生物核酸定量检测

2022年新冠疫情来势汹汹，做核酸成为许多人的日常，核酸检测实验也成为许多生物实验人的日常。核酸检测实验过程复杂，病毒灭活是非常重要的一步，其中，水浴锅作为常见的恒温仪器，在病毒灭活中发挥着重要作用。[img=,630,]https://pic1.zhimg.com/80/v2-e8a3063325978b82ec93ba0bb143a178_720w.jpg[/img][b][i]一、哪个实验步骤能用到水浴锅？[/i][/b]核酸检测过程复杂，包括信息录入、核酸提取、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增[/color][/url]、结果分析等环节。核酸样本收集之后，首先要做的就是将样本中的病毒进行灭活，灭活之后才能开启信息录入、核酸提取等一系列的环节。经研究人员测试发现，新冠病毒对紫外线和热敏感，只需高温就可以把新型冠状病毒灭活。目前，国家卫健委相关指南就要求，在提取样本核酸前需将样本置于56℃以上以灭活病毒。因此，将病毒样品放入56℃的恒温水槽或是水浴锅中，高温消毒30分钟以上，成为新冠病毒灭活的常用方法。[img=,623,]https://pic2.zhimg.com/80/v2-5cb88675f34cdc6a354f242c10bb2679_720w.jpg[/img][b][i]二、力辰水浴锅的优势有哪些？[/i][/b]疫情反复突增，核酸检测任务量大且紧急，缩短实验时间，提升检测效率成为各生物实验室的亟需解决的痛点之一。力辰数显恒温水浴锅，控温精准、升温迅速、性能稳定，可以有效缩短预热时间，精准控制加热温度，适用于实验室[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]核酸检测的病毒灭菌环节。[img=,625,]https://pic1.zhimg.com/80/v2-4746ea8d3c01f1bf78f7097bd45b94a0_720w.jpg[/img][b]1、微电脑控温仪表、PT100温度传感器，控温准确[/b]力辰数显恒温水浴锅采用抗振动、稳定性好、准确度高、耐高压的PT100温度传感器，同时使用数显控温仪表，按键控制，能做到准确控温。从控温精度来看，力辰水浴锅的温度范围在室温+5℃-100℃之间，控温精度≤±1℃，部分机型可做到≤±0.5℃的控温精度，充分满足用户精准控温需求。[img=,588,]https://pic4.zhimg.com/80/v2-fa2d2ed62ded9533223366a99f5c7ccb_720w.jpg[/img][b]2、大功率变压器，升温快、受热均匀[/b]机身内部设有大功率变压配套电路板，可控硅控制，配套不锈钢加热管，升温速度快。容积3-38L的水浴锅，由室温升至沸点（100℃）均小于70分钟。同时部分型号配备磁力搅拌功能，边加热边搅拌，使受热更均匀，能有效缩短实验时间，提升实验效率。[img=,602,]https://pic2.zhimg.com/80/v2-e2358e4366ba4e4495eb331b077ec195_720w.jpg[/img][b]3、可拆卸式锅盖，适配多种规格容器、保温性能高[/b]锅盖采用可拆卸式，能适配多种规格容器，保温性能好，有效保证温度精准性，确保样本处在稳定的恒温环境中；同时采用耐高温塑料，使用寿命长，节约实验室成本。[img=,619,]https://pic2.zhimg.com/80/v2-4e01da7de94c634a57134b428b0e845d_720w.jpg[/img][b]4、冷轧钢外壳、304不锈钢内胆，耐腐蚀性强、易清洗[/b]外壳采用冷轧钢，防生锈、防静电；内胆使用优质304不锈钢，一次性冲压成型，耐腐蚀，易清理消毒，杜绝病毒的残留。[img=,616,]https://pic3.zhimg.com/80/v2-d1b917968d59035122412f8b341f8162_720w.jpg[/img]在生物和制药行业，水浴锅是必备的实验仪器。核酸检测、疫苗研制等需要灭活病毒的实验，其他需要培养微生物的实验等等，都需要水浴锅提供恒温环境；除此之外，水浴锅可以结合旋转蒸发器、真空冷冻干燥箱等仪器，进行多功能化学反应作业及药物储存，用途十分广泛。【参考文献】张沁欣,赵庆顺.(2020).病毒核酸提取前的高温灭活过程显著降低可检出病毒核酸模板量.[ChinaXiv:202002.00034]

这次疫情严重，我们几乎是24小时做一次核酸，检测压力一定非常大，作为分析人深知核酸检测以为什么，如果有需要自己也想加入到检测人员中，做好筛查工作，愿疫情早日结束。

6月9日，国务院联防联控机制召开新闻发布会，介绍做好核酸检测工作有关情况。会上，北京市卫健委副主任李昂介绍，北京市始终把核酸检测质量安全放在首位，部门联动、多措并举，加强对核酸检测机构的监管。一是把好准入关。市区两级卫生健康部门严格按照相关标准对核酸检测机构进行准入管理，对于属地的卫生健康部门初审合格的检测机构，市级均要组织生物安全检验质控的专家进行现场验收，验收合格以后才准予开展核酸检测。二是加强常态化质控管理。市医学检验质控中心联合市临床检验中心，每月组织面向全市所有核酸检测机构的室间质量评价工作，发放盲样进行考核，考核不合格的需停止开展检测工作，整改合格以后才可以进行复检。三是建立第三方评价机制。根据国家相关工作的要求，建立了第三方核酸检测机构月审核制度，由各区组织专家，每月对辖区全部第三方实验室在依法执业、核酸检测质量等方面的情况进行审核，对核酸检测的机构名单进行公示。同时，通过组织飞行检查、质量抽查等形式，加强机构质量管理，综合运用多种监管方式，严把核酸检测质量关，保障人民群众的健康安全。国务院联防联控机制综合组北京工作组还组织了专家力量，编制了实验室检查操作细目表，用于日常监督检查工作。来源：北京日报

2024年3月12日，上海小海龟科技与苏州先达基因在上海签署全面战略合作协议，共同推进数字ERA技术的商业化应用。目前，小海龟科技和先达基因联合开发的数字ERA技术和产品已经可以在25 min内实现核酸的精准定量检测。此次签约，将全面推进双方在数字ERA技术和产品推广上的深入合作，双方将进一步联合攻关多重和超多重的Digital ERA扩增检测技术，为更多生命科学和前沿分子诊断产品开发人员带来新的技术和产品服务；同时，双方也将基于生命科学领域的AI助手-Biobuddy系统的应用展开深入的合作，以创新的方式共同加速推动数字ERA的普及，支持全球生命科学领域创新研究。[align=center][img=图片]https://img1.17img.cn/17img/images/202403/uepic/3a6496f7-5a1d-4f6e-be41-ef7464b5e24e.jpg[/img][/align][b]先达基因[/b]苏州先达基因科技有限公司，致力于研究开发分子诊断POCT化产品与提供现场快速一体化解决方案。公司拥有全球自主知识产权酶促恒温扩增技术（ERA技术）；基于此平台开发了多系列的核酸诊断试剂及其配套的便携式检测设备；产品涵盖公共卫生快速检测、体外分子诊断、POCT诊断试剂盒等领域，全力打造10-25分钟病原体快检项目。目前，先达基因已与国内外近千家高校院所及企业建立业务合作。截至2023年11月，累计申请专利40余项，11项专利获得授权，3项核心专利申请全球PCT。[b]小海龟科技[/b]上海小海龟科技有限公司，致力于引领生命科学与分子诊断进入数字时代，先后获批国家基因检测技术应用示范中心及国家首张数字 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]计量评价证书，已推出多款数字[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] 系统，并在全球率先推出可商用化的数字等温系统；实现了从基因检测仪器、芯片耗材、超多重试剂盒技术及超高特异性分子诊断酶的全链条技术创新。申请知识产权 70 余项，共获得近 50 项专利授权，其中发明专利20 余项。[url=https://www.instrument.com.cn/news/20240314/708830.shtml][color=#0070c0][b]21台生命科学仪器和1台医学仪器荣获“3i奖-科学仪器优秀新品奖”2023年度“提名”名单[/b][/color][/url][align=center][url=https://www.instrument.com.cn/news/topic-496.html][img=d820de71b1668ec0b2cc891dee3887db_7cf65bd5-818a-48c5-b8c6-9201968442c3.jpg]https://img1.17img.cn/17img/images/202403/uepic/a95a0306-1f2a-4a5a-8cf0-509106b9abaa.jpg[/img][/url][/align][来源：仪器信息网] 未经授权不得转载[align=right][/align]

随着常规分子生物学研究的深入，越来越多的生物实验室日常需要测量的核酸、蛋白样品量也在不断地加大。传统的分光光度计虽然已经非常普及，但由于需要在测量后清洗比色杯，实际上消耗了不少宝贵的研究时间。同时，由于核酸样品的体积较小，即使使用昂贵的微量石英比色杯（容积数十ul左右），也往往需要对原始样品进行稀释，从而带来可能的操作偏差。对于一些稀有的样品来说，稀释即意味着测量后无法回收，同样也会对后续研究带来更高成本。因此，无需比色杯，仅需数ul即可测定样品浓度的超微量分光光度计现在受到很多实验室的关注和欢迎。NanoVue是GE Healthcare公司于2008年最新推出超微量分光光度计。GE Healthcare公司的分光光度计品牌Ultrospec和GeneQuant在市场上已经有了十多年的历史，在用户中有着很好的信誉和口碑。NanoVue在该系列仪器的基础上延续了出众的检测性能，同时大大改进了检测的光路设计，通过专利的检测技术使检测样品的体积最小仅需0.5ul， 190-1100nm的宽范围连续波长设计较市场上同类仪器宽了一倍左右，使得能够轻松检测核酸、蛋白样品和Cydye荧光染料标记物的浓度。仪器内置了RNA、DNA 和寡核苷酸浓度和纯度测定方法；寡核苷酸转换因子，分子量，理论Tm计算功能；包括一般紫外、Bradford、 Biuret、BCA、Lowry的蛋白定量法；以及波长扫描，动力学，标准曲线，多波长测定等扩展功能。除了强大的检测性能外，NanoVue还在许多操作性能上进行了精心的设计，能够给用户带来众多全新的体验，主要包括以下方面：1 唯一不需电脑就能在仪器面板上直接检测的超微量分光光度计。仪器配置了一块大面积高分辨率的背光液晶屏和操作面板。相对于点样后转去电脑控制，再回去仪器清洁的过程，NanoVue不仅节省了购买电脑的支出，同时点样，按键测量，擦拭一气呵成。可以通过整合的打印机直接打印分析数据。当然，如果需要在电脑上保存分析数据，NanoVue同样支持USB或蓝牙连接电脑，将珍贵的实验数据永久记录下来。2 通过特别设计的疏水点样表面，能够很容易回收稀有的样品，并且有效避免多个测量间的样品交叉污染，提高测量的准确性。NanoVue的点样表面具有专利设计，表面坚固而且光滑。不管是样品回收还是测量完直接擦去都非常简易，不会有任何样品粘附残留在点样面上。而且点样面耐用性也非常出众，保守估计可以至少测量20000个样品以上。3 最快的检测速度。NanoVue通过独特的光路设计，使得所有样品的检测都能够在5秒钟之内完成，把微量分光光度计的测量时间提升到了一个新的高度。而且NanoVue具备即开即用功能，避免了许多分光光度计开机需要预热的麻烦，真正做到省时省力。由此可见，NanoVue不仅性能出众，其易用性和灵活性也是目前超微量分光光度计中出类拔萃的。通过试用NanoVue的体验，使用者可以完全感受到，原来，核酸蛋白的测定可以这么简单，这么快速！目前，NanoVue已经正式在中国推出，欲了解更多的信息，请直接联系GE公司。

由于传播途径多样、影响范围广泛，症状发展迅速，传染病仍然是世界范围内引起人类大量死亡的重要原因。21世纪以来多次严重疫情给我们留下深刻印象：一是2003年的“非典”（SARS），二是2009年的甲型H1N1流感（人感染猪流感），再有就是现在席卷全球的新型冠状病毒肺炎疫情。因此，传染病的防控一直是医学科学工作者面临的巨大挑战。其中，对病原体进行快速准确的鉴定是传染病精准防控的基础。中国医学科学院病原生物学研究所彭俊平研员自2000年起即深耕于病原体检测技术方法及基因组学、耐药机制相关的研究工作。近日，仪器信息网特别采访了彭俊平研究员，与他就核酸质谱技术在病原体检测领域的应用现状及前景进行了深入交谈。[align=center][img=彭俊平个人.JPG,600,337]https://img1.17img.cn/17img/images/202204/uepic/3407a132-360a-4424-b8f8-73b9d8028642.jpg[/img][/align][align=center]中国医学科学院病原生物学研究所 彭俊平研究员[/align][color=#ff0000]“国内最早开展核酸质谱病原体检测研究的团队之一”[/color]随着各项科学技术的进步，病原体检测技术也在不断发展，由病原分离、电镜观察、免疫学检测等传统生物学方法发展到[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术、芯片技术、测序技术、质谱技术等分子生物学方法。“因为引起疾病的病原体种类繁多，单一的平台技术不能解决所有问题，所以，我们的主要工作是利用各种平台技术对病原体进行筛查。”彭俊平介绍到，“多年来我们课题组一直致力于搭建一个病原体组合筛查技术体系，这也是我国在传染病防控领域的一个重要工作。另外，我们利用多重[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]反应结合飞行时间质谱技术（以下简称：核酸质谱）在病原体检测领域开展了10多年的工作，这也是我们多年来的一个重点发展方向。”核酸质谱是什么？彭俊平为笔者解答到，核酸质谱其实是基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF）在核酸水平的应用，是一种将多重[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]反应与质谱结合的复合技术。此前，MALDI-TOF主要应用于蛋白质水平的微生物鉴定研究，应用发展不过30多年，而MALDI-TOF在核酸水平的相关应用则是近些年提出的概念，应用发展时间就更短。最初，MALDI-TOF在核酸研究领域开展的应用是SNP基因分型，其首先通过[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]扩增含有SNP的基因组片段，再通过检测核酸分子在真空管中的飞行时间而获得样品分析物的精确分子量，从而检测出SNP位点信息。因为MALDI-TOF本身的高灵敏度和高通量等特点，使其非常适合应用于SNP多位点的筛查。而MALDI-TOF在病原体检测领域的研究则鲜少有报道。彭俊平课题组是国内最早开展核酸质谱病原体检测研究的团队之一。“我们是在2009年引进的这个技术平台，正好是H1N1全球大流行的时候，当时核酸质谱的技术水平还不足以帮助我们开展相关工作，因此我们就开始自己开发方法。”核酸质谱病原体检测的原理是利用MALDI-TOF检测多重[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]反应的产物，即单碱基延伸的产物质量大小，来判定检测靶基因的有无，从而进一步判定样本中目标病原体的有无。与传统的病原体检测技术相比，核酸质谱在灵敏度、检测通量以及操作简便性等方面均有一定优势。此外，核酸质谱检测的核酸序列均来源于公共数据库，不需要依赖其他的数据库。[color=#ff0000] “开发了7种人冠状病毒的检测方法，成功申请专利”[/color]经过多年的技术摸索，彭俊平团队利用核酸质谱在病原体检测领域做出了很多成果。最近其团队开发了7种人冠状病毒的检测方法，并申请了发明专利。目前，已知可以感染人的冠状病毒共有7种，其中包括2003年的“非典”SARS冠状病毒、2012年在中东地区出现的MERS冠状病毒以及2019年12月爆发的严重性呼吸系统综合征冠状病毒SARS-Cov-2。彭俊平介绍到，课题组是从2012年开始开展人冠状病毒的检测技术研究，其中一部分工作内容就是利用核酸质谱进行检测应用。该部分成果是与岛津公司合作开发的，利用一步法多重反应[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]与MALDI-TOF质谱联用鉴定7种人冠状病毒与新型冠状病毒的重要突变位点。“本次合作中我们将多重[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]反应从两步法改进为一步法，既缩短了实验时间，又减少了人为操作的工作。而且我们改进的方法适用于所有的RNA病毒，可以说是摸索出了一种通用的解决方案。”彭俊平介绍到，“和岛津合作成果的应用价值很明确，我非常期待未来该方法的推广。接下来我们也将继续和岛津合作在MALDI-TOF平台上开发出更多病原体检测解决方案，并合力推动核酸质谱在临床领域的应用。”笔者追问到目前国际上核酸质谱在病原体检测领域的应用现状如何？彭俊平坦言道，国际上相关的成果并不多，而团队于2009年就开展了相关研究，可以说是走在了国际前列。不过，目前核酸质谱病原体检测的应用还以科研阶段为主，临床应用正处于拓展阶段。此外，彭俊平也谈到他认为核酸质谱走向临床所面临的瓶颈，一是MALDI-TOF本身的硬件设备比较贵；其次，基于MALDI-TOF平台提供给临床应用的成熟方法不多。因此，核酸质谱这样的技术平台想要真正推广到临床，首先需要提供“一揽子”的解决方案，这样应用场景就会被打开。不过，彭俊平也观察到，无论国内还是国外，越来越多的团队和厂商开始关注这一领域，相信核酸质谱的临床应用情况将在短短几年之内得到很大的改变。最后彭俊平表示，未来核酸质谱病原体检测值得重点关注的方向有呼吸道感染疾病、腹泻性疾病和性传播疾病等，其涉及的病原体种类繁多，是核酸质谱可以“大展身手”的方向。后记：采访中彭俊平反复提到“病原体的组合筛查技术体系”，他也为笔者解释到，为了获取更全面的生物信息，往往需要多种技术平台共同解决问题，而不是希望用一个技术平台去解决所有的问题。回到MALDI-TOF这一技术来说，总有人拿质谱与NGS测序相比较，其实它们的应用场景和目标都不一样，发展核酸质谱也并不是为了替代测序技术。事实上，核酸质谱只需要在中高通量的检测中建立并巩固其“王者地位”，在此基础上能够再提升灵敏度和分辨率等性能，就为自身的发展开辟了新天地。

所在社区需要做核酸检测了

[font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=18px]5月1日到6月30日，上海常态化核酸检测点实行免费核酸检测。[/size][/font]

核酸检测繁忙中[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/02/202202211755369538_6188_1642069_3.png[/img]

动物疫病荧光定量PCR检测方法的模块化构建及实践1 背景近几十年来，动物疫病的发生与发展越来越趋向频繁、复杂，造成的危害也不断加重。究其原因：一是动物数量大幅度增加，集约化程度不断提高。据《中国统计年鉴》：1990年底全国猪、羊存栏分别为5668万头、11362万头，2015年底则分别为45803万头、31174万头，分别增加7.08倍、1.74倍；二是动物调运频繁、距离不断延长。以前动物调运仅限省内或周边省市，现在动辄上千公里甚至数千公里。据报道：“从2013年底到2014年的上半年，我国新疆、甘肃、内蒙古、宁夏等省区接连爆发了较为严重的小反刍兽疫疫情，而后疫情逐渐扩展地全国20余个省份，造成了严重的经济、社会影响”（《中国畜牧业》2014年第21期《小反刍兽疫爆发对我国肉羊产业发展的影响》）。三是人畜共患病种类不断增加。2012年6月加拿大Haroling教授报告，目前人类已发现1000多种动物病原体，其中有600种存在于家畜之中，在这600种病原体中有40%的病原体为人畜共患病。从国内情况看，进入21世纪以来，禽流感（H5亚型、H7N9）、甲型H1N1流感、SARS、猪链球菌病2型、布氏杆菌病、结核、乙脑、狂犬病等人畜共患病不断发生。为确保公共卫生安全，以及畜牧业健康发展，有必要实施动物疫病的核酸监测，尽早发现疫情隐患并予以及时处置，避免重大动物疫情及公共卫生安全事件发生。2 常用试剂盒的缺点目前，动物疫病（主要指病毒病）核酸检测一般采用商品化荧光PCR试剂盒，多由双组分组成且独立保存，使用前按一定比例（一般PCR反应液与酶混合液体积比为9:1）混匀后用于检测。这种试剂盒存在几个缺点：一是只能用于某一特定的动物疫病检测，如果检测任务中途发生大幅度削减，则试剂盒只能作报废处理；二是试剂盒中有的组分容易缺斤少两，尤其是酶混合液更是如此。每个样品约需酶混合液1.2μL，一般10T试剂盒装量为15μL，50T试剂盒酶混合液装量为70[font=宋体-方正超大字符集][size=18px]μL[/size][/font]，按理说应该足够使用。但实际检测中会出现10T试剂盒酶混合液只能检测7T，50T试剂盒酶混合液只能检测40T，严重影响检测工作的正常开展。分析其原因，可能与容器密闭不严、酶混合液中的水分在冰冻状态升华等有关；三是试剂盒中的引物探针信息缺失。出于保护商业秘密考虑，几乎所有试剂盒均对引物探针的具体序列进行保密。作为第三方检测机构，在开展检测工作时，应优先使用标准方法，并确保使用标准的有效版本。在使用标准方法前，应进行证实。在使用非标准方法（含自制方法）前，应进行确认。但由于试剂盒厂家不提供引物探针序列，检测机构无法判定使用试剂盒开展的检测是否符合标准方法的要求。另外，商品化试剂盒一般免费附带核酸提取试剂，但提取试剂根据检测项目的不同，一般为DNA专用提取试剂或RNA专用提取试剂。当一批样品要检测多种DNA及RNA病毒项目时，需要同时进行两次核酸提取，不仅费时费力且浪费试剂。由于上述缺点的存在，给动物疫病检测带来了不少麻烦。3 模块化检测方法的构建思路针对商品化试剂盒存在的缺点，进行了模块化检测方法的构建。总体思路是：将动物疫病荧光定量PCR检测分为三个模块，核酸提取采用DNA/RNA共提试剂，核酸扩增采用预混液+引物探针方式，质控品利用抗原或商品化疫苗自制。具体思路如下：——核酸提取采用DNA/RNA共提试剂；——引物探针严格按照标准方法，委托生物工程公司合成；——反应体系中其他成分，采购商品化qPCR预混液或RT-qPCR预混液（含逆转录酶）；——质控品：阳性对照采用病毒抗原、商品化疫苗等，测定结果后按一定比例稀释，保存备用。——反应体系：一律固定为20μL，具体如下：[table][tr][td]DNA扩增[/td][td]RNA扩增[/td][/tr][tr][td=1,2]qPCR预混液（2×） 10μL[/td][td]RT-qPCR预混液（2×） 10μL[/td][/tr][tr][td]逆转录酶 1μL[/td][/tr][tr][td]ROX 0.4μL[/td][td]ROX 0.4μL[/td][/tr][tr][td]引物探针 适量[/td][td]引物探针 适量[/td][/tr][tr][td]水 补足18μL[/td][td]水 补足18μL[/td][/tr][tr][td]DNA模板 2μL[/td][td]RNA模板 2μL[/td][/tr][/table]——反应条件首先按照标准中的条件开展摸索，如达到预期效果则予以固定；如效果不佳则参照预混液及引物探针推荐条件进行适当调整。根据上述思路，一个实验室只需配备DNA/RNA共提试剂、qPCR预混液、RT-qPCR预混液共3种试剂，加上特定的引物探针，即可开展多种动物疫病的检测。此配置有以下优点：一是试剂通用性强。实验室只需配备DNA/RNA共提试剂、qPCR预混液（针对DNA病毒）、RT-qPCR预混液（针对RNA病毒）三种主要试剂，以及不同的引物探针，即可开展几种甚至几十种检测项目；二是灵活方便。根据动物疫病的发生发展，实验室可以随时调整检测项目和检测数量。以RT-qPCR预混液为例，不仅可以用于检测禽流感，也可以用于检测口蹄疫、猪瘟、蓝耳病等项目。实验室常备一定数量的预混液，当某个项目检测量突然增加时，可利用预混液的通用特性，迅速完成检测任务，尔后再采购预混液进行补充。当某个项目因故取消时，也可将预混液用于其他项目的检测，不致于造成大量浪费。三是方便开展项目检测。当突发新的重大疫情，上级有关部门公布引物探针序列及扩增程序后，可以委托生物工程公司紧急合成引物探针，利用现有的预混液，在几天内即可具备新方法的检测能力，而这一点是成品试剂盒很难做到的。4 质控品制备对于病毒核酸荧光定量PCR检测，每次实验都必须设立阴性对照和阳性对照。一般情况下，在核酸提取和核酸扩增，需分别设立阴性对照和阴性对照，也就是说每次检测至少需要设立E-（核酸提取阴性对照）、E+（核酸提取阳性对照）、R-（核酸扩增阴性对照）、R+（核酸扩增阳性对照）共4个质控。在开展多次检测，结果稳定后，可以仅使用E-/E+或R-/R+。阴性对照可用DEPC水，阳性对照是否可以利用商品试剂盒附带的质控品？经过部分项目的检测，证明大部分商品试剂盒附带的质控品，均无法作为实验室自制的准标准方法的阳性对照。原因可能是商品试剂盒质控品系根据其专有的引物探针（与检测标准不一致）扩增片段制成质粒，只能使用其特有的引物探针才能检测到。因此，需要自制阳性对照用于质控。对于基层实验室来说，制备质粒或者假病毒非常困难，较可靠的办法是直接利用全病毒来制备阳性对照，具体思路如下：——对于禽流感、新城疫、口蹄疫等项目，由于商品化试剂盒附带有全病毒抗原，可以尝试使用这些抗原来制备阳性对照；——对于蓝耳病、伪狂犬、圆环病毒、小反刍兽疫等项目，由于已经有商品化疫苗上市，可以尝试使用商品化疫苗来制备；——对于部分既无全病毒抗原又无商品化疫苗的检测项目，在不违反法律法规及部门规定的情况下，可以利用已确认阳性的病毒核酸，适当稀释后作为核酸扩增阳性对照（R+）；或者将病毒核酸用已灭活的阴性血浆作适当稀释，复原成模拟阳性样品，作为核酸提取阳性对照（E+）。5 应用根据上述思路，进行了相关实验，取得了初步成果。现简要汇报如下：——核酸提取采用FastPure Viral DNA/RNA Mini Kit试剂盒，南京诺维赞生产，可以实现多种样品的DNA/RNA共提；——引物探针按照相应国家标准提供的序列，委托上海生工合成，引物稀释成10μmol/L、探针稀释成5μmol/L，分装成小包装冷冻保存备用；——qPCR预混液采用AceQ Universal U+ Probe Master Mix V2，RT-qPCR预混液采用2× One Step Q Probe Mix，逆转录酶采用One Step Q Probe Enzyme Mix，均为南京诺维赞生产；——质控品：禽流感选用血凝抑制抗原，口蹄疫选用液相阻断ELISA抗原，其他选用商品化疫苗，测定结果后用灭菌水稀释至Ct值约25~30，冷冻保存备用；——反应体系：设置为20μL，预混液（2×）10μL、逆转录酶1μL、ROX 0.4μL为固定量，引物探针加入量根据检测标准中的终浓度予以换算，加灭菌水补足18μL，DNA或RNA模板为2μL；——反应条件：绝大多数项目直接套用检测标准中的反应条件，效果良好不需要调整。6 讨论6.1 检测工作更加简捷高效模块化检测方法，极大地方便了检测工作的开展。目前实验室经常开展的检测项目有10余个，如果采用商品化试剂盒，则每个检测项目需专用的试剂盒，采购、保存和使用等各个环节，均显得很不方便。改用模块化检测方法后，只需要1种核酸提取试剂和2种扩增试剂，加上各检测项目专用的引物探针，即可开展多个项目的检测。6.2 适用性有待进一步验证尽管在构建新方法时，对适用性进行了尽可能多的验证，如对于动物A型流感，就验证了H5亚型Re-4、Re-5、Re-6、Re-7、Re-8、Re-10、Re-11、Re-12，以及H7亚型、H7N9、H7N9Re-1、H7N9Re-2等毒株的抗原，均证实有效。但对于其他毒株，尤其是较新型的变异株是否有效，尚有待进一步观察和验证。6.3 关于质控品质控品在某个检测方法中，起到非常重要的作用。E-出现阳性结果可能是核酸提取过程中受到污染，E+出现阴性结果可能是核酸提取试剂失效或提取过程出现问题，R-出现阳性结果可能是核酸扩增试剂受到污染，R+出现阴性结果可能是核酸扩增试剂失效。根据E-/E+/R-/R+的扩增结果，大致可以判断核酸提取和核酸扩增过程是否出现问题。阴性对照一般可用灭菌水代替，阳性对照可选用扩增效果较好的抗原或疫苗。6.4 规范操作避免污染由于阳性对照使用的是全病毒抗原或疫苗，一旦造成实验室内部环境污染，更换引物探针等方法无法有效消除污染。因此在实验操作各环节均要严格规范，阳性对照要事先经过可靠灭活，并尽可能降低其使用浓度，扩增产物、实验废弃物需进行无害化处理，以避免引起实验室内部环境污染和其他生物安全事故。6.5 严格依法依规操作农业农村部于2020年8月27日发布《关于非洲猪瘟病毒诊断制品生产经营使用有关事宜的通知》（农办牧〔2020〕42号），要求：自2021年1月1日起，各有关部门和单位在动物检疫或疫病监测、诊断中，对生猪及其产品开展非洲猪瘟病毒检测，应当使用已取得我部核发的产品批准文号的非洲猪瘟病毒诊断制品，确保检测结果准确。按照此规定，实验室自行构建的非洲猪瘟检测方法将不能继续使用，必须改用获得兽药批准文号的商品化非洲猪瘟检测试剂盒。

核酸检测和抗原检测哪个更准确？

想做核酸检测，但因为是新手，所以N多问题都不是很懂，还望各位大神不吝赐教！1、用质谱对核酸进行定性分析，这样的方法可行吗？2、如果可行，那是不是就是将我做出的质谱图拿来与质谱数据库中的该核酸标准质谱图进行对比，以确定我所得出的就是我想检测的核酸呢？这个不知道思路是不是这样的，如果不是，还望帮我指条明路http://assets.dxycdn.com/gitrepo/bbs/emotions/default/078.gif 如果是这样思路的话，那标准质谱图/质谱数据库我该去哪儿找呢？

[font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=18px][color=#222222]　[/color][/size][/font][b]上海：[/b][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=18px][color=#222222]全市常态化核酸检测点免费检测服务延长至9月30日，市民应每周至少进行1次核酸检测。[/color][/size][/font]

核酸药物又称核苷酸类药物，主要在基因水平上发挥作用。核酸类药物可直接作用于引起疾病的分子，并通过调节身体功能缓解疾病的症状，而无需操纵基因组，目前在抗病毒、抗肿瘤、抗代谢紊乱方面显示了独有的作用。目前，国内外核酸药物产业如火如荼，呈爆发之势，但核酸药物产业仍存在亟待解决的技术壁垒。 为加强核酸药物相关研发及分析检测技术和创新方法的交流，从而推动中国核酸药物产业快速发展，仪器信息网将于2021年7月6日举办“核酸药物研发与分析检测技术”主题网络研讨会，会议将邀请多位业内专家做精彩报告，为广大从事生物制药研发工作的用户搭建一个即时、高效的交流和学习的平台。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107020945525287_7888_2507958_3.jpg!w690x151.jpg会议日程：https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107020947424236_7198_2507958_3.png!w690x320.jpg点击链接，免费参会！！！https://insevent.instrument.com.cn/t/Lh

实验室人员如何组织核酸检测？

近日，中科院广州生物医药与健康研究院曾令文研究组成功开发出一种基于核酸等温链置换反应技术、T4连接酶反应与胶体金技术的单核苷酸多态性检测的生物传感器。 该生物传感具有以下三个特点：1.简单，无需复杂的检测仪器，仅需室温反应；2.高灵敏度，单次反应可检测约6个核酸分子；3.高特异性，可区分单碱基突变。该生物传感器克服了传统检测方法的操作技术复杂、耗时长、需要特殊仪器等缺陷。 该生物传感器可用于检测/诊断由单核苷酸多态性引起的遗传病、耐药性病原微生物、肿瘤等疾病易感基因。相关成果于7月6日发表在国际著名学术期刊Chemical Communications，2012，48(68): 8547-8549。 该项目由国家重大专项（2008ZX10004-004）、（2009ZX1004-109）经费资助。http://www.cas.cn/ky/kyjz/201208/W020120830533626771243.jpg单核苷酸多态性检测生物传感器

不知道发生过疫情高风险的地区有没有把核酸检测也变成了常态。

实验室如何组织核酸检测？

核酸蛋白检测仪是层析分析的主要装置，核酸蛋白检测仪配上层析柱、恒流泵、部分收集器、层析谱分析系统（根据需要选配）和电脑打印设备即构成一套完整的核酸蛋白检测仪分离层析系统。它是当今从事生命科学研究、药物测定、化工、食品科学及医学研究等行业的现代分析实验仪器。核酸蛋白检测仪分析系统广泛用于工业、农业、科研和大专院校的科学研究和教学实验。其原理是根据物质（样品）对紫外光有明显吸收的特征，实现对样品成份含量比对分析，以便进行样品蛋白、核酸物质识别检测和含量测定。在生化分析、环保科学、食品研究、毒理研究、新药开发等领域中对核酸、蛋白检测、纯化和提取提供了一种独特的分析手段。

[size=4][font=宋体]分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。[/font][font=Arial] [/font][font=Arial] [/font][font=宋体]分光光度计的简单原理[/font][font=Arial][/font][font=Arial] [/font][/size][size=4][font=宋体]分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。[/font][font=宋体]核酸的定量[/font][font=Arial][/font][font=Arial] [/font][font=宋体]核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链[/font][font=Arial]DNA[/font][font=宋体]，以及[/font][font=Arial]RNA[/font][font=宋体]。核酸的最高吸收峰的吸收波长[/font][font=Arial]260 nm[/font][font=宋体]。[/font][font=Arial] [/font][font=宋体]每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：[/font][font=Arial]1OD[/font][font=宋体]的吸光值分别相当于[/font][font=Arial]50μg/ml[/font][font=宋体]的[/font][font=Arial]dsDNA[/font][font=宋体]，[/font][font=Arial]37μg/ml[/font][font=宋体]的[/font][font=Arial]ssDNA[/font][font=宋体]，[/font][font=Arial]40μg/ml[/font][font=宋体]的[/font][font=Arial]RNA[/font][font=宋体]，[/font][font=Arial]30μg/ml[/font][font=宋体]的[/font][font=Arial]Olig[/font][font=宋体]。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。[/font][font=Arial][/font][font=Arial] [/font][font=宋体]事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如[/font][font=Arial]EppendorfBiophotometer[/font][font=宋体]的准确度[/font][font=Arial]≤1.0%[/font][font=宋体]（[/font][font=Arial]1A[/font][font=宋体]）。这样多次测试的结果在均值[/font][font=Arial]1.0%[/font][font=宋体]左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的[/font][font=Arial]pH[/font][font=宋体]值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用[/font][font=Arial]pH[/font][font=宋体]值一定、离子浓度较低的缓冲液，如[/font][font=Arial]TE[/font][font=宋体]，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于[/font][font=Arial]0.1A[/font][font=宋体]，吸光值最好在[/font][font=Arial]0.1-1.5A[/font][font=宋体]。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。[/font][font=Arial][/font][font=Arial] [/font][font=宋体]从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。[/font][font=Arial][/font][font=Arial] [/font][font=宋体]除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如[/font][font=Arial] A 260 / A 280[/font][font=宋体]的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是[/font][font=Arial] 280 nm[/font][font=宋体]。纯净的样品，比值大于[/font][font=Arial] 1.8[/font][font=宋体]（[/font][font=Arial]DNA[/font][font=宋体]）或者[/font][font=Arial]2.0[/font][font=宋体]（[/font][font=Arial]RNA[/font][font=宋体]）。如果比值低于[/font][font=Arial] 1.8 [/font][font=宋体]或者[/font][font=Arial]2.0[/font][font=宋体]，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。[/font][font=Arial]A 230[/font][font=宋体]表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸[/font][font=Arial] A 260 / A 230 [/font][font=宋体]的比值大于[/font][font=Arial] 2.0[/font][font=宋体]。[/font][font=Arial]A 320[/font][font=宋体]检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，[/font][font=Arial]A 320 [/font][font=宋体]一般是[/font][font=Arial] 0[/font][font=宋体]。[/font][font=Arial][/font][/size][size=1][font=Arial][/font][/size]

超想知道，核酸检测的准确率，是不是100%？

在防疫中，我们所做核酸检测排查这么快，是因为将一部分子样混合成一个样品，直接检查这个样品，如果都是阴性说明这部分的子样没有被感染，如果混合样品有阳性，再在这批子样中逐个筛查，最终确定感染的人。我们是不是可以把这个方法用到实际分析工作中，这样可以减轻分析的工作量，同时提高分析效率节约分析时间。

单位每周一次核酸检测，

[font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=18px]截至4日，新疆霍尔果斯市第一轮核酸检测结果全部为阴性。目前已开展第二轮核酸检测。[/size][/font]

[size=18px]河南郑州5日起开展全员核酸检测，不参加本次全员核酸检测的居民，健康码一律标记为黄码。[/size]

[font=SourceHanSerifCN-Regular][size=16px][color=#595959]6月2日，国家卫健委发布《关于进一步加强新冠病毒核酸检测全链条监管的通知》，要求[/color][/size][/font][font=SourceHanSerifCN-Regular][size=16px][color=#595959]进一步加强新冠病毒核酸检测实验室质量控制[/color][/size][/font][font=SourceHanSerifCN-Regular][size=16px][color=#595959]，[/color][/size][/font][font=SourceHanSerifCN-Regular][size=16px][color=#595959]保障检测质量和生物安全，确保检测结果准确可靠、报告及时[/color][/size][/font][font=SourceHanSerifCN-Regular][size=16px][color=#595959]。[/color][/size][/font][font=SourceHanSerifCN-Regular][color=#595959]随后，各地开始对核酸检测实验室进行集中排查整顿，目前已有多个省市对外公布排查结果。[font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]来源：检验医学，本文由检验医学综合整理自各省市卫健委官网[/font][/color][/font]

UV分光光度计是一款常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。那么在试验中UV分光光度计又是如何定量的呢?下面我们就以核酸的定量为例来讲述UV分光光度计是如何定量的。核酸的定量 核酸的定量是UV分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非是一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。其实试验过程中就是这样的，常常会出现一些不确定的因素，导致试验结果的偏差，有些因素是可以避免的，然而有些因素又是不可避免的。

[font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=18px]19日，北京通州区宋庄镇某画室一学生核酸检测结果阳性，宋庄镇连夜开展全员核酸检测。[/size][/font]