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凝胶成像仪的基本原理

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凝胶成像仪的基本原理相关的论坛

  • 【资料】凝胶渗透分析的基本原理

    [img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=44047]凝胶渗透分析的基本原理[/url][color=red]【由于该附件或图片违规,已被版主删除】[/color]

  • 【讨论】凝胶成像仪 购买

    实验室准备购买一台凝胶成像仪,本人没有经验,请使用过凝胶成像仪的同志帮忙推荐一台,谢谢!http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09502.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09510.gif

  • 【讨论】凝胶成像仪 购买一例

    实验室准备购买一台凝胶成像仪,本人没有经验,请使用过凝胶成像仪的同志帮忙推荐一台,谢谢!http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09502.gif

  • 化学发光凝胶成像仪

    化学发光凝胶成像仪   http://cls.bnu.edu.cn/Portals/1/yqysb/images/凝胶成像/化学发光成像.jpghttp://cls.bnu.edu.cn/Portals/1/yqysb/images/凝胶成像/化学发光成像面板.jpg操作流程:1. 打开电脑;2. 打开成像仪器电源(左后侧)和CCD 电源(黑色),将样品放入工作台;3. 双击桌面上图标,打开Quantity One 软件,或从开始-程序-The Discovery Series/Quantity One进入;4. 从File 下拉菜单栏中选择ChemiDoc XRS…,打开图像采集窗口;5. Select Application 选择相关应用;aUV Transillumination 透射UV:针对DNA EB 胶或其他荧光,打开仪器面板上UV 按钮;bWhite Transillumination 透射白光:针对透光样品如蛋白凝胶,x-光片,把白光灯箱 放在UV工作台上,打开仪器面板上Trans-White;cWhite Epillumination 侧面白光:针对不透光样品或蛋白凝胶,打开仪器面板上Epi-White6. 单击Live/Focus 按钮,激活实时调节功能,此功能有三个上下键按钮:IRIS(光圈),ZOOM(缩放),FOCUS(聚焦),您可在软件上直接调节或在仪器面板上手工调节,调节步骤:a调节IRIS 至合适大小b点ZOOM,将胶适当放大c调节FOCUS,至图像最清晰7. 如果是DNA EB 胶或其他荧光或蛋白凝胶,单击Auto Expose,系统将自动选择曝光时间成像,如不满意,单击Manual Expose,并输入曝光时间(秒),图像满意后保存;8. 如是化学发光,在Select Application 下选择Chemiluminescence 或Chemi Hi Sensitivity(如样品强度较弱),先打开Epi-White 侧面白光,同第5 步调节清楚膜的聚焦状态(如膜上没有可对焦的标记,可用记号笔做个小记号)。然后关闭光源,不打开任何光源,将滤光片位置换到o 位(仪器上方右侧),将光圈Iris 开到最大,选择Auto Expose 自动曝光,或输入ManualExpose 时间,可对化学发光的弱信号进行长时间积累如30min,或单击Live Acquire 进行多桢图象实时采集,在对话框内定义曝光时间长短,采集几桢图象,在采集的多桢图象中选取满意的保存。 化学发光是特别弱的发光,所以曝光可以很长,记得做完化学发光后,把滤光片位置换到原先的位置(I 位)。

  • 【分享】凝胶层析的知识(基本原理,凝胶类型与选择,凝胶的处理)

    基本原理凝膠過濾法(gel filtration)也稱為排阻層析(exclusion chromatography)、凝膠層析(gel chromatography)或分子篩層析(molecular sieve chromatofraphy),它是在1960年後發展出來的技術。凝膠是由膠體溶液凝結而成的固體物質,內部具有網狀篩孔,利用球狀凝膠內的篩孔,使分子流過填充凝膠的管柱時,大分子無法進入凝膠篩孔,而只流經凝膠及管柱間的孔隙,很快就可以流出管柱,較小的分子因為進入凝膠內的篩孔,故在管柱內的停留時間較長,由此區分大小不同的分子,亦可與已知大小的分子作比較而定出一分子的分子量。一般狀況下,凝膠不會吸附成份,所有欲分離物質都會被洗出,這是凝膠層析法與其它層析法不同的地方。目前常用的凝膠包括3個主要類型:1. PolydextranPolydextran的商品名稱是Sephadex,它幾乎不溶於溶劑中,親水性強,能迅速在水和電解質溶液中膨脹,在鹼性的環境中十分穩定,所以可以用鹼去除凝膠上的污染物。Sephadex依其吸水量有不同型號,如 G-25、G-75、G-100或是G-200,G 後面的數字為凝膠吸水量再乘以10,以G-25為例,表示1克乾燥的G-25凝膠可以吸水2.5 ml 。2. PolyacrylamidePolyacrylamide是一種合成凝膠,商品名Bio-Gel P,乾粉顆粒狀,在溶劑中自動溶成膠體,依膠的分離範圍不同,分成Bio-Gel P-2至Bio-Gel P-300,P後面的數字乘以1000為最大過濾限度。Polyacrylamide的化學性質不活潑,但它在極端的pH 下會被水解,水解後產生的COOH-具有離子交換的性質,因此pH 值應盡量控制在2-10之間。3. Agarose商品名Separose,屬於天然凝膠,依凝膠中乾膠的百分含量,分為Sepharose 2B,4B和6B。Agarose gel 是一種大孔凝膠,主要用於像核酸或病毒這些分子量400,000以上的物質,因其顆粒軟,在分離過程有時會阻塞管柱,造成流速減慢,又因其在攝氏50度以上會融化,故需於較低溫的環境中進行層析。Agarose 做成beads後不能再脫水乾燥,所以要在溼態中保存。凝膠和管柱的選擇凝膠的材質需為化學惰性,與分離物不能產生變性(denature)或是其它化學反應,最好具有能長期反覆使用的穩定性,並可以在較大的pH和溫度範圍內使用。由於凝膠上的離子交換基團會吸附帶電荷的物質,產生離子交換的效果,所以凝膠上最好不具有離子交換的基團。此外,凝膠要有一定的機械強度,在層析過程中才不會變形,增加機械強度也可使層析在較高壓力的環境進行,縮短分離時間。凝膠顆粒的粗細與分離效果有直接關係,顆粒細的分離效果好,但流速慢而費時,因此要依據實際的需要來選擇。對於分子量較小的物質,一般採用polydextran或polyacrylamide材質的凝膠,大分子物質則使用agarose。以Sephadex為例,Sephadex G-50可用於區分分子量1,500~30,000之分子,而Sephadex G-75 凝膠可區分分子量3,000~70,000之分子,所以若要分離分子量10,000及20,000之分子,兩種都適用。如果要分離的分子大小相差很多,則可選用柱高:直徑=5:1~15:1的管柱,且管柱體積要大於4~15倍的樣品體積;如果要分離的物質之間分子量差異不大,則要選用柱高:直徑=20:1~100:1的管柱,且管柱體積要大於25~100倍的樣品體積。凝膠的處理 商品凝膠一般是乾燥的顆粒,使用前要先泡在欲使用的沖洗液中,使它充份膨脹,否則有引起凝膠柱破裂的危險。熱脹法是常用的前處理法,即把浸於沖洗液中的凝膠加熱,讓它膨脹並除去氣泡,溫度夠高的話(加溫至近沸騰)也可消毒殺菌。凝膠處理過程不能劇烈攪拌,如此易使顆粒破裂,影響流速。將凝膠裝入管柱的方法有很多種,實驗室常用的方法是先在柱中加入約1/3 體積的沖洗液,邊輕輕攪伴邊將凝膠懸浮液倒入其中,等到底部沉積約1~2公分的凝膠後,打開下方出口讓水流出,上面不斷加入懸浮液,等到沉積到離頂部約3~5公分處停止,讓3~5倍柱床體積的緩衝液流過層析柱。若用polydextran的凝膠,可放入有顏色的蛋白質(如cytochrome c)流過管柱,看看色帶是否均勻下降,不均勻或出現氣泡,凝膠均需倒出重新填裝。衝洗緩衝液僅需留高於柱床2 公分左右,多餘的可用滴管吸去,再將出口打開使衝洗液流到距表面1~2公釐,關閉出口,用滴管緩緩加入樣品再打開出口,樣品完全滲入凝膠內後,加入約4公分衝洗液,出口處接上收集瓶開始層析。由於polydextran 和agarose都屬於多醣類,一旦微生物生長過多,分泌的酶會水解凝膠使其性質改變,為了防止這種情況發生,凝膠最好採用真空或低溫保存,但溫度不能過低使凝膠凍結。加入抑菌劑(chlohexidine, chlorbutol, phenylmercuric salts, NaOH等)也是常用的方法。長時間不用的凝膠可用乾燥保存法,也就是把使用過的凝膠用水除去碎顆粒和雜質,再用不同濃度的酒精,由70%、90%到95%逐步脫水,在攝氏60~80度下烘乾,不能加熱的Sepharose則用乙醚洗滌乾燥。

  • 凝胶成像系统采购注意事项

    凝胶成像系统包括成像系统和分析凝胶图片的软件系统。我们在选购时需要分别从这两个部分来考察凝胶成像系统的功能参数。  如果您主要用它来拍普通核酸胶或蛋白胶,那么几乎市场上所有的成像仪都可以很好的满足您的需求。这时除了价格这个决定因素外,能比较的也就是一些操作是否简便等不太重要的指标了。  但是对于准备做化学发光的用户,他们需要对敏感度要求高,同时还要求比较宽的动态范围。因为要想捕获到微弱的化学发光,需要上佳的CCD相机和镜头。  一般来说,CCD相机的冷却温度和背景噪音息息相关,温度越低,噪音就越低。因此,-25℃的绝对制冷温度是对相机的第一个要求(更低的温度,噪音降低效果不明显,而量子效率又会受很大影响);另外,较大的像素能够提供更高的捕光效率;所以对于相同大小的CCD芯片,需要注意像素的尺寸。  镜头的参数就简单了,由于我们只需要观察近距离的样品,而且一般可以调整样品位置(有些厂家甚至提供电动样品升降平台),所以基本无需选择长镜头或者变焦镜头;但是,由于我们需要检测微弱的化学发光,镜头的光圈则至关重要,一般F值越小,其通光量越大,而且成平方反比关系,因此我们一般需要选择光圈F值尽量小的镜头。另外,如果镜头是电动的,我们可以省却打开机箱,反复手工调整光圈和聚焦等的烦恼。  其他我们需要考虑的包括光源、滤光片和暗箱等部件。光源的种类和发光的均一度,滤光片的数量和暗箱的遮光效果等均在我们的考虑范围之内。当然,一般如果成像仪的CCD和镜头配置不错,一般这些部件也不会太差。  在选择凝胶成像系统时,我们关注的问题通常有以下一些方面:1、像素越高是不是成像更清晰,产品就越好?  像素是要针对成像设备来看的,其实CCD本身的质量比单纯的像素高低更重要。对于同级别CCD来说,最重要的指标是CCD的尺寸大小,尺寸越大其本身价值就成几何倍地增长。  2. CCD和CMOS有什么区别,哪种芯片更好?  CCD和CMOS在制造上的主要区别是CCD是集成在半导体单晶材料上,而CMOS是集成在被称做金属氧化物的半导体材料上。  从原理上,CMOS的信号是以点为单位的电荷信号,而CCD是以行为单位的电流信号,前者更为敏感,速度也更快,更为省电。  但CCD制造工艺较复杂,采用CCD的摄像头价格都会相对比较贵。事实上经过技术改造,目前CCD和CMOS的实际效果的差距已经减小了不少。而且CMOS的制造成本和功耗都要低于CCD不少,所以很多摄像头生产厂商采用的CMOS感光元件。  在成像方面,相同像素下CCD的成像通透性、明锐度都很好,色彩还原、曝光可以保证基本准确。而CMOS的产品往往通透性一般,对实物的色彩还原能力偏弱,曝光也都不太好,由于自身物理特性的原因,CMOS的成像质量和CCD还是有一定距离的。但由于CMOS低廉的价格以及高度的整合性,因此在摄像头领域还是得到了广泛的应用。  现在高级的CMOS并不比一般CCD差,但是CMOS工艺还不是十分成熟,普通的CMOS 一般分辨率低而成像较差。  目前的情况是,许多低档入门型的数码相机使用廉价的低档CMOS芯片,成像质量比较差。普及型、高级型及专业型数码相机使用不同档次的CCD,个别专业型或准专业型数码相机使用高级的CMOS芯片。代表成像技术未来发展的X3芯片实际也是一种CMOS芯片。  CCD与CMOS孰优孰劣不能一概而论,但一般

  • 正确选择适合的实验室成像仪

    作为实验室里最为常用的仪器之一,成像设备直接为您的论文提供影像。而这些影像质量的好坏,有时候甚至决定着您的论文能否发表。当然,拥有一台好的、运行稳定的设备也是老板和技术主管的心愿。那么,如何从纷繁的市场上选择到一款好的成像设备呢?很多号称“王牌”的设备是否真的能够打满分呢?下面的文章就向您介绍选择成像系统的“四项基本原则”。有了这些原则,您在选择成像仪时自然成竹在胸,无往不胜。原则一:“只选对的,不选贵的”市场上各品牌、各型号的成像仪林林种种,但是从成像原理上可以分成两大类,分别是拍照成像和扫描成像。拍照成像简单说就是样品和相机的相对位置不动,可以进行单次成像或多次成像;而扫描成像则是相机对样品进行局部成像,然后通过样品或相机的移动对整个样品进行成像。拍照成像目前主要采用CCD相机成像,由于可以设置不同的曝光时间,常被用来进行微弱的化学发光及生物发光的成像。而扫描成像则由于精度高、重复性好被广泛用于大型样品以及多通道成像中。可以说,对于大型样品或多通道应用,能选择扫描成像的,尽量不要选择拍照成像。原理搞清楚了,选择起来就简单了。不同的原理导致了不同应用的最佳选择,所以千万不要相信什么“全能王”之类的鬼话,没有任何一款机器可以通吃所有应用领域。下面就实验室最常见的一些应用简单的说明选择的依据:核酸电泳凝胶:一般此类凝胶都采用EB染色、紫外激发,而且凝胶较小。推荐采用一般的凝胶成像设备即可完成。蛋白电泳凝胶:一般此类凝胶采用考染或银染,白光透射成像。对于小型凝胶您可以选择一般的凝胶成像设备,但是对于大型凝胶,特别是双向电泳凝胶,由于CCD拍照成像会有几何扭曲,而且透镜效应也会导致不同区域的信号强度差异,另外CCD拍照也无法保证不同凝胶的成像参数保持一致,因此扫描成像是最好选择。转印膜:这个稍微有些复杂。一般转印膜有比色法显色、同位素、化学发光和荧光等不同检测手段。比色法显色就是产生有颜色的条带或斑点,一般采用普通的凝胶成像设备即可;同位素可以采用压胶片曝光的方法,但是费时、费力而且容易过饱和,比较通用的方法是由FujiFilm在1981年发明的磷屏成像技术,获得信号潜影的磷屏通过激光扫描就可以获取同位素的信号。而化学发光是目前最常用的蛋白印迹的检测手段,无疑,冷CCD拍照成像对这种微弱的光信号是最合适的。荧光是所有这些检测手段中最令人赞叹的和最有前景的。这不仅仅是因为荧光染料具有最宽的动态范围,而且还在于它能够为我们提供多通路的检测途径(同样适用于凝胶,通用电气公司的2D DIGE技术就是采用三种荧光染料标记蛋白而形成多通路检测的)。当然,您可以使用单一荧光检测,这时您对凝胶成像设备的要求就包括了新的激光光源和相应的滤光片。如果您是一个完美主义者,或者您需要对邻近或重叠的目标分子进行成像,那么多通道荧光检测是您的不二之选。这时扫描成像绝对是最佳选择,这样选择不仅仅是因为扫描成像能够带来更高的灵敏度和分辨率,更重要的是,不同通道之间没有几何扭曲,拟合性好。微孔板及其他特殊需求:对于拍照成像而言,由于几何扭曲的问题,对微孔板成像就变得比较复杂了,一般必须一个专用的校正装置才可完成。当然,如果采用扫描成像一般不需要任何额外附件。很多实验室现在都对小动物成像非常感兴趣,然而对小动物进行真的不是一件简单的事,一方面小动物需要进行麻醉和固定;另一方面还需要对信号位置进行三维定位。因此,能同时提供功能、代谢和解剖图像的PET/CT是进行这类成像的最有力的工具。限于篇幅,这部分将不做更多介绍。原则二:实践是检验真理的唯一标准这可不是在上政治课,每个厂家都对自己的产品是“王婆卖瓜,自卖自夸”,经常给您上两个小时课中间还不用休息,什么“专利技术”、“人性化设计”、“生命科学产业大奖”。只有您想不到的,没有他做不到的。可是,这些东西对用户到底有什么意义?就没有几个人说得清了。好用才是硬道理。任凭你说得天花乱坠,拿来我试试,不就什么都清楚了。现在多数厂商都提供Demo机服务,还有技术人员现场答疑解惑,那就请各位上场,真刀真枪的拼一下,谁的性能好,价格优,那我就要谁的。当然,我们的实际测试结果仅仅是针对我们自己的样品和现场demo的机器而已。我们不能据此对相关品牌和相关型号做太多评判。由于具体应用的限制、操作技巧的差异以及可能的仪器状态的区别,我们有可能没有给出公允的评价。但无论如何,这些讯息对我们采购者和使用者来说都是非常重要的。

  • 【分享】如何选购凝胶成像系统 注意事项(一)

    凝胶成像系统包括成像系统和分析凝胶图片的软件系统。我们在选购时需要分别从这两个部分来考察凝胶成像系统的功能参数。  如果您主要用它来拍普通核酸胶或蛋白胶,那么几乎市场上所有的成像仪都可以很好的满足您的需求。这时除了价格这个决定因素外,能比较的也就是一些操作是否简便等不太重要的指标了。  但是对于准备做化学发光的用户,他们需要对敏感度要求高,同时还要求比较宽的动态范围。因为要想捕获到微弱的化学发光,需要上佳的CCD相机和镜头。  一般来说,CCD相机的冷却温度和背景噪音息息相关,温度越低,噪音就越低。因此,-25℃的绝对制冷温度是对相机的第一个要求(更低的温度,噪音降低效果不明显,而量子效率又会受很大影响);另外,较大的像素能够提供更高的捕光效率;所以对于相同大小的CCD芯片,需要注意像素的尺寸。  镜头的参数就简单了,由于我们只需要观察近距离的样品,而且一般可以调整样品位置(有些厂家甚至提供电动样品升降平台),所以基本无需选择长镜头或者变焦镜头;但是,由于我们需要检测微弱的化学发光,镜头的光圈则至关重要,一般F值越小,其通光量越大,而且成平方反比关系,因此我们一般需要选择光圈F值尽量小的镜头。另外,如果镜头是电动的,我们可以省却打开机箱,反复手工调整光圈和聚焦等的烦恼。  其他我们需要考虑的包括光源、滤光片和暗箱等部件。光源的种类和发光的均一度,滤光片的数量和暗箱的遮光效果等均在我们的考虑范围之内。当然,一般如果成像仪的CCD和镜头配置不错,一般这些部件也不会太差。  在选择凝胶成像系统时,我们关注的问题通常有以下一些方面:

  • SmartGel™一体化凝胶成像仪

    SmartGel™一体化凝胶成像仪

    SmartGel一体化凝胶成像仪http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/08/201408261520_511707_2925070_3.jpg产品详细描述性能特点:①完全一体化设计将计算机整合在内,无需另外购买,真正做到拍摄和分析一体化。②占地面积小,宽度仅有32cm,只需狭小空间就可安放。③安装快捷,您只需要将SmartGel从包装箱取出,接上电源,打开开关就可开始使用。④真正的免培训设计,无需工程师上门,自动向导功能让您轻松掌握产品的使用。⑤专利的人机工程学设计让您在使用时保持最舒适的操作视角。⑥全触摸式显示屏可控制拍摄和分析的所有流程,可连接打印机、鼠标和键盘,可通过USB和网络进行各种图形和数据文件的交换。⑦先进的网络教学和远程诊断技术的应用让您后顾无忧。应用领域:可适用于各种紫外和可见光样品的拍摄何分析,包括:①EB、GoldView、SYBR Green等染色的DNA/RNA琼脂糖电泳凝胶;②考马斯亮蓝、银染等染色的蛋白质电泳凝胶;③印迹杂交膜(Southern、Northern、Western、Dot/Slot blot等;④克隆计数、抑菌圈、物体切片测量等样品。http://www.bioon.com.cn/ewebeditor/fckup/2014/7/20140723151422487231.jpg北京赛智创业科技有限公司地址:北京市海淀区清河龙岗路27号1号楼203室电话:010-62991647

  • 【原创大赛】凝胶成像系统选购要点

    凝胶成像系统包括成像系统和分析凝胶图片的软件系统。我们在选购时需要分别从这两个部分来考察凝胶成像系统的功能参数。  如果您主要用它来拍普通核酸胶或蛋白胶,那么几乎市场上所有的成像仪都可以很好的满足您的需求。这时除了价格这个决定因素外,能比较的也就是一些操作是否简便等不太重要的指标了。  但是对于准备做化学发光的用户,他们需要对敏感度要求高,同时还要求比较宽的动态范围。因为要想捕获到微弱的化学发光,需要上佳的CCD相机和镜头。  一般来说,CCD相机的冷却温度和背景噪音息息相关,温度越低,噪音就越低。因此,-25℃的绝对制冷温度是对相机的第一个要求(更低的温度,噪音降低效果不明显,而量子效率又会受很大影响);另外,较大的像素能够提供更高的捕光效率;所以对于相同大小的CCD芯片,需要注意像素的尺寸。  镜头的参数就简单了,由于我们只需要观察近距离的样品,而且一般可以调整样品位置(有些厂家甚至提供电动样品升降平台),所以基本无需选择长镜头或者变焦镜头;但是,由于我们需要检测微弱的化学发光,镜头的光圈则至关重要,一般F值越小,其通光量越大,而且成平方反比关系,因此我们一般需要选择光圈F值尽量小的镜头。另外,如果镜头是电动的,我们可以省却打开机箱,反复手工调整光圈和聚焦等的烦恼。  其他我们需要考虑的包括光源、滤光片和暗箱等部件。光源的种类和发光的均一度,滤光片的数量和暗箱的遮光效果等均在我们的考虑范围之内。当然,一般如果成像仪的CCD和镜头配置不错,一般这些部件也不会太差。  在选择凝胶成像系统时,我们关注的问题通常有以下一些方面:1、像素越高是不是成像更清晰,产品就越好?  像素是要针对成像设备来看的,其实CCD本身的质量比单纯的像素高低更重要。对于同级别CCD来说,最重要的指标是CCD的尺寸大小,尺寸越大其本身价值就成几何倍地增长。  2. CCD和CMOS有什么区别,哪种芯片更好?  CCD和CMOS在制造上的主要区别是CCD是集成在半导体单晶材料上,而CMOS是集成在被称做金属氧化物的半导体材料上。  从原理上,CMOS的信号是以点为单位的电荷信号,而CCD是以行为单位的电流信号,前者更为敏感,速度也更快,更为省电。  但CCD制造工艺较复杂,采用CCD的摄像头价格都会相对比较贵。事实上经过技术改造,目前CCD和CMOS的实际效果的差距已经减小了不少。而且CMOS的制造成本和功耗都要低于CCD不少,所以很多摄像头生产厂商采用的CMOS感光元件。  在成像方面,相同像素下CCD的成像通透性、明锐度都很好,色彩还原、曝光可以保证基本准确。而CMOS的产品往往通透性一般,对实物的色彩还原能力偏弱,曝光也都不太好,由于自身物理特性的原因,CMOS的成像质量和CCD还是有一定距离的。但由于CMOS低廉的价格以及高度的整合性,因此在摄像头领域还是得到了广泛的应用。  现在高级的CMOS并不比一般CCD差,但是CMOS工艺还不是十分成熟,普通的CMOS 一般分辨率低而成像较差。  目前的情况是,许多低档入门型的数码相机使用廉价的低档CMOS芯片,成像质量比较差。普及型、高级型及专业型数码相机使用不同档次的CCD,个别专业型或准专业型数码相机使用高级的CMOS芯片。代表成像技术未来发展的X3[font=宋体

  • 【分享】毛细管电泳的基本原理及应用

    高效毛细管电泳的基本原理 高效毛细管电泳(high performance capillary electrophoresis,HPCE)是近年来发展起来的分离、分析技术,它是凝胶电泳技术的发展,是高效液相色谱分析的补充。该技术可分析的成分小至有机离子、大至生物大分子如蛋白质、核酸等。可用于分析多种体液样本如血清或血浆、尿、脑脊液及唾液等,HPLC分析高效、快速、微量。 电泳迁移不同分子所带电荷性质、多少不同,形状、大小各异。一定电解质及PH的缓冲液或其它溶液内,受电场作用,样本中各组分按一定速度迁移,从而形成电泳。电泳迁移速度(v)可用下式表示: 其中E为电场强度(E=V/L,V为电压,L为毛细管总长度)。u为电泳淌度。 电渗迁移电渗迁移指在电场作用下溶液相对于带电管壁移动的现象。特殊结构的熔合硅毛细管管壁通常在水溶液中带负电荷,在电压作用下溶液整体向负极移动,形成电渗流。带电微粒在毛细管内实际移动的速度为电泳流和电渗流的矢量和。分析化学博客-jl2~d d&6}8eE4B3q5T I5U0 分离分析类型B[D hv,m cF2Z0 根据其分离样本的原理设计不同主要分为以下几种类型:b[ _0]&uL+\$C0①毛细管区带电泳(capillaryzoneelectrophoresis,CZE);②毛细管等速电泳(capillary chromatography,CITP);③毛细管胶速电动色谱(miceller electrokinetic capillary chromatography,MECC);④毛细管凝胶电泳(capillary gelelectrophoresis,CGE);⑤毛细管等电聚焦(capillary isoelectric focusing ,CIEF)。毛细管区带电泳(CZE)为HPCE的基本操作模式,一般采用磷酸盐或硼酸盐缓冲液,实验条件包括缓冲液浓度、pH值、电压、温度、改性剂(乙腈、甲醇等),用于对带电物质(药物、蛋白质、肽类等)分离分析,对于中性物质无法实现分离。毛细管胶束电动色谱(MECC)为一种基于胶束增溶和电动迁移的新型液体色谱,在缓冲液中加入离子型表面活性剂作为胶束剂,利用溶质分子在水相和胶束相分配的差异进行分离,拓宽了CZE的应用范围,适合于中性物质的分离,亦可区别手性化合物,可用于氨基酸、肽类、小分子物质、手性物质、药物样品及体液样品的分析。毛细管等速电泳(CITP)采用先导电解质和后继电解质,构成不连续缓冲体系,基于溶质的电泳淌度差异进行分离,常用于离子型物质(如有机酸),并因适用较大内径的毛细管而可用于微制备,但本法空间分辨率较差。毛细管等电聚焦电泳(CIEF)用于具兼性离子的样品(蛋白质、肽类),等电点仅差0.001可分离的物质。毛细管凝胶电泳(CGE)依据大分子物质的分子量大小进行分离,主要用于蛋白质、核苷酸片段的分离。此外,还有毛细管电色谱(CEC)及非水毛细管电泳(CNACE),用于水溶性差的物质和水中难进行反应的分析研究。CZE和MECC用得较多,本文以两种方法为例来说明HPLC的原理。

  • 电泳时胶回收和凝胶成像的需要注意事项有哪些

    电泳时胶回收切胶的注意事项:  1. 电泳的buffer和gel都是新制的,切胶的台子清理干净,刀片最好洗净灭菌,总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。  2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。为了减少胶的体积,可以用相对比较薄的胶来做,只要够点样即可,也可采用薄而宽的梳子来跑胶。  3. 关于防护,在一般有机玻璃后就足够了,戴上防护面具以保护眼睛,如果戴树脂眼镜就可以了。要是非常害怕紫外照射,或者对于胶有特殊要求,例如要求不含EB,可以采用点marker和带刻度的尺子一起照相的方法来确定目的条带在胶上的位置进行切胶。  4. 按照正常程序点marker跑胶,然后切下有marker的胶,EB染色,紫外灯下与带刻度的尺子一起照相。由于要回收的带与marker间的相对位置已知,根据尺子来衡量未染色胶上目的带的位置即可。如果觉得很难判断,可以直接在marker边点少量的样,这样位置就容易确定了。  凝胶成像分析系统的使用和注意事项:  凝胶成像分析系统:可以应用在蛋白电泳凝胶,DNA凝胶,样品进行图象采集并进行定性和定量分析,样品包括:EB、SYBR Green、SYBR Gold、Texas Red、GelStar、Fluoroscecin、 Radiant Red等染色的核酸监测;以及Coomassie Blue、SYPRO Orange、各种染色的蛋白质凝胶如考染等。(或UV,EB和有色及可见样品成像)  使用注意事项:  • 注意开机顺序,先开凝胶成像系统,再打开电脑进入软件。  • 紫外凝胶照相时要防止EB 污染仪器,凝胶成像系统的门不能用污染的手套接触,进行软件操作时同样不能被污染的手套接触。凝胶成像仪推荐  • 在使用紫外光源照相的过程中,不可以打开凝胶成像系统前面板。  • 照相后经废胶取出,并用较软的纸擦拭干净。  • 调焦时要轻,动作不要剧烈。  • 环境电压 不稳定 时,请使用稳压电源。使用过程中如遇断电,请及时将仪器电源关闭,直至重新来电。  • 使用时,请先打开仪器的电源开关,再打开电脑开关并打开软件( Quantity One )。  • 保持观测室内环境干燥,及时将遗留在观测板上的水或其他液体檫干(可使用软质纸,一般卷纸即可)。  • 观测用 EB (溴乙锭)染色的凝胶时,注意不要污染仪器表面。千万不要用手直接接触凝胶,或戴着接触过凝胶的手套去接触仪器的门和观测台的把手。  • 使用仪器时,要将门及观测台关紧,否则将无法正常使用紫外灯。  • 尽可能不要将电脑连接到因特网或局域网上,同时在电脑上安装杀毒软件(推荐使用正版软件),做到专机专用。  • 较长时间不用仪器时,请将仪器用防尘罩盖上。  • 为延长灯管的使用寿命,请观测好凝胶后及时关闭光源(仪器自身有 15 分钟的自动保护程序)。 转自上海思伯明仪器设备www.springsci.com.cn

  • 化学反应中的电子——基本原理

    化学反应中的电子——基本原理[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=15753]化学反应中的电子——基本原理[/url]

  • 凝胶成像的基本用途及发展预测

    专家介绍:大部分凝胶成像系统提供了不同的产品特性来满足不同科学研究的需要。凝胶成像分析软件功能介绍:凝胶图象剪辑处理,标记,自动寻找凝胶条带,与公用的标准条带或自选的标准条带比较,条带(泳道)迁移路径的校正,核酸、蛋白的处理,计算相应的数值,详细的分析结果可输出成EXCEL格式,根据需要编辑。另外一种更基础用途的型号Gel Doc XR,主要用于快速高分辨率成像,但没有化学发光成像功能。该系统包含一个暗室、一个1.4兆像素的CCD照相机、UV和白光照明、琥珀色滤光玻片和UV防护罩。Gel Doc XR系统也可以升级为ChemiDoc XRS系统,两种系统都包含了图像获取和分析软件 ——Quantity One。该系统尤其适用于蛋白组分析,例如可以利用Quantity One 1-D分析软件来估计蛋白样品的分子量和数量,也可以利用PDQuest 2-D分析软件来分析蛋白表达产物的差异。不管是什么用途,凝胶成像的组件都是相似的。都有一个拍摄系统、一个带有特殊光源的暗箱与获取和分析凝胶图片的软件组成。”但是,快速发展的电子技术、光学技术和成像分析软件使成像操作越趋人性化。随着分子生物学研究逐步普及凝胶成像系统在国内的需求在不断增长。

  • 我的『核磁共振波谱学的基本原理和实验』图书

    我的『核磁共振波谱学的基本原理和实验』图书

    书名:核磁共振波谱学的基本原理和实验作者:原现瑞出版社:河北人民出版社;出版年:2019年;页数:348页;装帧:平装;ISBN:978-7-202-12132-0;内容介绍:核磁共振(Nuclear magnetic resonance,NMR)包括液体NMR、固体NMR和NMR成像(Magnetic resonance imaging,MRI)等内容。液体NMR主要应用于化学,固体NMR应用于材料学,MRI应用于生物学和医学领域。本书论述液体NMR波谱学的基本原理和实验。 本书从量子力学的基础知识出发,介绍NMR波谱学的基本理论,用乘积算符公式分析一些经典脉冲序列和常用的1D和2DNMR实验,并给出NMR谱用于研究有机小分子结构的应用实例。 本书的目的是向这些非物理学专业人员介绍NMR波谱学的基本理论和常用实验,书中所采用的数学和物理的概念、模型或方法以简单介绍为主,数学公式的演算尽可能详细,以方便读者理解。 目前该书没有电子版,仅有纸质版,如有需要请与李润岩联系,电话:13784334153。谢谢!目录:第一章:核磁共振的概念和经典力学的理论解释第二章:量子力学基本知识第三章:量子力学中的算符和力学量;第四章:密度算符;第五章: 单自旋-1/2;第六章:二自旋体系;第七章:二自旋体系乘积算符之间的转化;第八章:一些经典的脉冲序列;第九章:一维NMR实验;第十章:同核二维NMR实验;第十一章:异核二维NMR实验;第十二章: 弛豫动力学;第十三章:用NMR谱研究有机化合物的分子结构;练习题及提示答案附录封面:[img=核磁共振波谱学,690,1064]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/07/202007151026532286_9904_1267429_3.jpg!w690x1064.jpg[/img]

  • pH电极、溶氧电极的基本原理和在生物发酵上的应用

    pH电极、溶氧电极的基本原理和在生物发酵上的应用 pH电极的基本原理:pH 测量中使用的电极又称为原电池。原电池是一个系统,它的作用是使化学能量转成为电能。此电池的电压被称为电动势(EMF)。此电动势(EMF)由二个半电池构成。其中一个半电池称作测量电极,它的电位与特定的离子活度有关;另一个半电池为参比半电池,通常称作参比电极,它一般是与测量溶液相通,并且与测量仪表相连。此二种电极之间的电压遵循能斯特(NERNST)公式: 其中:E——电位 E0——电极的标准电压 R——气体常数(8.31439焦耳/摩尔和℃ )T——开氏绝对温度(例:20 ℃ =273=293开尔文) F——法拉弟常数(96493库仑/当量)n——被测离子的化合价(银=1,氢=1) aMe——离子的活度标准氢电极是所有电位测量的参比点。标准氢电极是一根铂丝,用电解的方法镀(涂覆)上氯化铂,并且在四周充入氢气(固定压力为1013hpa)构成的。由于氢电极做为参比电极在实践中很难实现,于是使用第二类电极做为参比电极。其中最常用的便是银/氯化银电极。最熟悉也是最常用的 pH 指示电极。它是一支端部吹制上对于 pH 敏感的玻璃膜的玻璃管。管内充填有一定浓度的缓冲溶液。存在于玻璃膜内外两面的反映 pH 值的电位差用Ag/AgCL传导系统导出。此电位差同样遵循能斯特公式。

  • 凝胶成像系统

    各位大虾,小弟想请教凝胶成像系统知识,请问有没有比较详细的资料,最好是关于原理方面的。谢谢

  • 【分享】薄层色谱基本原理

    薄层色谱,或称薄层层析(thin—layer chromatography),是以涂布于支持板上的支持物作为固定相,以合适的溶剂为流动相,对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。这是一种快速分离诸如脂肪酸、类固醇、氨基酸、核苷酸、生物碱及其他多种物质的特别有效的层析方法,从50年代发展起来至今,仍被广泛采用。 基本原理薄层层析是把支持物均匀涂布于支持板(常用玻璃板,也可用涤纶布等)上形成薄层,然后用相应的溶剂进行展开。薄层层析可根据作为固定相的支持物不同,分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。吸附是表面的一个重要性质。任何两个相都可以形成表面,吸附就是其中一个相的物质或溶解于其中的溶质在此表面上的密集现象。在固体与气体之间、固体与液体之间、吸附液体与气体之间的表面上,都可能发生吸附现象。物质分子之所以能在固体表面停留,这是因为固体表面的分子(离子或原子)和固体内部分子所受的吸引力不相等。在固体内部,分子之间相互作用的力是对称的,其力场互相抵消。而处于固体表面的分子所受的力是不对称的,向内的一面受到固体内部分子的作用力大,而表面层所受的作用力小,因而气体或溶质分子在运动中遇到固体表面时受到这种剩余力的影响,就会被吸引而停留下来。吸附过程是可逆的,被吸附物在一定条件下可以解吸出来。在单位时间内被吸附于吸附剂的某一表面积上的分子和同一单位时间内离开此表面的分子之间可以建立动态平衡,称为吸附平衡。吸附层析过程就是不断地产生平衡与不平衡、吸附与解吸的动态平衡过程。例如用硅胶和氧化铝作支持剂,其主要原理是吸附力与分配系数的不同,使混合物得以分离。当溶剂沿着吸附剂移动时,带着样品中的各组分一起移动,同时发生连续吸附与解吸作用以及反复分配作用。由于各组分在溶剂中的溶解度不同,以及吸附剂对它们的吸附能力的差异,最终将混合物分离成一系列斑点。如作为标准的化合物在层析薄板上一起展开,则可以根据这些已知化合物的Rf值(后面介绍Rf值)对各斑点的组分进行鉴定,同时也可以进一步采用某些方法加以定量。薄层层析有许多优点:它保持了操作方便、设备简单、显色容易等特点,同时展开速率快,一般仅需15~20分钟;混合物易分离,分辨力一般比以往的纸层析高10~100倍,它既适用于只有0.01μg的样品分离,又能分离大于500mg的样品作制备用,而且还可以使用如浓硫酸、浓盐酸之类的腐蚀性显色剂。薄层层析的缺点是对生物高分子的分离效果不甚理想。

  • 顶空进样基本原理

    各位老师,我工作中一直使用顶空进样法来测定样品的有机溶剂残留,外标法做标曲,但是一直对于这个顶空法的基本原理不是很了解,为什么用顶空可以代表真实样品中的组分呢?基于什么定理?使用中有什么限制条件吗?

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