荧光分光光度法测定原理

用荧光分光光度法测定硒含量时的故障排除 荧光分光光度法是一种常用于测定硒含量的高效方法，但操作过程中难免会遇到一些故障。 1. 玻璃器皿污染 故障现象：测量结果偏高。 原因分析：玻璃器皿清洗不彻底，残留有硒污染物。 解决方法：使用前，将玻璃器皿用(1+1)硝酸浸泡至少4小时，然后用自来水和去离子水反复冲洗，确保器皿清洁透亮，不挂水珠。为避免交叉污染，用于原子荧光检测的玻璃容器应单独配制酸液浸泡并及时更换，禁止与其他检测器皿混用。 2. 仪器稳定性差 故障现象：测量结果波动大，重复性差。 原因分析：仪器未充分预热，或所处环境条件不稳定，如温度、湿度变化大。 解决方法：确保仪器在测试前充分预热，一般预热时间为30分钟以上。同时，保持实验室环境稳定，避免温度、湿度的大幅波动。此外，定期对仪器进行校准和维护，确保其处于最佳工作状态。 3. 样品处理不当 故障现象：测量结果偏低或不稳定。 原因分析：样品预处理过程中，硒的形态转化不完全，或样品中存在干扰物质。 解决方法：严格按照标准方法对样品进行预处理，确保各种形态的硒均转化为四价硒(Se4+)。在加入硼氢化钾(或硼氢化钠)反应前，可加入适当的掩蔽剂，消除干扰物质的影响。此外，注意控制样品的酸度和反应时间，确保反应完全。 4. 光源问题 故障现象：荧光信号弱，测量灵敏度低。 原因分析：光源老化或强度不足。 解决方法：定期检查光源的强度和稳定性，如发现光源老化或强度不足，应及时更换。同时，注意光源的散热，避免因过热而影响光源的使用寿命。 5. 数据处理错误 故障现象：测量结果与真实值存在系统偏差。 原因分析：标准曲线绘制不准确，或数据处理过程中存在错误。 解决方法：确保标准曲线的绘制准确可靠，使用高纯度的标准物质，并严格控制标准溶液的配制过程。在数据处理过程中，注意检查单位和量纲的一致性，避免因计算错误而导致的结果偏差。 用荧光分光光度法测定硒含量时，故障排除需要综合考虑仪器、操作和环境等多方面因素。通过严格的操作规范和细致的检查，可以有效提高测量的准确性和可靠性。

各位老师，有人在做这个《水质 苯并芘的测定 乙酰化滤纸层析荧光分光光度法》这个实验吗，他这个实验对荧光分光光度计的硬件要求都有哪些呢，或者推荐几款做这个实验的荧光分光光度计也可以。

准备工作 首先，我们需要准备一系列不同浓度的硒标准溶液。我们可以从0.1mg/ml的硒标准溶液开始，通过逐级稀释，配制出比如0.01mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml等不同浓度的标准溶液。这些浓度的选择应该覆盖我们预计样品中硒的浓度范围。 仪器准备 确保荧光分光光度计已经预热并校准好。我们需要选择适当的激发波长和发射波长。对于硒的测定，196.09nm和203.99nm是两个常用的激发波长，其中203.99nm具有最强的荧光强度，因此通常是首选。发射波长的选择则需要根据仪器的具体性能和我们实验的要求来确定。 测定荧光强度 接下来，我们需要测定每一个硒标准溶液的荧光强度。在测定之前，确保每个溶液都充分混合均匀，并放置在相同的测定条件下，比如温度、pH值等，以减少误差。对于每一个标准溶液，记录下其对应的荧光强度值。 绘制标准曲线 现在，我们可以开始绘制标准曲线了。以硒浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标，在坐标纸上或者使用数据处理软件（如Excel、Origin等）绘制出各个点的分布情况。然后，通过线性回归等方法，拟合出一条标准曲线。标准曲线的线性关系越好，我们后续的测定结果就会越准确。 检验标准曲线 为了确保标准曲线的可靠性，我们通常还需要进行一些检验。比如，可以配制一个已知浓度的硒溶液（其浓度应在标准曲线的浓度范围内），然后测定其荧光强度，看其是否落在标准曲线上。如果偏差较大，说明标准曲线可能存在一些问题，需要重新检查并绘制。 注意事项 在绘制标准曲线的过程中，需要注意以下几点： 确保所有溶液的配制和测定都是在相同的条件下进行的，以减少系统误差。 在测定荧光强度时，避免样品受到污染或者光照的影响，以免影响测定结果的准确性。 标准曲线的浓度范围应该尽可能覆盖我们预计样品中硒的浓度范围，以确保测定结果的可靠性。 通过以上步骤，我们就成功地绘制出了荧光分光光度法测定硒的标准曲线。在后续的样品测定中，我们只需要测定样品的荧光强度，然后通过标准曲线来计算其硒浓度即可。