示踪技术有临床药代动力学研究领域中得到了较大发展，本文综述了稳定同位素标记物应用于临床药代动力学研究的原理和方法。1 稳定同位素及其标记物的有关知识1.1 同位素化学简介同位素为相同化学元素的原子，由于在原子核中存在不同的中子数而具有不同的质量，有轻、重同位素之分。根据物理特性，又将同位素分为放射性和稳定性两种形式。放射性同位素(radioactive isotope)如：3H、14C经历着自身的衰变过程，并放射出辐射能，是不稳定的，具有物理半衰期。尽管放射性同位素仍应用于生物样本分析中(放免分析)，但由于它的辐射作用能对人体产生潜在的不良作用，其应用受到严格的限制，常用于放射治疗医学和影像医学中。稳定性同位素(stable isotope)无放射性，物理性质稳定，以一定比例存在于自然界，对人体无害，可采取化学合成的方法将其标记到药物分中去，在生物样本中的标记药物和未标记药物的浓度可运用GC-MS或[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]方法同时被检测。常用的稳定同位素有2H、13C、15N和18O四种(见Tab)。表中天然丰度(natural abundance)表示稳定同位素存在于自然中的百分比值。以碳元素为例，稳定同位素有12C和13C两种形式，分别占总额含量的98.893%和1.107%(共100%)。在各药物分子中，碳原子均以上两种同位素的比例自然存在。每一种有机物都是由不同同位素核素(Nulide)组成的混合分子。如维拉帕米的分子式为C27H38N2O4，分子量为454，而以各稳定同位素存在的平均分了量为454.27。在药物分子中，1个天然13C原子的存在，分子量就为455，因此，应用MS检测药物时，在质荷比(m/e)为455处会出现同位素族峰，其强度与分子中含该元素的原子数目及其重同位素的天然丰度密切相关。对某一有机化合物CWHXNYOZ而言，由重同位素天然存在引起的M+1(分子量+1)和M+2峰的相对强度可下式计算：(M+1)峰相对强度(%)=(1.1×W)+(0.015×X)+(0.037×Y)+(0.09×Z)(M+2)峰相对强度(%)=(1.1×W)2×(0.2×Z)/200如果将药物同重同位素13C、15N或2H(deuteriun，记作d量标记，则在M+1处会出现很强的标记药物峰，用GC-MS法能同时检测标记药物就是依赖它们之间存在的干扰，(即：M+1质荷比处检测标记药物的同位素峰共同贡献)。这种测试干扰可通过同位素分布计算方法来消除。避免同位素族峰干扰的最好方法是标记三个以上的原子(如标记三个氢原子，记作d3)，使标记药物的质量差≥3，此时，同位素峰干扰会很小，或不存在。另一个应予考虑的是用何种重同位素标记和标记位置问题，主要取决于药物的结构特征和体内代谢性质。标记物和未标记物的药代动力学及蛋白结合率等性质必须基本相同，不能存在同位素效应(见1.3部分)，所标记的部位不能放在该药代谢失活的重要位置或药物作用功能基上。因此，运用该技术之前必须对所研究药物的体内代谢特征及在MS上电离碎片式等知识有所认识和了解。1.2 使用安全性自1927年Ason等人首次发现同位素以来，药理、毒理学研究者对其毒性、致畸及致突变反应进行了探讨。小鼠体内13C含量增加到总碳含量的15%-20%，未观察到致畸反应。用于饲养小鼠的水及空气中的氧90%以18()取代，观察三代也未出现毒性和致畸反应。仅在体内有高含量的2H时(占体重的15%)会对哺乳动物产生显著性毒性。人体主要由氢、碳、氮、氧元素组成，以70kg人体重量计，大约含重同位素270g，人体内所含的及每天摄取的稳定重同位素的量远大于用标记药物试验的投药量(见Tab)，给予常剂量的稳定同位素标记药物进行人体实验是很安全的。Tab.Stalbe isotopes commonly utilized in pharmacokinetic studies　 Natural Body Normal Drug study Isotopes Abundance Content Daily Intake Intake* 　 (%) (mg/kg) (mg/kg) (mg/kg) 2H 0.015 15 6.93 0.049 13C 1.107 1980 99.90 0.106 15N 0.366 111 0.15 0.122 18O 0.204 1300 133.40 0.147 * Calculations based on a molecule with average molecular weight of 350 containing six atoms of deuterium or two atoms of other isotoped.Total dose is 100mg per 70kg human subjects

GB/T38608-2020《油墨中可挥发性有机化合物（VOCs）含量的测定方法》中附录B，B.3.4中提到标记物

很多人都在说对生物质谱的不了解，刚在安捷伦的网站看到一些研究论文集，转载过来，方便大家看看质谱在生物方面的应用，便于大家了解生物质谱。我不是要打广告噢！仅仅是觉得这些实例更方便大家理解而已。欢迎大家贡献自己的资料，供版友学习！

有一个化合物，它的某几个碳原子被13C标记，那么它跟没标记的该物质比，氢谱、碳谱有什么差别，能根据NMR确定是哪几个碳被标记了吗？