靶基因序列分析鉴定细菌和真菌的解释标准

[font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#05073b]　　真菌毒素检测仪检定规程介绍，真菌毒素检测仪检定规程是为了确保真菌毒素检测仪在正常使用之前和期间，其基本性能指标能够满足规定的要求，从而保证检测结果的准确性和可靠性。以下是关于真菌毒素检测仪检定规程的详细介绍：　　一、检定前准备　　检定仪器应按照制造厂家提供的操作手册进行检查、清洁和校准，确保仪器的正常运转、精度和稳定性。　　检定仪器需进行零点、灵敏度和漂移校正测试，以确保仪器能够准确测量真菌毒素的含量。　　检定仪器需采用标准物质进行检定测试，标准物质应符合国家相关检测标准的要求。　　检定仪器需进行空白对照测试，以排除环境中可能存在的其他干扰因素对检定结果的影响。　　二、检定过程　　检定仪器应按照操作手册要求进行测试或标定，确保仪器的灵敏度、准确性和稳定性。　　检定过程中，仪器应与检定程序保持一致，同时应注意仪器的运转状态和数据记录。　　检定结束后，需记录检定结果，并对其进行数据处理和分析，计算出检定仪器的测量误差范围。　　三、检定结果验收　　检定结果需进行数据分析，并结合实际检测情况进行判断，判定检定结果是否符合国家相关检测标准的要求。　　如检定结果符合检测标准的要求，则可以确认检定仪器的指标合格。　　如检定结果不符合检测标准的要求，则需针对检定结果进行数据分析和原因排查，并对检定仪器进行维修和调整。　　四、检定后维护　　检定后需对检定仪器进行清洁、维护和保养，保证仪器的正常运转和使用寿命。　　检定记录需进行保存，以备后续参考和比对，同时需定期对记录进行审核和更新。　　检定后需及时反馈相关问题和意见，以完善检定工作和提高检定质量。　　五、检定规程内容概述　　范围：明确规程适用于哪些类型的真菌毒素检测仪，以及不适用的范围。　　检定项目：包括仪器的基本性能、准确性、重复性、线性范围、稳定性等。　　检定方法：详细描述每个检定项目的具体操作方法、使用的工具或试剂、以及合格标准。　　检定周期：根据仪器的使用情况和关键性能指标，制定合理的检定周期。　　记录与报告：明确记录检定结果的要求，以及编写和提交检定报告的格式和内容。　　不合格处理：制定在检定过程中发现不合格时的处理措施，包括暂停使用、维修或更换等。　　培训与监督：对负责进行检定的人员进行培训，确保他们具备相应的技能和知识。同时，建立监督机制，以确保规程得到正确执行。　　通过以上规程的介绍，可以确保真菌毒素检测仪的检定过程规范、准确，从而保障食品安全和公众健康。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/06/202406201022152531_9846_6098850_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/color][/size][/font]

适用于细菌、真菌和霉菌的快速检测仪器，求推荐！

作为科研生产中最重要的基础性资源—菌毒种,其收集、保藏及相关的研究工作在我国正处于整理、整合以及全方面逐步正规化阶段.2003年7月23日,科技部在北京召开了“国家科技基础条件平台建设”部际联席会和专家顾问组成立大会,正式启动了国家科技基础条件平台建设工作.国家自然科技资源共享平台建设作为其中的一个重要组成部分同步启动.作为该项8的一个重要组成部分,微生物菌种资源整理、整合工作同期启动,在此项工作中,中国兽医药品监察所承担了兽医微生物资源整理、整合工作.本所在行业内发展了数家加盟单位,在整理、整合菌种资源的过程中遇到了一些实验室细菌鉴定结果出现偏差的问题.经分析调查,多是由于实验室人员结构以及实验室的硬件水平差别较大等原因,造成实验室间鉴定能力的参差不齐,致使鉴定项目完成情况不尽相同,细菌鉴定结果出现偏差. 细菌鉴定是指将分离培养获得的病原菌,通过纯化培养使其达到不含有其他微生物的纯培养程度,继而进行系统鉴定.而菌种保藏机构在收集一些已经冻干的菌种时,应在开启后经过两代的适应性培养方可进行复核性的系统鉴定.系统鉴定是通过细菌的形态结构、生长特性、抗原性、病原性以及目前流行的核酸测定方法等检测,并用已知标准免疫血清确定分离细菌的属、种和型(群).目前菌种保藏机构通常使用的细菌鉴定方法大致有以下几种:

ScienceNow：基因改造细菌可能有助于对抗地球变暖作者：towersimper 来源：生物谷 2012-2-27 22:12:05 1 21.join('');function a();if(/Firefox/.test(navigator.userAgent))else})(screen,document,encodeURIComponent));][url=javascript:(function(){window.open('http://v.t.qq.com/share/share.php?title='+encodeURIComponent(document.title)+'&url='+encodeURIComponent(location.href)+'&source=bookmark','_blank','width=610,height=350');})()][align=center][img]http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201202/2012022723292953.jpg[/img]在无菌溶液中形成的碳酸钙往往是无定形的和黑色的(左边)，但是在细菌存在下，细菌促进碳酸钙产生方解石晶体(右边)。图片来自 Jenny Cappuccio/Lawrence Berkeley National Laboratory。[/align]当人类通过释放二氧化碳(carbon dioxide, CO[sub]2[/sub])到大气而导致地球变暖时，一些研究人员相信捕获CO[sub]2[/sub]并将它封存在掩埋的岩石中能够降低产生灾难性气候变化的风险。如今，一个研究小组证实细菌能够促进这种捕获过程。而且经基因修饰后，它们甚至能够更快地捕获CO[sub]2[/sub]，让它保存在地下上百万年。当CO[sub]2[/sub]被注入到地下多孔岩石时，它与填充岩石孔的盐水中的金属离子结合在一起而发生矿化产生碳酸盐矿物，如碳酸钙(calcium carbonate, CaCO[sub]3[/sub])。这一过程需要上千年的时间。为了研究人们是否能够加速这种矿化作用，生化学家Jenny Cappuccio和来自劳伦斯-伯克利国家实验室地质CO[sub]2[/sub][url=http://www.bioon.com/Search.asp?Field=Title&ClassID=&keyword=纳米]纳米控制中心(Lawrence Berkeley National Laboratory's Center for Nanoscale Control of Geologic CO[sub]2[/sub])的同事们在实验室氯化钙溶液中加入很多种常见细菌物种的混合物，然后往里注入CO[sub]2[/sub]。他们发现相对于无菌溶液，含细菌的溶液中碳酸钙形成速度更快，而且当溶液存在细菌时，产生的碳酸钙形成一种不同的矿物结构：它倾向于生长为白色方解石(white calcite)晶体而不是无定形黑块(amorphous black lump)，如图所示。即便是当细菌无所事事，即处于不生长和增殖的状态，它们也促进方解石形成。研究小组对此感到好奇并猜测细菌表面在一定程度上有助于CO[sub]2[/sub]与钙离子结合在一起。为了测试这种观点，他们决定修饰其中一种细菌物种，即弧形茎菌([i]Caulobacter vibrioides[/i])，从而使得它的表面将钙离子吸引过来，然后观察接下来会发生什么。Cappuccio和同事们将一段编码一个六谷氨酸环(a loop of six glutamic acids)的短DNA序列插入到弧形茎菌中。这种环从细菌表面蛋白中伸出来并且在整个细菌表面按照六边形图案发生重复。每个六谷氨酸环含有六个负电荷。研究小组推想这种“负电荷环(negative loop)”能够巧妙地围绕在水中正电荷钙离子周围，从而将钙离子吸引到细菌表面并促使它们形成碳酸钙。它确实如此。当研究人员注入CO[sub]2[/sub]到基因修饰的细菌生活的水槽时，形成的碳酸钙数量要比同等条件下未修饰的细菌存在的水槽中更多。更重要的是，大多数的碳酸钙是以方解石晶体形式存在，而且鉴于方解石晶体要比无定形碳酸钙更加稳定，它也就可能在以地质时间衡量的长时间范围内封存CO[sub]2[/sub]。2012年2月26日，Cappuccio在美国加州圣地亚哥市召开的生物物理协会[url=http://www.bioevent.cn/]会议中报道了他们的研究结果。来自美国波兹曼市蒙大纳州立大学的生物工程师Robin Gerlach(未参与该项研究)，称赞这项研究“至关重要”。他期待它有着广泛的应用，包括稳定洪水区水土，分离放射性同位素以及通过追踪碳酸盐矿化来鉴定化石记录中的早期生命。但是Cappuccio是最先承认这些研究结果还需要在更接近实际环境的条件下进行验证。她想在更接近于可能在地下发现的更高压力、更高温度和更低pH条件下测试这种经过基因修饰的细菌。最终，她领导的研究小组想修饰更难培养的嗜极端菌(extremophile)，因为它们是生长在非常热的高温环境下的细菌，更可能类似于在地下岩石中形成菌落的微生物，而地下岩石正是封存CO[sub]2[/sub]的地方。([url=http://www.bioon.com/]生物谷：towersimper编译)本文译自[i]ScienceNow[/i], Kim Krieger , "Genetically Engineered Bacteria Could Help Fight Climate Change", 26 February 2012, 12:00 PM.

[font=SimSun, STSong, &]请问除了酵母菌抽提物之外，还有哪些细菌和真菌的抽提物可以应用于食品[/font]

原标题：科学家利用基因组序列设计新药 科技日报讯（记者常丽君）据物理学家组织网2月10日（北京时间）报道，来自美国弗罗里达大学斯克里普斯研究所（TSRI）的科学家称，他们开发出一种很有潜力的通用方法，可通过基因组序列来设计新药，并利用这种方法识别出一种高效化合物，其能让癌细胞攻击自身并最终死亡。相关论文在线发表于2月9日的《自然·化学生物学》。 “这还是第一次只凭借一个RNA序列，就理性地设计出治疗性小分子。许多人可能怀疑这一点。”负责该研究的斯克里普斯研究所副教授马修·迪斯尼说，“我们证明了这种方法能以前所未有的精确性瞄准一个致癌RNA。” 迪斯尼的实验室一直在开发能掌控药物与RNA折叠结合的方法，尤其是对microRNA（微RNA）的控制。微RNA上世纪90年代才被发现，是一种存在于所有动植物细胞中的短分子。通常，每个微RNA作为一个或多个基因的“光控开关”，与这些基因的转录结合并有效防止它们转录成蛋白质。以这种方式，微RNA调节着各种各样的细胞过程。有些微RNA与疾病相关，比如MiR-96，能阻碍凋亡过程或编程细胞的死亡，使细胞生长失控而促发癌症。 研究人员将他们的方法称为信息RNA。这是一种计算技术，通过计算能找到针对疾病相关基因组序列的信息，以及所有瞄准该序列的细胞RNA，再通过细胞RNA找到针对性药物。这些药物RNA序列能针对性地与数以千计的细胞RNA序列相互左右，而对其他序列没有影响。 利用信息RNA，他们识别出了瞄准MiR-96的化合物，以及瞄准其他20多种疾病相关微RNA的化合物。研究显示，抑制MiR-96的候选药物能抑制癌细胞生长，而且那些没有功能性MiR-96的细胞不会受到药物影响。 “这说明该方法在药物选择方面具有前所未有的精确性。”迪斯尼说。他还指出，新的候选药很容易生产，具有细胞渗透性，能专门瞄准MiR-96，针对性远远超过目前最先进的RNA瞄准技术。 “利用我们的程序，能找到高度特化的药物。”论文第一作者、迪斯尼实验室的研究生塞·普拉迪普·维拉盖普蒂说，“我们希望将来能针对其他癌症或任何疾病RNA设计出候选药物。” 总编辑圈点 长期以来，人类用于对付恶性肿瘤的放疗、化疗等方法，都是敌我不分、近乎“自残”的手段——一发炮弹打向战场，虽然杀敌一千，但也自损八百。这种局面，随着近年来靶向治疗的出现，正在发生改变。更精确的瞄准，不仅减少了患者的痛苦，也让打击效果有了保证。本文的研究，可以说是让科学家拿到了一把梦寐以求的狙击枪，不单稳准狠，更是能跟踪打击，认准设定目标，枪枪有准头。话说回来，到底它是不是真这么好使，还得战场上见真章。来源：中国科技网-科技日报 作者：常丽君 2014年02月11日

http://img.ycwb.com/news/attachement/jpg/site2/20101030/90fba60187190e35b72d07.jpg 济南市中心医院病原微生物学实验室培养皿中的细菌济南市中心医院是卫生部确定的全国19个超级细菌监测哨点医院之一。其病原微生物学实验室肩负着监测超级细菌的重任。检测超级细菌需要经过四道程序：工作人员首先将从临床患者感染部位提取的样本放在培养基上接种，然后再送入二氧化碳培养柜中进行18-24个小时的培养。培养出细菌后，进行细菌鉴定和药物敏感性试验，如果发现疑似耐药性反应，就会将其送到“临床基因扩增检验实验室”做基因分析，最快两三天就可以确认是否是超级细菌。

[align=center][b]中国计量院推出新冠病毒全序列假病毒标准物质[/b][size=14px][color=#333333]作者：文：牛春艳 图：龚亮 来源： 中国计量科学研究院 [/color][/size][/align][size=24px] [/size][size=12px] 当前，新冠疫情仍在全球肆虐，国内输入性病例时有发生，疫情防控形式依然严峻。目前核酸检测试剂品牌众多，检测靶标位置、灵敏度不尽相同，为更好地满足新冠核酸检测需求，中国计量院全新推出新型冠状病毒全序列假病毒标准物质（NIM-RM5207）、新型冠状病毒刺突蛋白基因（S）核糖核酸标准物质（NIM-RM5208）和新型冠状病毒B.1.1.7突变株核衣壳蛋白基因（N）核糖核酸标准物质（NIM-RM5209）。[/size][align=center][img=2463c0d7-793a-48f6-9f02-95c727de721a.jpg,800,533]https://www.ncrm.org.cn/Repository/2463c0d7-793a-48f6-9f02-95c727de721a.jpg[/img][/align][size=24px] [/size][size=12px]新型冠状病毒全序列假病毒标准物质NIM-RM5207 包含了100%新型冠状病毒基因组序列，以获得国际等效的数字PCR方法定值，量值包含ORF1ab、E、N、S基因，适用于市场上所有厂家试剂盒，应用于从取样、提取到扩增全流程的方法验证和质量控制等方面，保证测量结果准确。 同时，利用本次研制的全序列的假病毒标准物质（NIM-RM5207）对此前新型冠状病毒核酸检测弱阳性标准物质NIM-RM5205及NIM-RM5206进行了升级，使其成为了覆盖新冠病毒基因全长的假病毒溶液，模拟低病毒载量的临床样本，可参与从取样、提取到扩增全过程，适用于所有厂家试剂盒，应用于日常核酸检测的质量控制。 新型冠状病毒刺突蛋白基因（S）核糖核酸标准物质（NIM-RM5208）为S基因全序列，经体外转录获得纯化的RNA，采用建立的高准确数字PCR方法定值，可作为新冠病毒S基因的测量标准，用于S基因检测方法开发、方法验证等，保证测量结果准确。 新型冠状病毒B.1.1.7突变株核衣壳蛋白基因（N）核糖核酸标准物质（NIM-RM5209）为B.1.1.7突变株N基因全序列，包含了N基因的2个突变（D3L和S235F），采用特异性数字PCR方法定值，可作为新型冠状病毒B.1.1.7突变株N基因的测量标准，用于突变株检测方法开发、方法验证等，保证测量结果准确。 截至目前，中国计量院共开发新冠病毒核酸和免疫等系列标准物质26种，广泛应用于全国27个省市的近600家单位，此次新冠病毒系列标准物质的推出将进一步为提高核酸检测准确性、保障检测结果有效性提供更为有力的计量技术支撑。[/size]

真菌毒素无处不在 真菌毒素的检测方法1 生物鉴定法生物鉴定法利用真菌毒素能够影响微生物、家禽、水生生物等的细胞代谢过程来鉴定真菌毒素的存在，根据对生物体产生的病变、异常或死亡等判定真菌毒素的危害，该方法对样品的纯度要求较低，该方法主要用于定性分析，专一性较差，灵敏度较低，一般只是作为其他分析方法的佐证。2 化学分析方法化学分析方法检测真菌毒素主要包括以下步骤：提取、脱脂、净化、分离和鉴定。早期常用的化学分析方法有薄层层析法（Thin Layer Chromatography, TLC）和柱层层析法（ColumnChromatography,CC）。在20世纪80年代，我国将TLC作为食品及饲料中黄曲霉毒素的标准测定方法（GB/T8381-1987），将样品经提取、净化和浓缩处理后，在薄层层析板上分离后，利用黄曲霉毒素在紫外照射下可发荧光的特性进行检测。张华报道的薄层层析法检测检测霉菌毒素的灵敏度为5μg/kg，方法的结果准确，重现性好，回收率为 85%-100%。用薄层层析方法己分离出黄曲霉毒素、杂色曲霉素、青霉酸和构巢曲霉素等。柱层层析在真菌毒素样品前处理过程中得到了广泛的应用，柱层层折常用的吸附剂有氧化铝、活性炭、硅胶、镁等，将吸附剂填充到管中形成固定相，将样品提取液上柱，用流动相洗脱，利用样品中不同物质在固定相和流动相中分配系数的不同，实现样品中不同物质的分离，进而进行检测。利用亲和力不同的溶剂和不同固定相的组合可以形成不同分离能力的层析柱。基于吸附剂进行前处理的柱层析分离技术对靶标物的选择性不强，近年来，基于免疫亲和层析技术的样品前处理在真菌毒素提取中应用逐渐广泛。免疫亲和柱是将真菌毒素特异性抗体通过一定方式偶联固定在载体基质上，装柱形成微柱，用于样品前处理。其工作原理是样品溶液中的真菌毒素在流经亲和柱时，载体基质上的抗体特异性的捕获样品溶液中的真菌毒素，使真菌毒素得到净化和富集，待上样完成后用高浓度的甲醇、乙腈等溶液洗脱，将真菌毒素释放出来，得到的洗脱液用于检测。3 仪器分析法仪器分析方法是对样品进行一定的提取、净化处理后，借助检测仪器设备对待测靶标物进定性、定量分析的技术。在真菌毒素的检测分析中，常用的方法有高效液相色谱法（HighPerformance Liquid Chromatography, HPLC）、超高效液相色谱法（Ultra HPLC，UHPLC）、高效液相色谱法与质谱联用方法（HPLC-tandem mass Spectrometry， HPLC-MS/MS）、气相色谱与质谱联用法、高效液相毛细管电泳方法等。HPLC 方法是 20 世纪 60 年代末在气相色谱基础上发展起来的一种以液体为流动相的新型谱技术，在真菌毒素的检测中常采用反向色谱法。近年来，在 HPLC 方法的基础上发展起来的UHPLC 和 HPLC-MS/MS 方法比 HPLC 方法具有更高的检测灵敏度和检测通量。基于HPLC 的方法广泛的被国内外实验室和检测机构作为真菌毒素确证性检测方法。我国食品安全国家标准 GB541337-2010 中规定免疫亲和层析净化液相色谱-串联质谱法和免疫亲和层析净化高效液相色谱法分别作为乳和乳制品中 AFM1测定方法。HPLC 方法具有灵敏度高、测定结果准确可靠、特异性好的特点，基于免疫亲和柱前处理的HPLC方法与化学分析方法和生物鉴定法相比，检测时间缩短，对复杂样品的处理能力更强。但是仪器分析方法也有其缺陷，需要使用大量的有机溶剂，依赖大型精密仪器，检测成本高，需要专业的操作人员，不能满足现场快速筛查的需求。4 免疫分析方法免疫分析方法起始于20世纪50 年代，继 60 年代竞争分析原理提出后取得了巨大的进步，成为生物分析的重要手段之一。免疫分析方法从本质上说属于一种特殊形式的试剂分析法，将抗体作为核心分析试剂，基于抗体与抗原的特异性结合反应，对待测靶标物，包括小分子化合物、大分子的酶、蛋白质等，进行定性和定量分析。抗体和抗原反应的典型特点是抗体能特异性识别抗原，并发生结合反应，这种反应是可逆的，抗体与抗原的专一性比一般分析试剂间专一性强。免疫分析技术已广泛的应用于临床分析检测、食品安全检测、环境污染检测领域。免疫分析技术最早出现的是放射免疫分析，由 Berson和 Yallow首次使用，该方法的灵敏度高、特异性好，但是其最大的缺点是分析过程引入放射性核素，对操作人员和环境造成危害和污染。4.1 酶联免疫吸附法酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA）是在免疫酶技术基础上发展起来的免疫分析方法，于 1972 年由 Engvall 首次用碱性磷酸酯酶标记免疫球蛋白用于 IgG 的测定。现已广泛的应用于分析检测领域，检测对象包括疾病诊断中的大分子检测，食品安全检测中的小分子污染物检测。ELISA 方法的原理是将抗原或抗体与酶标记后形成酶标抗原或酶标抗体，既保持抗原、抗体的免疫活性，又具有酶活性，将待测物与酶标记抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面的抗体或抗原反应，洗涤去除未反应结合的物质，最后根据固相载体上酶的量与待测靶标物的对应比例关系进行定量分析。该方法根据反应模式的不同可分为夹心 ELISA 方法和竞争ELISA 方法，夹心 ELISA 方法主要用于检测大分子化合物，竞争 ELISA 方法主要用于检测小分子化合物。真菌毒素属于小分子物质，由于只有一个抗体结合位点，因此在真菌毒素的ELISA检测中常采用竞争分析模式。Wang等人建立了基于多克隆抗体检测AFM1的ELISA快速分析方法，对AFM1和 AFB1的检测灵敏度（IC50值）为分别为 0.014 和 0.02 ng/mL。Zhang等人研制了针对 OTA 的单克隆抗体，并用该抗体建立了间接竞争ELISA 方法测定谷物中的 OTA，方法的检出限为 0.15 ng/mL，灵敏度为 1.7ng/mL，检测范围为 0.55-6.75 ng/mL。Burmistrova 等人建立的基于单克隆抗体的 ELISA 方法在 ZEA 的检测中，检出限为 0.1 ng/mL，灵敏度为。4.2 免疫亲和方法免疫亲和方法主要用于样品的前处理过程中，主要利用抗体对待测物的专一识别特性，对待测物进行净化和浓缩，能够有效的去除样品基质干扰，提高检测灵敏度和准确性。基于免疫亲和柱的色谱分离方法被我国国家标准和国际标准定为真菌毒素检测的标准方法。免疫亲和柱常与其他检测方法联用，Li 等建立了基于免疫亲和柱的 ELISA 方法检测农产品复杂基质中的 OTA，结果表明在 OTA 添加样品检测中，经过免疫亲和柱处理后的 ELISA 检测回收率明显较未经亲和柱处理的方法回收率高。免疫亲和柱不仅可以用于样品前处理，还可直接在亲和柱上进一步反应进行定性或定量分析。Yu 等人基于免疫竞争反应原理建立了在免疫亲和柱上进行可视化检测 AFM1的方法，在样品上样完成后，再从亲和柱底端加入辣根过氧化酶（HRP）标记的 AFM1，洗脱后加入酶底物，进行显色，显色深浅与样品中 AFM1浓度成反比，根据显色深浅判别 AFM1的含量，该方法对 AFM1的灵敏度为 40 ng/L。Yuan等人基于免疫竞争原理，在凝胶上固定抗体后，制成免疫亲和柱，使其竞争性结合氯霉素和 HRP 标记的氯霉素，加入底物后显色，最终实现了对氯霉素的快速检测，方法的检出限为 1 ng/mL。4.3 [color=#0751

按JJG 694中的要求，检定过程中做检出限和线性误差时，用到的铜标准序列是0、0.5、1.0、3.0或0.0、1.0、3.0、5.0中任何的一组。但实际中我们根本用不到这么高的范围，也就是0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0了，那么我们在做期间核查时，可不可以就用我们自己的标准序列？还是必须要按照规程中重新配制一组序列呢？

真菌培养基培养基真菌培养基的成分有碳源、氮源和其他营养物质。葡萄糖提供碳源，硝酸盐、亚硝酸盐、氨、尿素、氨基酸和其他化合物提供氮源。1.普通培养基(1)改良沙氏琼脂、多选择沙氏琼脂(Sabouraud dextrose agar , SDA): 含有放线菌酮和氯霉素，放线菌酮可抑制腐生性真菌(多数可能为条件致病菌)，氯霉素可抑制大多数细菌(并非所有细菌) 。放线菌酮也抑制新型隐球菌、一些念珠菌、烟曲霉等。(2) 马铃薯葡萄糖培养基(potato dextrose agar , PDA) : 天然培养基。(3)脑心浸膏琼脂 临床常用脑心浸膏琼脂(brain-heart infusion agar , BHI) 分离深部真菌、双相真菌如皮炎芽生菌等，也可以在其中加入抗生素和血液制品。(4) 抑制性霉菌琼脂(inhibitory mold agar , IMA ) : 含有氯毒素，可抑制细菌的生长，是用于临床真菌培养标本初次增菌的理想培养基，常用于筛选放线菌酣敏感的真菌，如隐球菌、组织胞浆菌和接合菌等。2. 选择培养基(1)咖啡酸琼脂(CAA) : 用于鉴定新型隐球菌。由于该菌含有靛酚氧化酶，在CAA 培养基中菌落呈黑色。CAA 培养基对光敏感，应避光保存。(2) 鸟食琼脂(BA) : 用于从痰等标本中分离新型隐球菌。新型隐球菌在培养基上产生棕黑色色素，但是其他隐球菌在延长培养时也可产生色素。其他真菌也可在此培养基上生长，但不产生色素。(3) KT 培养基:由吐温、蛋白、烟酸和0.3 %水解酪蛋白氨基酸组成，用于皮炎芽生菌转相(为酵母相)培养时使用。(4) Kelley 琼脂:用于皮炎芽生菌( B. dermatitidis) 转相(为酵母相)时使用。(5) CHROM 琼脂: 念珠菌显色培养基。是一种用于鉴定培养念珠菌的培养基，不同念珠菌在此培养基上生长显不同颜色。

[align=left][b]简介[/b][/align]随着人民生活水平的提高，社会的进步，食品中微生物污染造成的[url=http://www.cnfoodsafety.com/]食品安全[/url]问题也越来越受到广大消费者、食品企业、政府监管部门的关注。食品变质原因90%是由微生物（细菌、真菌等）引起的，在此大环境下，食品加工企业要不断提高企业管理水平，保证所生产出的产品安全合格。[b]真菌[/b]说到真菌，很容易想到细菌，因为它们都能引起食品变质。其实真菌与细菌有本质上的不同，这种差别显示了生物进化历程：显微镜下可见细菌形态单一，呈球状或棒状；真菌形态比细菌复杂，有菌丝、芽胞等结构。所以真菌比细菌更难杀灭。真菌，是一类有细胞壁，不含叶绿素，无根叶茎，以腐生或寄生方式生存，能进行有性或无性繁殖的真核微生物。真菌中最常见的是各类蕈类，另外还有霉菌和酵母。世界上已被描述的真菌约有 1万属12万余种。真菌的危害在食品加工行业中是时时存在的。因为在空气中，水中，原料中都有真菌的孢子存在。遇到适宜的环境，即可繁育。同时，真菌通过产生真菌毒素也给人体健康带来危害。[b]食品生产过程中的真菌[/b]真菌在过去曾称为霉菌，是微生物中的一个大类，是一群数目庞大的细胞生物，估计全世界已有记载的真菌有10万种以上。它们的个头差别很大，小者用显微镜才能见到，大者可达数十厘米，如茯苓、蘑菇等。以食品行业为例，霉菌会造成食品腐败变质，是造成食品工业巨大经济损失的主要腐败微生物。霉菌污染频繁出现在食品、饮料、海产品、肉制品、熟食和新鲜的蔬菜中，每年都会给生产者和消费者造成极大的经济损失。霉菌除了会引起肉眼可见的腐败变质外，还会产生一些真菌毒素类物质，目前研究已经确定有超过200种霉菌在食品中生长时会产生对人体有害的物质，主要有黄曲霉毒素类、串珠镰刀菌素、赫曲霉毒素、棒曲霉素、单端孢煤烯类和玉米赤霉烯酮六大类。由于这些霉素具有致癌致畸形、同时对神经、肝肾也有毒害作用，因此这些腐败真菌给食品工业造成了巨大经济损失，同时也对公众的健康构成了极大危害。据统计，25%的农产品都含有霉菌毒素，在烘烤行业，霉菌造成的损失随着季节、产品种类、加工方法的不同在3%—10%之间浮动。假设仅有1%的损失，在英国每年由霉菌造成的污染的面包就有23000吨，价值2.42亿英镑。在澳大利亚每年由霉菌造成的经济损失大约在1千万美元。在水果行业，水果采摘后的使用杀菌剂的条件下也会有5%—10%的损失，在某些没有使用杀真菌剂的年份，损失达50%甚至更高。[b]食品厂杀灭真菌的方法[/b]食品加工厂生产车间温度、湿度适宜且营养物质丰富，较容易生长繁殖微生物，稍不加注意洁净车间卫生条件，很容易受真菌污染，导致食品腐烂变质。特别是食品厂霉菌因其特性一般的消毒剂很难对付。然而过氧化氢银离子复合型杀菌消毒剂杀孢子剂具有强烈杀灭食品厂真菌的作用，彻底分解不产生耐药性，并且对人健康无害，无色无味，无毒无残留，安全绿色环保，是新一代进口食品级消毒杀菌剂。[b]奥克泰士[/b]奥克泰士是进口德国，专为食品厂设计，奥克泰士配合空间、环境、物表等可达到食品企业消毒灭菌的要求，近来深受食品企业的青睐。奥克泰士杀菌消毒剂是由食品级过氧化氢和银离子组成的复合型溶剂，食品级无色无味无毒无残留型，IFS国际食品标准认证，欧盟EMAS检测认证等。所采用的氧化剂为过氧化氢，它与稳定剂结合形成复合溶液。作为催化剂添加的痕量银离子可以保持长久的效用。银离子的杀菌作用是基于单价银离子通过共价键和配位键来与细菌蛋白质牢固结合，从而使细菌钝化或沉淀。能在食品厂洁净区消毒中迅速杀灭一定空间内的的微生物（包括芽孢）或者抑制微生物繁殖的进口高效消毒剂。德国BUDICH INTERNATIONAL GMBH研制、生产，是目前国际上一款卓越的杀菌消毒剂。由于其独特的作用原理，能够快速杀灭包括芽孢、细菌孢子、真菌孢子、放射菌、分支杆菌、酵母菌、霉菌、病毒在内的所有类型的微生物。做为新一代生态环保的消毒剂在欧美发达国家早已成熟应用。在欧盟食品企业已经完全禁止甲醛的大环境下，奥克泰士是目前众多欧盟食品企业的首选。也代表着过氧化氢银离子复合型杀菌消毒剂发展的新方向。产品技术引进国内短短几年。目前在食品饮料、制药安全、医疗卫生等国内众多高端灭菌领领域顺速推广。奥克泰士己成分中国食品企业杀菌消毒的首选。可用于洁净室空间和生产设备、各类洁净区物表消毒和空间消毒；操作台表面消毒。适用领域包括食品、食品设备、食品企业动态环境、食品企业生产等。也可用于不锈钢、钢、塑料、玻璃、地板、墙壁等各种表面的消毒、灭菌等。[b]奥克泰士特点[/b]1、它能够有效杀灭细菌、病毒、变形虫、真菌及藻类，其十分广泛的应用领域使得用户便于操作处理。只需采用一种产品，便能够达到目前2种、3种甚至多种产品的使用目的。2、由于产品具有良好的稳定性，因此保证了长久的贮藏时间。产品在高水/气温度下仍能保持稳定；甚至在高温下，其效用还会有所增强。3、由于产品在防止再污染方面具有长久的有效性并且性能卓越，因此，产品非常适合用于饮用水与井水的消毒。4、过氧化氢银离子复合型杀菌消毒剂型产品是生态无害的。对防止水受细菌和病毒的再污染特别有效。其主要成分－过氧化氢－不会污染废水。这是由于它会分解成为水和氧气(H[sub]2[/sub]O和O[sub]2[/sub])，即，其副产物不具毒害性。5、两种基本物质（H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]和Ag）进一步促进了各自的优势（*协同作用）。两种物质的协同作用比其中任何一种物质单独作用要具有更快、更强的杀菌作用。*协同作用—两种或多种组份用以提高和增强效用6、过氧化氢银离子复合型杀菌消毒剂为在氧化和微动作用相结合的情况下所制成的两相产品——不同于其它消毒剂——具有破坏生物被膜的功效。这是杀菌消毒的一个重要步骤，因为细菌或病毒会产生出这种生物被膜作为自然防护。由过氧化氢所分离出的氧气会破坏生物被膜，使得银离子能够轻易地杀灭细菌或病毒。

基因组测序和序列的组装，为快速研究该致病菌株的致病机理创造了条件。与此同时华大基因与德国汉堡-Eppendorf医疗中心合作，也宣布完成了对致病菌株的测序工作。Guenther说："在有限的时间里完成了对微生物的全基因组测序，极大的方便了研究者从一个整体的水平上去研究微生物，进而揭示在这些目标微生物的基因组究竟发生了哪些改变。"事实上也的确如此，科学家根据从基因组测序的数据所获得的证据，将本次的致病型大肠杆菌鉴定为致病型大肠杆菌的一个新杂交品种，并且携带了一些抗性基因。"从宏观的基因组水平上来研究这类细菌，将在很大程度上革新我们对传染病暴发的认识，3-4天内完成对某种微生物的全基因组测序及基因标注，将会开启一个新的研究领域。"在新奥尔良召开的美国微生物学会年度会议上，一些研究者指出，分子鉴定的方法正被用来打造基因组传染病学这一领域，基因组传染病学致力于重构传染病暴发的过程，以求在将来能够对传染病能进行实时有效的监控和快速反应。

如何查找特定基因序列的心得与大家共享，下面以小鼠EDNRB基因为例子说明：1. 查找一个基因的启动子之前，最好是要对这个基因做一个初步的了解，了解方法为：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez/上面查找ednrb http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2014/01/A1388735412_small.jpg 注意：在research下面选择 Gene 在for后面输入ednrb2. 这个是查找结果，由于很多哺乳类动物都有该基因，查找结果显示了很多五种的ednrb基因，我们选择其中的Mus musculus 这个是我们要找的小鼠种类，请大家正确选择自己目标基因的动物种类，Rattus norvegicus是大鼠的学名，Mus musculus是小鼠的学名，由于我的目标是小数的ednrb基因，故选择Mus musculus。 http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2014/01/A1388735413_small.jpg 3: 对Official Symbol Ednrb and Name: endothelin receptor type B Other Aliases: AU022549, ET-B, ETB, ETb, Sox10m1, sOther Designations: piebaldChromosome: 14; Location: 14 51.0 cMAnnotation: Chromosome 14, NC_000080.5 (104213843..104242913, complement)GeneID: 13618解释：Official Symbol Ednrb and Name 这个是官方对这个基因的全称，也就是内皮素受体B 这个是该基因编码的蛋白质名称Other Aliases 该基因的别名Chromosome: 14; Location: 14 51.0 cM 说明该基因位于第14条染色体上面Annotation: Chromosome 14, NC_000080.5 (104213843..104242913, complement)GeneID: 13618这个说明基因的碱基分布是104213843到104242913.4. 该基因的具体信息 http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2014/01/A1388735414_small.jpg 5. 下面这个图片是上个图片的下半部分 http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2014/01/A1388735415_small.jpg 6. 以上部分是找到对该基因的基本信息，在最下面Reference assembly (C57BL/6J)上面找到基因具体序列的链接，点击其中的GenBank， ednrb基因碱基的排列就出来了，这里说明 一下，genbank上面给的序列都是与相应mRNA互补的序列，也就是模板链的序列，也就是-（minus strand) 上面的C57BL/6J是得出该序列的小鼠品系，如果大家要做相关实验的话 最好是选择该品系的小鼠或者相应的细胞。 http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2014/01/A1388735416_small.jpg 7. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/viewer.fcgi?val=NC_000080.5&from=104213843&to=104242913&strand=2&dopt=gb 上面是该基因的信息和碱基序列链接，上面有碱基的序列,mRNA 的序列。

很多豆科植物的根细胞能与根瘤菌共生，并由此获得更多营养，提高植株的抗病害能力。那么能不能让其他作物也与根瘤菌共生，为增产创造条件呢？在对此进行尝试时，俄罗斯科研人员通过转基因手段，让烟草、油菜与根瘤菌成功“配对”。根瘤菌在进入豆科植物的根细胞并定居下来后，能与后者协作合成为植株供氧的蛋白，并将游离的氮转变成氮素营养，因此很多豆科植物的种子不仅数量多，而且富含蛋白质。http://pic.biodiscover.com/uploads/b3e3e393c77e35a4a3f3cbd1e429b5dc/article/biodiscover_26d54f184803e74153.jpg可与有益细菌共生的转基因烟草和油菜可否利用这种方式改进其他作物的长势和收成呢？实现这一目标着实不易，因为很多植物的根细胞无法和根瘤菌自然共生。那么能否人工“配对”呢？俄罗斯科学院乌法科学中心的研究人员决定用转基因手段进行尝试。负责这项研究的小组不久前在俄学术刊物《应用生物化学和微生物学》上报告说，研究者将普遍种植的红花烟草和具有重要经济价值的甘蓝型油菜选为实验对象，截取烟草的小块叶片和油菜幼苗的茎部，并为其注入豌豆的一种基因。该基因能指导合成一种植物凝集素，它能与根瘤菌和植物根细胞同时结合，帮助根瘤菌在根细胞中安家落户。在完成上述操作后，研究小组通过培植使烟草叶片边缘和油菜的嫩茎上生成细长的不定根，并让与豌豆共生的根瘤菌和这些不定根亲密接触。实验结果显示，与完全不含特定凝集素基因的烟草和油菜相比，在转基因烟草和油菜根部聚集的根瘤菌的数量分别高出１３倍和３６倍，人工“配对”取得显著进展。目前研究小组正在观察“配对”后的根瘤菌和根细胞如何共同生活，分析这种共生能否改进烟草和油菜的性状。研究小组成员韦尔希尼娜认为，这种转基因研究有望为促进多种经济作物增产提供新途径。

[size=4] 我们对现今应用较为普遍的VITEK-AMS鉴定系统中报告“不能鉴定细菌”(UIO)菌株作了进一步分析，探讨其发生原因、处理方法，以期建立一套切实可行的仪器与手工方法相结合的细菌鉴定方法。[/size][size=4]　　[b]一、材料与方法[/b][/size][size=4]　　1. 仪器与试剂：VITEK-AMS 60型全自动细菌鉴定仪及其配套GNI、GPI、YBC试验卡（生物梅里埃公司产品)。[/size][size=4]　　2. 试验菌株：1 025株本院1999.10.21-2000.3.3临床标本分离的菌株进行了Vitek- AMS鉴定，其中应用GNI 卡631例、GPI卡334例、YBC卡60例。[/size][size=4]　　3.VITEK-AMS鉴定法：根据细菌表型特征，选择相应GNI+、GPI、YBC卡，严格按仪器操作说明进行，孵育后当检验地带网仪器报告结果为UIO时，挑取生长对照孔(GPI卡第1孔、GNI+卡第3孔、YBC卡第24孔)悬液于非选择性培养基上重新分离，观察是否纯培养，若是，分别按同法及以下两法鉴定。否则， 经纯培养后重新上机鉴定。[/size][size=4]　　4. 双歧检索鉴定法：根据Vitek全自动微生物分析系统技术资料提供的双歧检索表，依生化结果检索至属或种。[/size][size=4]　　5. 常规鉴定法：按照全国临床检验操作规程［1］进行，并经API系统(生物梅里埃公司) 复核鉴定至种。部分菌株鉴定依据文献［2］进行。 [/size][size=4]　　[b]二、结果[/b][/size][size=4]　　1. UIO发生机率：总共1025株细菌鉴定中，共出现UIO 44株，占4.3%。其中GPI卡334株，出现UIO16株，占4.8%；GNI+卡631株，出现UIO 24株，占3.8%；YBC卡60株，出现UIO4株，占6.7%。[/size][size=4]　　2.UIO发生原因：在44株出现UIO中，9株（0.9%)为待检细菌不纯，3株(0.3%)为浊度不合要求，2株(0.2%)为接种物孵育时间过长（超过48h），2株(0.2%)为超出试验卡鉴定范围（均为臭鼻克雷伯菌），1株(0.1%)为菌悬液不乳化（粘液型绿脓假单胞），其他如冲液时气泡过多，或其他原因不确定者27株（2.6%）。[/size][size=4]　　3.处理：（1）9株不纯菌株，经纯培养后，重新上机，均能成功鉴定。（2）35株纯培养但报告UIO菌株中，18株(1.8%)可通过双歧检索法获得结果，并与常规分类法结果完 全一致。3株（0.3%）浊度不合要求者经调整浊度后重新上机获得结果。 2株(0.2%)接种物超过48h菌株，经重新孵育后得以鉴定。1株(0.1%)为悬液不乳化菌株经|检验地带网|配制3个麦氏单位菌悬液，然后低速离心1～2 min(1 000r/min)，取上清液比浊并调节到所需的浓度后，得以鉴定。(3)余下11株(1.1%)菌中，仅2株(1株为大肠埃希菌，另1株为臭鼻克雷伯菌)不能从双歧检索表中查出结果，其他9株(主要为洋葱假单胞菌、琼氏不动杆菌、木糖产碱氧化杆菌等)，虽能从双歧检索表获得结果，但与常规鉴定法结果不相符合，或出现矛盾的生化结果，需增加试验项目，按常规鉴定方法及 API系统报告结果。[/size][size=4]　　[b]三、讨论[/b][/size][size=4]　　实验表明95.7%的临床分离菌株可通过VITEK-AMS正确鉴定，仅4.3%菌株无法一次性成功鉴定。细菌不纯是产生这部分菌株的主要原因（占近1/5），其他如待检菌菌龄、菌液浓度也是关系鉴定成败的关键。由于仪器本身原因（如对于罕见生物型、新种或不典型菌株无法鉴定）也不可忽视。正确处理这部分菌株，有重要的临床意义。实际应用自动化仪器时，必须挑取纯培养菌落，可提高鉴定率，对确认为纯培养而无法鉴定者，可通过传统分类法，参照双歧检索表能成功鉴定将近一半菌株，因此合理应用双歧检索表不失为一种较好的辅助方法。但仍有占总数1.1%菌株需用常规方法或其他方法如API系统重新鉴定。[/size][size=4]　　参考文献[/size][size=4]　　1，叶应妩，王毓三，主编. 全国临床检验操作规程. 第2版. 南京： 东南大学出版社,1997.5.[/size][size=4]　　2，Patrick R. Manual of clinical Microbiology (7th Edition). Washington DC: American Society for Microbiology, 1999.316-647. [/size]

随着genome sequence的完成，大家研究的基因序列基本上都已经知道了。如何才能找到自己的基因序列哪? 去NCBI的LocusLink:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/LocusLink/1.这是个功能非常强大的搜索工具。所有NCBI有的基因基本都连到了LocusLink。特别是你已经知道要找的基因，直接可以用基因的名字来检索。比如找基因“TGFa”，大家可以在上面的窗口直接试。你在Query里输入TGFa，点击"Go"，就可以找到所有NCBI里与TGFa有关的基因，包括所有已知的不同种群的homolog都会列出来。在Org一栏显示不同的organism,Hs是人,Mm是老鼠,Rn是大鼠等等。在每个基因名字的后面有一些彩色的小字母，那是代表不同的连接。P是Pubmed, 连接着Pubmed里面以这个基因名做主题词检索的所有文献。O是OMIM，这是个非常好的连接，总结介绍这个基因的名字及研究历史，对于了解该基因有总括性的作用，强烈推荐去看。R是Refseq,是该基因的序列G是Genbank，连着该基因的Genbank信息，有关该基因的序列P是Protein，连接到该基因的蛋白序列H是HomoloGene，连接到该基因的所有homologU是UniGene，解释该基因主要功能相关的分类V是Variation，连接到NCBI的DbSNP，可以找到该基因的SNP信息2.如果你点击你所要的organism的基因的LocusID，可以进入到该基因的具体介绍。里面有该基因的全名，和其他的名字。以及主要的文献。再往下看，可以找到该基因的染色体定位，还有mRNA,Protein,Genbank Source, GenomicDNA序列等等信息。功能非常强大。http://www.ncbi.nlm.nih.gov/LocusLink/LocRpt.cgi?l=70393.LocusLink还可以用疾病做主题词来搜索，比如diabetes。你可以找到几乎NCBI里报道过的与diabetes有关的基因，包括相关的signal pathway以及主要起作用的基因，对于了解diabetes领域的研究有提纲挈领的作用。希望大家有机会可以试试LocusLink，对于各位的研究会起到不同凡响的作用。几乎要什么有什么啊。会用LocusLink，可以节约你很多文献检索的时间，因为NCBI已经帮你打好了连接，只要你去开个门就行。

鉴定菌种，至少要具备下面3个条件： 1．待鉴定的菌种一定是纯种 如果菌种不纯，所观察到的现象则是混合现象，这样自然不会得到正确的结果。因此在鉴定之前，首先要将菌种纯化。 纯化方法，一般有2种：平板划线单菌落分离法和单细胞分离法。前一种操作简便，效果良好，适用范围广。 2．选一本比较好的鉴定手册 鉴定时以此手册为标准，开展鉴定工作。根据多数人的经验，我们认为在细菌鉴定方面，使用《伯杰氏鉴定细菌学手册》一书较为合适。 在具体鉴定时，可参看中国科学院微生物研究所细菌分类组编著的《一般细菌常用鉴定方法》一书。 在放线菌鉴定方面，可以参看中科院微生物研究所编著的《链霉菌鉴定手册》（1975年）一书。 真菌的鉴定可参看中科院微生物研究所编著的《常见与常用真菌》（1973年）一书。荷兰罗德的《酵母的分类研究》（1970年）一书，对酵母菌的分类有很大的实用价值。 3．要有合适的鉴定方法 微生物种类繁多，特征各异，性状有主次之分。因此，在鉴定某种微生物时，要选用合适的鉴定方法，确定主要的测试项目。 例如，鉴定的微生物若是霉菌，则菌落形态观察十分重要； 若是酵母菌，有性繁殖的方式、特征以及生理生化特征中的糖的发酵和同化，硝酸盐的同化就是主要指标。

无需进行文库制备，所用DNA样本比标准方法更少2012年12月13日 来源： 中国科技网 作者： 陈丹 中国科技网讯 据物理学家组织网12月12日（北京时间）报道，英国研究人员简化了基因组测序的标准流程，首次无需进行文库制备便完成了DNA（脱氧核糖核酸）单分子测序，而且新方法只要很少量的DNA就能获得序列数据，用量可低至不到1纳克（10亿分之一克），仅为常规测序方法的500分之一到600分之一。 文库制备是指从测序前基因组样本中提取不同长度的DNA片段，这一过程不仅费力、费时，还会浪费DNA，而新技术能极大地减少DNA的损耗，并缩短测序时间。 该研究论文的第一作者、英国威康信托基金会桑格研究所的保罗·库普兰说：“我们用这种方法对病毒和细菌的基因组测序后发现，即使在相对较低的水平，我们也能够确定所检测的是何种有机物，不论样本中是否存在特定的基因或质粒（这对于确定抗生素耐药性很重要），或者其他信息，如对特定DNA碱基的修改等。”他表示，一旦技术得到优化，将在快速、高效地识别医院和其他医疗场所中的细菌和病毒方面具有很大的应用潜力。 研究小组利用第三代单分子测序系统PacBio RS演示了这种简化的直接测序方法。他们仅仅用800皮克（千分之一纳克）DNA来分析一个生物体的基因组，尽管测序仪只读取了基因组的70个序列片段，相对于常规测序方法获得的数据来说不过是很小的一部分，但这些信息足以让研究人员确定他们所检测的生物体的品种。 这项技术也使得科学家能够对此前无法识别的宏基因组（也称微生物环境基因组）样本中的生物体进行确认。“为微生物测序，首先需要能够在实验室中培养它们。”论文的主要作者、英国巴布拉汉研究所的塔米尔·钱德拉说，“这不仅耗费时间，而且有时候微生物不生长，为它们的基因组测序极其困难。”他表示，新方法可以直接对微生物测序，短时间内便可确定其“身份”。 论文的另一主要作者、威康信托基金会桑格研究所的哈罗德·斯维尔德洛说：“我们的技术可以在对所测序列没有任何先验知识、没有特定微生物试剂的条件下，在很短的时间内操作，这是一种很有前途的替代手段，可应用于控制感染等临床需要。”（记者陈丹） 总编辑圈点 长久以来，基因测序等围绕基因科学所展开的研究，都被人们贴上了从本源上解开人体生命奥秘、彻底解除遗传疾病威胁等殷切的标签。多国为提高社会健康水平，都开展了解码国民DNA的活动，有些甚至覆盖全基因组。然而，面对由30亿个碱基对构成的人类基因组，精确测序注定将是一场浩大而又漫长的工程。如何能快速、准确地将海量DNA数据转化为有帮助的实用信息，已经成为该领域科学家们面临的重大挑战之一。因而我们说，英国科学家此番取得的突破，不管是从整个学科研究的方法论层面，还是从临床应用的角度，都提高了基因研究服务于人类的速度。 《科技日报》（2012-12-13 一版）

WS 287-2008 细菌性和阿米巴性痢疾诊断标准2008-02-28发布，2008-09-01实施，现行有效。该标准实施之日起，GB 16002-1995《细菌性痢疾、阿米巴痢疾诊断标准及处理原则》废止。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=147894]WS 287-2008 细菌性和阿米巴性痢疾诊断标准[/url]

益生菌，这一概念最早来源于希腊语，意思是“对生命有益”（for life）。早在远古时代，人类的日常饮食中就已经含有乳酸发酵类的食品了。　　1857年，法国微生物学家巴斯德研究了牛奶的变酸过程。他把鲜牛奶和酸牛奶分别放在显微镜下观察，发现它们都含有同样的一些极小的生物——乳酸菌，而酸牛奶中的乳酸菌的数量远比鲜牛奶中的多。这一发现说明，牛奶变酸与这些乳酸菌的活动密切相关。　　1878年，李斯特(Lister)首次从酸败的牛奶中分离出乳酸乳球菌。　　1892年，德国妇产科医生Doderlein在研究阴道时提出产乳酸的微生物对宿主--人有益。　　1899年，法国巴黎儿童医院的蒂赛(Henry Tissier），蒂赛率先从健康母乳喂养的婴儿粪便中分离了第一株菌种双歧杆菌（当时称为分叉杆菌），他发现双岐杆菌与婴儿患腹泻的频率及营养都有关系。　　1900-1901年，Moro，Beijerinck和Cahn各自研究了肠道中的乳酸菌。丹麦人奥拉一严森(OrIa—JerlSerl)首次对乳酸菌进行了分类。　　1905年，保加利亚科学家斯塔门·戈里戈罗夫第一次发现并从酸奶中分离了“保加利亚乳酸杆菌”，同时向世界宣传保加利亚酸奶。　　1908年，俄国科学家诺贝尔奖获得者伊力亚.梅契尼科夫（Elie Metchnikoff）正式提出了“酸奶长寿”理论。通过对保加利亚人的饮食习惯进行研究、他发现长寿人群有着经常饮用含有益生菌的发酵牛奶的传统。他在其著作「延年益寿」(Prolongation of Life)中系统的阐述了自己的观点和发现。　　1915年，Daviel Newman首次利用乳酸菌临床治疗膀胱感染。　　1917年，德国Alfred Nissle教授从第一次世界大战士兵的粪便中一株大肠杆菌。这名士兵在一次严重的志贺氏菌大爆发中没有发生小肠炎。在抗生素还没有被发现的那个时代，Nissle利用这株菌在治疗肠道感染疾病（由沙门氏菌和志贺氏菌）取得可观成果。这株大肠杆菌现仍然在使用，它是为数不多的非乳酸菌益生菌。　　1919年，怀着对巴尔干半岛有益酸奶和巴斯德研究所微生物研究成果的极大兴趣，伊萨克·卡拉索在西班牙巴塞罗那创立了公司(达能前身)。而且他常常召集许多博士医生到工厂讨论酸奶的益处。　　1920年，Rettger证明梅契尼科夫所说的保加利亚细菌（保加利亚乳杆菌）不能在人体的肠道中存活。发酵食品和梅契尼科夫的学说受到怀疑（在那时）。　　1922年，Rettger和Cheplin报道了嗜酸乳杆菌酸奶所具有的临床功效，特别是对消化的功能性。　　1930年，医学博士代田稔博士在日本京都帝国大学（现在的京都大学）医学部的微生物学研究室首次成功地分离出来自人体肠道的乳酸杆菌，并经过强化培养，使它能活着到达肠内。这种菌后来引用代田博士的名字，取名为Lactobacillus casei strain shirota。这就是后来被称为养乐多菌的益生菌。　　1935年，乳酸菌饮料问世，益生菌开始走向产业化。　　1945年，无菌动物模型和悉生动物模型建立。　　1954年，Vergio引入与抗生素或其它抗菌剂相对的术语“Probiot-ika”，提出抗生素和其它抗菌剂对肠道菌群有害而“Probiotika”对肠道菌群有利。　　1957年，Gordon等人在《柳叶刀(The Lancet)》提出了有效的乳杆菌疗法标准：乳杆菌应该没有致病性，能够在肠道中生长，当活菌数量达到107-109时，明显具有有益菌群的作用。同时德国柏林自由大学的Haenel教授研究了厌氧菌的培养方法，提出“肠道厌氧菌占绝对优势”的理论。日本学者光岗知足(Tomotari Mitsuoka)开始了肠内菌群的研究，最后建立了肠内菌群分析的经典方法和对肠道菌群作出了全面分析。　　1962年，Bogdanov从保加利亚乳杆菌中分离出了3种具有抗癌活性的糖肽，首次报道了乳酸菌的抗肿瘤作用。　　1965年， Lilly D. M.和Stillwell R. H.在《科学》杂志上发表的论文“益生菌—由微生物产生的生长促进因素”中最先使用益生菌Probiotic这个定义来描述一种微生物对其他微生物促进生长的作用。　　20世纪70年代初由沃斯(Woese)、奥森（Olsen）等提出16s rRNA寡核苷酸序列分析法来对菌进行鉴定。构建了现已被确认的全生命系统进化树，越来越多的细菌依据16SrDNA被正确分类或重分类，给乳酸菌的鉴定和肠内菌群分析带来极大方便。　　1971年，Sperti用益生菌（Probiotic）描述刺激微生物生长的组织提取物。　　1974年，Paker将益生菌定义为对肠道微生物平衡有利的菌物。　　1977年，微生态学（Microecology）由德国人Volker Rush首先提出。他在赫尔本建立了微生态学研究所，并从事对双歧杆菌、乳杆菌、大肠杆菌等活菌作生态疗法的研究与应用。Gilliland对肠道乳杆菌的降低胆固醇作用进行了研究，提出了乳酸菌在生长过程中通过降解胆盐促进胆固醇的分解代谢，从而降低胆固醇含量的观点。　　1979年中国的微生态学研究开始。自中国微生物学会人畜共患病病原学专业委员会下属的正常菌群学组的成立。1988年2月15日中华预防医学会微生态学分会的成立有了学术组织。1988年《中国微生态学杂志》创刊。　　80年代初大连医科大学康白教授首先研制成功促菌生（蜡杆芽胞杆菌）。　　1983年，由美国Tufts大学两名美国教授Sherwood Gorbach和Barry Goldin从健康人体分离出了LGG（鼠李糖乳杆菌），并于1985年获得专利。LGG菌种具有活性强、耐胃酸的特点，能够在肠道中定殖长达两周。　　1988年底丹麦的汉森中心实验室生产出超浓缩的直投式酸奶发酵剂。 直投式酸奶发酵剂(Directed Vat Set, DVS)是指一系列高度浓缩和标准化的冷冻干燥发酵剂菌种，可直接加入到热处理的原料乳中进行发酵，而无需对其进行活化、扩培等其它预处理工作。直投式酸奶发酵剂的活菌数一般为1010 - 1012 CFU/g。　　1989年，英国福勒博士(Dr.Roy Fuller)将益生菌定义为：益生菌是额外补充的活性微生物，能改善肠道菌群的平衡而对宿主的健康有益。他所强调的益生菌的功效和益处必须经过临床验证的。　　90年代，中国学者张箎教授对世界第五长寿区——中国广西巴马地区百岁以上老人体内的双歧杆菌进行了系统的研究，也发现长寿老人体内的双歧杆菌比普通老人要多得多。同时中医药微生态学建立。杨景云等学者开始对中国的传统中药与微生态关系进行了系统的研究。　　1992年， Havennar对定义进行了扩展，解释为一种单一的或混合的活的微生物培养物，应用于人或动物，通过改善固有菌群的性质对寄主产生有益的影响。　　1995年，吉布森(Gibson)把能在大肠中调整菌群的食品称为益生元。　　1998年，Guarner & Schaafsma给出了更通俗的定义：益生菌是活的微生物，当摄入足够量时，能给予宿主健康作用。　　1999年，Tannock作了总结：细菌是人体（还有高级动物和昆虫）中正常居住者。其中胃肠道中发现超过400多种细菌。　　2001年，世界粮农组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)也对益生菌做了如下定义：通过摄取适当的量、对食用者的身体健康能发挥有效作用的活菌。联合国粮农组织和世界卫生组织组成的专家联合顾问团强烈建议用分子生物学的手段鉴定益生菌。并推荐益生菌存放于国际性菌物保藏中心。具体的步骤是：先做表型鉴定，再做基因鉴定。基因鉴定的方法有DNA/DNA杂交，16S RNA序列分析或其它国际上认可的方法。然后到RDP上验证鉴定结果。　　2001年，法国完成第一株乳酸菌即乳酸乳球菌IL1403的全基因组测序。　　2002年，微生物学教授Savage宣布：正常菌群是人体的第十大系统——微生态系统。　　2005年，美国北卡罗来纳州立大学Dobrogosz 和Versalovic教授提出了免疫益生菌的概念（Immunoprobiotics）。　　2006年，意大利M. Del Pianoa等认为益生菌应该定义为一定程度上能耐受胃液，胆汁和胰脏分泌物而黏附于肠道上皮细胞并在肠道中定殖的一类活的微生物。提出从粪便中分离的“益生菌”有可能多数是浮游菌，而非黏附菌。　　2007年，美国《科学》杂志预测：人类共生微生物的研究将可能是国际科学研究在2008年取得突破的7个重要领域之一。12月9～10日，英、美、法、中等国科学家在美酝酿成立“人类微生物组国际研究联盟(IHMC)”，计划2008年4月联合启动“人类元基因组计划”，开始对人类元基因组的全面研究。这项被称为“第二人类基因组计划”的项目将对人体内所有共生的微生物群落进行测序和功能分析，其序列测定工作量至少相当于10个人类基因组计划，并有可能发现超过100万个新的基因，最终在新药研发、药物毒性控制和个体化用药等方面实现突破性进展。　　2008年，荷兰乌得勒支大学医学中心研究者在柳叶刀杂志上报道了益生菌可能会引起重症急性胰腺炎患者的肠道致命性局部缺血危险。

如题！关于细菌和真菌检测。

真菌是一类具有典型细胞核和完整细胞器,无根、茎、叶,不含叶绿素的真核细胞型微生物。大多数真菌对人体无害,但少数也可引起感染性、中毒性以及反应型疾病。在临床上以浅部感染真菌的毛癣菌属和深部感染真菌的白假丝酵母菌最为常见。实验室诊断的真菌阳性确诊性报告需要经过采集标本、直接镜检以及分离培养、生化反应,免疫学、分子生物试验鉴定等程序。整个过程复杂,成本高、时间长,从标本采集到报告发出,一般需24~48小时。非常不利于医生在第一时间给病人特别是门诊病人诊断、用药,以致延误病情。因此直接镜检后发出的初步诊断报告就显得尤为重要,对真菌感染性疾病的诊断具有重要意义。而真菌在体积上比细菌大几倍到几十倍,在形态上具有典型的菌丝和孢子,在结构和化学组成上不复杂、易染色,这些都为提高直接显微镜检查后所发出的初步诊断报告的阳性检出率提供了有利条件。近年来,我科室人员经过不断的摸索实验,总结出了不少经验,为临床医生提供了及时可靠的诊断报告,受到了他们的好评。浅部感染真菌的显微镜实验室诊断浅部感染真菌系指主要侵犯人和动物皮肤、毛发、及指(趾)甲,引起癣病的真菌

感受态是指细菌处于容易吸收外源DNA的状态。转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导人细菌的过程。其原理是细菌处于0℃，CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基—钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热击处理，促进细胞吸收DNA复合物。将细菌放置在非选择性]培养基[/url]中保温一段时间，促使在转化过程中获得的新的表型(如Amp[sup]r[/sup]等)得到表达，然后将此细菌培养物涂在含有氨苄青霉素的选择性[://]培养基[/url]上。重组质粒转化宿主细胞后，还需对转化菌落进行筛选鉴定。利用α互补现象进行筛选是最常用的一种鉴定方法。现在使用的许多载体都具有一段大肠杆菌β半乳糖苷酶的启动子及其编码α肽链的DNA序列，此结构称为[i]lac[/i]Z'基因。[i]lac[/i]Z'基因编码的α肽链是β半乳糖苷酶的氨基端的短片段(146个氨基酸)。任何携带着[i]lac[/i]Z'基因的质粒载体转化了染色体基因组存在着此种β半乳糖苷酶突变的大肠杆菌细胞后，便会产生出有功能活性的半乳糖苷酶，在IPTG(异丙基β—D—硫代半乳糖苷)诱导后，在含有Xgal(5-溴-4-氯-3-吲哚-6-D-半乳糖苷)的培养基平板上形成蓝色菌落（半乳糖苷酶能将无色的化合物Xgal切割成半乳糖和深蓝色的底物5-溴-4-靛蓝）。而当有外源DNA片段插入到位于[i]lac[/i]Z'中的多克隆位点后，就会破坏α肽链的阅读框，从而不能合成与受体菌内突变的β半乳糖苷酶相互补的活性α肽，而导致不能形成有功能活性的β半乳糖苷酶，也就不能分解Xgal而显蓝色，因此含有重组质粒载体的克隆往往是白色菌落。[仪器、材料与试剂](一) 仪器和材料 超净工作台、低温离心机、恒温摇床、恒温箱、恒温水浴、离心管、试管、培养皿、锥形瓶、接种针、玻璃涂棒、酒精灯、镊子、牙签、大肠杆菌DH5a 、质粒(二) 试剂0.1mol／L CaCl2溶液 LB液体培养基 LB固体培养基 氨苄青霉素(Amp)：用无菌水配制成100mg／mL溶液，置—20℃冰箱保存。Xgal：将Xgal溶于二甲基甲酰胺，配成20mg／mL，不需过滤灭菌，分装小包装，避光贮存于-20℃。IPTG：取2g IPTG溶于8mL双蒸水中，再用双蒸水补至10mL，用0.22um滤膜过滤除菌，每份1mL，贮存于-20℃。[实验步骤](一) 制备感受态细胞1、吸取15µl E.coil菌液，接种于20ml LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜，待OD600=0.5左右将该菌悬液以1：50接种量转于50ml LB液体培养基中，37℃振荡扩大培养，当培养液开始出现混浊后，每隔20-30min测一次OD600，至OD600=0.6左右，停止培养。2、培养液转入离心管中，在冰浴10min，4℃下5000rpm离心10min。3、弃上清液，用4ml冰预冷的0.1M CaCl2溶液轻轻悬浮菌体至均匀，冰上放置30min。4、4℃下5000rpm离心6min。5、弃上清液，用2ml冰预冷的0.1M CaCl2溶液轻轻悬浮菌体至均匀，冰上放置片刻后即制成感受态细胞悬液。6、以上制好的感受态细胞悬液可在冰上放置，24小时内直接用于转化实验，也可加入15%高压灭菌过的甘油，混匀后，分装于1.5ml离心管中，每管100µ l感受态细胞悬液，置-70℃条件下保存。.(二) 质粒DNA转化大肠杆菌1、取100µl摇匀后的感受态细胞悬浮液（如是冷冻保存液，则需化冻后马上进行下面的操作），加入5µl连接产物，轻轻摇匀，冰上放置30min后，于42 IPTG水浴中保温90s，然后迅速在冰上冷却2min。2、加入900µl LB液体培养基，则总体积约1ml，混匀于37℃振荡培养90分钟使受体菌恢复正常生长状态并使转化体产生抗药性Amp[sup]r[/sup]。3、在预制的LB琼脂平板上，加40uL 20mg／mL的Xgal和4uL 200mg／mL的IPTG溶液，并用灭菌玻璃推子(酒精灯上烧后冷却)，均匀涂布于琼脂凝胶表面，37℃倒置吸收。4、将恢复培养的菌体4000rpm离心5min，移去上层900µl LB培养基，用余下的100µl重悬菌体至均匀。(四) α互补现象的检查将重悬菌体均匀涂布于含X-gal+IPTG+氨苄青霉素的LB平板上，37℃倒置培养12—24h，出现菌落。其中白色菌落从理论上讲为重组克隆。如果进一步验证，可挑取多个白色菌落分别接种到1ml含有氨苄青霉素的LB液体培养基中，37℃振荡培养6-8h，然后提取质粒酶切验证，或进行菌落PCR扩增鉴定。

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RT：序列处理中标准品的浓度，您考虑过么？GC分析：一个序列，几十百来号样品，接近半小时一针。几十个小时中，标准品的浓度应该是不断提高的，您是怎样应对的？

真菌检验的临床重要性日益增加。传统的真菌培养和鉴定技术需时较长，且深圳特区部真菌感染的病原菌常不易培养成功，成为实验诊断的难点。　　近年来，真菌感染的快速实验诊断技术正在努力解决这一问题。一、应用分子生物学技术自临床标本中检出真菌DNA；二、应用单抗和免疫学技术自临床标本中快速检出真菌抗原；三、利用真菌的特异性酶快速诊断真菌；四、常规培养与鉴定技术的进步，现分述如下。　　一、常规分离、鉴定技术的进步　　利用酵母样真菌在生长过程中形成的酶，作用于培养基中的色原底物，使菌落呈现不同的颜色，此种CHROMOAGAR的应用，利于快速分离与初步鉴定酵母样真菌。　　酵母菌的常用鉴定系统已有以AP120C为代表的手工法，以ATB32C为代表的半自动法，以AMS为代表的自动代法借助于AMS的YBC卡的生化反应，应用人工双歧层次分析鉴定法可使鉴定正确率提高。　　利用酵母菌生长过程中形成的予成酶作用于合成的色原底物而制成的成套微量鉴定系统Rap ID Yeastplus System，可于4小时完成酵母菌的快速鉴定，与应用API20C的一致率达97.3%.　　平滑念株菌可利用其快速分解菌藻糖而迅速鉴定。用4%菌藻糖的0.1μmol/L枸橼酸缓冲液，取待鉴定菌落浓涂入液中，37℃温育3h，以尿葡萄糖试纸检测，如在2分钟内显色（阳性）即为平滑念珠菌。经与传统鉴定方法比较，此法的敏感性98.8%，特异性99.1%.　　都柏林念珠菌的临床重要性在增长，其简易可靠的鉴定试验为该菌在42℃不能生长，且β-D葡萄苷酶为阴性。

真菌是一大类不含叶绿素，无根、茎、叶，由单细胞或多细胞组成的真核细胞型微生物。大部分真菌对人类有益，能引起人类疾病的病原性真菌主要包括浅部真菌和深部真菌。 实验目的： 观察真菌的基本形态及菌落特点，了解浅部及深部真菌的检查方法。 实验内容： 一、常见单细胞真菌的形态观察 1、新型隐球菌墨汁负染色片：可见菌体呈球形，大小不一，有很厚的荚膜，包围在菌体周围，透明发亮，并可见发芽的菌体。 2、白色念珠菌菌体形态：用患者的棉拭子标本常法涂片，革兰氏染色，镜检。显微镜下可见菌体呈卵圆形，较葡萄球菌大2-5倍，细胞出芽伸长而成假菌丝，在假菌丝生长点上有芽生孢子及沿假菌丝顶端生长的大而圆的厚膜孢子。 二、皮肤丝状菌的检查 材料： 病人的甲屑、皮屑或毛发、10%KOH溶液、载玻片、盖玻片、小镊子、普通光学显微镜等。 方法： 1、采标本：用钝刀在手、足、体癣损害部位边缘轻轻刮取皮屑，甲癣可用小刀刮取病损指（趾）甲深层碎屑。 2、制片：用小镊子取少许皮（甲）屑标本置于载玻片中央，滴1-2滴10%KOH溶液，覆加一盖玻片，在火焰上缓慢加热，以加速角质溶解，使标本透明，然后轻轻加压使成薄片，驱走气泡并吸去周围溢液。 3、镜检：先用低倍镜观察有无真菌菌丝或孢子，再用高倍镜观察菌丝、孢子的特征。镜检时光线应稍弱，使视野稍暗。阳性标本常可查见分支菌丝或孢子。 三、真菌的培养 材料： 菌种、沙保氏培养基、平皿、载玻片、盖玻片。 方法： 1、一般培养：分别将新型隐球菌、白色念珠菌、絮状表皮癣菌接种于沙保氏培养基，于22℃-28℃下培养（深部真菌可培养于37℃环境），一周后观察菌落特征。真菌菌落在形态上可分为三大类： 酵母型菌落：与细菌菌落相似，圆形、白色、边缘整齐、表面光滑湿润。 类酵母型菌落：同酵母型菌落，圆形、较大、白色，但菌落根部有假菌丝长入培养基内。 丝状菌落：是多细胞真菌的菌落形式。有许多疏松的菌丝体构成，菌落呈棉絮状、绒毛状或粉末状，菌落中央有皱折，外围有放射状沟。其正面和背景又可显示各种不同颜色。 2、小培养（玻片法）：在无菌平皿中先倾注10-15ml沙保葡萄糖琼脂，待凝固后，无菌操作将琼脂切成约0.5cm的方块，再将琼脂块移放在灭菌的载玻片上，然后在小块培养基四边接种已分纯的真菌菌种，盖上无菌盖玻片，移入有一定湿度的无菌平皿内，置22℃-28℃孵育。动态观察生长过程，根据菌丝和孢子的特点鉴定真菌类别。