变异链球菌的检测

哪位朋友有 猪链球菌 的检测方法??一起进来讨论一下呀

兰氏D群链球菌（Lancefield group D streptococci）如何检测？哪位大侠提供一下方法，传授一哈经验撒

一、生物学性状　　根据最新分类原则，粪链球菌又叫粪肠球菌。应用C多糖抗原，根据兰氏（Lancefield）血清学分类，可将链球菌分成许多群。粪链球菌属于D群。D群链球菌分肠球菌和非肠球菌两类。前者包括粪链球菌（S.faecalis）、屎链球菌（S.faecium）和坚忍链球菌（S.durans）,后者有牛链球菌（S.bovis）和马肠链球菌(S.equinus)。　　粪链球菌菌形圆或椭圆，可顺链的方向延长,直径0.5-1.0微米,大多数成双或短链状排列,通常不运动。在丰富培养基上菌落大而光滑，直径1-2mm，全缘，罕见色素。其营养要求低，在普通营养琼脂上也可生长。能在10℃或45℃ pH 9.6或含6.5%NaCl肉汤培养基中生长，并能耐65℃ 30分钟。它可利用精氨酸为能源，发酵山梨醇，不发酵阿拉伯糖。在简单的培养基上生长不需叶酸。　　　近年来，DNA-DNA杂交结果显示，肠球菌与链球菌属同源程度低，故有学者建议另立肠球菌属，与人类有关者为粪肠球菌（E.faecalis）和屎肠球菌（E.faecium）。二、致病性　　　粪链球菌引起的感染有尿路感染、化脓性腹部感染、败血症、心内膜炎和腹泻发烧等。其中败血症最常继发于生殖泌尿性感染，皮肤、胆道、肠道等感染也可作为原发病灶。从天然乳清培养物中分离的菌株，能产生一种细菌素，叫肠球菌素（Enterocin），对单增李斯特氏菌有杀灭作用。三、流行病学　　粪链球菌为条件致病菌，它来源于人和温血动物的粪便，偶尔出现于感染的尿道及急性心内膜炎。它能够通过食品对人类造成感染，因而常见于许多食品，如火腿肠、炸肉丸、布丁及经过巴氏消毒的牛奶等，粪链球菌进入食物链的主要原因是不卫生的加工条件所致的，一般与直接的粪便感染无关。粪链球菌引起的感染大多是由于它的侵袭所造成，感染剂量较高，一般大于107个细菌。人、禽感染率最高，亦见于猪、牛、马、山羊、绵羊及兔。四、检验与控制1、检验：　　样品制备 取25g或25mL样品，放入225mL灭菌生理盐水中，充分混匀，制成1：10样品稀释液。根据样品的污染程度，制成适当的10倍递增稀释液。　　a.多管法：　　用适当的稀释液接种一套叠氮化钠葡萄糖肉汤管。接种量为1mL或以下的，使用10mL单料管；接种量为10mL，使用10mL双料管。35℃培养24-48h，并检查记录各管的混浊情况。用接种环将浑浊管中的培养物划线于PSE平板上，倒置平板于36℃培养24h。平板上出现的带棕色环的黑色菌落，确证为粪链球菌。根据接种的样品量和确证为是粪链球菌的管数，查MPN表，报告每克样品中的粪链球菌MPN值。　　b.滤膜法：　　倾注融化的4-5mL的KF琼脂于平板上，若平板表面有气泡，可用火焰灼除。根据样品的污染程度，使用样液的量为100，10，1.0，0.1或0.01mL。使用灭菌滤膜过滤样液，以能在滤膜上生长出20-100个菌落为宜。将滤过样液的滤膜紧贴在KF琼脂培养基表面上，避免出现气泡。倒置平板于36℃培养48h。粪链球菌在KF平板滤膜上形成暗红色至粉红色菌落。将典型菌落接种于脑心浸液斜面上，36℃培养48h。用其培养物做过氧化氢试验，过氧化氢浓度为3%，阳性反应者为非粪链球菌群细菌。将阴性反应者接种于脑心浸液肉汤，置45.5℃培养48h；同样方式接种一管胆盐肉汤，置36℃培养3天。在上述两种情况下生长者为粪链球菌。选择生长20-100个菌落的滤膜，根据所使用的样品量，计算出样品每克（毫升）中的粪链球菌数。　　c.平板计数法：　　 取1mL适当稀释液加入培养皿内，倾入12-15mL的KF或PSE培养基，转动平板充分混合。凝固后置36℃培养，KF平板培养48h，PSE平板培养24h。粪链球菌在KF平板上形成暗红色至粉红色菌落，边缘整齐，琼脂表面下菌落呈椭圆或晶体状；在PSE平板上形成带棕色环的棕黑色菌落。选择有30-300个菌落的平板进行记数。按粪链球菌数/g(mL)报告结果。2、控制　　由于粪链球菌可通过食物对人类造成感染，所以应从以下几个方面加以控制：　　加强生产区域的卫生管理，由于粪链球菌主要来源于人畜粪便，所以厕所要合理布局，避免粪便直接污染；生产人员要严格执行个人卫生制度。　　在加工过程中，严格注意每个关键点的控制，掌握好诸如温度、水源卫生等要素。　　对摆放时间过长的食物，如熟食制品、牛奶或奶制品等，要彻底加热再食用，春夏季尤其要注意。

粪链球菌及检验 一、生物学性状　　根据最新分类原则，粪链球菌又叫粪肠球菌。应用C多糖抗原，根据兰氏（Lancefield）血清学分类，可将链球菌分成许多群。粪链球菌属于D群。D群链球菌分肠球菌和非肠球菌两类。前者包括粪链球菌（S.faecalis）、屎链球菌（S.faecium）和坚忍链球菌（S.durans）,后者有牛链球菌（S.bovis）和马肠链球菌(S.equinus)。　　粪链球菌菌形圆或椭圆，可顺链的方向延长,直径0.5-1.0微米,大多数成双或短链状排列,通常不运动。在丰富培养基上菌落大而光滑，直径1-2mm，全缘，罕见色素。其营养要求低，在普通营养琼脂上也可生长。能在10℃或45℃ pH 9.6或含6.5%NaCl肉汤培养基中生长，并能耐65℃ 30分钟。它可利用精氨酸为能源，发酵山梨醇，不发酵阿拉伯糖。在简单的培养基上生长不需叶酸。　　　近年来，DNA-DNA杂交结果显示，肠球菌与链球菌属同源程度低，故有学者建议另立肠球菌属，与人类有关者为粪肠球菌（E.faecalis）和屎肠球菌（E.faecium）。二、致病性　　　粪链球菌引起的感染有尿路感染、化脓性腹部感染、败血症、心内膜炎和腹泻发烧等。其中败血症最常继发于生殖泌尿性感染，皮肤、胆道、肠道等感染也可作为原发病灶。从天然乳清培养物中分离的菌株，能产生一种细菌素，叫肠球菌素（Enterocin），对单增李斯特氏菌有杀灭作用。三、流行病学　　粪链球菌为条件致病菌，它来源于人和温血动物的粪便，偶尔出现于感染的尿道及急性心内膜炎。它能够通过食品对人类造成感染，因而常见于许多食品，如火腿肠、炸肉丸、布丁及经过巴氏消毒的牛奶等，粪链球菌进入食物链的主要原因是不卫生的加工条件所致的，一般与直接的粪便感染无关。粪链球菌引起的感染大多是由于它的侵袭所造成，感染剂量较高，一般大于107个细菌。人、禽感染率最高，亦见于猪、牛、马、山羊、绵羊及兔。

请教一下：溶血性链球菌和β型溶血性链球菌是一样的吗？只是叫法不同？还是说溶血性链球菌范围比较大吧？包括β型溶血性链球菌其他型号？

做能力见证溶血链球菌鉴别时，有溶血圈，显微镜下为阳性链球状，杆菌肽实验为阴性，这种情况存在么？

求助：保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌的光学显微镜的镜检照片和菌落形态的照片，谢谢！！！！！！！！！！！！

肺炎链球菌的 致病物 有哪些呢？

请大虾们请教乳酸链球菌菌落的镜检图

溶血性链球菌在血清肉汤中生长时，管中的现象是()。 A、块状沉淀 B、絮状或颗粒状沉淀 C、均匀生长 D、混浊

送风系统测β－溶血性链球菌，那么这个菌长什么样呢?[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/04/202004262134046384_8893_4157961_3.png[/img]

大家听说过肺炎链球菌吗？那可是导致肺炎的罪魁祸首。我曾经对肺炎链球菌进行过初步的研究。刚开始的时候，觉得好吓人，我刚拿到的肺炎链球菌，是一批刚刚从国外引进的菌种，足足有几百个株系，光对它们进行保存就用了好几天呢。肺炎链球菌不是一般的培养基就能培养的，而是需要血平板，我们的血平板都是直接买的现成的，那时候都好几块钱一个呢。我们培养了肺炎链球菌，首先要对他们进行保存，然后提取DNA，忘了为什么不能对肺炎链球菌进行液体培养，反正我们当时需要的菌全都是固体培养的，取样品是很麻烦的。首先，观察平板上长的肺炎链球菌会发现不同的菌株长相是各不相同，有黑的，有白的，有长的白白胖胖的，也有紧紧贴在培养基上的。实验起来，最令人喜欢的就是长的白白胖胖的，特别好取材，用水冲冲就能得到好多菌。而最讨厌的就是紧紧贴在培养基上的，怎么弄都很难弄到足够的菌。不过呢，那是从操作的难易方面，我们经过讨论，觉得这可能就是生物学实验上那个著名的噬菌体实验中用的R型和S型肺炎链球菌吧。长的难看的就是就是所谓的R型，非致病菌，属人体正常菌群，而长的白白胖胖的好看的则是S型的致病菌，是导致肺炎的罪魁祸首。这似乎就和自然界的其它生物一样，好看的通常都是有毒的，而有益的通常都是其貌不扬的。

哪位做过乳酸链球菌在MC上的培养，菌落形态如何？进一步鉴定怎样？

请问大家像嗜热链球菌这种兼性厌氧性菌，在培养的时候有没有什么特殊要求？需要隔氧吗？还是和其他好氧型菌的培养方式一样？请指教谢谢！

如题，七天 有个 招标招好了，经销商 竟然给我说是 草绿色链球菌不生产了，交换成 口腔链球菌。咨询下 大家有这回事吗？还没听说过了，。

猪链球菌2型病平板凝集试验操作规程,2005年最新行标[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=13572]猪链球菌2型病平板凝集试验操作规程[/url]

我们刚开始做粪性链球菌的培养~~请问下~哪位知道Pfrizer选择性肠球菌琼脂培养基倒入皿盘的体积呀~要倒多少合适~~谢谢~~急~

疑似的溶血性链球菌，进行了链激酶试验，在24小时内如何看是否完全溶解

各位大虾：我单位一直用斜面保存十几种菌种，均很成功。但在用加有琼脂的BHI斜面保存乙型溶血性链球菌时，发现其菌苔面逐渐变得很薄，在一个月后用BHI来接种复苏时，发现其已死亡。请问死亡原因是什么？可有好的保藏方法介绍？谢谢。

我做的本科毕业论文的题目是 ：链球菌表型耐药研究及耐药谱的迁移变化请问耐药谱的迁移变化怎么样来进行测定呢 ？需要哪些软件吗？谢谢了，急需。

[align=left][font='仿宋'][color=#000000]曾盈盈[/color][/font][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=center][font='宋体'][size=13px]目录[/size][/font][/align][url=#_Toc10970][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]III[/size][/font][url=#_Toc12352][font='times new roman'][size=16px]第1章 前言[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][url=#_Toc1794][font='times new roman'][size=16px]第2章 乳酸链球菌素的性质及标准[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][url=#_Toc2961][font='times new roman'][size=16px]2.1 Nisin的结构特点[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][url=#_Toc27220][font='times new roman'][size=16px]2.2Nisin特性[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][url=#_Toc13288][font='times new roman'][size=16px]2.2.1溶解度[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][url=#_Toc25604][font='times new roman'][size=16px]2.2.2[/size][/font][/url][url=#_Toc25604][font='times new roman'][size=16px]稳定性[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][url=#_Toc12757][font='times new roman'][size=16px]2.2.3抑菌性[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][url=#_Toc24549][font='times new roman'][size=16px]2.2.4[/size][/font][/url][url=#_Toc24549][font='times new roman'][size=16px]安全性[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][url=#_Toc14679][font='times new roman'][size=16px]2.3 Nisin作用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][url=#_Toc17293][font='times new roman'][size=16px]2.4[/size][/font][/url][url=#_Toc17293][font='times new roman'][size=16px]使用方法[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][url=#_Toc23803][font='times new roman'][size=16px]2.5 Nisin的使用标准[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][url=#_Toc13684][font='times new roman'][size=16px]2.5.1 Nisin的使用标准和限量标准[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][url=#_Toc5867][font='times new roman'][size=16px]2.5.3 Nisin的检测标准[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][url=#_Toc26192][font='times new roman'][size=16px]2.5.3.1 交叉反应率[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][url=#_Toc16246][font='times new roman'][size=16px]2.5.3.2 回收率[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][url=#_Toc13812][font='times new roman'][size=16px]第3章 乳酸链球菌素在食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][url=#_Toc1242][font='times new roman'][size=16px]3.1 [/size][/font][/url][url=#_Toc1242][font='times new roman'][size=16px]Nisin[/size][/font][/url][url=#_Toc1242][font='times new roman'][size=16px]在乳和乳制品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][url=#_Toc6265][font='times new roman'][size=16px]3.1.1在原料奶保鲜中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][url=#_Toc22101][font='times new roman'][size=16px]3.1.2[/size][/font][/url][url=#_Toc22101][font='times new roman'][size=16px]在巴氏杀菌乳中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][url=#_Toc1416][font='times new roman'][size=16px]3.1.3在酸奶中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][url=#_Toc1225][font='times new roman'][size=16px]3.1.4在干酪保藏中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]8[/size][/font][url=#_Toc19182][font='times new roman'][size=16px]3.1.5在长货架期软雪糕奶浆中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]8[/size][/font][url=#_Toc11638][font='times new roman'][size=16px]3.2 Nisin在肉制品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][url=#_Toc9450][font='times new roman'][size=16px]3.2.1牛肉冷却肉保鲜[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][url=#_Toc26522][font='times new roman'][size=16px]3.2.2在香肠中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][url=#_Toc20948][font='times new roman'][size=16px]3.2.3在西式切片火腿中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][url=#_Toc13302][font='times new roman'][size=16px]3.2.4[/size][/font][/url][url=#_Toc13302][font='times new roman'][size=16px]在即食腊肉制品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][url=#_Toc17421][font='times new roman'][size=16px]3.2.6[/size][/font][/url][url=#_Toc17421][font='times new roman'][size=16px]在泡凤爪制品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]11[/size][/font][url=#_Toc25989][font='times new roman'][size=16px]3.3 Nisin在罐藏食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]11[/size][/font][url=#_Toc27734][font='times new roman'][size=16px]3.3.1在罐头食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]11[/size][/font][url=#_Toc13547][font='times new roman'][size=16px]3.3.2在低盐酱菜中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]11[/size][/font][url=#_Toc10241][font='times new roman'][size=16px]3.4 Nisin在啤酒酿造中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]12[/size][/font][url=#_Toc31850][font='times new roman'][size=16px]3.5 Nisin在焙烤食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]12[/size][/font][url=#_Toc31137][font='times new roman'][size=16px]3.6 Nisin在果汁饮料中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]12[/size][/font][url=#_Toc18518][font='times new roman'][size=16px]3.7 Nisin在方便食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]13[/size][/font][url=#_Toc10264][font='times new roman'][size=16px]3.8[/size][/font][/url][url=#_Toc10264][font='times new roman'][size=16px] Nisin[/size][/font][/url][url=#_Toc10264][font='times new roman'][size=16px]在热处理密封包装食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]13[/size][/font][url=#_Toc2149][font='times new roman'][size=16px]3.9 Nisin在植物蛋白食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]13[/size][/font][url=#_Toc32563][font='times new roman'][size=16px]3.10 Nisin在鱼贝类等海产制品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]14[/size][/font][url=#_Toc20563][font='times new roman'][size=16px]3.11 Nisin 在酱类制品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]14[/size][/font][url=#_Toc1607][font='times new roman'][size=16px]3.12 其他[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]14[/size][/font][url=#_Toc19108][font='times new roman'][size=16px]第4章 结论[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]15[/size][/font][url=#_Toc25686][font='times new roman'][size=16px]参考文献[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]16[/size][/font][align=center][/align][align=center][/align][align=center][font='times new roman'][size=16px]第1章 前言[/size][/font][/align]食品在贮存中，极易受到微生物侵袭导致食物腐败变质，据统计，全世界大约有10%～20%的食品损失源于各种腐败变质，要使食品有一定的保藏期，就必须采用一定的措施防止微生物的感染和繁殖，采取防腐剂延缓视频腐败是一种最有效、最简捷、最经济的贮存食品手段。目前，我国食品行业所用防腐剂品种较少，人们追求对人体无害的防腐剂，于是无毒、高效的天然食品防腐剂乳酸链球菌素便引起人们的重视。乳酸链球菌素又称乳酸链球菌肽或音译为尼辛，是乳酸链球菌产生的一种多肽物质，由34个[url=/item/%E6%B0%A8%E5%9F%BA%E9%85%B8]氨基酸[/url]残基组成，[url=/item/%E5%88%86%E5%AD%90%E9%87%8F/6281359]分子量[/url]约为3500 Da。由于乳酸链球菌素可抑制大多数[url=/item/%E9%9D%A9%E5%85%B0%E6%B0%8F%E9%98%B3%E6%80%A7%E7%BB%86%E8%8F%8C/14130412]革兰氏阳性细菌[/url]，并对[url=/item/%E8%8A%BD%E5%AD%A2%E6%9D%86%E8%8F%8C/765328]芽孢杆菌[/url]的孢子有强烈的抑制作用，因此被作为[url=/item/%E9%A3%9F%E5%93%81%E9%98%B2%E8%85%90%E5%89%82/6199223]食品防腐剂[/url]广泛应用于食品行业。食用后在人体的生理pH条件和α—胰凝乳蛋白酶作用下很快[url=/item/%E6%B0%B4%E8%A7%A3/378219]水解[/url]成氨基酸，不会改变人体肠道内正常菌群以及产生如其它抗菌素所出现的抗性问题，更不会与其它抗菌素出现交叉抗性，是一种高效、无毒、安全、无副作用的天然食品[url=/item/%E9%98%B2%E8%85%90%E5%89%82/2532023]防腐剂[/url]。1969年，联合国粮食及农业组织/[url=/item/%E4%B8%96%E7%95%8C%E5%8D%AB%E7%94%9F%E7%BB%84%E7%BB%87]世界卫生组织[/url](FAL/WHO)食品添加剂联合专家委员会确认[url=/item/%E4%B9%B3%E9%85%B8]乳酸[/url]链球菌素可作为食品防腐剂。1992年3月中国卫生部批准实施的文件指出：“可以科学地认为乳酸链球菌作为食品保藏剂是安全的”。迄今为止，已有英美法等五十多个国家和地区批准Nisin作为食品防腐剂使用，最近，中国也制定了Nisin产品的国家标准[font='times new roman'][size=16px][1][/size][/font]。[align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=center][font='times new roman'][size=16px]第2章 乳酸链球菌素的性质及标准[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]2.1 Nisin的结构特点[/size][/font][align=left]乳酸链球菌素（Nisin； CNS：17.019； INS: 234）是由属于N型血清的某些乳酸链球菌在代谢过程中合成和分泌的具有很强杀菌作用的多肽抗生素类物质。它的成熟分子仅由34个氨基酸残基组成，分子式为C143H228N42O37S7，相对分子质量为3348。随着科技发展，人们深入研究，发现Nisin的类型有6种，分别为A，B，C，D，E和Z，其中对Nisin A和Nisin Z 的研究最为活跃，区别分别在于Nisin A 的第27位AA为His，而Nisin Z 的第27位AA为Asn，其抗菌特性几乎无差别[font='times new roman'][size=16px][2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]][/size][/font]，其分子结构见图1。[/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/06/202106201028412317_1856_1608728_3.jpeg[/img][/align][align=center][font='宋体'][size=14px]图1-1 Nisin A的结构（Nisin Z在27位His位为Asn）[/size][/font][/align] Nisin是由34个氨基酸残基组成的多肽，N末端为异亮氨酸，C端为赖氨酸，含2种特殊氨基酸Dha和Dhb，有5个硫醚键形成的分子内环，其中1个称为羊毛硫氨酸，其他4个是β-甲基羊毛硫氨酸。活性分子常为二聚体或四聚体。由于它的独特结构使它一方面在酸性pH值条件下，可经115.6 ℃的高压灭菌而不失活；另一方面表现出对许多革兰氏阳性菌，包括葡萄球菌、链球菌、微球菌、分歧杆菌、棒杆菌、利斯特氏菌、乳杆菌、芽孢杆菌等有很强的抑制作用[font='times new roman'][size=16px][4][/size][/font]。[font='times new roman'][size=16px]2.2Nisin特性[/size][/font]乳酸链球菌素（Nisin）的特性包括：溶解性、稳定性、抑菌性以及安全性。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.2.1溶解度[/size][/font][/align]乳酸链球菌素（Nisin）是一种浅棕色固体粉末，使用时需溶于水或液体中，且于不同pH值下[url=/item/%E6%BA%B6%E8%A7%A3%E5%BA%A6]溶解度[/url]不同。Nisin的溶解度随着pH值的下降而显著增加。如在水中（pH=7），溶解度为49.0mg/ml（Nisin）；若在0.02M [url=/item/%E7%9B%90%E9%85%B8]盐酸[/url]中，溶解度为118.0mg/ml（Nisin）；在碱性条件下，几乎不溶解。产品中由于含有乳蛋白，其水溶液呈轻微浑浊。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.2.2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]稳定性[/size][/font][/align]乳酸链球菌素（Nisin）的稳定性也与溶液的PH值有关。如溶于PH=6.5的脱脂牛奶中，经85℃ 巴氏灭菌15分钟后，活性仅损失15%，当溶于PH=3的[url=/item/%E7%A8%80%E7%9B%90%E9%85%B8]稀盐酸[/url]中，经121℃15分钟高压灭菌仍保持100%的活性，可看出其耐酸耐热性能优良。当pH超过4时，特别是加热条件下，它在水溶液中的分解速度加快，活力降低；在pH等于5时，灭菌后丧失40%活性；pH为6.8时，灭菌后丧失90%活性。乳酸链球菌素加入食品后，受到牛奶、肉汤等大分子的保护，稳定性大大提高。Nisin的稳定性也与温度有关，Delevs-Hroughton报道，将添加250IU/g Nisin的pH等于5.6-6.0，含水量54%～58%的巴氏灭菌精制干酪贮藏于不同温度中，30个星期后，20℃ 中的Nisin残留量为90%左右，25℃ 为55%，30℃ 下降到不到40%[font='times new roman'][size=16px][5][/size][/font]。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.2.3抑菌性[/size][/font][/align]乳酸链球菌素对许多革兰氏阳性菌，包括葡萄球菌、链球菌、微球菌、分歧杆菌、棒杆菌、利斯特氏菌、乳杆菌、芽孢杆菌等有明显的抑制作用，尤其对产生芽孢的革兰氏阳性细菌有特效，对革兰阴性菌影响不大。可能是因为革兰阴性菌的细胞壁较复杂，仅能允许分子量60Da以下的物质通过，乳酸链球菌素的分子量达到 3150Da，因此无法到达细胞膜。通常，产芽孢的细菌耐热性很强，如鲜乳采用135℃ 、2s超高温瞬时灭菌，非芽孢细菌死亡率100%，芽孢细菌死亡率90%，还有10%芽孢细菌不能杀灭。Nisin抑制细菌的生长及芽孢的萌发是由于其对细胞表面的强烈吸附而引起细胞质的释放实现的。Nisin是带有正电荷的疏水短肽，因而它可以作用于革兰氏阳性菌细胞壁带负电荷的阴离子成分上，如磷壁酸、糖醛酸磷壁酸、酸性多糖和磷脂。相互作用的结果是与细胞壁形成管状结构,使得小分了量的细胞组成成分从孔道中泄露出来,导致细胞内外能差消失,对蛋白质、多糖等物质的生物合成产生抑制作用。而G-与NisinG+相比,其细胞壁成分复杂而且结构致密，Nisin无法通过，无法对其发挥作用，但当经过处理改变G-的细胞壁通透性后同样对Nisin敏感[font='times new roman'][size=16px][6][/size][/font]。通过分子模型分析了乳链菌肽与质膜之间的相互作用及其对磷脂的影响表明,乳酸链球菌素吸附在质膜上,其N末端比C末端更深入地插入脂肪层中,表明N末端和C末端具有不同的疏水特点。对乳链菌肽与不同的中性和负电性磷脂模型的研究结果表明, 乳链菌肽扰乱了膜中脂肪,尤其是磷脂酰甘油的正常排列。对乳酸链球菌素与卵磷脂模型的作用方式研究表明,乳链菌肽可显著地改善二软脂酰-sn-甘油酰-3-卵磷脂的多层分散形态,而不会引起脂肪晶相的显著改变。乳链菌肽能显著地干扰膜的渗透性与膜结构。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.2.4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]安全性[/size][/font][/align]通过病理学家研究以及毒理学试验都证明乳酸链球菌素（Nisin）是完全无毒的。乳酸链球菌素（Nisin）可被消化道[url=/item/%E8%9B%8B%E7%99%BD%E9%85%B6]蛋白酶[/url]降解为氨基酸，无残留，不影响人体[url=/item/%E7%9B%8A%E7%94%9F%E8%8F%8C]益生菌[/url]，不产生[url=/item/%E6%8A%97%E8%8D%AF%E6%80%A7]抗药性[/url]，不与其它抗生素产生交叉抗性。世界上有不少国家如英、法、[url=/item/%E6%BE%B3%E5%A4%A7%E5%88%A9%E4%BA%9A]澳大利亚[/url]等，在包装食品中添加乳酸链球菌素（Nisin），通过此法可以降低灭菌温度，缩短灭菌时间，降低热加工温度，减少营养成份的损失，改进食品的品质和节省能源，并能有效地延长食品的保藏时间。还可以取代或部分取代化学防腐剂、发色剂（如[url=/item/%E4%BA%9A%E7%A1%9D%E9%85%B8%E7%9B%90]亚硝酸盐[/url]），以满足生产保健食品、绿色食品的需要。乳酸链球菌素为天然的多肽物质，食用后可被体内的蛋白酶消化分解成氨基酸，无微生物毒性或致病作用，因此其安全性较高。ADI: 0~3001U/kg (FAO /wHO, 1994)。雄性小鼠经口LDo09.2g/kg(bw)，雌性小鼠经口LD56.81g/kg(bw)，雄性大鼠经口LDso14. 70g/kg(bw)，雌性大鼠经口LD36.81g/kg(bw)。[font='times new roman'][size=16px]2.3 Nisin作用[/size][/font]（1）能有效抑制引起食品腐败的细菌和孢子,延长食品保存时间；（2) 降低灭菌温度,缩短热处理时间,减少营养成分的损失,改进食品的品质、风味、结构、颜色等性状 （3）它对食品的色、香、味、口感不产生副作用 （4）可取代或部分取代化学防腐剂,以满足生产健康食品、绿色食品的需要 （5）节省能源,增加有效工作时间 （6）它是一种多肽,可被人体内的酶降解、消化。乳酸链球菌素对蛋白水解酶如胰蛋白酶、胰酶、唾液酶和 消化特别敏感，但对粗制凝乳酶不敏感。（7）它的标准品纯度为2.5%,并定为1x101U/go.乳酸链球菌素既可以降低灭菌温度,又可以延长食品的保藏时间,在目前,具有这样双重作用的食品防 腐剂是不多见的。可以降低灭菌温度,这在食品加工中具有很大的实用价值[font='times new roman'][size=16px][5][/size][/font]。[font='times new roman'][size=16px]2.4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]使用方法[/size][/font]GB2760规定,乳及乳制品、预制肉制品、熟肉制品、可直接食用的熟制水产品0.5g/kg 杂粮灌肠、米面灌肠、改变物理形状的蛋制品0.25g/kg 食用菌及菌类罐头、八宝粥罐头、酱油、酱及酱制品、复合调味料、除水之外的饮料类0.2g/kg 醋0. 15g/kg.其他国家的规定见表2.1。[align=center][font='宋体'][size=14px]表2.1 批准使用乳酸链球菌素的国家举例[/size][/font][/align][table][tr][td] [/td][td][font='宋体'][size=14px]国家[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]允许使用的食品[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]最大使用量[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]澳大利亚[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]干酪，经加工的干酪，罐装番茄[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]无限制[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]比利时[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]干酪[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]100[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]塞浦路斯[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]干酪，凝结的干酪，罐装蔬菜[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]无限制[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]欧盟[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]E234，作为天然防腐剂[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]视具体食品和加盟国而定[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]法国[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]经加工的干酪[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]无限制[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]意大利[/size][/font][/td][td][/td][td][font='宋体'][size=14px]500[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]墨西哥[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]允许使用[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]500[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]荷兰[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]干酪，经加工的干酪[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]800[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]秘鲁[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]允许使用[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]无限制[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]俄罗斯[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]干酪，罐装蔬菜[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]800[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]英国[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]凝结的干酪，干酪，罐装食品[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]无限制[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]美国[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]经加工的干酪[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1000[/size][/font][/td][/tr][/table][align=left][/align][font='times new roman'][size=16px]2.5 Nisin的使用标准[/size][/font][align=left][font='times new roman'][size=16px]2.5.1 Nisin的使用标准和限量标准[/size][/font][/align]乳酸链球菌素 nisinCNS号 17.019 INS号 234功能 防腐剂[table][tr][td][align=center][font='宋体'][size=14px]食品分类号[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='宋体'][size=14px]食品名称[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='宋体'][size=14px]最大使用量/(g/kg)[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='宋体'][size=14px]备注[/size][/font][/align][/td][/tr][/table][table][tr][td][font='宋体'][size=14px]01.0[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]乳及乳制品(01.01.01、01.01.02、13.0涉及品种除外)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.5[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]04.03.02.04[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]食用菌和藻类罐头[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.2[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]06.04.02.01[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]杂粮罐头[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.2[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]06.04.02.02[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]其他杂粮制品(仅限杂粮灌肠制品)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.25[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]06.07[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]方便米面制品(仅限方便湿面制[/size][/font][font='宋体'][size=14px]品）[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.25[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]06.07[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]方便米面制品(仅限米面灌肠制品)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.25[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]08.02[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]预制肉制品[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.5[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]08.03[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]熟肉制品[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.5[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]09.04[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]熟制水产品(可直接食用)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.5[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]10.03[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]蛋制品(改变其物理性状)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.25[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]12.03[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]醋[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.15[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]12.04[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]酱油[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.2[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]12.05[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]酱及酱制品[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.2[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]12.10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]复合调味料[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.2[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]14.0[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]饮料类(14.01包装饮用水除外)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.2[/size][/font][/td][td][/td][/tr][/table][align=left][font='times new roman'][size=16px]2.5.3 Nisin的检测标准[/size][/font][/align]检出限2.0 mg/kg（mg/L）；定量限6.0 mg/kg（mg/L）。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.5.3.1 交叉反应率[/size][/font][/align]乳酸链球菌素100%；纳他霉素0.1%；苯甲酸钠0.1%；聚萘氨酸0.1%；山梨酸钾0.1%；对羟基苯甲酸0.1%；多粘菌素B1%；多粘菌素E1%；万古霉素1%；缬氨霉素1%；平阳霉素1%；环孢菌素A1%。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.5.3.2 回收率[/size][/font][/align]牛奶、饮料、乳制品（液态）回收率如下：——添加量为1 μg/mL时，回收率为78.6%～110.6%；——添加量为30 μg/mL时，回收率为98.7%～117.9%；——添加量为300 μg/mL时，回收率为79.4%～116.5%。肉制品、乳制品（固态）回收率如下：——添加量为0.5 μg/mL时，回收率为93.1%～105.9%；——添加量为10 μg/mL时，回收率为75.8%～116.3%；——添加量为100 μg/mL时，回收率为88.2%～112.4%。[align=center][font='times new roman'][size=16px]第3章 乳酸链球菌素在食品中的应用[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]3.1 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Nisin[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在乳和乳制品中的应用[/size][/font][align=left][font='times new roman'][size=16px]3.1.1在原料奶保鲜中的应用[/size][/font][/align]Nisin用于原料奶的保鲜是非常有效的，在世界许多国家，牧场往往远离加工厂，加上当地气候比较炎热，且无适宜的冷冻设备，因此通常在原料奶中加入Nisin，以增加原料奶的保质期。Anonynous等人研究证实，在寒冷、室温及较高温度下，添加30-S0IU/mL的Nisin，就可使原料奶保质期廷长1倍以上，孔保华等人在鲜奶中添加Nisin研究鲜奶在贮存期间的质量变化，结果如表3.1所示，在整个贮存期间对照组的细菌总数均高于添加Nisin的处理组，且随着Nisin用量的增加，细菌总数呈梯度下降；而且在整个贮存期间对照组pH明显低于其它组，下降速度较快，其它组pH下降速度较慢。这是由于添加Nisin抑制了细菌的活性，因而pH相对较高[font='times new roman'][size=16px][7][/size][/font]。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.1.2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在巴氏杀菌乳中的应用[/size][/font][/align]蒋艳在实验中发现，巴氏杀菌乳在整个贮存期间未添加Nisin的组、细菌总数均显著高于添加Nisin的各组样品，且随着添加Nisin浓度的增加，细菌总数逐渐减少、产品保质期延长（如表3.2），同时，对贮存期间巴氏杀菌乳酸度、风味的测定发现， Nisin对乳中的产酸菌有明显抑制作用且对风味没有影响。添加Nisin后，在4℃ 环境下保存，可使产品保质期达到12天左右，但由于Nisin价格较费，在实际生产中应考虑生产成本，确定合适的添加量。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.1.3在酸奶中的应用[/size][/font][/align]酸奶属高水分食品,水分活度约为0.90-0.95,酵母菌、霉菌及细菌等各种微生物都能生长,而最先导致酸奶腐败变质的微生物是细菌,它是最活跃量普遍的因素,起主导作用。因此抑制细菌的繁殖,就能有效地延长酸奶的保质期。潘利华的实验表明,在没有添加稳定剂的酸奶中, Nisin的添加量为500IU/ mL时,不影响发酵过程,也不能延长保质期。但在水果酸奶生产中,由于新鲜水果带入了酵母菌和细菌(210个/ml),致使产品在1周内即发生腐败,即使添加 Nisin对抑菌作用也无效,相反还会促进腐败菌的生长,在这种情况下添加香兰素(2g/kg)可以起到抑菌效果,而且对产品风味无影响。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.1.4在干酪保藏中的应用[/size][/font][/align]Nisin最初用于干酪的防腐，其已成功地用于硬制干酪、巴氏灭菌干酪、巴 氏灭菌乳、罐藏浓缩牛乳、高温灭菌乳、酸乳、乳制甜点等乳制品中。在干酪的加工过程中，Nisin是最有效的保护剂,干酪原料经80℃-100℃巴氏消毒后,梭菌芽孢仍能存活，乳酪中最常见的微生物为丁酸梭菌、酪丁酸梭菌、生抱梭菌,尤其是肉毒梭菌在加工的乳酪中产生毒素。Taraka等(1986)研究表明,在经巴氏处理的干酪中，加入500 IU/mL-1000IU/mL Nisin能阻止梭菌的生长和毒素的形成，同时还能降低食盐和磷酸盐的用量[font='times new roman'][size=16px][5][/size][/font]。加工干酪由于其高pH值、高水分和厌氧包装，故产品中存在的微生物问题主要是芽孢菌的生长， 如C sporogenes、C butyricum 和C tyrobutyricum，因此抑制加工干酪中的微生物就是抑制芽抱菌生长，有报道证实, Nisin作为加工干酪防腐剂有很好的作用。此外, C.botulinum对加工干酪的污染有日益增长的趋势，有研究表明, 12.5 -250.0 mg/kg的Nisin对加工干酪粉中防止C.botulinum的生长是有效的,它可延缓和防止C.botulinum的生长,并可延缓和防止C.botulinum毒素的产生。一般具有高水分、低盐和磷酸盐的产品要求应用的Nisin量较高. Natalia R等人也证实，一株产Nisin Z的Lactococcus lactis sp. lactis IPLA 729gB明显抑制 Vidiago酪中 C.tyrobutyricum 的生长。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.1.5在长货架期软雪糕奶浆中的应用[/size][/font][/align]Nisin能有效地抑制包括李氏菌在内的大多数革兰氏阳性菌。余保宁对Nisin在长货架期软雪糕奶浆的应用实验中发现、随着奶浆存放时间的延长, Nisin对微生物的抑制效果均表现为随着添加量的增加而增大，从细菌总数的数据分析看 Nisn的浓度大于或等于50mg/kg时,就能起到较好的抑菌作用。同时，有研究发现，添加不同防腐剂处理软雪糕奶浆观察其在4℃条件下菌数变化，发现Nisin和苯甲酸钠的抑菌效果较好，而且尤以Nisin的保鲜效果最佳、原因可能是 Nisin对梭菌和芽孢杆菌活性的抑制，这些产生内生孢子的细 菌是食品的主要腐败微生物，它们的孢子比营养细胞对Nisin更为敏感，这是由于孢子在软雪糕奶浆调和过程中已受到热损伤，因此变得对Nisn较为敏感。这也是Nisn比其它保鲜剂更适用于热加工食品防腐保鲜的重要原因。[align=center][font='宋体'][size=14px]表3.1 贮存期间细菌总数和[/size][/font][font='宋体'][size=14px]pH[/size][/font][font='宋体'][size=14px]的变化[/size][/font][/align][table][tr][td] [/td][td=1,2][font='宋体'][size=14px]Nisin添加量（IU/g）[/size][/font][/td][td=2,1][font='宋体'][size=14px]0天[/size][/font][/td][td=2,1][font='宋体'][size=14px]4天[/size][/font][/td][td=2,1][font='宋体'][size=14px]7天[/size][/font][/td][td=2,1][font='宋体'][size=14px]11天[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]细菌总数（个/ml）[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]pH[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]细菌总数（个/ml）[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]pH[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]细菌总数（个/ml）[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]pH[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]细菌总数（个/ml）[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]pH[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]空白[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]4.9[/size][/font][font='宋体'][size=14px]×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]4[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.55[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]9.0×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]5[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.49[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]7.6×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]7[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.05[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.6×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]9[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]5.82[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]200[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.0×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]3[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.59[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]3.8×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]5[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.55[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]4.3×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]7[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.21[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.4×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]8[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.09[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]300[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.4×102[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.63[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.4×105[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.59[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.1×106[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.37[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]8.6×107[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.39[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]400[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]4.8×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]2[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.67[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.8×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]5[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.60[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.5×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]3[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.58[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.5×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]5[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.46[/size][/font][/td][/tr][/table][align=center][font='宋体'][size=14px]表3[/size][/font][font='宋体'][size=14px].2[/size][/font][font='宋体'][size=14px] 不同浓度Nisin添加量对巴氏杀菌乳在贮存期间细菌总数的影响[/size][/font][/align][table][tr][td=1,2][font='宋体'][size=14px]Nisin添加量（mg/kg）[/size][/font][/td][td=8,1][font='宋体'][size=14px]细菌总数（个/ml）[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]1天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]3天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]5天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]7天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]9天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]11天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]13天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]15天[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]0[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]7.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]3.9×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.8×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]7.7×10[/size][/font][/td][td][/td][td][/td][td][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]100[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.7×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.5×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]4.2×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]5.5×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]3.3×10[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]200[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]8.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.2×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.3×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.5×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]9.2×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.3×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.6×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.3×10[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]300[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]7.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.6×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.7×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.1×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.1×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.7×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.1×10[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]400[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]5.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.6×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]8.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.9×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.6×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.5×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]4.2×10[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]500[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]3.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]9.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.4×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]8.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.7×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]4.6×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.5×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]3.7×10[/size][/font][/td][/tr][/table][align=left][/align][font='times new roman'][size=16px]3.2 Nisin在肉制品中的应用[/size][/font][align=left][font='times new roman'][size=16px]3.2.1牛肉冷却肉保鲜[/size][/font][/align]将鲜牛肉在2℃条件下经24h预冷，用不同浓 度的Nisin溶液浸渍30s，沥干，真空包装。80℃热水浸渍25s，4℃下贮藏、观察。结果发现，在牛肉冷却肉保鲜中，Nisin有显著的抑菌作用,细菌总数明显降低，且保鲜效果随Nisin浓度增加而增强,其有效保鲜浓度为0.075g/kg，且与乳酸钠之间存在协同作用,而与山梨酸钾发生拮抗作用。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.2.2在香肠中的应用[/size][/font][/align]亚硝酸盐是常用的肉制品发色剂，能够有效地抑制肉毒杆菌的生长和繁殖，但含亚硝酸盐的食物有致癌的危险，故世界各地对其用量都有严格的限制、并有禁止使用的趋势。添加Nisin到香肠中可降低亚硝酸盐的用量，又能有效地延长香肠的保质期[font='times new roman'][size=16px][8][/size][/font]。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.2.3在西式切片火腿中的应用[/size][/font][/align]火腿切片，先熟化后再切片包装。为防止二次污染,研究人员在切片中添加Nisin研究在无菌化包装条件下,延长火腿切片的保质期。试验结果可以看出，对照组不加Nisin,仅加发色剂亚硝酸盐0.016g/ e,在4℃下贮存，保质期为14天，试验组单独添加0.042 g/kg Nisin，并将亚硝酸盐用量减少一半，保质期为28天，比对照组提高1倍。另一试验组，添加0.042 g/kg Nisin和 20glkg乳酸钠，再加亚硝酸盐0.008g/kg，4 ℃ 下贮存，保质期则延长到70天，较好地解决了西式火腿切片保质期短的问题[font='times new roman'][size=16px][8][/size][/font]。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.2.4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在即食腊肉制品中的应用[/size][/font][/align][align=left]即食腊肉含水量较高，要保持其独特的耐嚼感，杀菌强度就不能过高。添加Nisin能很好地解决这一问题，Nisin能增加一些细菌对热的敏感性，且在小范围内也有辅助杀菌作用，可降低灭菌温度、缩短灭菌时间，同时能保持很好的色泽和风味。3.2.5在扒鸡中的应用[/align]扒鸡又名五香脱骨鸡，有近百年的历史，是山东的特色名吃，因肉质软烂，骨肉可以分离而得名。软包装扒鸡，是选健康童子鸡为原料，宰杀后经蜜水浇灌，素油烹炸，再以豆蔻、砂仁、丁香等10多种名贵中药调味增香、精工扒制而成，但与手工制作的散装扒鸡比较，有肉质过于软烂， 咀嚼性差等缺陷，为提高软包装扒鸡的质量，在扒鸡加工过程中添加Nisin，以降低其灭菌强度，改善扒鸡的食用品质。除杀菌温度由121℃降为105℃外，其它工艺条件不变，保质期可以达到半年以上，且口感也得到改善。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.2.6[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在泡凤爪制品中的应用[/size][/font][/align][align=left]泡凤爪属于动物性泡菜，是将发酵工艺成功用于肉制品生产的新食品。虽然其生产历史较短，由于其独特的风味，低脂高蛋白质，胶原蛋白含量丰富， 口感细腻，深受广大消费者的喜爱。但由于水份活性高，胶原蛋白含量丰富，限制了其进行热力杀菌，因此极易腐败添加30g/100kg的Nisin对泡凤爪的贮存、保鲜具有较好、较显著的作用。3.2.7在烤肉中的应用[/align]烤肉常采用优质黄牛后腿肉，经过若干工序制作而成的低温肉制品。产品表层粘有辣椒或咖喱粉，外表干爽，口感鲜嫩，风味独特，深受消费者喜爱。由于未经高温灭菌，因此在常温下不能长期保存。加入Nisin后能有效地抑制细菌生长繁殖，28℃下产品保质期从4～5天延长到了20天。[font='times new roman'][size=16px]3.3 Nisin在罐藏食品中的应用[/size][/font][align=left][font='times new roman'][size=16px]3.3.1在罐头食品中的应用[/size][/font][/align]罐头食品中经常污染一些极为耐热的细菌芽孢，如嗜热脂肪芽孢杆菌和热解糖梭菌的芽孢，一旦条件适宜，它们就会生长，引起产气、产酸腐败. 0.1g/kg的乳酸链球菌素添加于罐头食品中，可以使罐头食品在炎热的条件下保存2年。并能减少热处理强度1/2 ，节省能源，使罐头食品保持良好营养价值、外观、风味、色泽，保持产品品质、延长食品保质期，其效果优于山梨酸钾。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.3.2在低盐酱菜中的应用[/size][/font][/align]传统酱菜的制作主要是利用高浓度盐的高渗作用，起到防腐保鲜的作用，但是我国居民膳食指南提倡每人每日食盐摄入量应该少于6g,而对于高血压患者,每天的食盐摄人量应该在4g左右，因此，我国酱菜的研究方向应该朝着低盐的方向发展，但是盐浓度过低，微生物会大量繁殖，致使食品的货架期变短，而且Nisin的半数致死量与食盐相同，所以使用天然防腐剂Nisin成为酱菜行业中的选择。易建华等[font='times new roman'][size=16px][9][/size][/font]采用乳酸链球菌素、纳他霉素进行酱菜的保藏实验研究，单一使用二者时，300g/kg乳酸链球菌素和150 mg/kg纳他霉素效果最好，最优复合配方为300 g/kg乳酸链球菌素+150 mg/kg纳他销素；乳酸链球菌素与纳他霉素复合防腐剂对酱菜总酸度影响较小，同时,在保藏3个月内，乳酸链球菌素与纳他霉素复合防腐剂可以改善酱菜的感官品质。[font='times new roman'][size=16px]3.4 Nisin在啤酒酿造中的应用[/size][/font]由于乳酸链球菌素不能抑制酵母菌，因而可用于啤酒、果酒及其它酒类产品来防止乳酸菌引起的腐败。洗涤酵母：乳酸链球菌素可代替传统的酸洗法清除酵母菌中污染的乳酸菌，保持酵母原有的生命力、发酵力和凝聚力。添加1g/kg—1.5g/kg的乳酸链球菌素于酵母浆中混合均匀后放置4-6小时即可。减少巴氏灭菌时间：在巴氏灭菌后，加入0.01g/kg—0.05g/kg乳酸链球菌素到成品中。抑制细菌：发酵前加入0.025g/kg—0.1g/kg的乳酸链球菌素，成品酒中残留0.01g/kg—0.05g/kg即可。在葡萄酒的主发酵和后发酵中，加入0.1g/kg的乳酸链球菌素，可防止发酵过程中短乳杆菌、葡萄明串珠菌、干酪乳杆菌引起的污染。[font='times new roman'][size=16px]3.5 Nisin在焙烤食品中的应用[/size][/font]在发面烤饼、甜面包和煎饼等中添加Nisin，对引起产品腐败的耐热蜡状芽孢杆菌有很强的抑制作用，可延长制品的保质期。添加0.2g/Kg的乳酸链球菌素于产品中即可达到抑菌要求。[font='times new roman'][size=16px]3.6 Nisin在果汁饮料中的应用[/size][/font]酸土芽孢杆菌（Alicyclobacillus acidoterrestris）是一种耐酸且耐热的产孢子 菌，最适于在25~60℃ ，pH为5.0~6.0的环境下生长、繁殖、据资料报道,在果园、森林土壤以及生产饮料用水中均有酸土芽孢杆菌的生长。因此，酸土芽孢杆菌很容易被带人果汁及果汁类饮料的生产加工过程中,引起果汁及果汁类产品的酸败，如美、英、德 等国，都曾报道过由于该菌的污染而引起果汁类产品酸败的质量事故。为防止果汁饮料的酸败, Komitopoulou 等人试验了Nisin对市售纯果汁中酸土芽孢杆菌孢子的抑制作用，结果显示：在25℃ 温度下贮存的苹果汁、桔子汁和葡萄柚汁中, Nisin的添加量仪需5 IU/mL,即可抑制酸土芽孢杆菌孢子的生长。在44℃温度下贮存的纯果汁,只有葡萄柚汁有相同的抑菌效果，而桔子汁和苹果 汁中，酸土芽孢杆菌孢子对Nisin的敏感性降低了，在Nisin添加量为100 1U/mL的试样中，酸土芽孢杆菌才被完全抑制。显然, 在不同果汁中, Nisin的最低抑菌浓度是不相同的，这可能与果汁自身pH值的不同有关。Nisin有较高的热稳定性,因此,对果汁及果汁类产品在巴氏灭菌前添加适量的 Nisin，不仅可以降低热加工强度,提高Nisin 的残留量，而且，可以阻止存活的酸士芽孢杆菌孢子的生长,防止果汁及果汁类产品的酸败[font='times new roman'][size=16px][10][/size][/font]。[font='times new roman'][size=16px]3.7 Nisin在方便食品中的应用[/size][/font]方便食品中存在的主要问题是菌落总数，大肠菌群超标等，本品能有效防止微生物的生长，提高产品品质，延长产品保持期。添加少量的Nisin于色拉酱、冷盘、面点和汤类等方便食品中,能有效抑制酵母菌、细菌的生长繁 殖,效果可以和山梨酸盐等化学防腐剂媲美,且能使 盐浓度下降为7%～9%。在小包装休闲方便面中，如鸡腿、鸡爪、肉干等禽肉制品中可正常使用，蔬菜类的方便食品，如低盐榨菜、金瓜丝等也都在生产中正常使用。[font='times new roman'][size=16px]3.8[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] Nisin[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在热处理密封包装食品中的应用[/size][/font]许多经热处理密闭包装的食品，在加工过程中，高强度的杀菌会影响食品的品质，而低温热处理又不能杀灭耐热孢子，达不到保质的要求。如在该类食品中添加0.05g/kg— 0.2g/kg 的乳酸链球菌素，就可以解决上述问题。[font='times new roman'][size=16px]3.9 Nisin在植物蛋白食品中的应用[/size][/font]在豆奶、花生牛奶等中添加乳酸链球菌素0.1g/kg—0.15g/kg，保质期延长3倍以上。 内酯豆腐中添加 0.1g/kg 的乳酸链球菌素，能使保质期延长5倍以上。豆干中添加0.1g/kg的乳酸链球菌素、复合少量其它防腐剂，经合适的灭菌，保质期可达6个月。盒装内酯豆腐，在炎热的夏季，保质期不到12h。超过12 h，产品就会脱水、变酸、变质。添加Nisin，保质期可以延长到24 h。 1 d的保质期，安全可以满足这种即食产品在市场上流通的需要。如对保质期还有更高的要求，根据北京农大王绍林老师的研究，添加Nisin再配合微波杀菌，在室温18℃下，保质期可以达到3d[font='times new roman'][size=16px][5][/size][/font]。[font='times new roman'][size=16px]3.10 Nisin在鱼贝类等海产制品中的应用[/size][/font]鱼、鲜虾等海鲜制品以其美味及高营养价值深受人们喜爱，且多冷食，因易腐败变质，易遭受李斯特菌和E-肉毒杆菌的污染，对人体造成危害。控制半成品、成品中的细菌数就显得十分重要。添加100 mg/L-150 mg/L Nisin可抑制李斯特菌，延长保存期和新鲜度，使用方法与肉制品相同。以生虾肉为主料，加工的虾肉糜，一般只有2d的保质期，加入Nisin后可使保质期达到60~70天。[font='times new roman'][size=16px]3.11 Nisin 在酱类制品中的应用[/size][/font]添加Nisin于沙拉酱和调味用酱汁中,可有效抑制乳酸菌和孢子的生长,使低脂低盐产品的腐败性降低,可延长保存期达4倍之多，建议使用量为50 mg/L200 mgl[font='times new roman'][size=16px][5][/size][/font]。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.12 其他[/size][/font][/align]有用Nisin和纳他霉素复合，代替化学防腐剂用于高档酿造酱油以供出口。也有在酱制品如辣椒酱中使用取得成功。除食品行业以外,有用Nisin代替化学防腐剂应用于化妆品的制造。0.05g/kg—0.1g/kg 乳酸链球菌素添加到蛋制品中，可有效抑制引起产品腐败的耐热性孢子，将原来保存期 7 天的蛋制品的保质期延长到1个月以上。0.05g/kg—0.2g/kg 的乳酸链球菌素加入到沙拉酱等中，可有效抑制乳酸菌和孢子的生长，使低脂低盐产品的腐败性降低，延长保存期 3 倍以上。在香基香料加工中，Nisin可降低灭菌温度，减少灭菌时间，能有效杀死或抑制产品中各种有害微生物，如对细菌、大肠杆菌、革兰氏阴性菌、李斯特氏菌等都有较强的抑制作用，延长产品保质期，提高产品品质。 在膏状香精中添加0.2g/Kg的乳酸链球菌素、0.1g/Kg的纳他霉素和山梨酸钾可抑制其中的各种有害微生物的生长。[align=center][font='times new roman'][size=16px]第4章 结论[/size][/font][/align]综上，乳酸链球菌素作为一种新型天然对人体无毒害的食品防腐剂，应用前景十分广阔，它是一种天然、高效、安全的天然食品添加剂，符合未来食品防腐剂的要求，它能有效地抑制引起食品腐败的革兰氏阳性菌，特别对耐热芽孢杆菌、肉毒梭菌及李斯特氏菌有强烈的抑制作用，可降低食品灭菌温度、缩短灭菌时间、改善食品风味、外观和提高食品营养价值、延长保藏时间，符合国家农业行业标准NY/392-2000绿色食品食品添加剂使用准则。天然食品防腐剂取代化学合成防腐剂是一种必然趋势，乳酸链球菌素的开发和利用将对促进我国绿色食品的发展和保障人民身体健康具有重要的意义。[align=center][/align][align=center][font='times new roman'][size=16px]参考文献[/size][/font][/align][align=left][size=13px][1]田文利,吴琼,吕红线,王锦.乳酸链球菌素(Nisin)的研究进展[J].食品工业,2000:26-28.[/size][/align][align=left][size=13px][2]Allison G E and Fremaux C and Klaenhammer T R. Expansion of bacteriocin activity and h[/size][size=13px]ost range upon complementation of two peptides encoded within the lactacin F operon.[J]. Journal of bacteriology, 1994, 176(8) : 2235-41.[/size][/align][align=left][size=13px][3]郭本恒. Nisin的物理化学性质[J]. 农牧产品开发, 2001(02):3-5.[/size][/align][align=left][size=13px][4]张红印, 吴祖兴, 张一鸣,等. 天然防腐剂及其在食品加工中的应用[J]. 冷饮与速冻食品工业, 2001, 007(003):20-21.[/size][/align][align=left][size=13px][5]孙来华,张志强.乳酸链球菌素的特性及其在食品中的应用[J].食品研究与开发,2008(10):119-123.[/size][/align][align=left][size=13px][6][/size][size=13px]Hurst A[/size][size=13px]. Nisin [[/size][size=13px]J[/size][size=13px]].Advanse in Applied Microb biology,1981.27:85-123.[/size][/align][align=left][size=13px][7]王广萍, 郝奎, 付忠梅. Nisin在乳和乳制品保藏中的应用[J]. 中国乳业, 2006, 000(004):39-42.[/size][/align][align=left][size=13px][8]赵剑飞. Nisin的性能及在肉制品中的应用[C]// 中国肉类科技大会. 中国畜产品加工研究会, 2005.[/size][/align][align=left][size=13px][9][/size][size=13px]刘筠筠，杨嘉玮. 美国食品添加剂的安全监管及其启示[/size][size=13px][J].[/size][size=13px] 食品安全质量检测学报，2014，5[/size][size=13px](1):154-159.[/size][/align][align=left][size=13px][10]夏云梯, 潘利华, 等. 乳酸链球菌素在食品工业中的应用(三)[J]. 中国食品添加剂, 2000, 000(004):63-65.[/size][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align]

前 言本标准代替GB/T4789.11－2003《食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验》。本标准与GB/T4789.11－2003相比主要变化如下：—— 删除了以无菌生理盐水稀释样品的步骤；—— 增菌培养基以改良胰蛋白胨大豆肉汤代替了葡萄糖肉浸液肉汤和匹克氏肉汤；—— 分离培养基以哥伦比亚CNA血琼脂和哥伦比亚血琼脂代替了血琼脂平板；—— 完善了操作步骤；—— 在人血浆的基础上增加了兔血浆和绵羊血浆；—— 增加了规范性附录A。本标准的附录A为规范性附录。本标准所代替的历次版本发布情况为：—— GB4789.11－1984、GB/T4789.11－1994、GB/T4789.11－2003。食品安全国家标准食品微生物学检验 溶血性链球菌检验范围本标准规定了食品中溶血性链球菌（Streptococcushemolyticus）的检验方法。本标准适用于食品中β型溶血性链球菌的检验。2 术语与定义β型溶血：在菌落周围形成完全透明的溶血环，红细胞完全溶解。3 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1 恒温培养箱： 36 ℃±1℃。3.2 冰箱：2 ℃～5℃。3.3 厌氧培养装置。3.4 天平：感量0.1 g。3.5 均质器。3.6 显微镜：10×～100×。3.7 无菌吸管：1 mL（具0.01mL刻度）、10 mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。3.8 无菌锥形瓶：容量100mL、200 mL、2000 mL。3.9 无菌培养皿：直径90mm。3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。3.11 水浴装置: 36 ℃±1 ℃。3.12 离心机：离心速度≥20000×g。

KF链球菌琼脂培养基[img]http://img.foodmate.net/bbs/static/image/smiley/default/cry.gif[/img] 称取本品71.5g加入蒸馏水或去离子水1L,搅拌加热煮沸溶解,勿高压灭菌,冷至50度左右,倾注无菌培养皿.那么请教各位大侠那这个培养基如何灭菌,是否可以直接将过滤好的滤膜放入培养基中培养.

这儿有俩问题请教下有没大佬知道嗜肺军团菌采样用的里面滴一滴矿物油 这个矿物油用哪种的。找来找去都是那种杀菌的矿物油。第二个问题就是 GB4789.11-2014 β-溶血性链球菌这个方法只单单说需要生化试剂盒。不过好像市面上没有对应的生化试剂，这个有解决办法吗？希望微生物大牛帮忙解答下。感恩

实验室用于培养嗜热链球菌的脱脂奶粉培养基，可以直接从超市买任意品牌的脱脂奶粉然后加蒸馏水配制吗？还是必须要购买专用的脱脂奶粉？

婴幼儿奶粉中添加嗜热链球菌及双歧杆菌现在有没有什么法律规定依据？还是不能加？

GB-T 18203-2000 室内空气中溶血性链球菌卫生标准 .rar

如果大家做到一个样品（保健食品），菌落总数，霉菌酵母菌，大肠菌群都未检出，是否还需要检测致病菌（沙门氏菌，乙型溶血性链球菌，志贺氏菌，金黄色葡萄球菌），有没有什么相关的国标或者标准说明是否需要检测，非常感谢！

随着微生态学理论研究的不断深入.微生态制剂（或称微生态调节剂microeclogialmodulator）也随之迅速地发展起来.从本世纪初梅切尼科夫（Eliemetchnikoff）在欧洲提倡饮用酸牛奶可健康长寿以来,微生态制剂亦从此而风行于世界各地.70年代德国Volkorrusch在赫尔本建立了微生态学研究所,并从事对双歧杆菌、乳杆菌、大肠杆菌等活菌作生态疗法的研究与应用.日本微生态制剂发展较快.80年代初已有26种微生态制品用于医疗和保健.其他各国亦多种微生态制品投放市场,而且数量和品种亦在不断扩大.我国最早使用微生态制剂乳酶生（表飞鸣）来治疗肠道疾患.80年代初大连医科大学康白教授首先研制成功促菌生（蜡杆芽胞杆菌）以来,事后各种活菌微生态制剂相继研制成功.并陆续投放市场,这些微生态制剂一问世,便受到了人们的普遍关注和欢迎,并以惊人的速度、良好的效果被更多人群所接受.其主要原因是因为该制剂能纠正微生态失调,调节人体微生态平衡,起到有病辅治、未病防病、无病保健的主要作用.1、微生态制剂的定义和类型 微生态制剂是在微生态学理论的指导下,调整生态失调（microdysbiosis）保持微生态平衡（microeubiosis）,提高宿主（人、动植物）健康水平或增进健康佳态（wellbeing）的生理性活菌制品（微生物）及其代谢产物以及促进这些生理菌群生长繁殖的物质制品.目前国际上已将其分成3个类型,即益生菌（Probiotics）、益生元（Prebiotics）和合生素（Synbiotics）. 益生菌（Probiotics）又称益生素,是指投入后通过改善宿主肠道菌群生态平衡而发挥有益作用,达到提高宿主（人和动物）健康水平和健康佳态的活菌制剂及其代谢产物.近年来,国内外研制出多种益生菌活菌制剂,其基本指导思想是用人或动物正常生理菌群（normalmicrobiota）的成员,经过选种和人工繁殖,通过各种途径和剂型制成活菌制剂,然后再以投入方式使其回到原来环境,发挥自然的生理作用.目前应用于人体的益生菌有双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、大肠杆菌、枯草杆菌、蜡样芽肠杆菌、地衣芽胞杆菌、丁酸梭菌和酵母菌等. 益生元（Prebiotics）是指能够选择性地促进宿主肠道内原有的一种或几种有益细菌（益生菌）生长繁殖的物质,通过有益菌的繁殖增多,抑制有害细菌生长,从而达到调整肠道菌群,促进机体健康的目的.这类物质最早发现的是双歧因子（bifidusfactor）.如各种寡糖类物质（oligosaccharides）或称低聚糖.常见的有乳果糖（lactulose）、蔗糖低聚糖（oligosucrose）棉子低聚糖（oligofaffinose）、异麦芽低聚糖（oligomaltose）、玉米低聚糖（cornoligossacharides）和大豆低聚糖（soybeanoligosaccha-rides）等.这些糖类既不被人体消化系统消化和吸收,亦不被肠道菌群分解和利用,只能为肠道有益菌群如双歧杆菌和乳杆菌利用,促进有益菌的生长繁殖,抑制有害菌的生长,从而达到调整肠道正常菌群的目的.其它尚有一些有机酸及其盐类,如葡萄糖酸和葡萄糖酸钙以及我国的某些中草药类,如人参、党参、黄芪等或茶叶提取物亦能起到益生元的作用. 合生素（Synbiotics）是指益生菌和益生元同时并存的制剂.此类制品是以益生菌和益生元同时并用,服用后到达肠腔可使进入的益生菌在益生元的作用下,再行繁殖增多,使之更有利于发挥抗病、保健的有益作用.此类制剂已经在我国面市,并有逐渐增多的趋势,其中“希尔春多元养生素”是个典型的代表.

QWAS是通过UKAS认证，由LGC（承担英国计量院职能）开发的能力验证计划，对各类水、水环境进行微生物分析。QWAS的年度计划从当年1月到12月，具体测试轮，每轮包含的测试项，测试样品，样品派发日期及测试截止日期参见当年年度申请表。一般来说每年会有10轮测试（每年发放样品10次），目前总共有13个检测项（不同测试样品和测试项目）可供选择：测试材料检测项目饮用水计数：产气荚膜梭状芽孢杆菌，大肠菌群，肠球菌（粪链球菌），大肠埃希氏菌 绿脓杆菌，还原亚硫酸盐梭状芽孢杆菌，还原亚硫酸盐梭状芽孢杆菌孢子 22°C和37°C.菌落总数定性：大肠菌群，肠球菌（粪链球菌），大肠埃希氏菌，军团菌， 还原亚硫酸盐梭状芽孢杆菌工艺水计数：假单胞菌属 菌落总数，酵母菌，霉菌，酵母和霉菌污泥废水计数：大肠杆菌。定性：沙门氏菌环境水体计数：军团菌洗澡水，地表水，废水计数：粪大肠菌群，大肠埃希氏菌，肠球菌（粪链球菌），总大肠菌群。定性：沙门氏菌洗澡水，娱乐水（例如景观水），地表水计数：凝固酶阳性葡萄球菌矿泉水计数： 肠球菌（粪链球菌） 大肠埃希氏菌，铜绿假单胞菌，22°C菌落总数，37°C菌落总数。定性： 凝固酶阳性葡萄球菌，还原亚硫酸盐梭状芽孢杆菌，还原亚硫酸盐梭状芽孢杆菌孢子海水计数： 粪大肠菌群，肠球菌 粪链球菌，大肠杆菌，总大肠菌群定性： 沙门氏菌