液相色谱在检测辣椒素含量时检测

【作者】 蔡兴东； 刘新；【机构】 重庆医科大学药学院； 重庆医科大学药学院 重庆400016； 重庆400016；【摘要】 目的:建立生发凝胶中辣椒素含量测定的高效液相色谱方法。方法:采用Diamonsil C18色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸(65∶35)为流动相,流速为1.0mL.min-1,检测波长为280nm,柱温为40℃。结果:辣椒素在5.0~100.0mg.L-1范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为101.32%,RSD为1.72%(n=6)。结论:该方法简便、准确、重复性好,可作为生发凝胶中辣椒素的含量测定方法。 【谱图】 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208142055_383881_1609970_3.jpg

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辣椒和辣椒油中总辣椒素含量的测定（ISO 7543-1标准翻译）阿拉山口检验检疫局技术中心 赵晶晶 贺国庆 中哈管道石油公司 常健辉 译第一部分：分光光度法前言：国际标准化组织(ISO)是由各国标准化团体(ISO成员团体)组成的世界性联合会。制定国际标准的工作通常由ISO的技术委员会完成，各成员团体若对某技术委员会确立的项目感兴趣，均有权参加该委员会的工作。与ISO保持联系的各国际组织(官方的或非官方的)也可参加有关工作。在电工技术标准化方面，ISO与国际电工委员会(IEC)保持密切合作关系。 由技术委员会通过的国际标准草案提交各成员团体表决,需取得至少75%参加表决的成员团体的同意，才能作为国际标准正式发布。国际标准ISO-7543-1由技术委员会ISO/TC 34 /农业食品产品/SC 7/调味品 制定。ISO 7543 辣椒和辣椒油中总辣椒素含量的测定包括以下部分：第一部分：分光光度法第二部分：高效液相色谱法ISO 1994版权所有。除非特别规定，未经出版者的允许，任何印刷物的部分不得复制或以其他形式使用－电子或文字的（包括照片复制和微缩胶片）。国际标准化组织瑞士 Geneve CH-1211 56号邮政信箱瑞士印刷国际标准化组织版权所有2002年11月6日　星期三　13:15:2002辣椒和辣椒油中总辣椒素含量的测定第一部分：分光光度法1 范围ISO 7543 标准规定了用分光光度法测定辣椒、辣椒粉和辣椒油中总辣椒素含量的方法。本方法的分析需用活性炭脱色。在某些实验条件下，如不进行脱色，则必须参考ISO 7543-21的高效液相色谱法来测定辣椒素含量。2 标准文献下列标准所包含的条文，通过在本标准中的引用而构成本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。IEC[/fon

1.前言： 辣椒红素是从成熟红辣椒果实中提取的四萜类天然色素，属类胡萝卜素。辣椒红素色泽鲜艳，色价高，着色力强，保色效果好，安全性高，在食品工业应用广泛，可用于水产品、肉类、糕点、色拉、罐头、饮料等各类食品的着色。作为一种天然色素，[url=http://baike.baidu.com/item/%E8%81%94%E5%90%88%E5%9B%BD%E7%B2%AE%E5%86%9C%E7%BB%84%E7%BB%87][color=windowtext]联合国粮农组织[/color][/url]（FAO）和[url=http://baike.baidu.com/item/%E4%B8%96%E7%95%8C%E5%8D%AB%E7%94%9F%E7%BB%84%E7%BB%87][color=windowtext]世界卫生组织[/color][/url]（WHO）将辣椒红素列为A类色素，在使用中不加以限量。我国食品卫生法规定辣椒红素可应用于多种食品、医药以及化妆品中。目前测定辣椒红素的方法有薄层色谱法、比色法，也有采用HPLC测定的报道，但仅限于检测辣椒中的辣椒红素，未见有香肠中辣椒红素的检测方法，因此，目前急需一种高效、准确的方法来进行香肠中辣椒红素的检测。2.分析步骤2.1储备液的配制 准确称量10.00mg辣椒红素，溶解到丙酮中，定容到10mL，作为1000μg/mL的储备液（实际浓度应乘以辣椒红素的纯度），置于-18℃冷藏保存；2.2标准中间液的配制 准确量取2mL辣椒红素，溶解到正己烷中，定容到10mL，作为200μg/mL的中间液，置于4℃冷藏保存；2.3标准工作曲线的配制 用标准中间液配制成1、2、5、10、20、50、100μg/mL的标液作为工作曲线用的标准溶液。2.4样品处理 精确称取2.00样品于50mL离心管中，15mL的丙酮超声提取30min，离心，上清液转移至100ml梨形瓶中。残渣用15ml丙酮重复提取一次，离心，上清液合并到梨形瓶中。37℃旋干（若最后有水残留，加异丙醇旋干）。用2mL正己烷复溶，过膜，上机。2.5 HPLC测定2.5.1仪器条件(Agilent 1260 )2.5.2色谱参数：色谱柱：Agilent ZORBAX RX—SIL，5μm，4.6mm *250mm柱温：30℃流速：0.8mL/min进样量：20μL流动相：正己烷：乙醇=90:10（V/V）3.结果与分析3.1保留时间： 20mg/L与50mg/L辣椒红素通过RX—SIL色谱柱分离，确定保留时间，如下图:[align=center][img=,490,154]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708071527_01_3081717_3.png[/img][/align][align=left]3.2检出限 在基质中添加相当于样品含有1.0mg/L的标准品，经前处理上机检测，计算其信噪比（S/N）＞10，如图：[/align][align=center][img=,490,264]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708071529_01_3081717_3.png[/img][/align][align=left]3.34.4 线性关系 精密吸取辣椒红素标准品，用正己烷溶稀释成系列浓度为1，2，5，10，20，50，100，200mg/L标准溶液，分别进样测定，以峰面积响应为纵坐标，辣椒红素浓度为横坐标，得到辣椒红素的回归方程为Y=8.05659X-0.09749，相关系数：0.9998，线性关系良好。[/align][align=center][img=,490,392]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708071530_01_3081717_3.png[/img][/align][align=left]4.5 空白样品添加回收：[/align][align=center] [table=352][tr][td=4,1]回收率[/td][/tr][tr][td=1,2]名称[/td][td=1,2]添加浓度[/td][td=2,1]回收率%[/td][/tr][tr][td] 火腿肠[/td][td]香肠[/td][/tr][tr][td=1,6]辣椒红素[/td][td]spike-1mg/kg-1[/td][td]88.71[/td][td]91.27[/td][/tr][tr][td]spike-1mg/kg-2[/td][td]82.63[/td][td]85.42[/td][/tr][tr][td]spike-1mg/kg-3[/td][td]84.25[/td][td]86.33[/td][/tr][tr][td]spike-1mg/kg-4[/td][td]95.62[/td][td]95.1[/td][/tr][tr][td]spike-1mg/kg-5[/td][td]91.59[/td][td]89.74[/td][/tr][tr][td]spike-1mg/kg-6[/td][td]88.48[/td][td]84.55[/td][/tr][tr][td=2,1]RSD%[/td][td]5.36[/td][td]4.57[/td][/tr][tr][td=1,2]辣椒红素[/td][td]spike-20mg/kg[/td][td]93.24[/td][td]96.68[/td][/tr][tr][td]spike-100mg/kg[/td][td]98.44[/td][td]98.69[/td][/tr][/table][/align][align=left]添加回收选取市场上香肠及火腿肠做质控实验，回收均在80%-100%之间，方法稳定性良好。[/align][align=left]5.0 结语[/align][align=left] 初步用正相色谱做脂溶性物质，对此类型化合物较理想，后续继续尝试中。[img]http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09510.gif[/img][/align]

近几年来，地沟油的概念常见于新闻报道，一时间，各种鉴定地沟油的方法逐渐开展起来，近日国家食药总局就发布了《食用油脂中辣椒素的测定》食品补充检验方法的公告（2018 年第26 号）；作为一种鉴别地沟油的方法, 安谱实验及时跟进，根据该补充方法，使用CNW HC-C18 的柱子，用于食用油基质的净化，三种辣椒素：合成辣椒素，天然辣椒素 ，二氢辣椒素的5ppb 添加回收率分别为 65%，82%，61%；RSD 分别为2.9%，2.5%，3.7%，回收率稳定，平行性良好。[align=center][img=,690,936]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/04/201804121010097937_2159_960_3.jpg!w690x936.jpg[/img][img=,690,936]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/04/201804121010118280_4078_960_3.jpg!w690x936.jpg[/img][/align]

苏丹红：苏丹红学名叫苏丹，偶氮系列化工合成染色剂，主要应用于油彩、汽油等产品的染色。共分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ号，都是工业染料。该类物质对人体有较强的致癌性,是绝对不能添加到食品中的。然而,近年来它们被部分违法商人添加到辣椒粉、辣椒酱、辣椒油等食品中以改善食品的外在感官度。下面是本人测试辣椒酱中是否有苏丹红物质的过程：先上一张楼主我称取样品的照片，同事帮我拍的，呵呵！http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/03/201203301542_358275_1628076_3.jpg试验过程　　辣椒酱经正己烷-丙酮溶剂提取，用氧化铝层析柱进行固相萃取净化，用高效液相色谱，紫外检测器检测，选择月旭科技Ultimate®XBC18 4.6×100mm，5um的色谱柱测试苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ；色谱方法 ： 色谱柱：月旭色谱柱Ultimate® XB-C18 4.6×100mm，5μm；检测波长：500nm；流动相：乙腈：水=95：5；温度：30度；流速：1.0ml/min；进样量：20μL。　开始选用色谱柱Ultimate® XB-C18 4.6×250mm，5μm色谱柱，但苏丹红保留时间较长，调整了有机相比例，发现保留时间还是比较长，改变了色谱柱长度，换用4.6×100mm的长度从而能达到很好的分离效果，而且也缩短了测定时间，对于分析人员来说时间是相当宝贵的啊； 最终选择Ultimate® XB-C18 4.6×100mm，5μm；样品前处理：称取辣椒酱样品10g，至于50ml的离心管中，加10ml（正己烷-丙酮=3：1）溶解混匀，超声20min，采用4000转离心机离心10min，提取上清液；采用月旭氧化铝层析小柱进行固相萃取净化；下面是测试图谱1.苏丹红混标 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/03/201203301440_358270_1938106_3.jpg2.苏丹红加标http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/03/201203301453_358271_1938106_3.jpg3.辣椒酱供试品http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/03/201203301456_358272_1938106_3.jpg试验结果：苏丹红加标回收率：85%～95%结论：目前,国内已有HPLC法检测辣椒酱中苏丹红染料残留的报道，但是这些方法存在样品分析时间长、样品前处理过程操作繁琐、等缺点。本方法测试苏丹红，分离效果好、灵敏度高、检测时间短，测试结果的精密度和准确度满足试验要求；

[align=center][font='helvetica'][size=21px][color=#333333]水中低含量微囊藻毒素[/color][/size][/font][font='helvetica'][size=21px][color=#333333]（[/color][/size][/font][font='helvetica'][size=21px][color=#333333]RR[/color][/size][/font][font='helvetica'][size=21px][color=#333333]）[/color][/size][/font][font='helvetica'][size=21px][color=#333333]高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱[/url]法检测[/color][/size][/font][/align][font='helvetica'][color=#333333]摘要[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333] 本文用高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法检测水中微囊藻毒素（[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]RR[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]），针对水中微囊藻毒素含量低，难检出问题，对常规高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]做了两种优化改进，在线富集进样、大定量进样，大大降低了检出限，获得了满意的结果。[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333] 关键词[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333] [/color][/font][font='helvetica'][color=#333333][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url][/color][/font][font='helvetica'][color=#333333] [/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]在线富集[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333] [/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]大定量进样[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333] [/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]微囊藻毒素[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333] [/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]检出限[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]前言[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333] 微囊藻毒素（[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]RR[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]）[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]具有[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]较强的[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]毒性及危害性。随着中国水体富营养化程度[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]加剧，蓝藻水华和赤潮的发生逐渐增加。[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]80%[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]的蓝藻水华都可以检测出次生代谢产物[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]----[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]微囊藻毒素（[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]microcystins[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]，[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]MCs[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]），它对水体环境和人群健康的危害已成为全球关注的重大环境问题之一。[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333] 环境改善[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]，[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]检测[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]、防控[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]和治理是必不可少的工作内容。本文主要介绍水中低含量[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]微囊藻毒素（[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]RR[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]）[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]的检测方法。[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333] 本方法检出限低或超低，主要针对[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]水中低含量微囊藻毒素（[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]RR[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]）高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法检测[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]，[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]适用于饮用水、湖泊水、河水、地表水等[/color][/font][font='helvetica'][color=#333333]水样检测。[/color][/font] 本方法参考《GB/T 5750.8-2006 生活饮用水标准检验方法 有机物指标》中第13部分 微囊藻毒素，优化出两种检测方案。实验部分方案一：[align=left] 在线富集高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法检测。 [/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011932297209_8902_2369266_3.png[/img][/align][align=center]图1 在线富集高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法检测流程图[/align] 仪器配置：高压输液泵2台，在线脱气机（两路以上脱气）1台，六通自动进样阀2个（1个带2ml定量环1套，一个带富集柱1根），预柱1根，色谱柱1根，柱温箱1台，紫外检测器1台，三通电磁阀1个，进样泵（或高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]自动进样器）1台，工作站1套，配件1套（包括废液桶、管路、接头等）。 核心部件： 核心部件1：进样系统。进样系统包括两个进样阀，一个在定量环处连接适当的管路作为定量环，负责定量进样，另一个在定量环处连接富集柱，负责把大量的样品富集到富集柱这样一个小的容积内。两个进样阀的切换由程序按照进样过程时间表时间控制。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011932300237_5409_2369266_3.png[/img][/align][align=center]图2 六通自动进样阀[/align] 核心部件2：富集柱。富集柱有分体的和一体的，分体富集柱市面上较常见，包括柱体、柱芯，柱芯污染或故障后可随时更换，具有较好的性价比。选择和色谱柱相同或相近类型填料（粒径3.5μm～10μm，长度3㎝左右），能大量富集低浓度水样品。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011932303506_3493_2369266_3.png[/img][/align][align=center]图3 富集柱[/align] 核心部件3：色谱柱。该检测方法对色谱柱要求较高，要求色谱柱耐污染能力强，耐水性，分离速度快，分离效果好，色谱峰形好等。本文选择的这款色谱柱通过对孔径、比表面和碳含量等色谱参数的优化，绝佳的平衡了保留、分离度、耐污染关系，寿命较长。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011932303235_7720_2369266_3.png[/img][/align][align=center]图4 色谱柱[/align]色谱条件：色谱柱：ODS C[size=9px]18[/size]色谱柱，Venusil XBP (L) 4.6mm×150mm×5μm流动相：流动相A（色谱洗脱液）：乙腈：水：三氟乙酸=40%：60%：0.05%流动相B（富集液）：甲醇：水=15%：85%进样过程（以2ml进样体积为例）时间表，A、B输液泵保持持续运行[table][tr][td][align=center]时间（min）[/align][/td][td][align=center]进样状态[/align][/td][td][align=center]进样过程[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0[/align][/td][td]装样，进样泵启动[/td][td]样品由进样泵注入定量进样阀定量环中[/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td]富集，进样泵停止[/td][td]切换定量进样阀，样品由输液泵B带入富集进样阀富集柱中[/td][/tr][tr][td][align=center]4[/align][/td][td]进样[/td][td]切换富集进样阀，富集柱中样品由输液泵A带入色谱柱，样品进入色谱柱由洗脱液（流动相A）洗脱后进入检测器检测，最后排入废液桶中[/td][/tr][tr][td][align=center]14[/align][/td][td][align=center]定量、富集进样阀恢复初始状态，进样泵启动[/align][/td][td]通过切换进样泵前三通电磁阀，进样泵将清洗液注入定量进样阀，清洗定量环[/td][/tr][tr][td][align=center]15[/align][/td][td][align=center]进样泵停止[/align][/td][td]该进样、检测周期完成[/td][/tr][/table]流速：1ml/min检测器：紫外检测器检测波长：238nm柱温：35℃ 工作流程：输赢泵A、B保持正常运行。进样泵向定量进样阀注入处理好的样品，定量后切换该进样阀，样品由流动相B（富集液，来自输液泵B）带入富集进样阀富集柱，富集在富集柱中。切换富集进样阀，样品由流动相A（洗脱液，来自输液泵A）经过预柱后带入色谱柱，样品在色谱柱中经过流动相A洗脱逐渐分离，分离后的样品由流动相A带入紫外检测器检测，检测谱图及结果在电脑工作站中显示储存，检测完成后样品及流动相A流入废液桶中。进样泵完成对管路及进样阀清洗后各工作单元恢复初始，该检测周期完成。 试验对比（进样量相同，进样体积不同）： 直接进样20μl，标准样品浓度20ng/ml，色谱图情况[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011932306387_4566_2369266_3.png[/img][/align][align=center]图5 微囊藻毒素（RR）标准样品浓度20ng/ml色谱图[/align] 该检测方法噪声约3.6μAu，样品峰高32μAu，标准样品浓度20ng/ml，按3倍噪声计算检出限，检出限约6.75 ng/ml。 在线富集进样2ml，标准样品浓度0.2ng/ml，色谱图情况[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011932307364_8661_2369266_3.png[/img][/align][align=center]图6 微囊藻毒素（RR）标准样品浓度0.2ng/ml色谱图[/align] 该检测方法噪声约3.5μAu，样品峰高28μAu，标准样品浓度0.2ng/ml，按3倍噪声计算检出限，检出限约0.073 ng/ml。 直接进样20μl，标准样品浓度400ng/ml，色谱图情况[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011932306672_3479_2369266_3.png[/img][/align][align=center]图7 微囊藻毒素（RR）标准样品浓度400ng/ml色谱图[/align] 该检测方法检测400ng/ml微囊藻毒素（RR），保留时间7.33min，峰高631，峰面积13205。 在线富集进样2ml，标准样品浓度4ng/ml，色谱图情况[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011932309444_5108_2369266_3.png[/img][/align][align=center]图8 微囊藻毒素（RR）标准样品浓度4ng/ml色谱图[/align] 该检测方法检测4ng/ml微囊藻毒素（RR），保留时间7.76min，峰高542，峰面积12541。峰高比直接进样（等效进样量）略低，峰面积相当于直接进样的94.97%。 4ng/ml样品经过固相萃取、氮气吹干、定量等前处理富集后直接进样20μl，样品浓度等效直接进样400ng/ml，色谱图情况[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011932310791_9645_2369266_3.png[/img][/align][align=center]图9 微囊藻毒素（RR）标准样品经过固相萃取等前处理色谱图[/align] 该检测方法检测，保留时间7.30min，峰高615，峰面积11495。峰高比直接进样（等效进样量）略低，峰面积相当于直接进样的87.05%。小结： 直接进样20μl，检出限约6.75 ng/ml；在线富集进样2ml，检出限约0.073 ng/ml，检出限比直接进样低92.47倍（进样量相同，进样体积相当于100倍），实现更低检出限（进样体积还可以更大，检出限会更低）检测。直接进样20μl，样品浓度400ng/ml，色谱峰面积13205；在线富集进样2ml，样品浓度4ng/ml，色谱峰面积12541，等效进样量峰面积是直接进样峰面积的94.97%（该处介绍的是富集过程中样品损耗情况。色谱检测标准品和样品在同一色谱系统中进行，采用外标法分析，外标法对检测结果影响很小）；经固相萃取、氮气吹干等前处理后进样20μl，样品浓度等效400ng/ml（不考虑前处理损耗），色谱峰面积11495，等效进样量峰面积是直接进样峰面积的87.05%。 在线富集高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法检出限低，富集过程中的损耗较实验室富集前处理损耗低，可实现水中低含量甚至超低含量微囊藻毒素（[font='times new roman']RR[/font]）高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法在线检测。 该方案的优势： 检出限非常低。样品中微囊藻毒素含量如果非常低的话，常规高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法是根本无法检测出来的（国标《GB/T 5750.8-2006 生活饮用水标准检验方法 有机物指标》是在实验室样品经过前处理，将5L水样浓缩到1ml，进样量20μl，检出限为0.06μg/L，不考虑前处理，直接进样检出限相当于6ng/ml，这个检出限在常规方法中算是低的）。该方法可根据样品中微囊藻毒素的含量选择适当的进样量，进样量0.01ml～1000ml（甚至更大）可选，进样体积由所安装的定量环容积决定。检出限能降低几十、几百、甚至几千倍，是低含量尤其是在线低含量微囊藻毒素水样检测的好方法。方案二： 大定量进样高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法检测。 在检测允许范围内进样量尽可能大（只针对低含量样品），保证色谱峰高足够高，以减小分析误差。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法分析，进样量大会影响色谱峰宽及色谱峰形，所以进样量也只能在一个合理的范围，不能无限大。既要保证进样量大又要保证色谱峰宽及色谱峰形，色谱条件的选择非常关键，尤其是色谱柱和流动相。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011932310119_8947_2369266_3.png[/img][/align][align=center]图10 大定量进样高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法检测流程图[/align] 仪器配置：高压输液泵1台，六通自动进样阀1个（带1套0.5ml定量环），色谱柱1根，柱温箱1台，紫外检测器1台，三通电磁阀1个，进样泵（或高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]自动进样器）1台，工作站1套，配件1套（包括废液桶、管路、接头等）。 核心部件：色谱柱。该检测方法对色谱柱要求较高，要求色谱柱耐污染能力强，耐水性，分离速度快，分离效果好，色谱峰形好等。本文选择的这款色谱柱通过对孔径、比表面和碳含量等色谱参数的优化，绝佳的平衡了保留、分离度、耐污染关系，寿命较长。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011932312862_9074_2369266_3.png[/img][/align][align=center]图11 色谱柱[/align]色谱条件：色谱柱：ODS C[size=9px]18[/size]色谱柱，Venusil XBP (L) 4.6mm×150mm×5μm流动相：乙腈：水：三氟乙酸=40%：60%：0.05%进样过程（以0.5 ml进样体积为例）时间表：[table][tr][td][align=center]时间（min）[/align][/td][td][align=center]进样状态[/align][/td][td][align=center]进样过程[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0[/align][/td][td]装样，进样泵启动[/td][td]样品由进样泵注入进样阀定量环中[/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td]进样，进样泵停止[/td][td]切换定量进样阀，样品由输液泵带入色谱柱中，样品进入色谱柱由流动相洗脱后进入检测器检测，最后排入废液桶中[/td][/tr][tr][td][align=center]14[/align][/td][td][align=center]定量进样阀恢复初始状态，进样泵启动[/align][/td][td]通过切换进样泵前三通电磁阀，进样泵将清洗液注入定量进样阀，清洗定量环[/td][/tr][tr][td][align=center]15[/align][/td][td][align=center]进样泵停止[/align][/td][td]该进样、检测周期完成[/td][/tr][/table]流速：1ml/min检测器：紫外检测器检测波长：238nm柱温：35℃ 工作流程：输液泵保持正常运行。进样泵向进样阀注入处理好的样品，定量后切换该进样阀，样品由流动相（来自输液泵）带入色谱柱，样品在色谱柱中经过流动相洗脱逐渐分离，分离后的样品由流动相带入紫外检测器检测，检测谱图及结果在电脑工作站中显示储存，检测完成后样品及流动相流入废液桶中。进样泵完成对管路及进样阀清洗后各工作单元恢复初始，该检测周期完成。 试验对比（进样量相同，进样体积不同）： 直接进样20μl，标准样品浓度20ng/ml，色谱图情况[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011932312483_9082_2369266_3.png[/img][/align][align=center]图12 微囊藻毒素（RR）标准样品浓度20ng/ml色谱图[/align] 该检测方法噪声约3.6μAu，样品峰高32μAu，标准样品浓度20ng/ml，按3倍噪声计算检出限，检出限约6.75 ng/ml。 大定量进样0.5ml，标准样品浓度0.8ng/ml，色谱图情况[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011932314152_8360_2369266_3.png[/img][/align][align=center]图13 微囊藻毒素（RR）标准样品浓度0.8ng/ml色谱图[/align] 该检测方法噪声约3.8μAu，样品峰高33μAu，标准样品浓度0.8ng/ml，按3倍噪声计算检出限，检出限约0.28 ng/ml。 直接进样20μl，标准样品浓度400ng/ml，色谱图情况[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011932315266_8178_2369266_3.png[/img][/align][align=center]图14 微囊藻毒素（RR）标准样品浓度400ng/ml色谱图[/align] 该检测方法检测400ng/ml微囊藻毒素（RR），保留时间7.33min，峰高631，峰面积13205。 大定量进样0.5ml，标准样品浓度16ng/ml，色谱图情况[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011932318086_573_2369266_3.png[/img][/align][align=center]图15 微囊藻毒素（RR）标准样品浓度16ng/ml色谱图[/align] 该检测方法检测16ng/ml微囊藻毒素（RR），保留时间7.63min，峰高568，峰面积12779。峰高比直接进样（等效进样量）略低，峰面积相当于直接进样的96.77%。 4ng/ml样品经过固相萃取、氮气吹干、定量等前处理富集后直接进样20μl，样品浓度等效直接进样400ng/ml，色谱图情况[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011932319756_5075_2369266_3.png[/img][/align][align=center]图16 微囊藻毒素（RR）标准样品经过固相萃取等前处理色谱图[/align] 该检测方法检测，保留时间7.30min，峰高615，峰面积11495。峰高比直接进样（等效进样量）略低，峰面积相当于直接进样的87.05%。小结： 直接进样20μl，检出限约6.75 ng/ml；大定量进样0.5ml，检出限约0.28ng/ml，检出限比直接进样低24.11倍（进样量相同，进样体积相当于25倍），实现更低检出限检测。直接进样20μl，样品浓度400ng/ml，色谱峰面积13205；大定量进样0.5ml，样品浓度16ng/ml，色谱峰面积12779，等效进样量峰面积是直接进样峰面积的96.77%（该处介绍的是常规进样和大定量进样检测的差别。色谱检测标准品和样品在同一色谱系统中进行，采用外标法分析，外标法对检测结果影响很小）。 大定量进样高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法检出限低，进样过程中的损耗较实验室富集前处理损耗低，可实现水中低含量微囊藻毒素（[font='times new roman']RR[/font]）高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法在线检测。 优势：检出限低。样品中微囊藻毒素（RR）含量较低，常规高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法无法检出。该方法可根据样品中微囊藻毒素的含量选择适当的进样量（定量环），进样量在0.02 ml～0.6ml范围可选。这样检出限就能降低几倍到几十倍。仪器配置相对简单，成本低很多。该方法是样品中微囊藻毒素（RR）含量较低时比较理想（可以优先考虑）的检测方法。 结论：以上两种检测方案都能较好的检测含量较低的微囊藻毒素（RR）样品，区别是第一种方案进样量更大检出限更低，更适用于超低含量检测，但仪器配置较复杂，成本较高。第二种方案检出限没有第一种低，但仪器配置较简单，成本较低，适用于较低含量检测。具体检测时可根据实际情况选择理想的检测方法，从而达到更满意的结果。 以上两种方法检出限均较低，可供其它低含量样品高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法检测（在线富集进样或大定量进样）参考。参考文献[font='calibri']［[/font]1[font='calibri']］[/font][font='calibri']GB/T 5750.8-2006[/font] 生活饮用水标准检验方法 有机物指标.[font='calibri']［[/font]2[font='calibri']］[/font][font='calibri']GB/T 20466-2006 水中微囊藻毒素的测定[/font][font='calibri'].[/font][font='calibri']［[/font]3[font='calibri']］[/font][font='calibri']在线固相萃取-高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法测定水体中的多环芳烃 陈静等 分析化学（FENXI HUA XUE）研究报告 2014：[/font][font='calibri']1785-1790.[/font]

以前我也不知道辣度是如何评价的，没有想到，居然还有国家标准，而检测的组分居然是用液相色谱。标准里是测定2个组分，而我只测其中一个项目，晒晒图给你看看吧。用移液器称样品呢，辣椒油不要弄到手上哟，会辣手啊http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209071650_389283_1608710_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209071652_389286_1608710_3.jpg看看检测的色谱图，油里的杂质干扰还是比较少的http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209071652_389287_1608710_3.jpg你知道辣椒为什么辣了吗，就是因为有2个组分的含量不一样造成的