酶底物法大肠菌群检测

不知道各位现在使用的是什么方法检测大肠总大肠菌群、粪大肠菌群（耐热大肠菌群）及大肠埃希氏菌，还是传统的多管发酵还是滤膜法呢，下面我为大家推荐一种新的方法——酶底物法。水质大肠菌群酶底物法检测系统：由LK-2014程控定量封口机、51或97孔定量检测盘、100mL定量瓶、酶底物检测试剂四部分组成。检测水样范围:饮用水、源水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、废水、食品水、畜牧用水、医疗用水等。该检测方法采用大肠杆菌产生β-半乳糖苷酶分解色源底物-ONPG(Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside) 使培养液呈黄色。大肠埃希氏菌产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4 - methyl-umbelliferyl-β-glucuronide）使培养液在波长366 nm 紫外光下产生荧光的原理,来定性定量水中总大肠菌群、粪大肠菌群（耐热大肠菌群）及大肠埃希氏菌。序号指标名称技术指标1名称程控定量封口机2用途用于GB5750-2006酶底物法检测水质总大肠菌群、大肠埃希氏菌，粪大肠菌群3可靠性无漏液,无破孔4稳定性可检测40,000个样品以上，使用寿命大于5年5方便性开/关及退格键有定量数显窗口,有保洁窗口6快捷性无需无菌室,24h检测水中总大肠菌群\大肠埃希氏菌\耐热大肠菌群7重量≤16kg8尺寸39cm 长 X 27cm 宽 X 30cm 高9预热时间≤14min10噪音50dba11外罩温度40oC12封口速度 13工作电压AC 220V±10％,50HZ14封口速度51孔、97孔定量检测盘封口时间≤12秒/个15工作环境温度-10oC-50oC16检测范围配合51孔定量检测盘检测范围0-200MPN/100ml(水样不稀释）配合97孔定量检测盘检测范围0-2419MPN/100ml(水样不稀释） 该检测方法是国际上发达国家普遍采用的检测方法,相比我国标准的检测方法,如多管发酵及滤膜法具简便快捷，其选择性培养基具有抑制杂菌的作用，假阳性低，定量准确。由于该方法的方便快速，在实验室日常检测中能提高效率，缩短检测时间，在应急监测中能及时报出数据，避免造成大的公共安全事故。

环境标准《水质 总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法》已编制完成，目前开始征求意见，附件是该标准的征求意见稿。

小编为你解忧，采用酶底物法对地表水水样进行不同倍数的稀释后进行培养检测,观察地表水结果变化。结果表明:地表水水样稀释倍数越小,结果越准确。采用酶底物法测定地表水中的粪大肠菌群具有快速、简便的特点,准确掌握水样稀释倍数对测定结果就越准确。【工作原理】加入含有总大肠菌群细菌的水样，放入程控定量封口机中，目标细菌在Minimal Medium ONPG-MUG培养基中36℃培养，总大肠菌群细菌产生的特异性生物酶β一半乳糖苷酶能分解MinimalMedium ONPG-MUG培养基中的色源底物ONPG,使培养呈现黄色；同时水样中大肠埃希氏菌产生特异性的β一葡萄糖醛酸酶分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的荧光底物MUG，产生特征性荧光。同样原理，耐热大肠菌群(粪大肠菌群)在44.5℃培养时会分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的色源底物ONPG，使培养基呈现黄色。程控定量封口机9900Z SEALER PLUS:智能程控定量封口机配合51孔定量盘或97孔定量盘提供简单、快速、准确的定量检测总大肠菌群、大肠埃希氏菌、粪（耐热）大肠菌群、肠球菌和绿脓假单胞菌的实验方案。捷骋牌51孔定量盘和97孔定量盘是基于传统方法最大可能数 (MPN) 统计模型而设计的半自动定量方法。· 通过9900Z sealer PLUS程控定量封口机自动将样品／试剂混合液分配到独立孔中。· 培养结束后，阳性孔数可以转化为 MPN 值。· 51孔定量盘可检测每 100 mL 水样中 1-200MPN 值。· 97孔定量盘可检测每 100 mL 水样中1-2,419 MPN 值。· 整个检测过程手工操作时间小于 1 分钟。【使用方法】定性测试：第一步、在100ml水样中加入试剂，溶解，36℃培养24h；第二步、结果判读 无色=阴性 黄色=总大肠菌群阳性 黄色+荧光=大肠埃希氏菌群阳性注：耐热大肠群菌（粪大肠菌群）需44.5℃培养24h后，观察黄色为阳性定量检测第一步、在100ml水样中加入试剂，溶解；第二步、倒入51孔定量检测盘（定量孔板）或97孔定量检测盘（定量孔板）中；第三步、用程控定量封口机对定量检测盘（定量孔板）进行封装，36 ℃培养24h；第四步、51孔定量检测盘（定量孔板）结果判读： 无色=阴性 黄色格子=总大肠菌群阳性黄色+荧光格子=大肠埃希氏菌群阳性查对照MPN表计数注：耐热大肠群菌（粪大肠菌群）需44.5℃培养24h后，观察黄色格子为阳性结果，查对照MPN表计数。97孔定量检测盘（定量孔板）结果判读无色=阴性 黄色格子=总大肠菌群阳性黄色+荧光格子=大肠埃希氏菌群阳性查对照MPN表计数注：耐热大肠群菌（粪大肠菌群）需44.5℃培养24h后，观察黄色格子为阳性结果，查对照MPN表计数

粪大肠菌群，需用酶底物法的标准，国标、行标或是ＥＰＡ均可

环境水体粪大肠菌群用酶底物法和纸片法测量，结果相差较大。请问有比较过的吗？原因是什么？

做水质检测时,用滤膜法同时检测总大肠菌群及耐热大肠菌群时,为什么总大肠菌群没有生长,而耐热大肠菌群却生长很多,这是什么原因

求电子版NY/T 1665-2008 畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法。谢谢！

检测大肠菌群时，待检样品接种乳糖胆盐发酵管，经培养如不产气，则大肠菌群()。 A、阳性 B、阴性 C、需进一步试验 D、需接种伊红美兰平板

[align=left]为贯彻《中华人民共和国环境保护法》，保护生态环境，保障人体健康，规范生态环境监测工作，现批准《水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法》等五项标准为国家环境保护标准，并予发布。[/align][color=#000000][/color][align=left]　　标准名称、编号如下。[/align][color=#000000][/color][align=left]　　一、[url=http://kjs.mee.gov.cn/hjbhbz/bzwb/jcffbz/201901/t20190104_688590.shtml]《水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法》（HJ 347.1-2018）；[/url][/align][color=#000000][/color][align=left]　　二、[url=http://kjs.mee.gov.cn/hjbhbz/bzwb/jcffbz/201901/t20190104_688592.shtml]《水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法》（HJ 347.2-2018）；[/url][/align][color=#000000][/color][align=left]　　三、[url=http://kjs.mee.gov.cn/hjbhbz/bzwb/jcffbz/201901/t20190104_688594.shtml]《水质 细菌总数的测定 平皿计数法》（HJ 1000-2018）；[/url][/align][color=#000000][/color][align=left]　　四、[url=http://kjs.mee.gov.cn/hjbhbz/bzwb/jcffbz/201901/t20190104_688595.shtml]《水质 总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法》（HJ 1001-2018）；[/url][/align][color=#000000][/color][align=left]　　五、[url=http://kjs.mee.gov.cn/hjbhbz/bzwb/jcffbz/201901/t20190104_688596.shtml]《水质 丁基黄原酸的测定 液相色谱-三重四极杆串联质谱法》（HJ 1002-2018）。[/url][/align][color=#000000][/color][align=left]　　以上标准自2019年6月1日起实施，由中国环境出版集团出版，标准内容可在生态环境部网站（kjs.mee.gov.cn/hjbhbz/）查询。[/align][color=#000000][/color][align=left]　　自以上标准实施之日起，《水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法和滤膜法（试行）》（HJ/T 347-2007）废止。[/align][color=#000000][/color][align=left]　　特此公告。[/align][color=#000000][/color][align=right]　　生态环境部[/align][color=#000000][/color][align=right]　　2018年12月26日[/align]

检测粪大肠菌群时，如EC肉汤管产气者，将产气的EC肉汤管分别接种()，然后置培养箱内培养。 A、乳糖发酵管 B、伊红美兰琼脂平板 C、蛋白胨水 D、葡萄糖发酵管

做废水中粪大肠的检测，初发酵用10^(-1)、10^(-2)、10^(-3)的取样量，可以用总大肠菌群测试盒来做初发酵吗？

我们实验室是做水质检测的 跪求粪大肠菌群检测的质控措施及质控指标，多管发酵法检测。谢谢

做水质微生物检测，耐热大肠菌群滤膜法，总大肠菌群15管法，滤膜法需要做空白对照吗？滤膜法的空白怎么做，是直接拿张煮沸过滤膜贴在培养基上放入培养？15管法的空白，是直接同步把未经接种的15管培养基放入培养吗？用的是GB5749的检测方法，看标准里，这两个指标是没要求做空白的。老手们帮忙指导下，谢谢

关于大肠菌群检测方法，2010版国标规定有月桂基硫酸盐以蛋白胨肉汤还有平板计数法，有MPN和CFU两个单位，也可以用测试片做样品，现在国家审核，要求以CFU计数么？

1、按照网络上的资料CJ/T 51-2018《城镇污水水质标准检验方法》，但明确的文本却是找不到下载链接，是不是还在征求意见？2、该标准上的指标是耐热大肠菌群，HJ/T 347-2007的指标是粪大肠菌群，两者是不是同一种东西？3、网络上有按照iso 9308说法，从培养温度和时间上均和粪大肠菌群有相同之处，是不是就可以认为两者是同样的？见下表[table=693][tr][td=1,1,67]ISO 9308-2：1990（E）[/td][td=1,1,252]能在液体乳糖培养基中35±0.5℃或37±0.5℃培养，48h内能产酸产气，并在44±0.25℃或44.5±0.25℃培养24h内产酸产气的细菌[/td][td=1,1,78]水（MPN法）[/td][/tr][/table]因为我们的质量管理对耐热粪大肠菌群和粪大肠菌群的字眼上比较较真，我们在选择申请计量认证的时候，要核对排放标准或者产品标准的文字，哪位朋友手上有ISO 9308-2：1990或者更高版本的标准，方便的话传上来看看，谢谢。

各位前辈，5750.12生活饮用水，5749标准中，是说如果没有检测出总大肠菌群，就不用检测耐热大肠菌群，还是说没有检测出总大肠菌群，耐热大肠菌群和大肠埃希氏菌需要检测一个呢，刚接触微生物这块，有点懵，求指教[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/12/201912212149135475_48_3892805_3.png[/img]

因为已经新的标准06的强制推行，每日必检项目中有细菌总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群等项目，因为我们实验室比较小，建立超净实验室要单独隔出超净实验室、缓冲间和准备室比较困难，那么应对标准我们能不能用超净工作台来代替超净实验室呢？怎么样才能满足检测标准？因为我们建立的仅仅是日检9项的实验室，所以地方不大，条件有限。

我是做水质检测的，想请教有经验人士，粪大肠菌群用多管发酵法检测的有什么质控措施？谢谢赐教

水中总大肠菌群、粪大肠菌群的快速测定本方法适用于医院污水、生活污水、垃圾渗滤液，以及其他行业(如餐饮业、食品加工等)排入地表水中的污水，快速测定总大肠菌群或粪大肠菌群。1．方法原理应用灭菌的滤纸吸收选择性培养基，细菌通过滤纸纤维膨胀而被固定并生长繁殖，大肠菌群在发育时伴随产生琥珀酸脱氢酶将纸片上的TTC(红四碳唑)还原成不可逆的甲臜(Formazane)产生红色色素，即大肠菌在纸片培养基上呈红色菌落，菌落周围产生黄圈是大肠菌分解乳糖产酸使指示剂变色的结果。2．水样采集用采水器或其他灭菌器采集水样500ml放入灭菌瓶内，如果是经加氯处理的废水，需加1．5％硫代硫酸钠5ml除去余氯。3．方法和步骤 每份预监测水样，接种水样总量为55．5ml，分别接种大纸片五张，小纸片10张。每张大纸片接种10ml水样，五张小纸片每张接种1ml，另五张小纸片接种1：10稀释的水样lml。接种水样时要均匀涂布于纸片上，用手轻轻压平，作好标记于铺有湿纱布的搪瓷盘中。测总大肠菌群37℃±l℃培养18～24h观察结果，测粪大肠菌群44．5℃±l℃培养18～24h，观察结果。4．判定标准①纸片上出现紫红色菌落，周围有黄圈者为阳性或出现片状红晕周围为黄地者亦为强阳性。②纸片为一种颜色而无菌落生长者为阴性。③纸片呈紫红色或紫色，菌落周围无黄圈者为阴性。④酸性水样接种后纸片变黄，经培养无紫红色菌落者为阴性。⑤纸片变色并呈不典型菌落结果可疑者，应作复发酵进行验证。5．报告结果根据阳性纸片张数，查MPN值表(如水样污染较重可采取适当稀释后接种，查表5-2-10 MPN表后乘以稀释倍数，报出结果)，报出1L水中大肠菌群或粪大肠菌群数。

想请问一下，检测水质的粪大肠菌群一般是如何看用多管发酵法还是滤膜法的？

做海水大肠杆菌的检测，可是只找到了粪大肠菌群的检测。三种检测方法有什么不一样的？好多文献大肠杆菌用的就是总大肠菌群的检测方法，不知对结果会有多少影响

水质中的粪大肠菌群检测初发酵不产气不产酸，那阴阳对照还要继续往下做进行复发酵试验吗？

有做过海水1.发酵法和滤膜发的粪大肠菌群检测吗，最近在做海水微生物的扩项，要买菌株做阴阳性对照吗？有没有做过的请教一下

遇见这样一个情况，菌落总数检测结果（CFU/g）数值低于大肠菌群检测结果（MPN/100g），也查了论坛的帖子有相关讨论，但没有最终结论，各持不意见。想知道菌落总数与大肠菌群之间是不是正比关系，菌落总数包不包括大肠菌群另求一篇文献，不知哪位同志有没？

总大肠菌群是指受人、畜粪污染程度，那检测自来水时会因为自身操作导致最后结果出现总大肠菌群吗？

大肠菌群检测中的接种量怎么理解

请问大家，我需要检测 粪大肠菌群 大肠菌群 菌落总数 这些微生物指标，作为检测机构的话相应的实验室条件需要哪些呢？比如洁净室的级别，环境温湿度，及其他硬件设施呢？

大肠菌群报告酱腌菜中大肠菌群的标准是≤30MPN/100g，我们在国标中检测大肠菌群是报告MPN值，那么在报告MPN/100g时，是不是只要将MPN值直接除以100呢？ 还是说在其中报告的时候还有其他换算方法的？

最近看到环保部出了《水质 总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法》（HJ 1001-2018），今年6月实施。我们实验室想更换使用这个新的方法，目前实验室资质认定的已有的项目是《水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法》（HJ/T 347-2007），请问这种情况是去申请方法变更还是扩项呢？