酶底物法微生物检测

不知道各位现在使用的是什么方法检测大肠总大肠菌群、粪大肠菌群（耐热大肠菌群）及大肠埃希氏菌，还是传统的多管发酵还是滤膜法呢，下面我为大家推荐一种新的方法——酶底物法。水质大肠菌群酶底物法检测系统：由LK-2014程控定量封口机、51或97孔定量检测盘、100mL定量瓶、酶底物检测试剂四部分组成。检测水样范围:饮用水、源水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、废水、食品水、畜牧用水、医疗用水等。该检测方法采用大肠杆菌产生β-半乳糖苷酶分解色源底物-ONPG(Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside) 使培养液呈黄色。大肠埃希氏菌产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4 - methyl-umbelliferyl-β-glucuronide）使培养液在波长366 nm 紫外光下产生荧光的原理,来定性定量水中总大肠菌群、粪大肠菌群（耐热大肠菌群）及大肠埃希氏菌。序号指标名称技术指标1名称程控定量封口机2用途用于GB5750-2006酶底物法检测水质总大肠菌群、大肠埃希氏菌，粪大肠菌群3可靠性无漏液,无破孔4稳定性可检测40,000个样品以上，使用寿命大于5年5方便性开/关及退格键有定量数显窗口,有保洁窗口6快捷性无需无菌室,24h检测水中总大肠菌群\大肠埃希氏菌\耐热大肠菌群7重量≤16kg8尺寸39cm 长 X 27cm 宽 X 30cm 高9预热时间≤14min10噪音50dba11外罩温度40oC12封口速度 13工作电压AC 220V±10％,50HZ14封口速度51孔、97孔定量检测盘封口时间≤12秒/个15工作环境温度-10oC-50oC16检测范围配合51孔定量检测盘检测范围0-200MPN/100ml(水样不稀释）配合97孔定量检测盘检测范围0-2419MPN/100ml(水样不稀释） 该检测方法是国际上发达国家普遍采用的检测方法,相比我国标准的检测方法,如多管发酵及滤膜法具简便快捷，其选择性培养基具有抑制杂菌的作用，假阳性低，定量准确。由于该方法的方便快速，在实验室日常检测中能提高效率，缩短检测时间，在应急监测中能及时报出数据，避免造成大的公共安全事故。

据我所知目前只有多管发酵法和膜过滤法两种国标，上一段时间疾控南京会上美国爱德士公司提出一种新的酶底物法，听说很快就会出来的，大家可否有相关消息？

酶底物法中用到的科立得试剂，方便携带外出，我想知道科立得一旦加入可以保存多久呢？如果说路程较远，当天来不及回来，我可以放在车载培养箱中，但是回来后还要倒入97孔定量板中，想知道科立得粉末保存时间有没有限制。

小编为你解忧，采用酶底物法对地表水水样进行不同倍数的稀释后进行培养检测,观察地表水结果变化。结果表明:地表水水样稀释倍数越小,结果越准确。采用酶底物法测定地表水中的粪大肠菌群具有快速、简便的特点,准确掌握水样稀释倍数对测定结果就越准确。【工作原理】加入含有总大肠菌群细菌的水样，放入程控定量封口机中，目标细菌在Minimal Medium ONPG-MUG培养基中36℃培养，总大肠菌群细菌产生的特异性生物酶β一半乳糖苷酶能分解MinimalMedium ONPG-MUG培养基中的色源底物ONPG,使培养呈现黄色；同时水样中大肠埃希氏菌产生特异性的β一葡萄糖醛酸酶分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的荧光底物MUG，产生特征性荧光。同样原理，耐热大肠菌群(粪大肠菌群)在44.5℃培养时会分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的色源底物ONPG，使培养基呈现黄色。程控定量封口机9900Z SEALER PLUS:智能程控定量封口机配合51孔定量盘或97孔定量盘提供简单、快速、准确的定量检测总大肠菌群、大肠埃希氏菌、粪（耐热）大肠菌群、肠球菌和绿脓假单胞菌的实验方案。捷骋牌51孔定量盘和97孔定量盘是基于传统方法最大可能数 (MPN) 统计模型而设计的半自动定量方法。· 通过9900Z sealer PLUS程控定量封口机自动将样品／试剂混合液分配到独立孔中。· 培养结束后，阳性孔数可以转化为 MPN 值。· 51孔定量盘可检测每 100 mL 水样中 1-200MPN 值。· 97孔定量盘可检测每 100 mL 水样中1-2,419 MPN 值。· 整个检测过程手工操作时间小于 1 分钟。【使用方法】定性测试：第一步、在100ml水样中加入试剂，溶解，36℃培养24h；第二步、结果判读 无色=阴性 黄色=总大肠菌群阳性 黄色+荧光=大肠埃希氏菌群阳性注：耐热大肠群菌（粪大肠菌群）需44.5℃培养24h后，观察黄色为阳性定量检测第一步、在100ml水样中加入试剂，溶解；第二步、倒入51孔定量检测盘（定量孔板）或97孔定量检测盘（定量孔板）中；第三步、用程控定量封口机对定量检测盘（定量孔板）进行封装，36 ℃培养24h；第四步、51孔定量检测盘（定量孔板）结果判读： 无色=阴性 黄色格子=总大肠菌群阳性黄色+荧光格子=大肠埃希氏菌群阳性查对照MPN表计数注：耐热大肠群菌（粪大肠菌群）需44.5℃培养24h后，观察黄色格子为阳性结果，查对照MPN表计数。97孔定量检测盘（定量孔板）结果判读无色=阴性 黄色格子=总大肠菌群阳性黄色+荧光格子=大肠埃希氏菌群阳性查对照MPN表计数注：耐热大肠群菌（粪大肠菌群）需44.5℃培养24h后，观察黄色格子为阳性结果，查对照MPN表计数

随着人们生活水平不断提高，各种安全问题越来越受到人们的重视，微生物的污染问题也相应地备受关注。在食品和环境等各个方面都有微生物污染的可能，一旦污染，微生物将大量繁殖而导致食源性疾病或环境污染甚至医院内感染。特别是近年来随着环境污染的加剧和生态平衡的不断破坏，导致感染的致病菌的种类越来越多，病原微生物对人类的威胁越来越大。传统的检验方法，主要包括形态检查和生化方法，其准确性、灵敏性均较高，但涉及的实验较多、操作烦琐、需要时间较长、准备和收尾工作繁重，而且要有大量人员参与。所以，迫切需要准确、省时、省力和省成本的快速检验方法。本文对微生物快速检测方法的进展情况及实际应用进行综述，以利于预防食源性疾病及公共卫生突发事件的发生。 1 即用型纸片法 　　3M公司的perrifilmTMPlate系列微生物测试片，可分别检测菌落总数、大肠菌群计数、霉菌和酵母计数。由RCPScientific Inc公司开发上市的Regdigel系列，除上述项目外还有检测乳杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌的产品，这两个系列的产品与传统检测方法之间的相关性非常好。如用大肠菌群快检纸片检测餐具的表面，操作简便、快速、省料，特异性和敏感性与发酵法符合率高，已经被列为国标方法。使用时应正确掌握操作技术和判断标准，从而达到理想的检测效果。美国3M公司生产的PF(Petrifilm)试纸还加入了染色剂、显色剂，增强了菌落的目视效果，而且避免了热琼脂法不适宜受损细菌恢复的缺陷。霉菌快速检验纸片，应用于食品检验中的霉菌具有操作简便，仅需36℃培养，不需要低温设备；快速，仅需2d就可观察结果，比现在的国家标准检验方法缩短3～5d，大大提高了工作效率。纸片法与国标法在霉菌检出率上差异无统计学意义，且菌落典型，易判定。纸片荧光法利用细菌产生某些代谢酶或代谢产物的特点而建立的一种酶—底物反应法。只需检测食品中大肠菌群、大肠杆菌的有关酶的活性，将荧光产物在365nm紫外光下观察即可。同时纸片可高压灭菌处理，4℃保存，简化了实验准备、操作和判断。但由于它们价格昂贵，限制了在基层单位的实际应用。

如题，大家都知道微生物测定现在大多用酶底物法测定总大和大肠，结果是查表得出来的结果，多数为带一位小数的结果，那出报告的时候，是原封不动呢，还是修约一下变成整数报出呢？大家所在的实验室都是怎么规定的，尤其是CMA认证过的实验室，最主要是有啥明确的依据不，欢迎大家讨论~

[size=4][B]农药残留检测生物传感器酶固定技术研究进展[/B][/size][I]罗启枚[/I]摘要：酶生物传感器在农药残留检测方面具有传统检测方法不可比拟的优势，而酶的固定技术将直接影响酶生物传感器的性能。该文就酶的不同固定方法和使用的不同载体材料，对近二十年来农药残留检测生物传感器酶的固定技术的研究进展进行综述，并就不同固定方法，不同固定方法的特点和不同载体材料对生物传感器性能的影响作了简单介绍。关键词：酶生物传感器；酶的固定；酶的固定载体材料[B]0 引言[/B]近几十年来，各种农药相继大量的生产和使用，极大促进了农业、林业的生产和发展。在目前世界范围内大量使用的农药中，大部分是毒性高、残留量大的有机磷农药，对环境和人们的身体健康构成了极大的威胁，对农林业的可持续发展也很不利。为了保护环境，保护人们的身体健康，对农林、水产品实时、快速、成本低廉的农药残留检测方法和技术一直是人类十分关注的焦点。当前，高效液相色谱法（HPLC）与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]X质谱联用方法（GCMS）是实验室常用的农药残留检测方法。虽然这些方法具有高的选择性和灵敏度，但是存在以下缺点：（1）因仪器体积庞大、结构复杂、价格昂贵；（2）农药残留检测时存在过程复杂、费时、费用高；（3）需要熟练的专业技术人员，无法做到实时连续检测。随着人们对环境、食品安全的要求越来越高，同时，世界发达国家对农药残留标准也越来越高，因此，发展新的快速、自动、价廉、方便、实时在线、大批量的检测农药残留的方法和技术，无论是在促进农业、林业的生产和发展，还是对环境和人们的身体健康都有极其重要意义。酶生物传感器自发现以来，因具有高度的选择性、结构简单、自动、价廉而备受研究者的关注。特别是微电子技术、纳米材料制备技术、生物技术的发展为扩展生物传感器的应用范围、批量生产、集成化、微型化打下了坚实的基础，极大地促进了酶生物传感器的研究与应用。农药残留检测生物传感器的原理主要是利用农药（如有机农药等）与酶（如乙酰胆碱酯酶等）结合来抑制酶的活性，农药的浓度与酶被抑制的活性成一定的数学关系，从而实现对农药残留量的检测。作为生物传感器关键组成物! 活性酶在水溶液中一般不太稳定，且酶只能和底物作用一次。因此，使用起来极不方便，最有效的途径是将酶固定制备成生物敏感膜使用。这就须采用合适的固定技术将酶固定在合适的载体上，因此酶的固定技术是制备生物传感器的关键步骤，这将直接影响传感器的稳定性、灵敏度、检测下限、响应时间和酶的活性、存活时间等。酶的固定技术主要包括酶的固定方法和固定酶的载体材料的选择，当前国内外对农药残留检测生物传感器中酶的固定技术进行了广泛的研究，并取得了许多重要进展。该文就农药残留检测生物传感器中酶的各种固定技术和研究应用进展进行了较全面系统的介绍，并对一些影响传感器性能的因素进行了分析讨论。[B]! 酶的固定方法[/B]酶在基体电极上的固定是酶生物传感器制备中的重要环节，它直接影响传感器的检测性能。酶的固定化技术是指通过某些方式将酶和载体相结合，使酶被集中或限制，使之在一定空间范围内进行催化反应。要想使酶作为生物敏感物质使用，就必须研究如何将酶固定在各种载体上。酶的固定方法主要有吸附法、共价键合法、凝胶% 溶胶法、聚合物包埋修饰法、交联法等方法。[color=#DC143C][B]全文附件在3楼[/B][/color]

我要较快的方法检测发酵产生的多酚氧化酶的酶活,底物也是复合型的茶多酚类物质,有较好的思路吗?

酶底物法相比多管发酵法、滤膜法的优势特点优势特点：酶底物法为GB5750-2006收录的用于大肠杆菌检测标准方法，酶底物法是目前水中大肠杆菌检测的最先进方法，目前以其方便快捷，假阳性低，适用大量样品快速检测等优点正逐步被国内检测部门所认可。相对于多管发酵和滤膜法，酶底物法检测步骤大大减少，而且对实验环境要求不高，检测时间可减少到24小时，在日常水样监测及应急监测中具有很好的应用前景，可及时检测，预防，最大限度的减少重大公共安全事故的发生几率。 以GB5750-2006中总大肠菌群测定为例，比较三种方法，如表所示。 多管发酵法 滤膜法 酶底物法 检测时间 3-5天 2-3天 1天 假阳性 — 23-26% 1% 检测范围 2-1600MPN/100mL — 1-2419.6MPN/100mL 环境要求 洁净实验室 洁净实验室 无特殊要求 实验人员要求 有专业基础、操作熟练 有专业基础、操作熟练 简单培训即可 定量标准 MPN表 直接计数 MPN表 定量方法 15管 菌落计数 51或97孔板

一、适用范围适用于食物中毒样品中致病菌的快速筛查，常规样品中卫生指标菌与致病菌的日常监测以及检测样品的采集。 二、工作意义食品在生产、加工、储存、运输和销售等各个环节都有可能受到有害微生物的污染，从而引起食品腐败变质和食源性食物中毒的发生，而且一些危险的致病菌不断涌现出来。据世界卫生组织估计，在全世界每年数以亿计的食源性疾病患者中，70％是由于食用了各种致病性微生物污染的食品和饮水造成的。中国社科院发布的首部食品安全绿皮书《中国食品安全报告（2007）》指出，当前我国食品安全的形式依然严峻，其中微生物污染和化学性食物中毒是影响我国食品安全的最主要因素。微生物污染包括细菌性污染、病毒和真菌及其毒素的污染。2000年至2002年，中国疾病预防控制中心营养与食品安全所对全国部分省市的生肉、熟肉、乳和乳制品、水产品、蔬菜中的致病菌污染状况的监测结果表明，微生物性食物中毒仍居首位，占39.62％；化学性食物中毒占38.56％；动植物性和原因不明的食物中毒均占10％左右。为了减少和防止由微生物污染事件的发生，对食品采用有效的检验方法进行检测和监督是非常必要的。利用传统的检测方法，主要包括形态检查和生化方法，其准确性和灵敏性均较高，但涉及的实验较多、操作繁琐、需要时间较长、准备和收尾工作繁重。有条件的实验室采用了PCR仪、全自动细菌鉴定仪、全自动荧光酶标免疫测试系统等先进设备进行检验，具有快速、灵敏、准确的优点，但这些先进设备价值昂贵，基层检测监管单位和食品生产企业一般难以配备。1955年德国学者F.J.Forg 发明了一种简单快速的大肠菌群快速检测法—纸片法，使原来的检测周期由72小时缩短到15小时，材料成本降低了四分之三，同时大大简化了操作程序。从此，这种集化学、高分子学和微生物学于一体的检测方法开始发展起来，近十几年来发展更为快速。纸片法或测试片法是基于微生物具有复杂多样的酶系统，通过加入特异性酶的底物，在酶的作用下游离出发色基团，直接观察菌落颜色即可对菌类做出鉴定。从而使传统方法需要几步不同反应、几天甚至更长时间才能完成的检测过程简化为一步完成，检测时间缩短到24小时以内，不但能够大大提高检测工作的效率，还可减少大量人工成本。目前国外已有一些知名品牌，国内一些企业出品的此类产品其质量也是越来越好，为此项工作的开展与普及奠定了基础。另外，在国标检测方法基础上研发出的大肠菌检测试剂盒以及致病菌增菌检测试剂盒，采用包被技术将干燥培养基包被在试剂盒中，随时取用，也大大简化了实验前的准备工作。而且，大肠菌检测试剂盒秉承了国标方法中大肠菌阳性结果时的产酸产气的观察理念，保证了检测结果的准确性。至于致病菌增菌检测试剂盒，除日常卫生指标的控制外，更加有利于食物中毒因子的筛选和卫生保障应急处理时使用。

【网络讲座】：全自动水中微生物快速检测技术 【讲座时间】：2017-04-25 14:00【主讲人】：张爱芳，2012年加入北京华夏科创仪器股份有限公司，担任水中微生物检测方向产品经理一职。专注于水中微生物产品的推广、应用，具有专业的技术知识储备及丰富的经验积累。【会议简介】我国由于经济的不断发展，城市化进展迅速，生活污水的排放量急剧增加，而目前，在我国的600多座城市中，有近一半的城市没有污水处理能力，大量的生活污水被直接排入水体，含有人畜排泄物的生活污水，携带大量的病原微生物进入水源，直接威胁饮用水的安全，威胁人们的身体健康。目前我国对生活饮用水、水源水、地表水等进行卫生学评价，检测的指标为大肠埃希氏菌、总大肠菌群和耐热大肠菌群，以这三种指标作为粪便污染的指示菌。采用的标准检测方法为滤膜法、多管发酵法和酶底物法。其中滤膜法和多管发酵法，此两种方法检测时间相对较长，需2~5天，并需在最初观察到阳性结果后进行验证试验，实验步骤较为繁琐，不能对现有的卫生学状况作出快速评价。因此，采用快速简便的检测方法十分必要。以酶底物法为计量基础的光谱法能很好的弥补传统方法的不足。-------------------------------------------------------------------------------1、报名条件：只要您是仪器网注册用户均可报名参加。2、报名参会：http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting/meetingInsidePage/2320 4、报名及参会咨询：QQ群—290101720，扫码入群“环境”http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191701_669929_2507958_3.gif

农残检测的霉试剂，显色剂，底物对身体有害吗？

生物发光技术在细胞学检测中的应用摘要：本文就生物发光技术的种类、机理、及其技术特点进行了综述，并就其在细胞学检测中的应用与研究进展展开了讨论。关键词：生物发光； ATP；荧光素酶；细胞凋亡；细胞内游离Ca2+自从20多年前，Marlene A DeLuca’s第一个成功的获得表达萤火虫荧光素酶基因(luc基因)的转基因烟草以来，生物发光(Bioluminescenc，BL)作为一个古老而又年轻的技术, 近年来得到了很大的发展和广泛的应用。而近几年来，随着分子生物学的进展以及一些新生物技术工具的出现，尤其在某些关键技术如生物传感器、基因序列分析、活体细胞ATP 测定]等方面取得了一些突破，使生物发光的应用进入了一个新时代，极大提高了生物发光的检测和快速应用，其应用范围更进一步扩大[1]。1 生物发光的种类和特点尽管自然界中的生物体普遍存在发光现象，它们的发光机理、强度和光谱范围存在着很大差异。目前，国际上根据发光的机理不同将生物发光分为：受激荧光，发光生物发光，化学发光和生物的超微弱发光[3,4]。1.1 受激荧光受激荧光是指生物体在受到外界光辐射的作用时，体内固有的荧光物质或吸收的荧光标记物发光的现象。在生物学领域中，由于分析物质荧光的方法敏感性极高，而且几乎所有的有机分子都能够直接或经过适当的化学处理后发生荧光，故很早就受到重视，并逐渐发展成为生物学和医学中的荧光分析。在生物医学领域应用荧光分析最多的是荧光显微技术，基本工具为荧光显微镜。但一般的荧光显微镜某些情况下荧光的亮度不足，使观察困难随着光电技术和计算机技术的进步，已经发展出的激光共聚焦显微镜，操作更加方便，实验可重复性提高，使受激荧光的应用更加广泛[5]。1.2 发光生物发光在生物发光领域中最容易被人们所接受的发光现象就是以萤火虫的闪光为代表的发光生物发光[3]。现在，已了解各种发光生物发光的基本反应，在这个领域中也取得了一些新的进展，例如在体外重组虫荧光素酶，用基因工程技术在大肠杆菌中表达；人工合成荧光素；体外模拟细菌发光体系已获成功；细菌的发光基因已被提出，同样也已用基因工程方法在大肠杆菌中表达。水母发光蛋白已经分离纯化，一级结构已经清楚。由于生物发光的量子效率极高，所以研究生物发光能量的转化具有重要的理论与实际意义。近年来被广泛应用的发光蛋白，如GFP、YFP、CFP 等，其发光原理就是源自动物的自发发光，从而为生物医学研究提供了新的手段[6]。1.3 化学发光化学发光是在化学反应过程中(主要为氧化还原反应)发出可见光的现象[6]。化学发光反应是由两个关键步骤组成：激发和发射。许多化学反应进行时能释放足够的自由能而把参加反应的物质之一激发到能发射光的电子激发态，生成一种激发态产物，在它回到基态时，剩余能量转变成光子能量产生发光现象。随着化学发光物质合成技术的进步，化学发光在生物医学及其它领域的应用越来越广泛[7,8]，将化学发光与免疫反应结合起来建立的化学发光免疫测定法和化学发光标记是继荧光标记，放射性核素标记，酶标记三大标记技术之后，发展起来的最新检测技术[8]。1.4 生物超微弱发光 随着生物发光研究的进一步深入，发现人体的器官、组织、细胞、乃至大分子都在发光，不过发光强度更弱。这些有关生物超微弱发光(ultra-weak bioluminescence)的研究课题，构成了当前生命科学发展前沿中的一个极其重要的研究领域——生命系统的超微弱光子辐射(ultra-weak photon emission from living system) [8]。20世纪60~70 年代以来，各国先后出现了一些研究小组专门进行这方面的探讨，如日本的稻场文男小组(1991)研究了鼠肝核的超微弱天然光子发射；德国F.A. Popp小组提出了“生物光子”概念和一系列的相干理论[9]。目前研究已涉及到细胞、亚细胞乃至生物大分子的层次[ 9,10]。越来越多的实验表明，DNA 是生物超微弱发光的一个辐射源。1.5 生物发光特点研究发现生物发光有以下几个特点：① 生物发光的颜色范围很宽，可从红光到深蓝光；② 氧是几乎所有生物发光系统中必须的因素；③ 生物发光是由“荧光素酶”与“荧光素”的化学反应所引起的；④ 所有的生物发光反应似乎都是酶-底物类型的反应，但复杂程度不同，某些生物发光反应涉及3 种或4种底物，而另一些生物发光反应甚至需要3个或4个酶的体系[8]。[/size]

在BCEIA展会上，看到大的仪器厂家开始向小型化仪器方面发展，其中有一款便携式ATP,主要检测细菌总数，非常快速，我联想到我们水质菌落总数是需要培养的，时间很长。那我们是不是菌落总数也可以采用这样的方法？？ATP荧光检测仪基于萤火虫发光原理，利用“荧光素酶—荧光素体系”快速检测三磷酸腺苷（ATP）。由于所有生物活细胞中含有恒量的ATP，所以ATP含量可以清晰地表明样品中微生物与其他生物残余的多少。

化学反应过程中的能量以光的形式释放出来，成为化学发光，有些生物体在能量代谢的过程中通过消耗ATP也可发光，为生物发光。化学发光 常用物质包括二氧乙烷衍生物、鲁米诺及衍生物、和丫啶酯。这些试剂可用于各种标本分析、HPLC检测和流动注射分析系统。二氧乙烷衍生物在碱性磷酸酶的作用下水解，形成一种高能量的中间体，这种中间体进一步分解后释放出光子，此类有代表性的物质是AMPPD和CSPD。此方法最为广泛的应用是基于碱性磷酸酶和β半乳糖苷酶的分析系统。碱性磷酸酶（AP）的测定 检测AP，β-葡糖苷酸酶活性的方法是使用一种有商品供应的稳定的1，2-二氧乙烷衍生物，这种发光底物的发光时间为数分钟至数小时。发光强度直接与酶的浓度相关。这种底物可用于1) 微孔板的免疫分析，DNA 探针捕获法和报告基因分析法, 2) 用于蛋白质和核酸分析的96-孔斑点膜。鲁米诺 是一种最古老的和最常用的试剂，在碱性条件下可被过氧化物氧化，同时发光，鲁米诺和过氧化物之间的氧化还原反应需要催化剂，这种催化剂一般为多价金属离子、过氧化物酶如铁、辣根过氧化物酶等，此种方法常用于检测过氧化物、重金属、过氧化物酶的含量，以及由此衍生的检测自由基、进行毒物分析和基于过氧化物酶和葡萄糖氧化酶的分析方法。丫啶酯及衍生物 在碱性条件下可产生瞬时发光，将其作为标记物，已广泛用于免疫分析和分子杂交。

环境标准《水质 总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法》已编制完成，目前开始征求意见，附件是该标准的征求意见稿。

微生物细菌检测仪是一种专门用于检测生物体、环境水样、食品、化妆品和医药产品表面ATP(三磷酸腺苷)含量的装置。ATP是所有活细胞和一些非细胞生物(如病毒、霉菌和酵母菌等)所含的核苷酸之一，因此微生物细菌检测仪可以通过检测表面ATP含量来检测这些生物的存在。　　微生物细菌检测仪的工作原理是通过荧光素酶作用的ATP检测试剂将样品表面的ATP转化为荧光素，然后利用荧光素酶催化的发光特性来测定样品表面的ATP含量。这种测量方法快速、准确、简单，一般检测时间不超过30秒。　　微生物细菌检测仪的作用和用途非常广泛，它可以用于以下领域：　　食品生产和加工：检测食品生产和加工过程中的卫生情况，确保食品质量和安全。　　医疗设备和药品检测：用于检测医疗设备、药品和患者样本中的微生物，确保患者的安全和健康。　　环境监测：检测水源和空气中的微生物污染，评估环境质量。　　化妆品和医药产品检测：确保这些产品的生产和储存过程中的卫生条件符合标准。　　此外，微生物细菌检测仪的使用方法通常包括打开机器、放入试子、采集样品、挤压拭子头、将拭子插入仪器中检测等步骤。在操作过程中，需要遵循相关操作规范，以确保检测结果的准确性和可靠性。　　总之，微生物细菌检测仪是一种重要的检测工具，它可以帮助我们快速、准确地检测生物体、环境水样、食品、化妆品和医药产品表面的微生物含量，为食品安全、医疗、环境监测等领域提供有力的技术支持。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/05/202405091048555937_3652_4214615_3.jpg!w690x690.jpg[/img]

哪位高手做过关于用微生物法检测叶酸的呀？最近在做叶酸检测时标准曲线怎么都做不好，我是按照GB/T 5009.211-2008做的，都做了好久了，每次做出来差距都很大，而且都很不好；还有一个问题是，在做标准曲线时，标准上是按不接种的不含叶酸的管调零，但是标准系列管的0管即不含叶酸但加了菌种的吸光度就不会为0了，但是我看了几篇文献也是按国标做的，其标准曲线都经过了原点，我不知道自己做的问题出在了哪里。希望做过这方面实验的高手能够指点一二，感激不尽~~

微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常用的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。　　概述：　　一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其他生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，通常情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长通常指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和他们的生长抑制紧密相关。所以有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，可以从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。　　生长量测定法　　体积测量法：又称测菌丝浓度法。　　通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。

跪求：各位兄弟姐妹好，我们要开展微生物检测的工作了，老大就给讲了下，之前学校的时候虽然上过，也做过，但是时隔多年还是相当生疏了，谁有微生物检测关于细菌、霉菌、酵母菌、大肠埃希菌、大肠菌群的资料，可以帮帮我的大忙啊！！！或者说谁知道关于这些有哪些书比较好的，推荐一下！！谢谢！！！

GB5749常规检测42项，其中微生物4项，大家知道微生物超标，很容易引发传染性肠道疾病，包括世界卫生组织和很多国家的饮水卫生标准，都将微生物指标放在第一位。大家日常工作中使用的方法是滤膜法、多管发酵法还是酶底物法？

环境监测是了解环境现状的重要手段，它包括环境化学分析、物理测定和生物监测三个部分。生物监测是一个利用生物对环境污染所发出的各种信息来判断环境污染状况的过程。生物长期生活于自然环境中，不仅能够对多种污染作出综合反映，也能对污染的历史状况作出反映。因此，生物监测取得的结果具有重要的参考价值。微生物监测是生物监测重要组成部分具有其独特的作用。 一、水体污染的微生物监测 （一）、粪便污染指示菌 人畜粪便中携带有大量致病性微生物。如果将这类污染物排人水体，就可能引起各种肠道疾病和某些传染病的暴发流行。因此，对水体的粪便污染状况进行监测具有重要意义。直接检测各种病原菌十分烦琐和耗时耗费。此外，由于水中的致病菌少，直接检测也很困难，即使检测结果阴性，也不能保证水中不含致病微生物。因此，在水质卫生学检查中，通常采用易检出的肠道细菌作为指示菌，取代对病原菌的直接检测。若水样中检出这类指示菌，即认为水体曾受粪便污染，有可能存在致病菌。检测到的指示菌越多，污染越严重。肠道细菌中的大肠菌群是普遍采用的粪便指示菌。在水质卫生学检查的结果中，常用“大肠菌群指数”和“大肠菌群值”作指标。大肠菌群指数是指每 L 水中所含的大肠菌群细菌的个数。大肠菌群值则是指检出一个大肠菌群细菌的最少水样量（ ml 数）。两者间的关系可表示为：大肠菌群值 =1000 ／大肠菌群指数我国饮用水的质量标准规定，大肠菌群指数不得大于 3 ，大肠菌群值不得小于 333ml 。

不知道为什么2010年的新标准把微生物检测的测试片法删除了，有知道原因的吗？

摘要： 　　微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常用的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。　　概述：　　一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其他生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，通常情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长通常指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和他们的生长抑制紧密相关。所以有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，可以从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。　　生长量测定法　　体积测量法：又称测菌丝浓度法。　　通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。　　称干重法：　　可用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10-20%。在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1-5次，进行干燥。干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80℃或40℃下真空干燥，干燥后称重。如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40℃下进行真空干燥。称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（activity dry yeast, ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。　　比浊法：　　微生物的生长引起培养物混浊度的增高。通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时，可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶。将侧臂插入光电比色计的比色座孔中，即可随时测定其生长情况，而不必取菌液。该法主要用于发酵工业菌体生长监测。如我所使用UNICO公司的紫外-可见分光光度计，在波长600nm 处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD600，以此监控E.Coli的生长及诱导时间。　　菌丝长度测量法：　　对于丝状真菌和一些放线菌，可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度，或是利用一只一端开口并带有刻度的细玻璃管，到入合适的培养基，卧放，在开口的一端接种微生物，一段时间后记录其菌丝生长长度，借此衡量丝状微生物的生长。微生物计数法　　血球计数板法:　　血球计数板是一种有特别结构刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴，中央有一短横沟和两个平台，两嵴的表比两平台的表面高0.1 mm，每个平台上刻有不同规格的格网，中央0.1 mm2面积上刻有400个小方格。通过油镜观察，统计一定大格内微生物的数量，即可算出1毫升菌液中所含的菌体数。这种方法简便，直观，快捷，但只适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子进行计数，并且所得结果是包括死细胞在内的总菌数。　　染色计数法：　　为了弥补一些微生物在油镜下不易观察计数，而直接用血球计数板法又无法区分死细胞和活细胞的不足，人们发明了染色计数法。借助不同的染料对菌体进行适当的染色，可以更方便的在显微镜下进行活菌计数。如酵母活细胞计数可用美蓝染色液，染色后在显微镜下观察，活细胞为无色，而死细胞为蓝色。　　比例计数法：　　将已知颗粒（如霉菌孢子或红细胞）浓度的液体与一待测细胞浓度的菌液按一定比例均匀混合，在显微镜视野中数出各自的数目，即可得未知菌液的细胞浓度。这种计数方法比较粗放。并且需要配制已知颗粒浓度的悬液做标准。　　液体稀释法：　　对未知菌样做连续十倍系列稀释，根据估计数，从最适宜的三个连续的10倍稀释液中各取5毫升试样，接种1毫升到3组共15只装培养液的试管中，经培养后记录每个稀释度出现生长的试管数，然后查最大或然数表MPN（most probably number）得出菌样的含菌数，根据样品稀释倍数计算出活菌含量。该法常用于食品中微生物的检测，例如饮用水和牛奶的微生物限量检查。　　平板菌落计数法：　　这是一种最常用的活菌计数法。将待测菌液进行梯度稀释，取一定体积的稀释菌液与合适的固体培养基在凝固前均匀混合，或将菌液涂布于已凝固的固体培养基平板上。保温培养后，用平板上出现的菌落数乘以菌液稀释度，即可算出原菌液的含菌数。一般以直径9cm的平板上出现50-500个菌落为宜。但方法比较麻烦，操作者需有熟练的技术。平板菌落计数法不仅可以得出菌液中活菌的含菌数，而且同时将菌液中的细菌进行了一次分离培养，获得了单克隆。　　试剂纸法：　　在平板计数法的基础上，发展了小型商品化产品以供快速计数用。形式有小型厚滤纸片，琼脂片等。在滤纸和琼脂片中吸有合适的培养基，其中加入活性指示剂2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，无色）待蘸取测试菌液后置密封包装袋中培养。短期培养后在滤纸上出现一定密度的玫瑰色微小菌落与标准纸色板上图谱比较即可估算出样品的含菌量。试剂纸法计数快捷准确，相比而言避免了平板计数法的人为操作误差。　　膜过滤法：　　用特殊的滤膜过滤一定体积的含菌样品，经丫叮橙染色，在紫外显微镜下观察细胞的荧光，活细胞会发橙色荧光，而死细胞则发绿色荧光。　　生理指标法：　　微生物的生长伴随着一系列生理指标发生变化，例如酸碱度，发酵液中的含氮量，含糖量，产气量等，与生长量相平行的生理指标很多，它们可作为生长测定的相对值。测定含氮量：　　大多数细菌的含氮量为干重的12.5%，酵母为7.5%，霉菌为6.0%。根据含氮量×6.25，即可测定粗蛋白的含量。含氮量的测定方法有很多，如用硫酸，过氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas测N2气法。Dumas测N2气法是将样品与CuO混合，在CO2气流中加热后产生氮气，收集在呼吸计中，用KOH吸去CO2后即可测出N2的量。　　测定含碳量：　　将少量（干重0.2-2.0 mg）生物材料混入1毫升水或无机缓冲液中，用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在100 0C下加热30分钟后冷却。加水稀释至5毫升，在580nm的波长下读取吸光光度值，即可推算出生长量。需用试剂做空白对照，用标准样品做标准曲线。　　还原糖测定法：[/si

[color=#333333]一、农残快速检测的相关概念[/color][color=#333333] 1、农药的种类。农药可根据用途、来源、作用方式及化学组成和结构等不同角度进行分类。[/color][color=#333333] 2、农药的毒性。按照产生损害的性质及程度可分为急性毒性、慢性毒性、迟发性神经毒性以及致畸、致癌、致突变作用等。[/color][color=#333333] 3、农药残留。是指农药使用后残存于生物体、农副产品和环境中的微量农药原体、有毒代谢物和杂质的总称。[/color][color=#333333] 4、分光光度法。利用紫外可见分光光度计测量物质对紫外可见光的吸收程度和紫外可见吸收光谱，来确定物质的组成、含量，推测物质结构的分析方法。[/color][color=#333333] 5、酶抑制率法。根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制乙酰胆碱酯酶的活性原理，向蔬菜的提取液中加入生化反应底物碘化乙酰硫代胆碱和乙酰胆碱酯酶，如果蔬菜不含有机磷或氨基甲酸酯类农药残留或残留量低，酶的活性就不被抑制，实验中加入的底物就能被酶水解，水解产物与加入的显色剂反应产生黄色物质。如果蔬菜的提取液含有农药并残留量较高时，酶的活性被抑制，底物就不被水解，当加入显色剂时就不显色或颜色变化很小。用分光光度计在412nm处或农药残毒快速检测仪测定吸光值，根据计算出的抑制率，就可以判断蔬菜中含有机磷或氨基甲酸酯类农药残留量的情况。[/color][color=#333333]二、农残快速检测法的检测盲区[/color][color=#333333] 1、在对部分果蔬农残检测中可能出现误检现象。一方面，各蔬菜品种间，例如葱蒜类，香菜类，韭菜等14种容易出现假阳性的蔬菜，对检测抑制率有不同干扰和影响，容易出现假阳性。另一方面，色素的干扰也可能影响检测结果的准确性。[/color][color=#333333] 2、不能检测部分类别的农药。由于酶抑制率法是针对有机磷和胺基甲酸类农药的快速检测方法，因此，不能有效检出对硫丹、三氯杀虫酯、醚菊酯等菊酯类农药。因此，需要针对性的选择快速检测方法。[/color][color=#333333][/color]

[color=#333333]理化检测有发展还是微生物检测有发展,哪个经验对未来食品方面的发展更有帮助,微生物检测对身体有危害么?[/color][color=#333333] [/color]

叶酸检测是否有其他的方法检测？微生物法实在是做不出来，望老师不吝赐教

[size=16px][color=#ff0000][b][url=https://www.instrument.com.cn/job/position-79866.html]立即投递该职位[/url][/b][/color][/size][b]职位名称：[/b]PCR测试片销售总监（微生物行业）[b]职位描述/要求：[/b]岗位职责：1.参与制定企业的销售战略、具体销售计划和进行销售预测。2.组织与管理销售团队，完成企业产品销售目标。3.控制销售预算、销售费用、销售范围与销售目标的平衡发展。4.招募、培训、激励、考核下属员工，以及协助下属员工完成下达的任务指标。5.收集各种市场信息，并及时反馈给上级与其他有关部门。6.参与制定和改进销售政策、规范、制度，使其不断适应市场的发展。7.发展与协同企业和合作伙伴关系，如与经销商的关系、与代理商的关系。岗位要求：1.生物工程、食品安全、工商管理、市场营销等专业，本科以上学历 2.有5年同行业销售工作经验，有3年以上管理岗位工作经验，具有微生物检测产品销售经验者优先考虑 3.有较强的市场决策能力 4.有良好的语言表达能力及沟通能力 5.有较强的团队管理能力。[b]公司介绍：[/b] 北京美正检测技术有限公司（英文名称：Beijing Meizheng Testing Co., LTD），位于北京中关村延庆园，拥有独立法人地位，是可以公开为社会提供检测技术服务的第三方检测机构。公司同时提供可用于检测过程的各个阶段，包括方法确认、校准和质量控制的标准物质/标准样品（RM）。相应产品还用于以方法确认和实验室能力评价为目的的实验室间比对。公司的检测团队具有多年的行业经验，并与中国农业...[url=https://www.instrument.com.cn/job/position-79866.html]查看全部[/url][align=center][img=,178,176]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108160948175602_3528_5026484_3.png!w178x176.jpg[/img][/align][align=center]扫描二维码，关注[b][color=#ff0000]“仪职派”[/color][/b]公众号[/align][align=center][b]即可获取高薪职位[/b][/align]