凝胶色谱检定规程

质检总局近日发布公告，新版的《液相色谱仪》、《离子色谱仪》、《凝胶色谱仪》计量检定规程正式发布。3个新规程将于今年8月14日起实施，实施后将分别替代原有的3个旧规程。　　全国物理化学计量技术委员会的何雅娟介绍，色谱仪的应用遍及工矿生产、环境保护、食品安全、医疗卫生、科学研究等诸多领域。为了仪器检测的准确可靠，仪器本身首先要测量准确，这就离不开对其进行计量检定。液相色谱仪的计量检定规程距离上次修订已经十多年;离子色谱仪和凝胶色谱仪的检定规程自实施至今，已经20年没有修订。随着科学的发展，仪器科学不断进步，运用最新检测原理的检测器不断被开发应用，色谱仪的检测范围不断扩大，检测精度不断提高。对这些科学仪器进行更准确、更全面、更科学地计量检定，确保其本身的量值准确，已经成为一项迫在眉睫的任务。　　据介绍，本次修订，对近年来新出现并广泛运用的新设备提出了计量检定要求。例如，在液相色谱仪中，蒸发光检测器是近年来广泛运用的新型检测器。尤其是在我国药典将抗生素类药物的检测方法定为蒸发光散射法后，蒸发光检测器在制药和药检行业应用尤为广泛。制定旧版《液相色谱仪》计量检定规程时，还没有成熟的条件将蒸发光散射检测器的检定内容纳入规程中，而新规程的一项重要内容就是增加了蒸发光散射检测器的检定内容;在《离子色谱仪》检定规程的修订中，特意增加了紫外可见检测器和电化学检测器的相关内容。正是有了这些检测器的不断发展，离子色谱仪的检测范围才由最初只能检测部分离子强度高的离子，到现在还能检测I-、CN-、CrO4-、有机酸和糖类等弱离子。　　旧版规程实施已近20年，很多技术指标已经与现在仪器发展不相适应。调整有关技术指标，成为本次规程修订的重要内容。例如，随着科技的发展，凝胶色谱仪的示差检测器和紫外检测器的信号稳定性和灵敏度都大大提升，原检定规程中对检测器基线的技术指标已大大落后于实际水平。修订后的检定规程对检测器基线检测结果进行了相关修订，使这些技术指标更加符合新版国际标准的要求。　　检定色谱仪的主要标准器是各种标准物质，不同标准物质的选择可能会影响检定工作的效率和准确性，本次修订还对检定用标准物质进行了调整。2002年版的《液相色谱仪》检定规程中，荧光检测器检定用标准物质为硫酸奎宁/高氯酸水溶液。由于各种原因，检定中经常出现信号不理想等情况，导致检定不能顺利进行。本次修订将其改为萘/甲醇溶液，避免了上述问题的出现，同时还提高了检定效率;在1993年版的《凝胶色谱仪》检定规程中，对标准物质只是规定“窄分布聚苯乙烯标准物质”，但这样的规定导致对以水作为流动项的凝胶色谱仪无法进行检定。修订后的规程对标准物质的规定进行了补充，增加了葡聚糖标准物质，使检定规程可用于检定有机流动项和水流动项的凝胶色谱仪。==================================================众所周知，我们的《气相色谱仪检定规程》 JJG 700-1999，到现在也出了15年了。很多方面的内容都不适合现在的仪器了，比如标准里基本上只有填充柱，检测器噪声、信号的单位使用电流A很难计算（大部分现代的仪器是电压mV或者uV，也有不少是Hz这类没法换算成电流的单位）还有没有关于DID、PID这类最近才比较流行的新型检测器的指标，为嘛还不赶快也来更新一下呢？

凝胶色谱仪检定方法本规程适用于新制造、使用中和修理后的凝胶色谱仪的检定。请到资料中心下载:http://www.instrument.com.cn/download/shtml/012546.shtml

[size=3][b]凝胶色谱仪标准操作规程(SOP)[/b]背景知识：凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。[/size]

我先把本板快的知识与大家的问题归归类，大家看看那些是需要留住让后来人看看学习的。大家认为没有必要留驻的帖子（连接），用站内短消息与我联系。[b]另外如果大家发现有我整理的内容里有任何问题，都可以用站内短消息与我联系。另外如果大家对凝胶色谱版块的建设有任何建议或意见可以发新帖或跟帖[/b][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20060912/552188/]真希望凝胶版可以旺起来！[/url][b]我都会根据情况给予一定的奖励。[/b]谢谢大家！！[b]整理一下本板块的知识点：[/b]如何学习凝胶色谱啊？[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20050228/129987/[/url]凝胶色谱技术：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20031110/18764/[/url]凝胶层析法技术简介：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20060421/401834/[/url]凝胶层析的知识（基本原理，凝胶类型与选择，凝胶的处理）：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20070110/704521/[/url]《色谱法》电子书：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20050105/114592/[/url]《仪器分析》课件--色谱法：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20040508/46902/[/url]色谱中的一些符号：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20040107/24878/[/url]色谱术语：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20041012/84241/[/url]凝胶色谱（电子书）：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20060416/396030/[/url]凝胶色谱手册（英文著作，515页）：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20051220/305998/[/url]凝胶色谱的讲义第一章（1）：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20051102/265886/[/url]凝胶色谱（GPC）电子教材：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20041220/109533/[/url]GPC操作规程：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20060328/376128/[/url]凝胶色谱仪检定方法：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20050928/245321/[/url]GPC是指凝胶色谱仪?[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20060919/560251/[/url]高温GPC：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20060605/448959/[/url]GPC软件-现场培训教材：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20061120/634044/[/url]需要介绍GPC组成方面的资料：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20061106/617390/[/url][em61]

凝胶色谱的资料又积攒了不少，接力前辈，汇总一下，方便查找。要注意帖子的回复，里面也有宝藏哦~~【原创】凝胶色谱的应用 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20061228/685978/【资料】GPC分析的聚合物可以选择的良溶剂方案 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101214/2999859/【资料】最近凝胶色谱相关的文献资料http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100401/2476606/ 【资料】GPC高级课程培训－柱选择 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20110519/3315288/【资料】《凝胶渗透色谱操作手册》北京大学化学院 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101228/3045365/【分享】凝胶色谱的讲义 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101106/2908677/【资料】凝胶色谱柱操作 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101105/2907744/【分享】凝胶色谱仪标准操作规程(SOP) http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101012/2855479/【原创】多功能凝胶色谱仪（GPC）测聚合物分子量分布 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100510/2546330/【资料】凝胶色谱法的基本理论 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100406/2483413/下面是前辈整理的资料：2010.4【资料】凝胶色谱 和 超临界流体色谱 资料汇总http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100411/2493256/2006年【公告】凝胶色谱版的知识点汇总！ http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20061215/669019/

化学计量检定规程目录：JJG 940-1998 催化燃烧型氢气检测仪 JJG 945-99 原电池法气体氧分析器 JJG 880-94 浊度计 JJG 681-90 色散型红外分光光度计 JJG 682-90 双光束紫外可见分光光度计 JJG 914-96 六氟化硫检漏仪 JJG 119—1984 实验室PH（酸度）计检定规程 JJG 154—1979 标准毛细管粘度计检定规程 JJG 155—1991 工作毛细管粘度计检定规程 JJG 178—1996 可见分光光度计检定规程 JJG 179—1990 滤光光电比色计检定规程 JJG 214—1980 滚动落球粘度计试行检定规程 JJG 215—1981 旋转粘度计试行检定规程 JJG 228—1993 静态激光小角光散射光度计检定规程 JJG 291—1999 覆膜电极溶解氧测定仪检定规程 JJG 342—1993 凝胶色谱仪检定规程 JJG 365—1998 电化学电极气体氧分析器检定规程 JJG 375—1996 单光束紫外-可见分光光度计检定规程 JJG 376—1985 电导仪试行检定规程 JJG 390—1985 船用pH计检定规程 JJG 392—1996 感应式盐度计检定规程

水相凝胶色谱与普通凝胶色谱的区别？请高手多多指教，有相关资料更好，谢谢！

背景知识：凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。一、基本理论（一）分子筛效益　　一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，这种现象叫分子筛效应。具有多孔的凝胶就是分子筛。各种分子筛的孔隙大小分布有一定范围，有最大极限和最小极限。分子直径比凝胶最大孔隙直径大的，就会全部被排阻在凝胶颗粒之外，这种情况叫全排阻。两种全排阻的分子即使大小不同，也不能有分离效果。直径比凝胶最小孔直径小的分子能进入凝胶的全部孔隙。如果两种分子都能全部进入凝胶孔隙，即使它们的大小有差别，也不会有好的分离效果。因此，一定的分子筛有它一定的使用范围。综上所述，在凝胶色谱中会有三种情况，一是分子很小，能进入分子筛全部的内孔隙；二是分子很大，完全不能进入凝胶的任何内孔隙；三是分子大小适中，能进入凝胶的内孔隙中孔径大小相应的部分。大、中、小三类分子彼此间较易分开，但每种凝胶分离范围之外的分子，在不改变凝胶种类的情况下是很难分离的。对于分子大小不同，但同属于凝胶分离范围内各种分子，在凝胶床中的分布情况是不同的：分子较大的只能进入孔径较大的那一部分凝胶孔隙内，而分子的可进入较多的凝胶颗粒内，这样分子较大的在凝胶床内移动距离较短，分子较小的移动距离较长。于是分子较大的先通过凝胶床而分子较小的后通过凝胶床，这样就利用分子筛可将分子量不同的物质分离。另外，凝胶本身具有三维网状结构，大的分子在通过这种网状结构上的孔隙时阻力较大，小分子通过时阻力较小。分子量大小不同的多种成份在通过凝胶床时，按照分子量大小“排队，凝胶表现分子筛效应。（二）色谱柱的重要参数⑴柱体积：柱体积是指凝胶装柱后，从柱的底板到凝胶沉积表面的体积。在色谱柱中充满凝胶的部分称为凝胶床，因引柱体积又称“床”体积，常用Vt 表示。⑵外水体积：色谱柱内凝胶颗粒间隙，这部分体积称外水体积，亦称间隙体积，常用Vo表示。⑶内水体积：因为凝胶为三维网状结构，颗粒内部仍有空间，液体可进入颗粒内部，这就分间隙的总和为内水体积，又称定相体积，常用Vi表示。 不包括固体支持物的体积（Vg）。⑷峰洗脱体积：是指被分离物质通过凝胶柱所需洗脱液有体积，常用Ve 表示。当使用样品的体积很少时，（与洗脱体积比较可以忽略不计），在洗脱图中，从加样到峰顶位置所用洗脱液体积为Ve。 当样品体积与洗脱体积比较不能忽略时，洗脱体积计算可以从样品体积的一半到峰顶位置。当样品很大时，洗脱体积计算可以从应用样品开始到洗脱峰升高的弯曲点（或半高处）。二、凝胶的种类及性质 （一）交联葡聚糖凝胶（Sephadex）⑴Sephadex G交联葡聚糖的商品名为Sephndex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。⑵Sephadex LH-20，是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物， 能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。（二）琼脂糖凝胶：　　商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia ），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。（三）聚丙烯酰胺凝胶：　　是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位， 由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。交联剂越多，孔隙越小。聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P （Bio-Gel P），由美国Bio-Rod厂生产，型号很多，从P-2至P-300共10种，P 后面的数字再乘1000就相当于该凝胶的排阻限度。（四）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel ， 具有大网孔结构， 可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。三、实验技术（一）层析柱 层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管或有机玻璃管。层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径，一般制备用凝胶柱，直径大于2厘米，但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外， 直径加大，洗脱液体体积增大，样品稀释度大。分离度取决于柱高，为分离不同组分，凝胶柱床必须有适宜的高度，分离度与柱高的平方根相关，但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞，一般不超过1米。分族分离时用短柱，一般凝胶柱长20-30厘米，柱高与直径的比较5:1─10:1，凝胶床体积为样品溶液体积的4-10倍。 分级分离时柱高与直径之线为20:1─100:1，常用凝胶柱有50×25厘米，10×25厘米。层析柱滤板下的死体积应尽可能的小，如果支掌滤板下的死体积大，被分离组分之间重新混合的可能性就大，其结果是影响洗脱峰形，出现拖尾出象，降低分辩力。在精确分离时，死体积不能超过总床体积的1/1000。（二）凝胶的选择根据所需凝胶体积，估计所需干胶的量。 一般葡聚糖凝胶吸水后的凝胶体积约为其吸水量的2倍，例如Sephadex G-20的吸水量为20，1 克Sephadex G─200吸水后形成的凝胶体积约40ml。凝胶的粒度也可影响层析分离效果。粒度细胞分离效果好，但阻力大，流速慢。一般实验室分离蛋白质采用100-200号筛目的的Sephadex G-200效果好， 脱盐用Sephadex G-25、G-50，用粗粒，短柱，流速快。（三）凝胶的制备商品凝胶是干燥的颗粒使用前需直接在欲使用的洗脱液中膨胀。为了加速膨胀，可用加热法，即在沸水浴中将湿凝胶逐渐升温至近沸，这样可大大中速膨胀，通常在1-2小时内即可完成。特别是在使用软胶时， 自然膨胀需24小时至数天，而用加热法在几小时内就可完成。这种方法不但节约时间，而且还可消毒，除去凝胶中污染的细菌和排除胶内的空气。（四）样品溶液的处理 样品溶液如有沉淀应过滤或离心除去，如含脂类可高速离心或通过Sephadex G-15短柱除去。样品的粘度不可大，含蛋白为超过4％，粘度高影响分离效果。上柱样品液的体积根据凝胶床体积的分离要求确定。分离蛋白质样品的体积为凝胶床的1-4％（一般约0.5-2ml），进行分族分离时样品液可为凝胶床的10％，在蛋白质溶液除盐时，样品可达凝胶床的20-30％。 分级分离样品体积要小，使样品层尽可能窄，洗脱出的峰形较好。（五）防止微生物的污染 交联葡聚糖和琼脂糖都是多糖类物质，防止微生物的生长，在凝胶层析中十分重要，常用的抑菌剂有:⑴叠氨钠（NaN3）在凝胶层析中只要用0.02％叠氮钠已足够防止微生物的生长，叠氮钠易溶一水，在20℃时约为40％；它不与蛋白质或碳水化合物相互作用，因此叠氮钠不影响抗体活力；不会改变蛋白质和碳水化合物的层析我特性。叠氮钠可干扰荧光标记蛋白质。⑵可乐酮在凝胶层析中使用浓度为0.01-0.02％。在微酸性溶液中它的杀菌效果最佳，在强碱性溶液中或温度高于60℃时易引起分解而失效。⑶乙基汞代巯基水杨酸钠 在凝胶层析中作为抑菌剂使用浓度为0.05-0. 01％。在微酸性溶液中最为有效。重金属离子可使乙基代巯基的物质结合，因而包含疏基的蛋白质可在不同程度上降低它的抑菌效果。⑷苯基汞代盐 在凝胶层析中使用浓度为0.001-0.01％。在微碱性溶液中抑效果最佳，长时间放置时可与卤素、硝酸根离子作用而产生沉淀；还原剂可引起此化合物分解；含疏基的物质亦可降低或抑制它的抑菌作用。原理：选填项目主体内容：一、 实验室要求：凝胶色谱仪所使用流动相多为有毒的有机性试剂，实验室要保持良好的通风条件，试剂需专柜保存。实验室温度需保持在10℃~35℃，湿度小于80%。周围无腐蚀性气体，无尘土飞扬。二、实验台要求：实验台要求通水电良好，电源为220V±20 V，电源频率为50Hz±0.5 Hz，无剧烈震动。三、仪器摆放要求：仪器放在无阳光直射的地方，不要放在靠门、窗的地方，以减少空气、阳光对仪器带来的影响。四、仪器操作规范： 样品经充分溶解后，再用过滤器过滤后才可使用；流动相也需现配后，再过滤使用；所有选用试剂均需选用色谱纯试剂。新色谱柱初次使用流速设置为0.2ml/min，冲洗1小时后再接检测器

最近想采购一些设备，有同事提到了凝胶色谱，我们是做食品和酒类检测，不知道这个凝胶色谱对我们的检测会有那些项目的应用呀？还有就是食品中塑化剂的检测，有个标准中提到一个前处理设备是凝胶色谱，不知道这两个是不是一个概念呀？我不懂，希望给我指教啊！谢谢

[color=#444444]目前正在实验室做课题需要用到凝胶色谱，请教大家，测酪蛋白溶液(里面还含有一些乳化剂)溶剂是纯水，凝胶色谱要用得流动相和柱子分别是什么？[/color]

本单位有一台GPC，目前在做农残的净化方法研究吗，但是我们买的美国J2的凝胶色谱净化系统，净化效果比较差，询问工程师说，我们的凝胶柱配备的是快速柱，净化效果比较差，因此想询问各位高手，推荐几款凝胶色谱柱给我们，我们是用来净化辣椒酱，酱油之类的复杂基体。谢谢

有么有推荐凝胶色谱的销售啊啊？请站内告诉我电话，谢谢，我想买一套用来做油类里的邻苯。

[b]凝胶色谱的应用[/b]：1、[b]分子量的测定[/b]根据凝胶色谱的原理，样品物质在凝胶色谱柱中的洗脱性质与该物质的分子大小有关。因此选用不同的凝胶色谱柱后，能方便地测定物质的分子量。用此法测定分子量时，可以在各种PH值、离子强度和温度条件下进行。所测定的物质可以是天然状态，也可以是变性后的。实际应用中，可先选用一系列已知分子量的标准样品在同一色谱条件下进行色谱分离分析，并以保留体积（或保留时间）对分子量的对数作图，在一定分子量范围内得到一直线（标准曲线），而后根据待测定物在同一条件下的保留体积（或保留时间），从标准曲线上查得/计算出其分子量。目前用本法测定分子量的应用范围非常广泛。[u]高分子物质的分子量及其分布的测定[/u]：特别是近年来，随着各种高分子材料的问世，人们对高分子科学的不断探索，高聚物的分子量及其分布的测定显得尤为重要，成为科研和生产中不可缺少的测试项目之一。例如：常见的聚苯乙烯塑料制品，其分子量为十几万，如果聚苯乙烯的分子量低至几千，就不能成型；相反，当分子量大到几百万，甚至几千万，它又难以加工，失去了实用意义。科研和生产上通过控制高聚物的分子量及其分布宽度指数D（D=Mw/Mn）、分子量微分分布曲线、分子量积分分布曲线来生产出性能最佳的高聚物产品。同样，除了快速测定分子量及其分布以外，凝胶渗透色谱还广泛被用于研究高聚物的支化度，共聚物的组成分布及高聚物中微量添加剂的分析等方面。如果配以在线的绝对分子量检测器（如：LALLS、Multi-Angle LS、Dual-Angle LS等），凝胶渗透色谱可以测定高聚物的绝对分子量。[u]蛋白质分子量的测定[/u]：现代蛋白质药物的研究中，凝胶色谱法测定分子量是蛋白质分子量的快速测定方法之一。一般选用标准分子量蛋白质（如：铁蛋白、醛缩酶、牛血清白蛋白、卵清蛋白、胃蛋白酶、核糖核酸酶，这就是一组分子量从300KD到14KD的标准品）。

凝胶渗透色谱(Gel Permeation Chromatography、GPC)) 　 http://chemlab.gzhu.edu.cn/gzhugfz/fenxishouduan/4.jpg　1964年，由J.C.Moore首先研究成功。不仅可用于小分子物质的分离和鉴定，而且可以用来分析化学性质相同分子体积不同的高分子同系物。(聚合物在分离柱上按分子流体力学体积大小被分离开）　1.基本原理1.1.分离原理：让被测量的高聚物溶液通过一根内装不同孔径的色谱柱，柱中可供分子通行的路径有粒子间的间隙（较大）和粒子内的通孔（较小）。当聚合物溶液流经色谱柱时，较大的分子被排除在粒子的小孔之外，只能从粒子间的间隙通过，速率较快；而较小的分子可以进入粒子中的小孔，通过的速率要慢得多。经过一定长度的色谱柱，分子根据相对分子质量被分开，相对分子质量大的在前面（即淋洗时间短），相对分子质量小的在后面（即淋洗时间长）。自试样进柱到被淋洗出来，所接受到的淋出液总体积称为该试样的淋出体积。 当仪器和实验条件确定后，溶质的淋出体积与其分子量有关，分子量愈大，其淋出体积愈小。（1） 体积排除 （2） 限性扩散 （3） 流动分离 1.2.校正原理：用已知相对分子质量的单分散标准聚合物预先做一条淋洗体积或淋洗时间和相对分子质量对应关系曲线，该线称为“校正曲线”。聚合物中几乎找不到单分散的标准样，一般用窄分布的试样代替。在相同的测试条件下，做一系列的GPC标准谱图，对应不同相对分子质量样品的保留时间，以lgM对t作图，所得曲线即为“校正曲线”。通过校正曲线，就能从GPC谱图上计算各种所需相对分子质量与相对分子质量分布的信息。聚合物中能够制得标准样的聚合物种类并不多，没有标准样的聚合物就不可能有校正曲线，使用GPC方法也不可能得到聚合物的相对分子质量和相对分子质量分布。对于这种可以使用普适校正原理。1.2.1.普适校正原理:由于GPC对聚合物的分离是基于分子流体力学体积，即对于相同的分子流体力学体积，在同一个保留时间流出，即流体力学体积相同。两种柔性链的流体力学体积相同： 1M1=2M2k1M1α1+1=k1M2α2+1　两边取对数：lgk1+(α1+1)lgM1=lgk2+(α2+1)lgM2即如果已知标准样和被测高聚物的k、α值，就可以由已知相对分子质量的标准样品M1标定待测样品的相对分子质量M2。　2.实验部分直接法：在测定淋出液浓度的同时测定其粘度或光散射，从而求出其分子量。间接法：用一组分子量不等的、单分散的试样为标准样品，分别测定它们的淋出体积和分子量，则可确定二者之间的关系。2.1.仪器：GPC仪的组成：泵系统、（自动）进样系统、凝胶色谱柱、检测系统和数据采集与处理系统。1.1.泵系统：包括一个溶剂储存器、一套脱气装置和一个高压泵。它的工作是使流动相（溶剂）以恒定的流速流入色谱柱。泵的工作状况好坏直接影响着最终数据的准确性。越是精密的仪器，要求泵的工作状态越稳定。要求流量的误差应该低于0.01mL/min。 2.1.2.色谱柱：GPC仪分离的核心部件。是在一根不锈钢空心细管中加入孔径不同的微粒作为填料。每根色谱柱都有一定的相对分子质量分离范围和渗透极限，色谱柱有使用的上限和下限。色谱柱的使用上限是当聚合物最小的分子的尺寸比色谱柱中最大的凝胶的尺寸还大，这时高聚物进入不了凝胶颗粒孔径，全部从凝胶颗粒外部流过，这就没有达到分离不同相对分子质量的高聚物的目的。而且还有堵塞凝胶孔的可能，影响色谱柱的分离效果，降低其使用寿命。色谱柱的使用下限就是当聚合物中最大尺寸的分子链比凝胶孔的最小孔径还要小，这时也没有达到分离不同相对分子质量的目的。所以在使用凝胶色谱仪测定相对分子质量时，必须首先选择好与聚合物相对分子质量范围相配的色谱柱。2.1.3.填料（根据所使用的溶剂选择填料，对填料最基本的要求是填料不能被溶剂溶解）：交联聚苯乙烯凝胶（适用于有机溶剂，可耐高温）、交联聚乙酸乙烯酯凝胶（最高100℃，适用于乙醇、丙酮一类极性溶剂）多孔硅球（适用于水和有机溶剂）、多孔玻璃、多孔氧化铝（适用于水和有机溶剂) 2.1.4.柱子：玻璃、不锈钢2.1.5.检测系统：通用型检测器：适用于所有高聚物和有机化合物的检测。有示差折光仪检测器、紫外吸收检测器、粘度检测器。2.1.6.示差折光仪检测器：溶剂的折光指数与被测样品的折光指数有尽可能大的区别。2.1.7.紫外吸收检测器：在溶质的特征吸波长附近溶剂没有强烈的吸收。2.1.8.选择型检测器：适用于对该检测器有特殊响应的高聚物和有机化合物。有紫外、红外、荧光、电导检测器等。2.2.操作：2.2.1.溶剂的选择： 能溶解多种聚合物；不能腐蚀仪器部件；与检测器相匹配。2.2.2.把激光光散射与凝胶色谱仪联用，在得到浓度谱图的同时，还可得到散射光强对淋出体积的谱图，从而计算出分子量分布曲线和整个试样的各种平均分子量2.2.3.激光光散射实验中必须对样品严格除尘，溶液中的灰尘会产生强烈的光散射，严重干扰聚合物溶液光散射的测量。溶液除尘是光散射成败的关键。首先是溶剂除尘，配置测试样品的溶剂应进行精馏，并经过0.2μm超滤膜过滤后方可使用。配好的溶液也要用0.2μm的超滤膜过滤。另外，测试中所用的器械，如：注射器等，使用前要用洗液浸泡，清水强力冲洗

耗材配件栏目，想在液相色谱柱的分类里，添加凝胶色谱柱，现做以下调查，请大家多多支持，多多关注。耗材配件：http://www.instrument.com.cn/Consumables/ 液相色谱柱：http://www.instrument.com.cn/Consumables/P1903.htm1、是否希望增加凝胶色谱柱的分类，是否方便查找？2 、对液相色谱柱的分类，有何建议？3、市面的凝胶色谱柱，现在都有哪些厂家？4、各家都有什么主推的特点？5、。。。。。。

各位朋友们，我的课题是分离检测陈酿红酒中的聚合色素。在色素检测的领域，常规的是HPLC（MS），采用C18反相色谱。但只是对单体花色苷和寡聚花色苷有好的效果。聚合度提升（花色苷，黄酮类物质的互相聚合物）导致色谱分离效果下降，显示出的是一大块不能分开的大峰（hump）。这是现在问题的瓶颈所在。因为聚合色素的分子量一般都在1000以上，所以想试一试凝胶色谱的分子筛效应筛选，但是我之前没有做过分子筛，对之很不熟悉。所以想请各路朋友探讨一下方法的可行性。下面是我针对凝胶色谱的几个疑问，希望有经验的朋友帮我解答：、1，凝胶色谱是一个配备有特殊检测器和别的装置的大型仪器吗？还是只是色谱柱是凝胶色谱柱？如果将HPLC（MS）的色谱柱更换为凝胶色谱柱，是不是就达到了凝胶分离的效果，操作上可不可行？2，因为聚合色素的结构复杂，同分异构体也会很多，我自认将其每个分离纯化出来都是不可能的工作。而且，因为凝胶色谱的分离只能达到将不同水力半径的物质分离的目的所以，其最终的分离效果如何仍然未知，望有经验的朋友指点一二，不胜感激！3，我认为，聚合色素分离的关键在于色谱柱，只有符合聚合色素物理化学特性的色谱柱才能解决分析检测的能力。希望有详细介绍和讲解色谱柱技术的朋友不吝分享一下资源，小弟QQ邮箱为543351984@qq.com，万分感激！

高分子工业材料及生物高分子分析是近年来新兴的课题。凝胶色谱是分离分析高分子组成及鉴定其性能的最好方法。高分子材料中填充各种助剂、乳化剂、分散剂等物的分离，色谱技术也独具特点。 　　①控制高分子产品质量　在生产工艺中，可利用凝胶色谱测定聚合物小分子杂质。如用凝胶色谱测定环氧树脂中未聚合的双酚A，用C18柱分离小分子环氧化合物，小分子聚苯乙烯或不能成膜的聚脂等，用以鉴定聚合物的质量。　　②测定聚合物的分子量分布宽度　分子量大小和分子量分布宽度是衡量聚合物质量的一种重要指标，用凝胶色谱可以测定。　　③高温凝胶色谱测聚合物的老化、降解现象及分级。如测定聚乙烯分子量应为四万左右，通过分析可将分子量1000以下的聚乙烯蜡分开。还可用来观察高密度聚乙烯的氧化过程，观察聚苯乙烯、环氧树脂、聚磺酸脂、尼龙及聚醚聚砜等的降解情况。　　④测定高分子材料的适用性　日常食品的高分子材料包装的很多，如果测定食品中有高分子材料，则说明这种高分子材料不适于做食品和包装。

凝胶色谱法开关电源1．2 分离纯化蛋白质的原理与方法──凝胶色谱法（分子筛效应）凝胶是一些由多糖类化合物构成的多孔球体，当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质直径小于凝胶网孔，由于静电吸附和扩散作用容易进入凝胶内部的通道，可以自由地进入凝胶颗粒的网孔，在向下移动的过程中，它们从凝胶颗粒的网孔扩散到凝胶颗粒间的孔隙，再进入另一凝胶颗粒的网孔，如此不断地进出，使流程增长，而最后流出层析柱。而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶颗粒的网孔，只能沿着凝胶颗粒间的孔隙，随着洗脱液流动，流程较短，因此首先流出层析柱。分子量介于二者之间的物质，虽然能够进入凝胶网孔，但比小分子难，因此进入凝胶网孔的几率比小分子小，向下移动的速度比小分子快，而比大分子慢。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。需要注意的是，有部分小分子蛋白质未进入凝胶内部，而在外部移动，因此，如果需要得到纯度更高的蛋白质分子，可将色谱柱中的凝胶溶液进行平衡后进行再次冼脱和分离。1．3 鉴定蛋白质纯度的原理与方法──电泳蛋白质分子的基本单位是氨基酸，氨基酸的一些基团在一定的pH下会发生水解或电离从而带有电荷。但总的来说蛋白质分子一般带有负电。在电场的作用下，带电的蛋白质分子会向着电泳槽中的正极方向移动。由于样品中各种蛋白质分子净电荷的量的差异以及蛋白质分子本身的大小等因素，使蛋白质分子产生不同的迁移速率，从而将样品中各种蛋白质分子分离开。由于蛋白质分子带电电荷比较复杂，净电荷总量与蛋白质分子的质量不成正比，而蛋白质分子的质量又是衡定的，电泳时在带电量和分子质量两种因素的作用下会产生迁移速率的复杂化，不能正确地将分子质量不同的蛋白质分子分离开，因此，实际操作中，一般会将蛋白质分子与SDS（十二烷基硫酸钠）发生反应形成蛋白质—SDS复合物，由于SDS所带负电荷的量大大超过蛋白质分子原有的电荷量，因此掩盖了不同种蛋白质间的电荷差异，使蛋白质的迁移率完全取决于蛋白质分子质量的大小。在电场条件下，分子量大的蛋白质迁移率慢，离前沿较远，而分子量小的蛋白质迁移快，离前沿较近。这样，不同分子量大小的蛋白质得到了分离。如果蛋白质的纯度高，迁移率一致，就会形成前沿整齐、清晰的条带。www.peakoil.com.cn

1、凝胶渗透色谱GPC的概念2、凝胶渗透色谱GPC的原理3、凝胶渗透色谱GPC的用途4、聚合物的各种平均分子量计算 5、凝胶渗透色谱GPC 的仪器组成6、影响凝胶渗透色谱数据置信度的因素分子量的一般定性关系之一： 性质/工艺参数 随MW增加§融化粘度 向上§冲击强度 向上§加工温度 向上§脆性 向上§拉伸能力(纤维) 向下§融流 向下G聚合物的支化度及粘度系数--------------粘度检测器G聚合物的功能基团，如短链支化--------------红外检测器G聚合物的绝对分子量及回转半径------------------激光光散射检测器

最近有个实验要用到凝胶色谱仪净化样品，可我公司没有，对这个也不太懂。请问有没有其他可替代的办法？能否买方法中要求的凝胶色谱柱，接到液相上分离？样品基质中有大量高分子脂类，试过SPE小柱，效果不佳，干扰太大。或者有没有类似SPE小柱那样的凝胶色谱小柱，可以起到分离大分子物质的东西？

请问各位老师能否提供些关于凝胶色谱柱埃值（凝胶孔径）与分子测定体积之间关系的资料呢。或者说如何通过色谱柱埃值来知道要分离物质分子量多少？或者通过分子量来确定所需色谱柱埃值。谢谢。

做液相色谱时使用GPC凝胶色谱柱是不是既可以起到分离的作用又可以看出个洗脱峰的分子量？我要分离的是多肽，想咨询一下具体的操作流程，包括流动相、检测器等一些相关参数的设置？

RT：今天有一厂家问我GPC是用于检测的还是分离用的，说是有什么不同。但具体就是不告诉我。请教一下各位专家、好友、能人志士：这两种用途的凝胶色谱GPC有何不同？？？

离子色谱和水相凝胶色谱有哪些相同点和差异？不是列数据的那种。本人用过凝胶色谱，正欲学习离子色谱，看一些资料发现有些类似，所以想求教学习离子色谱的时候那些GPC的知识可以借鉴，那些又要特别注意不要混淆。谢谢~http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09511.gif

[color=#444444]我们现在在分析水溶性样品的凝胶色谱柱（分析聚乙二醇类样品），用得是shodex的为型号OHpak SB-802.5和OHpak SB-803 HQ的凝胶色谱在，我们想自制相当的液相柱，请问可以自制吗？填料和空柱哪能买到呐？[/color]

如题，大家的凝胶色谱有实时显示流量吗？假设设定1.0ml/min，误差相差多少？我觉得流量对标准曲线的建立有很大关系。我的凝胶色谱没有显示实际流量是多少，我发现有时会流量变很小，这是怎么回事？单向阀有问题？

5009.19第一法做有机氯净化是用凝胶色谱净化，我们没有全自动凝胶渗透色谱系统，选择手动的话问题就来了，Bio-Beads S-X3聚苯乙烯凝胶100g大概三千块钱，按标准要求装一个要多少克凝胶？装的凝胶色谱柱过完一个样还可以继续过另外的样品吗？自己装的凝胶色谱柱可以用多久？麻烦做过的前辈给点指导····

哪位高手能告诉我装凝胶色谱柱的匀浆液用什么好吗？