利用高效液相检测

利用紫外和荧光光谱扫描技术开发高效液相色谱-荧光检测方法全过程荧光是光致发光中的一种，荧光过程是物质吸收入射光进入激发态，从激发态回到基态并发出波长更长得光的过程，在此过程中，物质吸收的光为激发光，发出的光为发射光（这个定义并不准确，有兴趣的版友可以参照相关教科书）。荧光检测在高效液相色谱中是比紫外检测更灵敏的检测方法，但是能够发出荧光的物质并不多，如何判断分析物有没有荧光特性并优化荧光检测器参数是荧光检测方法开发过程的重要内容。荧光检测方法优化的最重要两个参数是确定激发波长和发射波长。二极管阵列检测器（DAD）可以提供分析物在流动相的紫外吸收光谱，基于提取的紫外吸收光谱在日常高效液相色谱分分析中主要有两大作用：1.发现并确定紫外检测器的最佳检测波长；2进行进一步的运算做峰纯度检查，判断有没有共流出物。在这里通过实例向大家介绍二极管阵列检测器的另一用处：二极管阵列检测器辅助荧光检测器开发分析物的高效液相色谱-荧光检测方法。1实验设备和基本实验条件：Waters 2695分离单元Waters 2996 二极管阵列检测器Waters 2475 荧光检测器二极管阵列检测器和荧光检测器串列，荧光检测器在后（检测池耐压较差）二者之间死体积为1ml/min×0.1min。分析物为两种原料药色谱柱：C18，4.6×150mm，5μm柱温：30℃流动相：乙腈：醋酸盐缓冲溶液=65:352实验A：二极管阵列检测器获取紫外吸收光谱，荧光检测器扫描发射光谱实验仪器设置 :2996 3D采集模式，获取210-400nm紫外吸收谱图2475 3D采集模式，固定激发波长220nm（一般有紫外吸收的物质在210-230nm都有吸收），获取250-650nm发射光谱。利用二极管阵列检测器来判断化合物的出峰时间，图1是在254nm下提取的分析物1和分析物2的色谱图，信号很弱。依照二极管整列检测器提取的色谱图，根据连接二极管阵列检测器和荧光检测器的管路体积，推算二者之间死时间约为0.1min。在荧光检测器中调出发射波长3D图，在250-650nm每间隔50nm提取一次色谱图（即250nm，300nm，350nm…），根据紫外色谱图的分析物保留时间，确定荧光色谱图中分析物的出峰时间。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112130845_337609_2265735_3.jpg图1 二极管阵列检测器色谱图和提取的分析物紫外吸收色谱图在提取的荧光色谱图中，分析物1有荧光（300nm，图2），而分析物2没有。在荧光检测中，会有很多杂质峰出现（图3，在发射400nm提取的色谱图），而紫外检测器中不一定会发现，利用二极管阵列检测器获得的谱图有利于准确定位分析物在荧光色谱图出现的位置，排除杂质干扰（图3）。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112130846_337610_2265735_3.jpg图2 从激发波谱300nm发射光提取的色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112130848_337612

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高效液相色谱法更快检测非法添加剂 吊白块又称雕白粉或雕百块，俗称二水甲醛合次硫酸氢钠,常用作工业还原剂及漂白剂,多用于印染行业。 该物为半透明白色结晶或小块,易溶于水有机溶剂,高温下具有极强的还原性,同时释放出有毒气体，有漂白、保鲜作用。绝对不可用于食品添加剂(或食品漂白剂). http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411292020_525190_2498430_3.png http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411292020_525191_2498430_3.jpgfile:///C:/Users/HJJ/AppData/Local/Temp/ksohtml/wps8F73.tmp.png 中毒表现：打喷嚏、咳嗽、胸痛、声音沙哑、没食欲、发烧、头晕、头痛、恶心、呕吐、疲乏无力、四肢疼痛、血管水肿、血压下降等. 严重时会有危险，对人体的肾、肝、中枢神经、免疫功能、消化系统等均有不同程度的损害,并有一定的致癌性。 如吃了某些食品出现了以上症状,要及时就医或采取合理的应急治疗。 现在有一些不法分子为了减少生产成本,增白食品色泽及食品保鲜，常在食品生产过程中添加该物,危害消费者的身体健康, 带来不良的社会影响。现在已发现过的典型的案例有在腐竹、粉丝、米线、米粉、面粉、竹笋、白糖、大米、鱼干、肉制品、腌制品等食品中的添加。所以买东西不要一味的追求外观,以防上当受骗,并造成不必要的损失和麻烦。如果不幸受到这方面的损失及伤害,需要维权的话,可以多关注些类似的法律及相关的检测方法及规定。实验部分检测原理 利用吊白块易溶于水/甲醇/乙腈等溶剂的性质，溶解萃取,高效液相色谱柱分离,紫外检测器检测,外标法（保留时间定性，峰面积定量）计算. 主要仪器及试剂高效液相色谱仪(等度泵+紫外检测器或二极管检测器+柱温箱)超声波清洗仪[font='

相同的原理，不同的性能。想必很多用过普通液相和超高效液相的人都知道，超高效液相紫外检测器的灵敏度要比普通液相高，可是你知道为什么吗？有的人说，是检测器比色池的差异，有的人说，是检测器整体性能的差异。我找了下仪器的参数，以Waters 2996 PDA 检测器和PDA eλ二极管阵列检测器为例，让大家看看。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/02/201502051103_534343_1608710_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/02/201502051103_534344_1608710_3.jpg从参数上看，指标都差不多，唯独流通池设计不一致。〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓分割线〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓请您来解析：1、你觉得这两种检测器参数差异有哪些？2、哪些参数是影响检测器灵敏度的？3、两种检测器可以互换互用吗？4、两种检测器的使用效果和维护都有哪些不同？欢迎大家参与讨论，补充自己想交流的参数，说说自己的认识或者提出自己的疑问！！！往期回顾：【参数解读】基因扩增仪(PCR)的技术参数解读与使用