平板克隆形成

日前，岛津制作所发售细胞集落培养工具“CELL PICKER”。本产品通过实现细胞集落※的采集、播种（培养作业）及去除(去掉作业)工序的自动化，有助于提高让特定细胞繁殖的“克隆”工序的效率。“CELL PICKER”由安装在显微镜上的主机部分和在平板电脑上运行的专用软件组成。配有标准的奥林巴斯产（CKW-53）及岛津理化产（AE2000三眼）的显微镜。 以前的细胞克隆，需要用移液管吸取目标集群，移至别的容器里。由于是边用显微镜观察边进行操作，因此，作业负担很重，而且必须保证手工作业娴熟。而“CELL PICKER”，则只需观察显示在平板电脑画面上的显微镜图像，锁定目标后按平板电脑上的按键即可，操作非常简单，人人都可胜任培养作业。另外，培养前后的显微镜图像均可自动保存，对工序管理中所需的作业记录也大有帮助。 岛津制作所一直都在充实以iPS细胞和ES细胞等干细胞在内的各种细胞培养方面研发的辅助产品与服务，比如，今年4月发售的用于细胞培养基的自动预处理装置“C2MAP-2030”和细胞培养解析装置“CultureScanner CS-1”等。5月，出于开发生命科学领域兼具高度“透明性”、“重现性”、“效率性”的新一代实验室的目的，与iPS Portal、地球环境服务、NTTDATA、奥林巴斯、片冈制作所、大城建设、日立产机系统7家公司联手设立了“COTO LABO国际财团”。细胞在培养时增殖形成细胞团的状态。新产品的特点1. 生产效率是手工操作的两倍“CELL PICKER”与使用移液管的手工作业相比，包括图像记录等的工序在内，培养48个集落所需的时间前者（90分钟）约是后者（175分钟）的一半。不仅减少因手抖等造成的不稳定，保持质量均一，还可以消除负担巨大的手工作业，因此，可实现细胞培养现场的工作方式改革2. 作业记录操作简单培养作业的自动摄影功能即为工序管理的“记录员”。站在操作员的角度设计的平板电脑画面，使细胞集落从采集到播种的全工序更加一目了然。3. 节省空间的小巧外型装置的占用面积小（宽600mm×纵深650mm×高500mm、含显微镜），即使实验室面积有限也可容纳。此外，我们还准备了专用台式无尘工作台（日立产机制造、另售品）。

p　　strong我国首例克隆猫诞生/strongbr//pp　　38万克隆一只狗狗，你们愿意吗?/pp　　看到眼前有一只一模一样的狗子，是会勾起对狗子的无限眷念，还是可以填补思念代替陪伴?/pp　　日前，北京希诺谷生物技术有限公司宣布，我国首例自主培育的克隆猫诞生。经过4只代孕猫的孕育，成功生产1只克隆猫。这只猫取名“大蒜”，于今年7月21 日经代孕猫自然分娩出生，小猫目前健康状况良好。/pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201908/uepic/1bd44553-b4bb-4283-b5e6-fe11a51ab3fb.jpg" title="大蒜.jpg" alt="大蒜.jpg"//pp style="text-align: center "克隆猫“大蒜”/pp　　基因科技改变生活。23年前，世界第一只克隆羊“多利”的诞生开始，克隆技术不断刷新人们的认知。去年第一只灵长类动物猕猴的成功克隆，到现在资本开始进入宠物克隆市场，公众对于克隆的讨论趋于白热化，克隆到底是什么?/pp　　strong克隆到底是什么?/strong/pp　　克隆是英文“clone”或“cloning”的音译，而英文“clone”则起源于希腊文“Klone”。克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖，以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群。通常意义的克隆是指利用生物技术，由无性生殖产生与原个体有完全相同基因的个体或种群。/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 400px height: 525px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201908/uepic/fea68563-a87b-444c-8435-e27dcdc54fcc.jpg" title="多利.jpg" alt="多利.jpg" width="400" height="525" border="0" vspace="0"//pp style="text-align: center "“多利”克隆过程/pp　　“大蒜”的孕育过程跟多利类似，通俗来讲就是取到宠物身体样本的细胞核，放入到另一位“捐赠”者的去核卵细胞中，通过电脉冲刺激使之体外融合，并发育成胚胎。最后将此胚胎放入到另外一只代孕猫体内。经过两个月左右时间发育，代孕猫就可以生出一只遗传物质跟爱宠一模一样的小猫。这样一来，“大蒜”就有3个妈妈，而没有爸爸。/pp　　strong宠物克隆已经不是新奇事/strong/pp　　韩国三星电子公司会长李健熙的宠物博美犬“本吉”就是经过克隆诞生的。据悉，李健熙的宠物狗“本吉”是纯种雄性博美犬。2009年，“本吉”以16岁的“高龄”去世后，李健熙把“本吉”的肌肉组织交给了韩国忠南大学动物资源生命科学学科金珉奎教授。金珉奎研究小组对“本吉”的体细胞进行培养，并于2010年第一次成功克隆出一对双胞胎宠物狗“本吉2号”和“本吉3号”。2017年，金珉奎小组和韩国生命科学企业“美迪克隆”再次成功克隆了李健熙的宠物狗“本吉4号”。/pp　　strong38万克隆一只宠物狗 宠物克隆已经商业化!/strong/pp　　小编从京东和淘宝上搜索，均能够搜到“克隆宠物”相关服务，页面标价500-15000不等。和客服沟通后了解到，克隆一只狗需要38万，页面标价仅为基因保存和上门取样费用。客服表示从启动到交付一共需要10个月，克隆期间如果失败，工作人员会马上启动第二轮克隆，每组克隆同时有两只代孕犬代孕。/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 600px height: 239px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201908/uepic/a587486c-6e72-43fb-93b9-08b3300c0c15.jpg" title="宠物服务.jpg" alt="宠物服务.jpg" width="600" height="239" border="0" vspace="0"//pp style="text-align: center "京东上克隆宠物的服务/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 400px height: 488px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201908/uepic/8106abba-4bfc-4739-b001-5fd35e1f2d46.jpg" title="123.png" alt="123.png" width="400" height="488" border="0" vspace="0"//pp style="text-align: center "某公司的宠物克隆宣传单/pp　　克隆“大蒜”的希诺古公司称，目前已经接到七八个克隆猫的商业订单。宠物克隆已经开始商业化。/pp　　主人想要找回爱宠的心情可以理解。可是，宠物克隆技术已经成熟了吗?在各种动物保护法规还未完善的情况下就推崇克隆犬商业化，这样真的好吗?/pp　　另一方面，38万克隆狗狗，这个过程平均需要5-6只代孕犬。得到一只成功的克隆犬背后，那些失败的克隆犬以及不断繁殖的代孕犬又会何去何从呢?/p

肿瘤干细胞（CSC）除了具有高度致瘤性、无限的增殖潜力和产生恶性肿瘤的能力外，还在肿瘤转移和治疗后原发肿瘤的再增殖中发挥作用，更可以抵抗传统的化疗以及更现代的靶向治疗，CSC的这些特性使得开发治疗恶性肿瘤的有效疗法变得复杂。克隆形成试验作为CSC功能研究的一个标准，通过检测CSC形成克隆的能力，既可以评估其干性，也可以对后续的放化疗进行个性化的用药指导，但是目前对CSC的克隆表征进行高通量筛选还存在，考虑到CSC的复杂性及其临床相关性，需要有更高效的方法来对CSC的克隆表征进行高通量筛选分析，并在此基础并开发更有效地针对这些人群的药物或其他疗法。Advanced High-Content-Screening Applications of Clonogenicity in Cancer一文就提出了一种运用高内涵系统来量化2D和3D细胞培养模型中CSC克隆数量、大小和形态，并基于荧光标记区分克隆的高通量方法。图一：2D培养模式下用化合物61预处理的SW620细胞克隆图像，全实验组克隆计数、平均表面积和全孔融合率定量分析在2D培养模式中，使用极限稀释法将SW620结直肠癌细胞从2500个细胞/孔稀释至1个细胞/孔，并配合不同化合物处理，在培养的第8天对细胞进行核染色。结合明场与Hoechst 33342染色图像，对细胞形成的克隆数量、面积和融合度进行了分析，数据显示SW620细胞的克隆形成对TOP2A抑制剂（化合物61）的处理呈现出浓度依赖性反应，并且不同处理方式（预处理VS.连续处理）克隆的生长情况也有所不同。图二：3D培养模式中SW620细胞克隆的计数和形态学分析在3D培养模式中，采用同样的方法对SW620细胞（混于基质胶中）进行稀释，从40000个细胞/400μl稀释至约1248个细胞/200μl，并以50μl/孔接种于96孔培养板中，培养到第7-10天时同样对细胞进行核染色（Hoechst 33342）并使用高内涵系统对样品进行3D成像和分析，结果显示与2500个细胞相比，在5000个铺板细胞上观察到的克隆数量增加了一倍以上，而克隆表面积和体积则保持相对一致。图三：3D培养模式中A549细胞克隆的形态学分析为了评估这一体系在不同种类、不同形态的肿瘤细胞中的适用性，研究中还用A549肺癌细胞进行了验证，形态学进行分析发现A549细胞球长成了两种不同典型形态的克隆—“圆形”、“分支”，随后用高内涵分析软件对这两种细胞球的体积、表面积、椭球轴（长度、短轴与长轴之比、中轴长度、最短轴长度、倾斜度和方向）、球度和最大厚度等形态学参数进行定量，这些结果表明A549细胞可能含有两种不同的CSC亚群。图四：2D培养SW620克隆中CD44和CD24的免疫荧光染而对CSCs的细胞表面标志物（高CD44 ，低CD24）进行图像分析后发现，CD24表达在所有细胞接种浓度下不变，CD44表达随着细胞数量的减少而增加，CD44high/CD24low在细胞中的表达与其干细胞潜能一致。对比只分析膜区域的荧光强度和全细胞区域分析的结果其表达趋势是相似的。本文中介绍的工作概述了克隆形成集落的2D和3D分析的方法、算法和工作流程，可广泛适用于其他HCS仪器和成像分割软件。这些高内涵技术可用于研究促进CSC干性的复杂机制，但也可广泛用于其他药物的发现，以及评估小分子药物、生物制剂和放射治疗的治疗潜力。高内涵系统的智能预扫功能允许灵活地执行初始低倍镜大范围扫描以定位感兴趣的克隆，并自动以更高的放大倍数仅对所需克隆的XYZ位置进行重新扫描。在大量样本中定位研究人员感兴趣的特殊对象大大减少了使用整个成像过程所需的时间。参考文献Esquer H , Zhou Q , Abraham A D , et al. Advanced High-Content-Screening Applications of Clonogenicity in Cancer[J]. SLAS DISCOVERY Advancing the Science of Drug Discovery, 2020

单克隆抗体制备的原理：B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力、B细胞的这种能力和量是有限的,不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的、将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体.这种技术即称为单克隆抗体技术。单克隆抗体制备的过程：免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。细胞融合采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。选择性培养选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。 未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。(1)体内诱生法 取BALB/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体。(2)体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体，收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。各种新型培养技术和装置不断出现，大大提高了抗体的生产量。单克隆抗体制备的意义：用于以下各种生命科学实验并具有医用价值（1）沉淀反应：Precipitation reaction（2）凝集实验：haemaglutination（3）放射免疫学方法检测免疫复合物（4） 流式细胞仪：用于细胞的分型和细胞分离.（5）ELISA 等免疫学检测（6）BIAcore biosensor:检测Ab-Ag或与蛋白的亲和力 .（7）免疫印记（western blotting)（8） 免疫沉淀：（9） 亲和层析：分离蛋白质（10） 磁珠分离细胞（11）临床疾病的诊断和治疗；

p克隆猴诞生的消息让媒体蜂拥而上，可爱的“中中”“华华”萌态不断刷屏，让2018年新春多了一道创新大礼。/pp这一成果所体现的是具有中国特色的创新活动正在不断深入，尽管仍然缺乏具有领军性质的原始创新，通俗地讲就是具有潜力问鼎诺奖的成果，但结合不断取得的成绩，我们可能也要转变一下——对科学本身而言，问鼎诺奖一定是最重要的目标吗？/pp同样的问题也可以用来探讨工业界的创新路径。今日中国尽管已经成为了高技术产品的最大生产国，电信设备等领域在国际上已一言九鼎，但很多创新政策学者仍然认为我们原始创新能力不足。产业界创新与“中中”“华华”的成功诞生看似风马牛不相及，但背后的逻辑可能一致，中国社会对两者的影响因素也高度相似。/ppstrong丰收克隆猴/strong/pp克隆猴这一重大成功得益于中国在科研方面的优势，那就是跟踪、模仿和利用后发优势以及技术优势实现超越。克隆技术发展了20年，灵长类动物的体细胞克隆一直进展不顺利。中国科学家通过持续努力和技术攻关突破了细胞遗传物质植入、分离、被植入的卵细胞的遗传机制启动等重大难题，不能不说是一项非常重要的技术突破。但还不能像率先提出克隆理论或者将皮肤细胞分离为多能干细胞那样被称为划时代的科学成果，因为其中没有体现出足够的原创思想。/pp但这一成果仍然让人非常兴奋。这主要在于，这个工作的团队负责人孙强博士没有海外留学或博士后经历，甚至本科和硕士都不是985高校，本科更是地方院校。此外，论文的主要工作由博士后刘真为主的团队实施。刘真跟随导师开展体细胞克隆猴项目，放弃了去美国顶尖研究所的机会。这看似不起眼的细节说明，取得重大技术突破的技术手段，在中国科学家群体中，已经深入到很多努力、执着和刻苦的科研人员了。这才是一个更加值得祝贺的进步。/ppstrong后发优势与大国路径/strong/pp“中中”“华华”成功克隆的背后有另一个需要进一步探讨的重要因素，就是中国体制特点决定的资金投入优势。按照介绍，克隆猴项目研究持续了5年甚至更长，投入一定不少。/pp这与大多数科研人员的基金使用经历形成一个鲜明对照。君不见，科学界坊间对基金使用抱怨很多，基金尤其是国家科技攻关项目的大课题，从开题到申报截止时间短暂，基金的执行期也非常僵硬，课题费到账慢，到了之后又有很多报销限制。/pp诸如此类各种困难，为何能让若干需要持续多年，大量投入的项目仍然取得成果呢？/pp这其实是在抱怨由行政官员主导的国家课题。但这种行政主导型的课题管理也并非完全乏善可陈。首先，对于大项目来说，对资金使用的产出需要有更大的把握，跟踪世界先进方向的追踪研究无疑是最保险的。/pp的确，发挥高投入、注重工艺与细节以及团队作战等优势，可以取得很多成就，这些成就不是没有可能构成新的科研方向或二次原始创新。/pp大课题的追踪式研究的第二个既往被忽视的亮点，与科研的分包不无关系。大课题不可能由中标的大科学家一个人的实验室完成，在实际执行过程中，要分包成很多子课题甚至更小的单元。相比于自由竞争，这种分包过程往往是承担者和发包者彼此都很熟悉，都相对清楚对方能做到什么地步。当科研压力很大而又不可能草率交差时，这种“小作坊”做法反而有可能诞生新的创新。/pp最近有人问我，2017年诺奖化学奖颁发给了冷冻电镜的研发者，施一公团队还能拿诺奖么？/pp提问者显然比较熟悉清华大学施一公院士的蛋白结构解析研究，知道其研究对冷冻电镜有很大的依赖。同时显然也知道，诺奖是奖给重大原创成果的，所以该问题的逻辑就清楚了：施一公的研究严重依赖冷冻电镜，冷冻电镜获奖，施一公的研究拿诺奖就很难了。/pp但这个逻辑仍然是有待澄清的。诺奖的获奖研究应该是对整个科学发展具有方向性指引或者起到颠覆性作用。从这个角度讲，发表多篇CNS（Cell、Nature、Science）论文的施一公及团队的研究，也许仍然可以被界定为一种跟跑。但这样的研究并不必然被诺奖“淘汰出局”，因为科学的进步是环环相嵌的。冷冻电镜促进了蛋白质结构的解析研究，但突破性的、经典的蛋白质结构的解析研究，有可能为我们认识生命世界的其他研究提供重要的指南，为新的研究方向开启大门。所以以冷冻电镜拿奖来否定施一公蛋白质结构解析研究获得诺奖的可能性，这本身是不成立的。/pp另外，中国在这个路径上又有了一个绝大多数其他国家不具备的优势，那就是大国体量。这种大国体量可以在被领导人认可的研究方向上短时间内集中大量的人力物力资金。/ppstrong产业界的高歌猛进/strong/pp大国优势在产业界可能体现得更淋漓尽致。在我们对中国企业缺乏原创技术的担忧和埋怨还没有一点好转的时候，中国企业突然开始雄起兼并拥有诸多原创技术的西方企业，最近的例子包括海信对东芝家电的兼并，如当时不看好但目前进展顺利的吉利汽车对沃尔沃的兼并。/ppstrong到底发生了什么？/strong/pp如果按照Clarivate Analytics（科睿唯安：原汤森路透旗下知识产权与科技事业部）的以核心专利持有为标准的世界创新百强的划分，中国企业除了华为外，还一直没有上榜者。但与拥有技术相比，中国的杰出企业已经拥有了市场和庞大的并可以随时升级换代的生产能力，尤其是在电子、通讯等高科技行业。按照最近比较有名的宁南山的强国专栏所述，现在中国企业只剩下汽车和能源行业还没有一统江湖。/pp宁南山专栏的说法从技术层面来看可能过于乐观，中国企业目前确实单纯从技术上讲，还没有原创到可以引领世界发展方向的地步。但是，早在2011年，当时的佐治亚理工的科技政策教授Dan Breznitz就在其著作中提到，中国已经在高技术产品的生产上体现出强大的创新能力，并不需要格外担忧原创技术的自主研发能力。如今，有两方面的趋势进一步促进中国优势的强化，让中国虽然仍然没有走到原创技术的领导者层面，但已经依靠大国优势在攻城略地。/pp首先，随着科技全球化的发展，研发越来越与生产分离，经过时日，生产能力拥有者也不断发展出自己的排他性壁垒。在这种情况下，中国的大国优势又让制造基地可以通过内迁等冲销成本上涨。而作为大国使得中国企业拥有的市场议价能力，又让任何原创技术拥有者不能肆意定价。/pp其次，研发本身也在不断分化，不断分包。这就让拥有市场和统一研发能力的中国大企业的议价能力不断增强，并且随着资本流动，可以将兼并作为一种议价选项。/pp在本质上，这种大国国情决定的利用后发优势的产业技术发展路线，与基础科研并无不同。只是传统上，基础研究更加强调高度原创的那个部分，但实际情况可能并非完全如此。/ppstrong颠覆式创新，颠覆了谁？/strong/pp在肯定创新成绩的同时，也要仔细思考时下很多流行的表述，比如用“颠覆式创新”这样的词汇来表明中国在科技创新上已经“领跑”。取得了成绩不假，但这些都不能用来证明我们“颠覆式地”从跟跑者变成领跑者。/pp先从产业界的技术谈起。在中国，跟跑仍然是压倒性主流。只是跟跑速度加快，而且经常不屑于在常规跑道上跟，在生产和市场占有上的大国优势，让我们有了更多的底气。/pp但另一方面，国家的导向仍然是如何从跟跑到领跑，但以是否拥有原始创新为主要衡量手段的跟跑到领跑的研发创新战略经常失效。具体表现为，投入巨资的国家工程实验室或科技重大专项的攻关结果，与企业需求相差较远。但好在企业的技术升级在不断加速，可以根据自己对市场的判断而不断扩展技术版图， 在大多数情况下，是否领跑对企业并不重要。/pp换句话说，时下比较流行的词汇“颠覆式创新”，其实不是在取代领跑者的原始创新能力，而是在颠覆这些原始创新的应用。在一定程度上，也一直在颠覆科技政策领域专家们的认知。/pp同样的情况也适用于基础科研。当把能否领跑作为衡量创新能力的主要评判标准时，决策者实际上依赖的是跟跑路线。CNS和牛刊发表记录往往是跟跑路线的最典型体现，但跟跑事实上产生的各种可能对将来科研起到领跑作用的研究成果反而被忽视了，至少不如CNS和其他牛刊的发表记录含金量高。/pp在这些跟跑出来的成果中，也许会孕育出将来领跑的种子。但种子最终能否生根发芽，则取决于很多因素。反过来，如果全部研发战略的设计核心就是实现所谓领跑，那我们不但不能颠覆领跑者，最终颠覆的恐怕还是自己。/pp style="text-align: right "（作者系康奈尔大学博士研究生）/ppbr//p

SpectraMax Mini 多功能微孔板读板机兼容 SoftMax Pro 超强能力的数据分析软件，轻松可负担的多功能微孔板读板机探索细胞株开发的未来CloneSelect Imager FL介绍当依靠传统技术时，证明细胞株来自单一的祖细胞，或者一个基因是按预期编辑的，可能是一个耗时且主观的过程。美谷分子近期发布CloneSelect Imager FL结合高速荧光和白光成像与智能数据分析，轻松保证单克隆性。CloneSelect Imager FL 是一种用于成像和分析哺乳动物细胞的高通量自动化解决方案，可为研究人员提供准确、客观和一致的结果。 随着时间的推移跟踪带条形码的板，跟踪单个细胞的克隆形成。 高对比度全孔荧光和白光成像允许在第 0 天进行准确的单细胞检测和单克隆性证明。 使用多通道荧光，可以验证基因编辑并执行多通道汇合度分析。 CloneSelect Imager FL 将如何优化您的细胞株开发工作流程？通过交互式演示探索 CloneSelect Imager FL 简便操作的软件关键优势白光和荧光成像无标签的明场快速采集，并能在两分钟内成像96孔板。多通道荧光(红色与绿色)成像提高了单克隆性和比较汇合度分析的可信度。数据工具加速研究进程该软件自动计算汇合度并生成生长曲线、热图和进行图像关联。 随着时间的推移自动跟踪每孔的检测值。证明了IND的成功简化 IND 申报的细胞株开发工作流程中的多个步骤（成像、样本跟踪、数据分析和报告生成）。 借助快速单细胞确认和单克隆性报告功能，您可以简化为监管机构创建支持文档的过程。定制自动化（可选）*我们的自动化和定制团队提供各种定制服务，从机器人装板到具有液体处理和培养功能的全自动工作站。 我们使用 CloneSelect Imager 构建了定制的自动化工作单元，用于 iPSC 工作流程、完整的分析系统以及药物毒性和表征研究。

众所周知，细胞株开发在单抗领域是一个至关重要的环节。现有的细胞株开发流程存在很多弊端，如单细胞分离效率低下、单细胞存活率低以及缺乏单克隆性证据等。近日，Molecular Devices推出了新品CloneSelect高通量单细胞分离系统c.sight及f.sight两款仪器，它们能提高单细胞分离的效率及活率，且增加单克隆性的可信度。系统采用一次性分离槽设计，省却清洗验证程序，降低交叉污染的风险。此外，系统具备除静电装置，保证高精度的接种，尤其是针对PCR孔板。CloneSelect高通量单细胞分离系统高效接种单个活细胞至微孔板后，用CloneSelect Imager细胞生长分析系统对孔板进行成像记录单个细胞及后续的细胞分离过程。结合单细胞接种前后的图像，以及单细胞在微孔内增殖最终形成细胞团的序列图像，可以为细胞株的单克隆性提供更高的可信度保证。CloneSelect高通量单细胞分离系统的高效率和高活率，可以在不增加工作量的前提下提升细胞筛选的通量，从而有助于发现更多更优质的细胞株或者稀有细胞。主要特点： • 单细胞分离、成像并接种至96或384孔板 • 克隆成活率提高至最多8倍 • 一次性无菌微流控分离槽确保细胞健康无污染 • 明场或荧光分离细胞 工作原理： 使用专有的喷墨式单向分离槽及微流控技术和智能图像分析技术将单个活细胞高效地接种至微孔板或PCR板，轻柔而高效地分离单个细胞。使用高分辨率的明场或荧光成像对细胞进行成像和分析，记录细胞分离过程的连续5张图像，用于增加单克隆性的可信度。应用领域：单细胞分离/分选，用于细胞株开发 单个B细胞技术，用于抗体发现 筛选稀有活细胞，如干细胞、基因编辑的细胞等 单细胞测序，尤其是转录组测序。 下载产品资料请联系美谷分子仪器

大家好，本周为大家分享一篇发表在Journal of Proteome Research上的文章，Template-Assisted De Novo Sequencing of SARS-CoV‑2 and Influenza Monoclonal Antibodies by Mass Spectrometry [1]，文章的通讯作者是德克萨斯大学生物医学研究支持中心的Maria D. Person。抗体在对病毒和其他病原微生物的适应性免疫反应中起着重要作用。对病毒中和抗体的详细表征对于开发能够有效预防病毒疾病的新疫苗和单克隆抗体疗法至关重要。目前，仅从蛋白质中获得抗体的完整氨基酸序列仍然具有挑战性，且许多用于氨基酸从头测序的软件对计算、硬件及操作人员知识和经验的要求较高。另一种蛋白基因组学方法是使用来自DNA序列的数据库作为起点，以数据库序列和实验数据之间的最佳匹配作为模板。这种方法在分析抗体时特别有用，因为大部分抗体序列（不包括CDR3区域）通常与种系序列非常相似。此外，准确区分Ile和Leu在抗体CDR区测序时尤为重要，而大多数蛋白质从头测序软件都没有解决这个问题。Supernovo是从种系序列模板开始的测序程序之一，该模板可以利用ETD和EThcD片段数据来自动区分Ile/Leu。在这项研究中，作者利用SARS-CoV-1人类抗体来开发模板辅助从头测序的方案，对两株SARS-CoV-2人类单克隆抗体进行了测定，最终优化的方案使用四种蛋白酶、双片段化方法、优化补充激活归一化碰撞能量和Supernovo获得99%准确的氨基酸序列，并以该方案对25株流感人单抗进行了测序。一、模板辅助从头测序方法的建立Supernovo的工作原理是，首先将MS/MS数据与种系数据库中的序列进行匹配，在初始种系序列选择之后，使用通配符搜索来确定接合（J）区域，以与可变区和恒定区候选最佳结合，然后进行in silico重组以生成模板。接下来，限制的从头测序和Byonic通配符搜索通过在迭代过程中改变单个氨基酸来改进模板，实现实验数据最佳匹配。最初由种系序列确定的Ile和Leu残基通过蛋白酶切割特异性和w离子的存在进行修正。利用多种蛋白酶从基因组数据库中选择种系支架序列，并通过通配符搜索获得从头测序所需的各种肽。胰蛋白酶和糜蛋白酶是根据其不同的切割特异性选择的，并选择特异性较低的弹性蛋白酶和胃蛋白酶提供额外的切割位点。由于Supernovo利用来自特异性和非特异性裂解肽的所有信息来构建序列，因此具有许多重叠的裂解位点对于序列测定至关重要。作者首先用序列已知的重组单抗CR3022制定和优化方案。CR3022用胰蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶和胃蛋白酶酶切，用HCD和EThcD LC-MS/MS分析酶切溶液。实验显示使用EThcD可以在不针对选定的单个z离子的情况下全局碎裂肽混合物，并且产生足够的w离子来区分Ile/Leu。b、c、y、z和w离子的产率取决于SA-NCE， 35%的SA-NCE值产生了最高数量的高置信度Ile/Leu分配，并被选择用于最终方案。图1显示了两种含有Leu和Ile的重链肽，其中检测到w离子z-43（Leu）和z-29（Ile），从而允许Supernovo区分Ile和Leu。虽然在碎裂谱中可以检测到w离子，但使用单一SA-NCE值的宽带碎裂，其丰度较低，这是该方法的主要限制。将多重断裂能量相结合，可以提高对w离子的检测，而使用额外的蛋白酶增加切割位点的数量，有助于分离位置相近的Ile/Leu。图1 使用EThcD对Ile/Leu进行MS/MS分配图2显示了用胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶和弹性蛋白酶酶切的重链Fab区域在HCD碎裂下的序列覆盖图。由于四种蛋白酶的不同切割特异性以及Supernovo对非特异性切割肽的匹配，可以观察到肽在许多氨基酸残基上的切割。除脯氨酸外，大多数残基的MS/MS中都观察到对应碎片离子。图3显示了DNA确定的参考CR3022序列（DNA sq）、通过将IMGT数据库中的序列片段与MS数据（SNO-gm）进行数据库匹配而识别的种系模板，以及通过对抗体可变区Fab的MS数据（SNO-MS）进行Supernovo分析而生成的最终从头序列之间的比较。所有CDR区域均实现100%正确的氨基酸序列（灰色高亮）覆盖，具有正确的Ile/Leu分配。Supernovo的错误分配（蓝色高亮）主要发生在HC和LC上的N-末端残基以及LC上的C-末端序列。与DNA衍生序列不匹配的外来N和 C-末端残基均与初始种系支架存在偏差，如图3中重链末端的洋红高亮所示。末端氨基酸具有较少的裂解和片段数据，并且可能具有混杂的修饰。半胱氨酸残基可导致附近氨基酸的错误分配，因为半胱氨酸硫的氧化修饰。总的来说，99%的单克隆抗体序列是通过这种方法正确测定的。结合HCD和EThcD数据，68个Ile/Leu中有67个被正确分配。图2 用胰蛋白酶（黑色）、糜蛋白酶（蓝色）、弹性蛋白酶（红色）和胃蛋白酶（黄色）酶切并用HCD裂解的CR3022重链Fab的肽覆盖图。图3 对CR3022 DNA衍生序列（DNA sq）、MS Supernovo种系模板（SNO-gm）和Fab区域的实验结果（SNO-MS）进行比对接着，作者使用两种具有DNA衍生序列的SARS-CoV-2抗体CM66和CM67来测试该方案的最终版本（即四蛋白酶酶切，HCD和EThcD活化，SA-NCE 35%）。表1总结了该方法对已知序列的三种抗体CR3022、CM66和CM67的测试结果。CDR区氨基酸在HC和LC中的分配均正确，只有两个Ile错误分配给Leu。在高通量方法中，产生足够强度的诊断性w离子仍然不一致，但当与蛋白水解切割偏好和种系模板结合使用时，该方法是有效的，至少提供97%的正确Ile/Leu分配。因此，四酶酶切双活化法被确定足以对抗体进行高度准确的序列测定。表1 受试单抗的氨基酸序列和Ile/Leu分配置信水平以及正确匹配的总结二、基于质谱的25种流感抗体分析产生高置信度序列作者用最终确定的方案分析了另外25种序列信息不确定的抗体，以评估该方法在更大规模的实验下是否能产生与SARS-CoV-1和2抗体相同水平的高置信度结果，并最终确定生成的序列是否可用于产生克隆和表达功能性抗体的基因。对于25株流感单克隆抗体，平均97%的序列和76%的Ile/Leu分配可在高置信度下确定。大多数置信度较低的氨基酸分配位于N端和C端，因此不太可能影响抗体结合。与半胱氨酸残基相邻的序列也有较高的中低置信度分配和偏离种系序列的发生率。在25株单克隆抗体中的24株中，两条链上三个CDR区域的所有残基都得到了高度可信的鉴定。由于该方法不总是在可检测水平上产生可区分的w离子，CDR区域具有一些中低置信度Ile/Leu分配。因此，当大规模应用于各种IgG抗体时，该方案提供了高置信度氨基酸序列。获得的流感单克隆抗体序列随后用于通过克隆和在HEK293细胞中表达产生抗体。三、流感病毒HA特异性人单克隆抗体的生物学活性及序列分析在克隆、表达和纯化后，通过ELISA评估原始25种流感病毒和相应重组表达的HA特异性单克隆抗体的生物活性。图4显示了25种单克隆抗体与原始和重组单克隆抗体的HA抗原的结合曲线。通过评估单克隆抗体对相应HA抗原的结合活性，证实了单克隆抗体对H1N1、H3N2和B型流感病毒HA的特异性。如图4所示，流感特异性单克隆抗体表现出与季节性和大流行性流感病毒株的重组HA（rHA）的差异结合，与原始抗体显示的结合活性相当。图4 原始MS测序（左曲线）和重组表达（右曲线）流感HA特异性单克隆抗体的ELISA结合曲线总的来说，作者通过对25个未知序列单克隆抗体进行测序，确认所采用的方法在不同单克隆抗体上产生的残基测定置信度与已知序列或商业来源的单克隆抗体相同。蛋白质组学方法可以用来检查基于DNA的方法，这些方法被认为更准确，或者可以用来清除样本处理和标记中的错误。通过ELISA结合试验观察并验证了CDR序列的多样性。这些分析证实，当克隆和重组表达时，质谱模板辅助从头测序产生的高置信度序列会产生与特异性流感病毒rHA抗原结合的重组单克隆抗体，从而对该方法进行生物学验证。撰稿：夏淑君 编辑：李惠琳文章引用： Template-Assisted De Novo Sequencing of SARS-CoV-2 and Influenza Monoclonal Antibodies by Mass Spectrometry.

p style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.75em " 单克隆抗体药物(mAb)是通过基因工程生产的蛋白质药物，具有特异性高、作用机制明确、效果显著、经济效益大等优势，是近年来生物医药产业的重要增长点。br//pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.75em "治疗性单克隆抗体（mAbs）的开发和制造是一个高度管制的过程，ICH的指导原则指出了相关产品质量参数允许的异质性水平。电荷异构体是单克隆抗体（mAb）的关键质量参数（CQA）之一，在药品稳定性研究、申报及放行等环节都必须检测、评估。抗体的电荷异构体是由细胞内的酶促和非酶促过程分泌到培养基后形成，电荷异构体可能具有明显不同的生物活性，影响单抗药物的功能、安全性及稳定性。导致电荷异质性的最常见变异之一是C末端赖氨酸剪切，随着一个或两个带正电荷的赖氨酸残基丢失，可导致碱性变异体的形成；另外，在N-和O-连接的聚糖上脱酰胺、糖化和带负电荷的唾液酸的存在都会导致负电荷增加和酸性变异体的形成。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.75em "电荷异构体的检测方法有很多种，如：聚丙烯酰胺凝胶电泳，虽然仪器设备相对便宜，但其分辨率低、操作繁琐，目前应用较少；毛细管等电点聚焦（cIEF）电泳可进行蛋白的等电点测定，现已开发出毛细管电泳与质谱联用的技术，该方法可从完整蛋白水平进行分析，暂未推广使用；离子交换色谱（IEX）在电荷异构体的分析中使用较多，有盐洗脱与pH梯度洗脱两种方式，后续收集各个成分进行质谱检测分析其分子量及翻译后修饰。现已有在线的LC-MS方法，此方法不使用传统的盐缓冲液，改为质谱可以耐受的有机盐缓冲液来进行电荷异构体的分离，但其质谱图谱质量及普适性还有待考量，且不能实现肽段水平翻译后修饰的解析。中国计量科学研究院研制了人源化IgG1 κ型单克隆抗体标准物质，与军事科学院军事医学研究院钱小红、应万涛课题组合作，建立了cIEF-WCID及SCX-HPLC两种方法分离检测了单克隆抗体标准物质中的电荷异构体。运用蛋白质组学技术，从完整的分子量分布、肽图分析、进一步延伸到糖肽分析，建立了逐步深入的分析方法来研究单克隆抗体电荷异构体形成的影响因素，此方法可推广应用于其他单抗类药物的电荷异质性分析与评价。/pp style="text-align: center margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.75em text-indent: 0em "img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 600px height: 272px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202010/uepic/f26eb0c0-ed43-47b2-9965-eb69024d8360.jpg" title="图片1.png" alt="图片1.png" width="600" height="272" border="0" vspace="0"//pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.75em "2020年11月10-12日，中国计量科学研究院和国际计量局拟联合举办span style="color: rgb(255, 0, 0) "strong第三届 “药物及诊断试剂研发与质控——测量与标准，质量与安全（TD-MSQS 2020）”/strong/span 国际研讨会，以期进一步促进该领域的学术交流和技术发展，提升企业的研发水平和产品质量。本次会议将在南京市政府的支持下，在江苏省南京市举行。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.75em "本次会议可通过官方网站http://tdmsqs.ncrm.org.cn注册或扫描二维码注册，注册成功后请填写参会回执发送至会议邮箱pptd@nim.ac.cn。/pp style="text-align: center text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.75em " /pp style="text-align: center margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.75em text-indent: 0em "img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202010/uepic/11c12ff4-263b-48c2-aff9-f4640b0a1850.jpg" title="图片3.png" alt="图片3.png"//pp style="margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.75em text-indent: 0em text-align: center "strongspan style="text-indent: 0em "欢迎各位专家、同仁报名参会！/span/strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.75em "更多信息请关注会议官方网站：a href="http://tdmsqs.ncrm.org.cn。" _src="http://tdmsqs.ncrm.org.cn。"http://tdmsqs.ncrm.org.cn。/a /pp style="margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.75em text-indent: 0em text-align: right "供稿：崔新玲 胡志上span style="text-indent: 2em " /span/p

小麦是全球分布最为广泛的粮食作物，世界上有超过40%的人口以小麦为主食。提高小麦产量，事关粮食安全。4月10日，科技日报记者从南京农业大学获悉，该校农学院应用植物基因组团队贾海燕教授与美国俄克拉荷马州立大学、中国农业科学院等机构合作，发现并克隆了一个提高小麦籽粒产量的关键基因TaCOL-B5，同时为蛋白质磷酸化可能参与小麦穗形成和籽粒产量提供了示范。该成果近日发表于国际学术期刊《科学》。　　《科学》杂志同期配发的评论文章认为，“TaCOL-B5的发现是提高谷物产量的一个里程碑，因为它提高了我们对控制株型和产量的分子机制的理解”。　　普通小麦的籽粒产量受三个主要因素影响：单位面积的穗数、每穗粒数和粒重。穗数可以通过促进分蘖而增加，每穗粒数分为小穗数和每小穗粒数两个亚组分，增加小穗数是提高粒数但不降低粒重的有效途径。　　“最初，我们发现小麦‘CItr17600’的粒数较多，就想把控制这一表型的基因克隆出来，但这需要先‘锁定’对应的基因组区域，然后再验证候选基因是否决定了它的高产。”论文共同第一作者贾海燕说。　　研究人员先利用CItr17600和扬麦18的F2:3家系，将一个控制每穗小穗节数的主效数量性状基因定位在7B染色体上，接着通过重组体表型和基因型分析和双亲序列比对，确定TaCOL-B5为候选基因。　　随后，他们从CItr17600中克隆了TaCOL-B5的cDNA，将其转化到扬麦18中，表型分析发现在转基因的不同后代都显著提高了穗数、每穗小穗节数及其粒数，从而证实TaCOL-B5是提高产量的关键基因。

大家好，本周为大家介绍的是一篇发表在Analytical chemistry上的文章Epitope Mapping of Polyclonal Antibodies by Hydrogen–Deuterium Exchange Mass Spectrometry (HDX-MS)1，文章通讯作者是意大利锡耶纳葛兰素史克公司实验室主任Nathalie Norais和丹麦哥本哈根大学药学系教授Kasper Rand。抗体表位定位对理解适应性免疫、研究治疗性抗体和疫苗的作用方式至关重要。对疫苗接种后产生的多克隆抗体群（pAb）的结合特性的深入了解将为疫苗开发提供重要价值，但很少有表位定位方法能耐受pAb样品的复杂性。本文使用氢氘交换质谱（HDX-MS），通过检测存在不同量的pAb时抗原的HDX值变化，绘制了pAb样品识别的表位，并提供了表位与抗体的相互作用信息。因子H结合蛋白（fHbp）是被广泛研究的脑膜炎奈瑟菌抗原之一，在人体中能引发强大的保护性免疫反应。fHbp是27kDa的脂蛋白，N端为一个饼状的β-sheet，C端为一个8股β桶，两端由linker连接。本文的研究对象是fHbp和用fHbp免疫的兔pAb。首先作者进行了被pAb识别的fHbp抗原表位的鉴定。重组fHbp在不孵育和孵育两倍量的pAb下进行了30秒到20分钟的HDX实验，在抗原的多个区域检测到了抗体导致的HDX降低，标记10min后HDX的变化最为显著，因此接下来的HDX-MS实验选择了10 min时间点。随后作者进行了孵育比例的考察以判断结合亲和力，考察了Ag：pAb从1:2、1:5、1:10到1:15，氘代时间为10分钟（图1），可以观察到抗原的3-26、44-72、104-120三个区域的氘代被抗体显著的保护住了，从1:5时开始看出差异，从1:2到1:15，所有肽的平均氘代降低率从3%增加到了16%，104-120的氘代降低率最高。之前的研究表明，fHbp的兔抗中存在与抗原亲和力在1nM及以下的抗体，故氘代保护率随抗体用量增加的原因可能是，在低比例的多克隆抗体中，每种抗体的占比有限，高亲和力的抗体还没达到能与抗原形成1:1复合物的浓度。作者将实验结果与前人研究的fHbp的单克隆抗体结果进行比对，多个氘代减少的区域得到了印证，尤其是104-120区域，残基S112、G116和K117可被认定为抗原表位。同时，抗体之间也存在组合功能，即单个抗体无法发挥的功能会由两到三个抗体协同产生，本实验中使用多克隆抗体研究的优势在于，通过与单克隆抗体研究中氘代降低的区域对照，判断表位抗体间的组合功能和起到免疫效果所需的交叉区域。图1. 不同比例的Ag：pAb对抗原fHbp氘代率的影响。A.颜色由浅到深依次是1:2、1:5、1:10、1:15，正值代表加入抗体后氘代率降低。B.映射到晶体结构上的氘代变化（PDB：3kvd）。C. 15-31、44-71、102-120、209-234区域随抗体加入比例的变化，灰色线为不加抗体时的氘代值，所有氘代是最大氘代值（MX）的相对值，最大氘代值为1:15比例下氘代24h的结果。接着，作者使用VADAR分析研究fHbp的主要表位区。VADAR v1.8算法基于蛋白的X射线结构原子坐标测量fHbp单个残基的表面可及性，将其与HDX结果相结合可进一步描述fHbp的表位区域。可及表面积分数（ASA）超过50%的残基为暴露残基，图2总结了映射到fHbp晶体上的所有暴露的残基，每个识别的表位区域的范围为1992-2509 Å2，作者强调位于表位区的暴露残基不一定都参与表位组成，也可能是间接稳定抗体的结合引起的HDX保护。图2. 结合VADAR和HDX数据的抗原表位区。两个在N端结构域（黑灰、浅绿），两个在C端结构域（浅蓝深蓝、深绿），紫色代表不在HDX鉴定的表位区域内的暴露残基。最后，作者使用了变性剂和盐来评估结合特异性和非特异性相互作用。由于亲和力低的抗体在变性剂存在时可与抗原解离，作者将此策略应用到了HDX实验中，选择1:10结合比例进行HDX，标记缓冲液使用含有或不含有盐（0.5M NaCl）或变性剂（硫氰酸铵AT或尿素），探究这些情况对HDX结果的影响（图3）。在存在0.5M、2M和4M AT的情况下，fHbp的多个区域获得了更多的氘代，N端区域3-26和44-71，以及C端区域176-184显示出氘代增加（相对于不加AT结果），因此作者推断即便在0.5M的浓度水平下AT也能影响fHbp与抗体的结合，2M尿素存在下也是如此。但0.5M尿素和0.5M NaCl的存在没有明显影响fHbp与抗体的结合。因为非结构肽中酰胺氢的交换速率会受到溶剂离子强度、pH值、温度、以及相邻残基侧链的诱导和空间效应的影响，作者额外考察了0.5M尿素和0.5M NaCl是否会影响fHbp酰胺氢自身的交换速率，即在对照条件（PBS缓冲液）和实验条件（加入0.5M尿素或 NaCl）下分别标记5秒和30秒，控制缓冲液的pH相同且控温（在冰浴进行标记）。结果表明实验组序列覆盖率没有降低，相比于对照组，肽的回收率也高达91.8%，三次重复实验可表明0.5M尿素或 NaCl的加入不会对fHbp自身的氘代特性产生任何显著性影响，也不影响fHbp的构象。将0.5M尿素或 NaCl添加到抗原抗体孵育后的氘代实验中，发现fHbp上的所有表位在抗体结合后仍被显著保护，排除了抗体非特异性结合的可能。值得注意的是，在存在尿素或NaCl的情况下，fHbp的表位区域氘代降低变化幅度不同，尤其是在标记30秒时，这说明了不同表位在与抗体互作时的特性不同，例如残基3-26和104-120可能为静电相互作用（被NaCl破坏），残基133-166和209-234可能为氢键作用（被尿素破坏）。图3. 添加剂对抗原结构和抗原-抗体结合的影响。A.在0.5M AT存在下，30秒氘代后fHbp结构中氘代增加的区域（蓝色）。B.抗原-抗体1:10孵育对fHbp氘代的影响。C.49条鉴定肽在30秒氘代时的变化，蓝色为添加0.5 M AT，紫色为添加0.5 M尿素。D. 抗原-抗体1:10孵育后，49条鉴定肽在30秒氘代时的变化，橙色为对照组，蓝色为添加0.5 M NaCl，紫色为添加0.5 M尿素。总结：本文通过监测fHbp与多克隆抗体群pAb孵育后的HDX-MS变化，绘制了fHbp的抗原表位，并使用尿素和NaCl深入了解了抗体群的相对丰度和亲和力，以及潜在的非特异性结合，这种方法可以广泛应用于其他抗原和pAb样品，为免疫学和疫苗设计提供有价值的信息。参考文献：1.Ständer, S. R. Grauslund, L. Scarselli, M. Norais, N. Rand, K., Epitope Mapping of Polyclonal Antibodies by Hydrogen–Deuterium Exchange Mass Spectrometry (HDX-MS). Analytical Chemistry 2021, 93 (34), 11669-11678.

一次性使用技术在制药领域的应用越来越广。根据目前统计，超过85%的商业化前的上游生物加工主要或完全使用一次性使用技术仪器设备进行制造。（来源：搜狐网）什么是一次性使用技术一次性使用技术（SUT, Single Use Technology），也称可抛弃型技术（Disposable Technology），在生物制药设施中应用的SUT产品通常由一次性使用的耗材和重复使用的配套硬件组成。相对于传统的不锈钢系统，其特点在于——❖与产品直接接触的部件设计为一次性使用；❖与产品直接接触部件通常以无菌形式供应；❖消除了部件使用前的清洗和消毒/灭菌；❖避免了交叉污染的风险。 例如，实验室规模的细胞或组织培养很早便开始采用可抛弃型转瓶。SUT技术在规模化生产中应用，是从上游细胞接种培养和扩增培养开始的。 至今已全面覆盖了上游扩增和生产培养、细胞澄清收获、下游分离纯化、浓缩超滤、原液分装/冻融、制剂灌装等。什么是无菌克隆环Bel-Art无菌克隆环，使用克隆环可以便捷、高效地从培养板或者培养皿等培养耗材获得单克隆细胞。操作指南 无菌克隆环有助于获得单克隆细胞，每个克隆由单个细胞产生，产生同质的细胞群。 ❖为隔离克隆，在圆柱体底部边缘涂上薄薄的润滑脂；❖然后在选择的克隆上倒过来；❖加入少量胰蛋白酶或EDTA；❖培养皿在37ºC（98.6ºF）下短暂培养，直到细胞分离；❖从圆筒内收集细胞并转移到另一个容器中进一步生长。 无菌克隆环的尺寸规格● 产品是锥形的，因此底部边缘比顶部宽，确保良好的密封面；● Polystyrene克隆环提供无菌包装；● 50个/包；● 三种尺寸规格的克隆环可选择：4.7mm I.D.x 8mm H 6.4mm I.D.x 8mm H9.5mm I.D.x 11mm H 注：灭菌产品不可退货哟~优惠福利点击原文链接即享折扣

南开新闻网讯（通讯员 刘曜玮 记者 乔仁铭）2022年3月31日，由一头普通的“代孕”母猪怀孕110天，诞下了7头克隆纯种小长白猪，这是自动化操作完成克隆全流程获得的克隆动物——南开大学科研团队实现全流程机器人自动化“孕育”克隆猪，为世界首次。南开大学赵新教授科研团队联合天津市农业科学院畜牧兽医研究所针对人工克隆技术存在的相关问题，对自动化操作克隆技术进行了研究，成功实现突破。该团队亦成为世界上唯一实现机器人操作及自动化操作克隆全流程的团队。团队从机器人操作到自动化操作，进一步扩大了我国克隆技术在世界范围内领先优势。种业是农业的基石，我国种猪产业由于优良原种猪资源不足同样面临着“卡脖子”问题。发达国家对我国引进曾祖辈的原种猪进行封锁，我国只能引进退化快的祖父辈原种猪，通常经3年左右繁殖即退化，正经历着原种猪“引进、退化、再引进、再退化”的恶性循环。用克隆技术大量扩增祖父辈原种猪，是解决种猪育种问题的有效方案。但是，人工克隆操作步骤多、难度大、效率低，胜任克隆操作的人员极度短缺，不能真正解决生产祖父辈原种猪大量需求的难题，这使得大范围推广克隆技术用于种猪育种存在瓶颈。为此，在国家重点研发计划项目支持下，南开大学人工智能学院赵新教授科研团队联合天津市农业科学院畜牧兽医研究所针对人工克隆技术存在的相关问题，对自动化操作克隆技术进行了研究。自动化操作克隆技术利用显微视觉建立了最大厘米级、最小亚微米级分辨率的全局视野，提高操作效率实现了克隆操作批量化；通过细胞受力分析，实现了基于最小力的克隆操作自动化；通过细胞内应变评估，降低了克隆操作过程对卵母细胞的损伤，提高了克隆操作后胚胎发育率，实现了克隆操作精准化。采用自动化操作克隆技术，将标志克隆成功的囊胚率，从人工操作的10%提高到自动化操作的27.5%，囊胚率提升2.75倍。团队相关工作结果显示，单胎代孕母猪产仔数，从人工克隆猪的平均不足5头，提升到机器人化、自动化克隆猪两批3胎共24头，平均单胎产仔8头，提升了60%以上。此外，该团队第一批机器人操作的克隆猪已用于育种生产，13头健康克隆猪有9头留种，留种率69%，与普通种猪留种率35%相比翻了一番。自动化操作克隆技术为大量扩增祖父辈原种猪、大范围推广克隆技术用于种猪育种和实际生产应用提供了途径，这为我国解决大量快速“复制”优良动物品种，解决种猪育种“卡脖子”问题提供了方案。据了解，我国种猪需求量巨大，每年种母猪更新量1300万头，种公猪更新量30万头以上。为适应育种规模化需求，赵新科研团队长期以来致力进一步提升克隆全流程机器人操作水平，在批量化、自动化、精准化、规模化上下功夫，研究工厂化的自动化动物克隆育种技术体系，旨在为解决种业“卡脖子”问题不断提供科学的自动化方案。

中广网济南2月2日消息 (记者 柴安东)山东省干细胞工程技术研究中心2月2日宣布，由这个中心李建远教授率领的科研团队，攻克人类胚胎克隆技术，成功克隆出5枚符合国际公认技术鉴定指标的人类囊胚。这一研究成果于2009年1月27日在这一领域国际权威学术期刊《CLONING AND STEM CELLS》杂志网络版发表。　　在今天上午召开的“山东省干细胞工程技术研究中心、烟台毓璜顶医院成功获得人类体细胞克隆胚胎介绍会”上，李建元教授向与会专家、学者详细介绍了这一科研成果。据介绍，此次研究者选择了健康卵细胞志愿捐献者12人，经促排卵获得135枚卵细胞，经试验最终成功获取囊胚5枚，其中，4枚囊胚的供体细胞来源于正常人皮肤纤维细胞，1枚来源于帕金森病患者外周血淋巴细胞。　　据介绍，李建元教授的研究团队主要采用先进的三维立体偏震光纺锤体成像系统(对细胞无损伤)，对卵母细胞纺锤体(核DNA)精确定位后，再用微激光对卵子的透明带打孔，精确剔除卵子细胞核。通过核移植后所获得的囊胚进行DNA遗传多态性位点鉴定，不同细胞阶段克隆胚胎的供体与受体细胞浆中线粒体定量动态学分析和囊胚线粒体遗传多态性位点SNP鉴定。　　李教授介绍说，他们掌握的这一先进技术不是为了制造克隆人，而是进行人类治疗性克隆研究，造福人类。　　介绍会上，中国科学院动物研究所生殖生物学国家重点实验室首席研究员、我国著名动物克隆专家、中国首例克隆牛专家陈大元教授对这一成果给予高度评价。称该成果不只是应用人类纤维体细胞获得克隆胚胎，更重要的是应用帕金森病患者外周血的淋巴细胞作为供体细胞也成功获得囊胚，这使治疗性克隆研究向前迈进了一大步。　　可以预见，不久的将来，目前各种无法治疗的疑难性疾病都有可能通过克隆胚胎提取到与病人遗传基因完全相同的全能型胚胎干细胞，用其衍生而来的全新的功能细胞、组织或器官，来取代病变的细胞、组织、器官，从而避免免疫排异反应的发生，从根本上解决组织器官移植中配型困难与供体不足等瓶颈问题。

p　　随着引领第二次生物医药产品浪潮的“单克隆抗体”的出现，抗体研发的一切正在慢慢改变。在抗体工程药物中，肿瘤抗体药物更是异军突起，独占一半天下，单克隆抗体药物以其独特的作用机制及高效性，在抗恶性肿瘤的治疗中发挥了不可估量的重要作用。目前，单克隆抗体已广泛应用于肿瘤的临床治疗，本文主要从抗体药物的发展、面临的挑战以及如何解决等方面进行了详细的分析。/ppstrong　　抗体药物的前世今生/strong/pp　　和各种重大革命性技术的发展一样，抗体的研究也是经历了漫长岁月。直到Kohler和Milstein在1975年创建了淋巴细胞的杂交瘤技术并获得了专一识别抗原位并与之特异结合的单克隆抗体，才受到了相关领域学者们的高度重视。两位科学家因此被授予1984年的诺贝尔生理学或医学奖。/pp　　然而，由于通过杂交瘤技术制备的单克隆抗体是鼠源性的，应用于人体不可避免地引起人抗鼠抗体(HAMA)反应，限制了单克隆抗体的临床应用。/pp　　为了克服这种缺陷，20世纪80年代中期研究者们寻求以基因工程技术对鼠源性单克隆抗体进行改造，尝试对其人源化处理。如将鼠源抗体可变区与人抗体恒定区拼接而形成嵌合抗体或将鼠抗体可变区的互补决定区(CDR区)与人的抗体的互补决定区互换构成人源化抗体等。/pp　　以上抗体技术的建立，基本解决了抗体药物异源性的问题，促进了抗体药物的广泛应用。迄今美国FDA已经批准上市了几十种治疗性抗体药物，抗体产业增长迅猛，产生了巨大的社会效益和经济效益。目前国内外处于临床前、临床研究的各类生物技术药物中也以抗体类制品最多，其中则以抗肿瘤抗体药物最多。/pp　　这其中除了单抗之外，新型抗体的开发也各施所长，其中包括双特异性抗体以及抗体偶联药物(ADC)。就开发热点而言，当然要数PD-1/PD-L1单抗、ADC药物、以及双特异性抗体了。目前，全球抗体药物产业已经步入了强劲发展的时代，与此同时，抗体技术的发展也面临着诸多挑战。无论是在抗体靶标和新抗体基因发现，还是在新抗体药物的研发和产品种类等方面，很多问题都亟待解决。在此，小编做了详细的总结。主要分为以下几个方面。/ppstrong　　筛选肿瘤治疗新靶点/strong/pp　　与传统的小分子药物相比，抗体的靶点数量相对要少的很多。这主要首先由于抗体本身的性质。一般来说，抗体分子的分子量较大，结构复杂，绝大多数抗体只能对位于细胞膜表面及分泌出来的分子发挥作用，而对于细胞内的分子则很难产生功效。/pp style="text-align: center "img title="001.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201801/insimg/3fbc9274-4de1-4a6d-acf5-dc8ffbcad09f.jpg"//pp style="text-align: center "strong针对不同靶标的抗体/strong/pp　　目前，在已经批准的抗体药物中仅有27个靶标。其中7个靶标分别有两个或两个以上的抗体药物，共计18个。其中5个靶标(TNF、CD20、VEGF、HER2、EGFR)所对应的抗体药物多数为重磅炸弹药物，共计10个。在2014-2017新上市的抗体中，几个特殊靶点已引发重大波澜，诸如CTLA-4、PD-1/PD-L1等都成了重磅炸弹的诞生地。其中以PD-1/PD-L1为靶点的抗体作为肿瘤免疫治疗中的先锋队更是各个公司追逐的热点。/pp　　多家国际巨头公司已在该领域做了充足的准备，包括辉瑞，安进，赛诺菲，再生元、罗氏、诺华、礼来、阿斯利康等。该靶点也必然引起新一轮的腥风血雨。但总体来说，抗体靶标十分有限，所以说，在研发的候选抗体药物中，新靶点和新适应证抗体是药物研发团队首要追求的目标 其次是老靶点的深度开发。/ppstrong　　降低抗体的免疫原性/strong/pp　　最早通过杂交瘤技术制备的鼠源性单克隆抗体，应用于人体会不可避免地引起人抗鼠抗体(HAMA)反应。随着基因工程技术的发展，研究人员开始对鼠源性单克隆抗体进行改造，尝试对其人源化处理以解决单克隆抗体的这种缺陷。可分为嵌合抗体、人源化抗体或完全人抗体。试图通过增加其可变区序列与人胚系基因的同源性来降低它们的预期免疫原性。/pp style="text-align: center "img title="002.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201801/insimg/d4eabd2b-11a8-492c-b317-7b62d2129725.jpg"//pp style="text-align: center "strong鼠源性到完全人源化抗体/strong/pp　　嵌合抗体成功的例子包括罗氏公司的抗 CD20 抗体Rituxan，其用于治疗B 淋巴瘤。它的抗淋巴瘤作用主要来自于补体作用、ADCC作用和诱导肿瘤细胞凋亡。因为人鼠嵌合抗体仅仅消除了鼠源单抗的部分异源性，未经改造的可变区的鼠源序列依然可以诱导人体产生HAMA反应，因此对鼠源抗体可变区的进一步进行人源化改造是必然趋势。/pp　　通过研究大量小鼠抗体可变区序列，截取可变区中与抗原直接接触的序列与人抗体可变区的框架区嫁接，经过亲和力重塑，可在极大程度上保持亲本抗体的特异性和亲和力，同时在人鼠嵌合抗体的基础上进一步消除免疫原性和毒副作用。人源化抗体成功的例子包括罗氏的Herceptin，其用于治疗HER-2过度表达的转移性乳腺癌。/pp　　不容置疑，完全人源化抗体绝对是最理想抗体，其可以达到完全避免鼠源性单抗的种种缺点。目前主要通过抗体库技术以及转基因小鼠技术等方法来进行生产。/ppstrong　　新型抗体药物/strong/pp　　抗体偶联药物(ADC)、双特异性抗体以及PD-1/PD-L1单抗绝对算的上是抗体圈的明星产品了。/pp　　ADC由单克隆抗体与有治疗作用的小分子药物两部分构成，借助抗体实现化学药物对肿瘤组织的靶向递送。ADC 在血液中稳定性高，药物分子不会脱落，因而毒副作用较小，但对肿瘤细胞的抑制作用远远高于裸抗体。这种设计策略既可提高抗体药物的杀伤能力，又提高小分子化学药物的治疗窗。/pp style="text-align: center "img title="003.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201801/insimg/c110a3a2-3d90-4c38-ab72-7b6cdd3ecafa.jpg"//pp style="text-align: center "strong双特异性抗体/strong/pp　　传统抗体药物通过封闭单一信号通路抑制肿瘤生长，临床上易出现抗体药物的耐药性。所以双特异性抗体(BsAb)应运而生，其通过基因工程手段将两个分别靶向不同抗原的抗体片段组合在一起，具有两种抗原结合位点，可以发挥协同作用，进而提高治疗效果。这种结构设计能有效地改善抗体药物在体内的药物代谢动力学过程，增强临床治疗效果。然而，设计出疗效好、稳定性高且利于生产的BsAb仍需深入研究。/pp　　除了ADC和BsAb之外，肿瘤免疫治疗抗体药物也是火的不行。近几年，针对免疫检验点的PD-1/PD-L1单抗治疗不断在癌症治疗中取得突破性进展，尤其在黑色素瘤、肺癌、肾癌及膀胱癌等多种肿瘤的治疗中显示出很好的疗效，初步实现了利用免疫方法治疗肿瘤的梦想。/ppstrong　　抗体组技术和抗体组药物/strong/pp　　抗体组技术是在基因组学和蛋白组学基础上，结合杂交瘤技术及基因工程抗体技术，经过抗体靶标高通量筛选、建立大规模抗体库，最终走向应用。相比传统的单克隆抗体技术相比，抗体库技术，具有库容量大、可筛选种类多、更易获得针对特定抗原表位的高活性单克隆抗体等无以替代的优势。同时抗体库技术在筛选过程中，更为省时、省力、高效、经济。/pp style="text-align: center "img title="004.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201801/insimg/7cd75911-64ed-4a38-aa94-c1179ab902e0.jpg"//pp style="text-align: center "strong抗体库技术/strong/pp　　目前抗体库根据其宿主免疫状态来说，主要分为天然库和免疫库两大类。天然库从理论上来说可以筛选获得可与任何抗原特异结合的的抗体，同时人抗体库可以直接产生全人的抗体V区基因，避免了后续的繁琐的人源化过程，但这些天然抗体基因缺乏体内的重排与突变过程，因而很难获得高亲和的抗体，所筛选的抗体往往需要进一步的亲和力成熟改造，而且同时筛选背景较高，针对特定抗原的抗体丰度低。/pp　　相比较而言，免疫库中则含有大量针对该特定抗原的抗体，其筛选背景大大降低，并且这些抗体基因经过在宿主体内的成熟过程，往往具理想的亲和力。/pp　　小鼠目前依然是最容易进行免疫和其后续进行基因工程操作的动物品种，然而通过小鼠抗体库获得的依然是鼠抗体V区基因，想使其安全用于临床，还必须进行后续的人源化改造。近两年发展的全人抗体的转基因小鼠技术，使得我们可以通过转有全套人抗体基因的转基因小鼠来制备人的免疫抗体库，并从中直接筛选具有治疗价值全人的抗体V区基因，无需人源化的改造。/ppstrong　　国内抗体药物产业如何突破瓶颈/strong/pp　　在全球抗体药物产业强劲发展的浪潮中，国内抗体药物产业也已经实现了从基础研究到产业化的跨越，抗体的产品逐渐增多，市场逐渐扩大。尽管我国抗体药物产业近年来发展迅速，但国产抗体药物的技术水平及市场占有率与国际先进水平仍有较大差距。/pp　　中国抗体药物上市以及原始创新产品开发都面临着严重不足的问题。无论是已上市销售的还是正在注册研究的抗体药物，国内企业在抗体靶标和新抗体基因发现、新抗体药物创制、产品种类等诸多方面都亟待提升。/pp style="text-align: center "img title="005.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201801/insimg/35b205bb-cafe-410d-88f4-0541881c8198.jpg"//pp style="text-align: center "strongCustom mAb/strong/pp　　要实现抗体药物产业发展的突破，应该结合抗体药物相关的产学研医用现状资源禀赋及医疗服务的需求，选定未来重点发展领域及其对应的产品方向，重点支持和引导相关领域目标性抗体药物产品的开发。加强研发平台建设、提升抗体药物自主研发、CRO、CMO及产业化水平，达到与欧美先进国家同步，打破国外医药巨头对我国抗体药物的市场垄断，增强我国在国际抗体药物领域的综合竞争优势。/p

p　　3月15日，记者从公安部昆明警犬基地和北京希诺谷生物科技有限公司获悉，全国首只克隆警犬“昆勋”从2018年12月19日出生至今，各项健康指标正常，近日已运抵昆明进行专业训练。/pp　　克隆犬“昆勋”是一头雌性狼青品系昆明犬，其体细胞供体犬是战功赫赫的一级功勋犬“化煌马”。经第三方机构公安部南昌警犬基地亲缘鉴定，克隆犬“昆勋”的DNA与供体犬“化煌马”有99.9%以上相似度，证实二者存在同一性关系，strong这标志着我国首次实现了警用工作犬的克隆。/strong/pp　　该成果来源于公安部重点研究计划项目“功勋昆明犬的克隆”，由公安部昆明警犬基地牵头，云南农业大学和北京希诺谷生物科技有限公司合作开展研究，strong目的是利用体细胞克隆技术培育警用性能优异的工作犬，大大缩短优秀工作犬的培育时间，提升优良警犬的繁育效率/strong。/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201903/uepic/61c7a691-0a47-4aea-bf99-e92baff96975.jpg" title="00.jpg" alt="00.jpg"//pp style="text-align: center "strong图为两个月大的克隆警犬“昆勋”与实验工作人员嬉闹/strongbr//p

安捷伦科技公司推出创新型克隆工具包 2015 年 2 月 13 日，北京 — 安捷伦科技公司（纽约证交所：A）今日推出了世界首个供分子克隆和 DNA 组装研究人员使用的模块式载体工具包——SureVector。 自 2007 年收购 Stratagene 之后，安捷伦一直是分子生物学工具的领先供应商，也是能够提供一系列分子与合成生物学完整工作流程解决方案产品的少数几家公司之一。 SureVector 利用新一代 DNA 组装技术的效率提供一种基于合成生物学的方法，采用 DNA 小片段创建载体，这些 DNA 片段能够使所创建的载体在多种细胞类型中发挥作用。 安捷伦诊断和基因组学事业部总裁 Jacob Thaysen 表示：“SureVector 使生物学家可以快速、高效、可靠地利用标准组件构建定制载体（细胞内可独立进行复制的小 DNA 分子），它将改变人们看待并进行分子克隆的方式。” 依赖服务供应商创建定制载体的实验室往往会支付高昂的单位成本，还必须忍受漫长的交付周期。另一种选择是单独订购 DNA 片段和组装酶，但这会使实验室对未经验证的 DNA/酶组合花费大量精力，可能还需要进行大量故障排除工作。 另一方面，安捷伦通过 SureVector 提供了一系列经广泛验证的标准部件，可组装为数千种涵盖绝大部分市售载体的组合。 “因此，实验室将能够在一天之内设计、创建并使用一个全新的定制载体，而非目前通常需要的两周时间。”Thaysen 说道，“更重要的是，SureVector 能以不足定制载体平均单价三分之一的价格提供非凡的灵活性。” 这款新产品作为安捷伦顶尖合成生物学产品线中的一部分，其中既包括最高保真的 DNA 合成平台，又包括了质谱系统等先进检测仪器。SureVector 是继 QuikChange HT 和 SureGuide CRISPR/Cas 系统之后分子和合成生物学领域一系列新一代工具中的最新成员。 关于安捷伦科技公司 安捷伦科技公司（纽约证交所：A）是生命科学、诊断和应用化学市场领域的全球领导者，是致力打造美好世界的顶级实验室合作伙伴。安捷伦与全球 100 多个国家的客户进行合作，提供仪器、软件、服务和消耗品，产品可覆盖到整个实验室工作流程。在 2014 财年，安捷伦的净收入为 40 亿美元。全球员工数约为 12000 人。如需了解安捷伦科技公司的详细信息，请访问 www.agilent.com。 编者注：更多有关安捷伦科技公司的技术、企业社会责任和行政新闻，请访问安捷伦新闻网站：www.agilent.com.cn/go/news。

近年来，随着单细胞组学、单细胞克隆研究的持续走热、循环肿瘤细胞研究的不断深入，如何高效、准确地分选单细胞成为研究工作中的桎梏。作为单细胞分选与培养领域领先者，英国iotaSciences公司推出了单细胞可视化分选培养系统-isoCell，不仅确保分选所得的样品中只有单个单细胞，分离效率高达100%，更进一步实现了将挑选出的单个细胞自动化地、直接地培养成单克隆细胞系，且分选与培养过程全程可验证、可追踪，保证每一个单克隆细胞系均来自单细胞。Quantum Design中国作为iotaSciences公司的战略合作伙伴进一步将单细胞可视化分选培养系统引进中国，为中国研究人员提供可靠且功能强大的单细胞分选与培养技术和解决方案。 单细胞可视化分选培养系统-isoCell iotaSciences公司特有的网格式单细胞腔室技术（GRID技术）是单细胞可视化分选培养系统-isoCell自动化分离和培养单细胞解决方案的核心。该技术每个腔室尺寸微小、光学清晰度卓越且无边缘效应（如下图所示），可以清晰地查看腔室内的细胞数量与形态。设备创新性的将GRID技术与可视化分选相结合，确定腔室内只有单个细胞，通过自动化地微流控技术从GRID腔室挑选出单个细胞用于下游应用，也可以在GRID腔室内将单个细胞直接培养成单细胞系，单克隆细胞系成活率高。 单细胞的分选与培养操作流程高度自动化保证了单细胞的高活性与单克隆细胞系的高成活率，且全流程可视化监控确保了每一个单克隆细胞系均来自单个细胞。单细胞可视化分选培养系统-isoCell的优势：☛ 全自动化流程☛ 操作条件温和，对单细胞无损伤☛ 全培养、分析流程可追踪☛ 单细胞分离效率高达100%☛ 单克隆细胞系构建成活率高☛ 直接转移到PCR管或96孔板☛ 结构紧凑，体积小 文献举例： 单细胞可视化分选培养系统-isoCell已在Cell、Advanced Science、Small Methods、Nature Communications 等知名期刊发表多篇文章，如下摘引了近年三篇具有代表性的文献和大家分享。 Soitu C, Stovall‐Kurtz N, Deroy C, et al. Jet‐Printing Microfluidic Devices on Demand[J]. Advanced Science, 2020, 7(23): 2001854.Gangoso E, Southgate B, Bradley L, et al. Glioblastomas acquire myeloid-affiliated transcriptional programs via epigenetic immunoediting to elicit immune evasion[J]. Cell, 2021, 184(9): 2454-2470. e26.Deroy C, Nebuloni F, Cook P R, et al. Microfluidics on Standard Petri Dishes for Bioscientists[J]. Small Methods, 2021, 5(11): 2100724.Deroy C, Wheeler J H R, Rumianek A N, et al. Reconfigurable microfluidic circuits for isolating and retrieving cells of interest[J]. ACS Applied Materials & Interfaces, 2022, 14(22): 25209-25219.Oliveira N M, Wheeler J H R, Deroy C, et al. Suicidal chemotaxis in bacteria[J]. Nature Communications, 2022, 13(1): 7608.样机体验： 为更好地服务中国科研工作者，Quantum Design 中国也建立了样机演示实验室，将为大家提供为专业的售前、销售、售后技术支持，欢迎各位老师垂询！用户名单 用户评价路易莎埃姆斯，研究科学家：The Native Antigen Company（LGC 临床诊断集团旗下公司）”使用 isoCell 进行单细胞克隆工作从一开始就简单可靠，并且已无缝地融入我们的流程中。 该程序对细胞很温和，我们看到非常好的存活率，可以筛选大量克隆。 我们收到的客户服务是优质的。“

p来自Postnova Analytics英国实验室的讯息：/pp　　strongPostnova Analytics发布了一份新海报，比较了两种用于测定单克隆抗体物理化学及生物物理学性质的测试方法——电场流及非对称场流分离色谱法(EAF4-Electrical Asymmetrical Flow Field Flow Fractionation)和体积排阻色谱法(SEC-Size Exclusion Chromatography)的适用性。/strong/pp style="text-align: center "strongimg title="复杂单克隆抗体的对比分析.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201805/insimg/c124cda4-465c-4088-99f8-7208b46db509.jpg"//strong/pp　　据美国国家标准与技术研究院(NIST-U.S. National Institute of Standards and Technology)的工作所述，一种参比单克隆抗体(RM 8671 mAb)，被用于比较EAF4-UV-MALS(多重散射聚焦系统Multi Astigmatism Lens System)与SEC-UV-MALS之间分离量化、聚合量化及恢复参数的差异。NIST的这种mAb为治疗用蛋白质表征这一新技术的发展提供了一种代表性的检测分子。/pp　　该海报阐述了EAF4模组如何将抗体及蛋白质分子大小与表面电荷特性(电泳迁移率)的同时测量变为可能。FFF(场流分离色谱Field Flow Fractionation)系统测量显示蛋白质/抗体的聚集只占注入总量的10%，且无聚集体被SEC检测到。研究人员总结到，FFF的开放通道设计会顾及相比SEC更好的注入物的复原，这对于追求量化少量聚集体而言至关重要。/pp　　Postnova Analytics的EAF4技术独创性地将电场流分离色谱和非对称场流分离色谱的原理融合在同一系统中。在EAF2000系统中，电场流和交叉场流被同时应用于FFF通道，通过粒子不同的电泳迁移率，使得按粒子大小与电荷进行色谱分离成为可能。这两种强大分离技术在一个单独平台上的结合，为表征复杂的蛋白质、抗体、病毒，以及环境和带电纳米粒子或高分子打开了大门，而其他技术已证明了这一问题是多么棘手。/p

p　　拔根汗毛，吹口气，就能变出一大堆小猴子。如今，“齐天大圣”孙悟空的这项绝活，真的成为了现实。/pp　　最近，在中国科学院神经科学研究所非人灵长类研究平台出生的两个猕猴宝宝“萌”化了所有人，它们时而一起嬉笑打闹，时而依偎着自己心爱的“Hello Kitty”毛绒玩具，时而瞪着大大的眼睛，好奇地望着这个世界。/pp style="text-align: center "img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201801/noimg/7696dbb3-c7ab-4fc7-bc3d-a18b33961f3c.jpg" title="中华.jpg"//pp style="text-align: center "span style="color: rgb(0, 112, 192) "“中中”和“华华”/span/pp　　这两个小猴子的“父母”，是中科院神经科学研究所、脑科学与智能技术卓越中心研究团队。经过五年不懈努力，他们在国际上首次实现了非人灵长类动物的体细胞克隆。1月25日在线出版的《细胞》杂志以封面文章形式发表了这项成果。/pp　　这两只名叫“中中”和“华华”的小家伙，也在一夜之间，成为世界上最珍贵的一对小猕猴。/pp　strong　克隆猴为何这么难?/strong/pp　　自从1997年“多莉羊”体细胞克隆成功后，人类就打开了一扇新的窗户。/pp　　20年间，许多哺乳类动物的体细胞克隆相继获得成功，不仅诞生出马、牛、羊、猪和骆驼等大型家畜，还诞生了小鼠、大鼠、兔、猫等多种实验动物。/pp　　然而，与人类最为相近的非人灵长类动物的体细胞克隆，却一直没有得到解决，成为世界性难题。美国、中国、德国、日本、新加坡和韩国等多家科研机构在此方面进行不断探索和尝试，但始终未能成功。/pp　　“一个主要的限制因素，是供体细胞核在受体卵母细胞中的不完全重编程，导致胚胎发育率低。”文章通讯作者、中科院神经科学研究所非人灵长类研究平台主任孙强说，“另外，非人灵长类动物胚胎的操作技术不完善，这些都影响了实验的成功。”/pp　　胚胎操作的一个必要步骤是给卵母细胞去核。但与其他动物不同的是，猴子的卵母细胞不透明，因此去核操作非常困难。/pp　　科研人员想出了使用偏振光的方式来给细胞“打光”，但为了尽可能减少对细胞的影响，操作必须在极短时间内完成。/pp　　为此，文章第一作者、中科院神经科学研究所非人灵长类研究平台博士后刘真花了大量的时间，去训练这项技术，最终实现了在10秒内精准完成体细胞核移植的显微操作。/pp　　同时，科研人员不断尝试各种实验方法，通过表观遗传修饰促进体细胞核重编程，显著提高了体细胞克隆胚胎的囊胚质量和代孕猴的怀孕率。/pp　　2017年11月27日，世界上首个体细胞克隆猴“中中”在中科院神经科学研究所、脑科学与智能技术卓越创新中心非人灵长类平台诞生 12月5日，“中中”的妹妹“华华”也顺利诞生。/pp　　strong真正有用的动物模型/strong/pp　　体细胞克隆猴是在中科院战略性先导科技专项“脑功能联结图谱与类脑智能研究”的支持下，完全由中科院团队独立完成的国际重大突破。/pp　　“这个成果真正实现了生命科学领域的弯道超车，意义重大。”中科院院长白春礼评价称，该成果标志着中国率先开启了以体细胞克隆猴作为实验动物模型的新时代，实现了我国在非人灵长类研究领域由国际“并跑”到“领跑”的转变。/pp　　体细胞克隆猴的成功，为动物模型家族再添“新成员”。/pp　　当前，药物研发通用的动物模型是小鼠。但小鼠与人类相差甚远，药物研发人员在小鼠模型上花费了巨大资源，但筛选到的候选药物用在病人身上，却大都无效，或有不可接受的副作用，这使得诸如阿尔茨海默病、自闭症等脑疾病，以及免疫缺陷、肿瘤、代谢性疾病等不能得到有效治疗。/pp　　这让非人灵长类动物模型成为生命科学研究和人类疾病研究的急需。/pp　　因此，除了基础研究上的重大意义外，利用体细胞克隆技术制作脑疾病模型猴，为人类社会面临的重大脑疾病的机理研究、干预、诊治带来了前所未有的光明前景。/pp　　“这项成果使猕猴有望成为真正有用的动物模型。”中科院院士、美国科学院院士、中科院神经科学研究所所长、脑智卓越中心主任蒲慕明说。/pp　　白春礼也相信，体细胞克隆猴的成功，以及未来基于体细胞克隆猴的疾病模型的创建，将有效缩短药物研发周期，提高药物研发成功率，使我国率先发展出基于非人灵长类疾病动物模型的全新医药研发产业链，有力推动我国新药创制与研发，助力“健康中国2030”目标实现。/pp　　strong伦理问题?不存在的!/strong/pp　　两只小猴子目前正在实验室里健康活泼地生活着，但人们的疑问也随之而来：克隆猴出来了，克隆人还会远吗?/pp　　对于这个公众高度关切的问题，蒲慕明明确表示，中科院做这项工作的目的，不是为了克隆人，而是为了提高人类健康、研究脑科学基本问题服务的。/pp　　相反，这项工作还可能使一些伦理争议得到化解。/pp　　目前，中国每年出口数万只猕猴，主要用于药物筛选。在蒲慕明看来，这么大批量的动物实验，在伦理方面是有问题的。“我们做这项工作，就是要解决这一伦理问题。”/pp　　有了体细胞克隆猴技术，人们就能使用体细胞在体外有效地做基因编辑，准确地筛选基因型相同的体细胞，产生基因型完全相同的大批胚胎，用母猴载体怀孕出生一批基因编辑和遗传背景相同的猴群。/pp　　也就是说，中科院神经科学研究所的这项技术，让人们在一年内就能制备大批遗传背景相同的模型猴，大大减少了个体差异对实验的干扰。这样，只要使用很少数量的克隆猴，就能够完成很有效的筛选。/pp　　“任何科学发现都是双刃剑，既有可能带来巨大的进步，也有可能造成一系列危机，核能、基因编辑都是典型的例子。”在蒲慕明看来，生命科学的伦理问题不仅仅是科学家需要注意的，更需要政府部门以及整个社会大众共同参与，通过立规、立法等方式，来约束人们的行为，做出正确的决策。/pp　　“对新技术，我们要重视，但不要害怕。”他最后补充说。/p

p style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　strong仪器信息网讯 /strong沃特世宣布推出一种新的阳离子交换色谱柱产品线，该种专门的消耗品可以简化和改进单克隆抗体(mAb)疗法的表征和检测。新的BioResolve SCX mAb色谱柱和Vanguard FIT管状柱技术，连同一套补充消耗品，使基于世界卫生组织、美国食品药品监督管理局和人用药物注册技术要求国际协调会(ICH)要求的、确认生物制剂和生物仿制药在发现、开发和制造应用中的有效性和安全性过程中的mAb电荷变异分析成为可能。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　“随着这些产品的推出，我们正在采取一种全面的方法来进行单克隆抗体分析，并将其向前推进了一大步。科学家们现在有了一套完整的工具来分析单克隆抗体的电荷变化，这将使他们对单克隆抗体以及单克隆抗体的结构和功能之间的关系有一个更完整和详细的了解，”沃特世公司化学品副总裁Erin Chambers博士说。“我们的目标是帮助简化分析流程，加快候选药物的开发，以便更快地为患者提供所需的治疗方法。”/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/032f7e7c-e24f-4ee5-bf7a-eece881b559c.jpg" title="BioResolve_SCX_Family.jpg" alt="BioResolve_SCX_Family.jpg"//pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　BioResolve SCX MAB色谱柱包含一种创新的强阳离子交换剂，该交换剂基于一种新的聚合物成分、亲水性涂层和多组分表面化学试剂，所有这些都是在沃特世的化学工厂合成的。基础材料由三微米无孔颗粒组成，以实现最佳扩散动力学、耐高压能力和与HPLC、UHPLC和UPLC 方法的兼容性。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　这些色谱柱还配备了首创的Vanguard全集成技术(FIT)，可防止微粒和其他污染物被带到色谱柱上，从而延长其使用寿命并降低每次分析成本，同时不会影响分离的质量。 BioResolve SCX mAb色谱柱和Vanguard FIT管状柱的每批材料都经过了专门的质量控制测试，采用了一种新的市售单克隆抗体电荷变体标准，该标准来自美国国家科学技术研究院参考材料8671(即人源化IgG1κ)，以帮助确保新产品的批次间一致性。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　当与配备Auto?Blend PLUS技术的沃特世液相色谱系统配合使用时，科学家们可以利用预先配置的Empower 软件方法，自动混合多达四种溶剂的任意组合或比例，并编程确定pH和离子强度。这将显着减少了人为错误，并消除了手动准备缓冲流动相的任务。 沃特世还专门为那些寻找mAb电荷变异分析整体解决方案的科学家配制了新的BioResolve SCX pH缓冲浓缩液，并推荐了梯度分离条件。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　新型BioResolve SCX单克隆抗体色谱柱和消耗品的引入，以及最近推出的BioAccord 系统，加强了沃特世对创新的承诺，并满足了生物制药行业不断变化的需求。/ppbr//p

近期，Analytical Chemistry杂志上发表的一篇文章提出了一项创新性的用于抗体药物电荷异质性表征的分析技术——icIEF-MS。icIEF-MS联用技术平台与传统的SCX-MS对蛋白异质性进行交叉验证，而且更高的灵敏度、更出色的重复性和更低的样品残留，这将为蛋白药物电荷异质性表征提供一种新的策略。 原文见：Anal. Chem. 2023, 95, 4, 2548–2560 蛋白质的电荷异质性是由多种复杂机制所共同作用形成，包括细胞过程、化学降解和制造过程中的生产条件。这些因素中的许多修饰会引起蛋白质等电点 (pI) 值的变化，例如翻译后修饰（PTMs) 的发生，包括 c 端赖氨酸缺失、焦谷氨酸形成、脱酰胺化、唾液酸化和糖基化等，都会导致电荷变异体的形成，从而对药物的稳定性和溶解度产生重要影响。因此，对电荷异质性的可靠表征是评估关键质量属性 (CQA) 的重要步骤，也是确保治疗性mAbs在整个临床和商业开发期间保持一致质量的关键所在。 目前，全柱成像毛细管等电聚焦 (icIEF) 和离子交换色谱 (IEX) 是治疗性mAbs在研发和质量控制中进行电荷异质性分析的两种常用技术。然而，传统的cIEF-MS联用技术在研究蛋白质电荷变异体方面还存在着许多缺陷，如重复性差、操作复杂以及与MS离子源不兼容等问题。 CEInfinite icIEF分析兼制备型全柱成像毛细管电泳系统 基于一体化的icIEF-MS技术平台，使用加拿大品牌艾易尔斯生物科技（AES）开发的分析与制备一体的CEInfinte系统，可实现快速的icIEF分离，并配合使用高分辨率的Thermo Q-Exactive Plus质谱平台对蛋白质的电荷变异体进行鉴定。icIEF分离部分采用了与MS兼容的两性电解质，无需使用甲基纤维素和尿素作为添加的的涂层毛细管柱。通过创新的纳流ESI接口，检测蛋白质药物电荷变异的灵敏度和重复性得到了极大提高，整个icIEF-HRMS分析可在25分钟内完成，比传统cIEF-MS所需的60分钟更加迅速。此外，该平台还可以灵活切换到icIEF馏分收集模式，对蛋白质的电荷变异体组分进行组分收集，并进行深入表征，包括LC-MS肽图分析、IEX-MS 完整蛋白分析、生物相互作用等研究。整合icIEF-MS和基于icIEF的馏分收集将在mAb电荷异质性表征的全新MS策略。图1 icIEF-MS的原理图 利用该icIEF-MS系统对9种不同的治疗性mAb的电荷变异体进行表征，并对icIEF-MS的方法进行了系统验证。同时，我们还使用SCX-MS分析了所研究mAb的电荷异质性。两种手段的分析结果表明，icIEF在分离分辨率、灵敏度、低残留效应和精确分子量测量精度等方面都具有明显优势。我们相信，结合传统的IEC-MS技术平，台icIEF-MS将成为电荷异质性表征领域中的一项重要技术，为研究人员提供更加快速、准确、灵敏和高效的分析手段。 表1 九种单抗的等电点信息和使用的icIEF试剂● icIEF和SCX分离9种单克隆抗体的性能比较 ●在最优化条件下，通过icIEF-UV和SCX-UV分别分离了9种单克隆抗体，并进行了性能比较。两种分离工具均在10分钟内完成了高通量分离，所研究的单克隆抗体获得了相同的峰序列。在icIEF分离中，首先洗脱的是酸性最强的异质体，其次是主峰和碱性异质体，这与SCX分离的顺序相同。然而，对于大多数异质性mAb混合物，icIEF的分离效率显著高于SCX，这是因为iCIEF基于pI差异进行分离，微小pI差异的蛋白质异质体就可以得到高分离度的分离。在某些情况下，如英夫利西单抗，通过icIEF可以实现4种电荷变异体和一个主成分的基线分离，但使用SCX的分离效率却不佳。类似地，对于帕博利珠单抗、阿替利珠单抗和地诺单抗，使用icIEF可以很好地检测出所有电荷变异体；然而，在使用SCX时，一些电荷变体却丢失了。尽管icIEF由于不同的分离机制而比SCX具有更宽的峰宽，但由于其pI的微小差异，icIEF表现出了更好的分离性能。图2 九种mAb的icIEF-UV图谱和SCX-UV谱图● icIEF和SCX串联MS的比较 ●如图3所示，icIEF-S和SCX-MS都可以用于鉴定阿替利珠单抗的电荷变异体。在SCX分离中，MS检测到的酸碱峰顺序与UV一致。而在icIEF分离中，碱性峰首先被纳流泵推向ESI源，因此MS检测中的酸碱峰顺序与UV检测的顺序相反。另一个显著的区别是，由于SCX-MS使用更高的流速，从UV到MS检测，柱外的峰展宽程度都较轻，这意味着UV峰形状与MS峰形状更一致。相比之下，icIEF-MS的较低迁移流速意味着柱外效应对icIEF分离的影响更大，从UV检测到MS检测，峰呈现更为明显的展宽，尤其是主峰，强度更高，并与稍低pI的酸性峰部分重叠。为了进一步提高icIEF-MS的分离度以克服峰展宽造成的分辨率损失，可以使用窄pH的两性电解质、新型的涂层分离毛细管柱和纳流ESI源。图3 以阿替利珠单抗为研究对象，比较icIEF-MS 和 SCX-MS分离效果：UV谱图(左)和MS-TIC谱图(右)。 在分析单克隆抗体时，icIEF-MS的信号响应比SCX-MS高。虽然icIEF-MS的样品载量只有SCX-MS的十分之一，但如图3所示。icIEF-QE Plus MS的TIC强度与SCX-Orbitrap Exploris 240相同（Orbitrap Exploris 240比QE Plus MS具有更高的检测灵敏度）。icIEF-MS比SCX-MS灵敏度高的原因有两个：首先，icIEF-MS的纳流流速（小于5μL/min）远低于SCX-MS的流速（300 μL/min），这导致icIEF-MS的去溶剂化效率和离子化效率较高，从而极大的提高了MS灵敏度和动态范围，即使样品量低至1 ng。此外，在icIEF-MS中，补偿液采用含0.5% FA的50%乙腈，流速为5 μL/min，纳流泵速为50-100 nL/min。在此比例下，进入MS的最终流动相处于酸性条件，而文章中用于SCX-MS的洗脱流动相的pH接近mAb的pI点 (pH 7~10)，洗脱是在中性碱性条件下进行的，而在中性/碱性条件下，蛋白质与质子结合的能力比酸性条件下弱得多。因此，与SCX-MS相比，icIEF-MS在较低的电荷状态下具有更多的电荷数量，从而增加了电离和质谱效率。 总之，icIEF和SCX是两种有效的单克隆抗体分离工具，在高通量条件下分离效率都很高。然而，在icIEF-MS中，由于低迁移流速和酸性流动相的使用，其灵敏度比SCX-MS更高。这些结果表明，icIEF-MS是一种具有优越性能的单克隆抗体分离和表征方法，可以应用于生物制药的研究发现和质量控制。(A)(D) 图4 阿替利珠单抗的高灵敏度icIEF-MS表征分析:不同浓度(0.0 5 ~ 2 mg/mL ) 阿替利珠单抗(A) 的UV谱图，TIC (B) 和 MS(C )谱均为0.05 mg/mL；电荷变异体的浓度与MS响应强度的关系如图(D)所示。 图4展示了icIEF-QE Plus MS 在不同浓度阿替利珠单抗的结果，见图4。从酸性变异体和碱性变异体的 TIC和MS谱图得出，即使在 0.05 mg/ mL的最低浓度 (3倍S/N的UV信号)下，MS仍然检测到所有电荷变异体的明显信号。而SCX-QE Plus MS不能达到0.05 mg/ml的检出限。而在已报道的传统cIEF-MS研究中，典型的蛋白质分析浓度为 0.1~ 2 mg/mL。● icIEF-MS和SCX-MS的质量准确度比较 ●icIEF-MS 不仅在灵敏度上表现更优，而且在质量准确度方面也优于 SCX-MS。质量准确度是 MS 检测的一个关键指标，这取决于 MS 的分辨率。可达到的质量分辨率不仅取决于仪器的质量分辨率极限，还受电离过程的影响。加合物会使离子信号变宽，因为它们不仅来自于多重质子化的分析物，还来自于携带加合物的分析物。因此，更多的加合物会导致较差的分辨率和较大的质量误差（即较差的精度）。虽然源内碰撞诱导裂解（CID）可以减少加合物的形成，但并不是所有加合物都可以被去除。如表2所示，尽管使用了110 V 的源内CID值，但SCX-MS 获得的质谱峰仍然比 icIEF-MS 获得的质谱峰宽，导致 SCX-MS 主成分的 MW 偏差（5.4 ppm）大于 icIEF-MS（2.7 ppm）。另一个例子是贝伐珠单抗，在没有脱盐预处理的情况下，SCX-MS 对贝伐珠单抗的 MW 偏差高达33.9 ppm。脱盐后进行分析，贝伐珠单抗的偏差降低到12.8 ppm。而 icIEF-MS，由于加合离子形成较少，即使不脱盐，获得的贝伐珠单抗的偏差也仅为9.6 ppm。表2 阿替利珠单抗的电荷变异体的icIEF-MS和SCX-MS分析结果比较● icIEF-MS和SCX-MS的残留效应 ●相比 SCX-MS，icIEF-MS 的残留效应要小得多。在对阿替利珠单抗分析后，icEF-MS 使用含有4% HR 8.5&minus 9.5 两性电解质的水溶液作为空白样本，而 SCX-MS 使用水作为空白样本。在 icIEF-UV 检测中未观察到明显信号，而 SCX-UV 在阿替利珠单抗峰值处检测到了信号残留。SCX-TIC 和 icIEF-TIC 中有信号峰相对明显，保留时间分别为6.82和21.5 min，。从这两个信号峰提取的 MS 数据通过去卷积得出，SCX-TIC检测到的残余信号是阿替利珠单抗，而 icIEF-TIC 检测到的信号只是两性电解质，这意味着 icIEF-MS 中没有检测到残余分析信号。低残留率使得 icIEF-MS 对微量蛋白电荷变异体的检测更加准确和可靠，避免了假阳性结果。图5 icIEF-MS和SCX-MS的残留效应的比较：SCX-MS (A-C)显示残留阿替利珠单抗信号，而icIEF (D-F)没有残留分析物信号。如图4和图5所示，观察到1500~2500 m/z 的背景信号，MS信息证实它们不是蛋白质，而是来自两性电解质和溶剂背景，背景离子不干扰mAb电荷变异体的鉴定。 ● icIEF-MS鉴定蛋白质的可重复性 ● 针对阿替利珠单抗电荷变异体进行的重复性考察表明，icIEF-MS 平台对其测定表现出良好的重复性。通过 icIEF-MS 对批间蛋白质样品进行鉴定，所有批间检测到的相同电荷变异的质量偏差都很小（10 ppm），可以保证可靠性和一致性。 图 6 使用阿替利珠单抗进行的icIEF-MS蛋白鉴定的重复性考察（n=5）● 9种mAb的icIEF-MS表征结果 ●表3列出了所有9种mAb的电荷变异体的修饰鉴定结果。酸性变异体的表征比碱性变异体更具挑战性，因为酸性变异体具有更复杂的修饰。虽然这种酸性修饰通常可以通过 pI 来区分，但它们在分子质量上的差异相当小。icIEF在线串联高分辨率质谱可以通过结合完整的蛋白质分子量和测量的pI值来阐明蛋白质的结构信息，为解决酸性电荷变异体的难题提供一个有用的icIEF-MS联用平台。表3 九种单克隆抗体的电荷变异体的iCIEF-MS表征结果在对一系列不同的治疗性单克隆抗体进行电荷变异体表征时，icIEF-MS 和 SCX-MS 可以获得类似的结果。然而，icIEF-MS 在分离分辨率、灵敏度、低残留效应和 MW 测量准确度方面比 SCX-MS 展现出更多的优势。因此，将 icIEF-HRMS 分析与更常见的 SCX-MS 相结合，通过正交的验证，可以为分离和鉴别蛋白电荷变异体提供更加全面的分析策略。 如需进一步了解相关信息，可联系我们获取更多文献。艾易尔斯生物科技（AES）致力于全柱成像毛细管等电聚焦技术（icIEF）技术与质谱的联用、馏分制备以及高分辨分离等领域。

单克隆抗体药物是利用淋巴细胞杂交瘤或基因工程技术制备得到的药物，是生物制药领域的重要组成部分。在抗肿瘤方面，单克隆抗体药物通过干预肿瘤发生发展中的信号通路，或激活机体对肿瘤的免疫反应，实现对肿瘤的靶向杀伤作用。与传统化疗药物相比，单克隆抗体药物表现出专一性强、疗效显著的特点，因此在肿瘤治疗中起到重要作用。此外，单克隆抗体药物还用于自身免疫、心血管、感染等疾病的治疗。据有关资料显示，2015 年全球单克隆抗体药物的销售额已达到 980 亿美元左右，而同年中国的单抗药物市场已经达到了 72 亿人民币，估计2020 年有望达到 200 亿。 据美国 FDA 规定，对人体使用的单克隆抗体药物，其临床前及临床试验中需进行药代动力学研究，包括药物血浆浓度变化、体内分布和清除率等。然而，生物基质中单克隆抗体药物的定量分析面临巨大挑战。如今对抗体药物的检测主要是采用 ELISA 试剂盒完成，但 ELISA 方法的缺点主要有开发时间长、准确性一般、假阳性率高、线性范围窄。LC-MS/MS 方法可以很好地解决 ELISA 所存在的不足，而且灵敏度也满足实际检测需求，因此被越来越多地应用于抗体药物的检测。但是其前处理方法不成熟常常导致选择性和重现性不佳。 纳米表面分子导向限制性酶解（nSMOL, nano-Surface and Molecular Orientation Limited Proteolysis）技术通过对抗体药物 Fab 区域选择性酶解，获得靶标蛋白特异性肽段，之后通过LC-MS/MS 方法对特异性肽段进行检测，从而实现对抗体药物的定量分析。nSMOL 技术能确保获得靶标蛋白特异性肽段，同时尽可能降低样品的复杂程度，从而表现出良好的选择性和重现性。 岛津公司作为全球著名的分析仪器综合生产厂商，始终秉承创业宗旨“以科学技术向社会做贡献”，不断钻研领先时代、满足社会需求的科学技术。为了迎合客户需求和行业发展趋势，岛津公司本应用文集，汇总了当前应用 nSMOL 技术在国际期刊上发表的研究论文，以及岛津公司基于 nSMOL 技术开发的应用文章。主要内容包括：1. 基于nSMOL技术发表的SCI论文Selective detection of complementarity-determining regions of monoclonal antibody by limiting protease access to the substrate: nanosurface and molecular-orientation limited proteolysis The development of the validated LCMS bioanalysis of trastuzumab in human plasma using a selective detection method for complementarity determining regions of monoclonalantibodies: nano-surface and molecular orientation limited (nSMOL) proteolysis Fully validated LCMS bioanalysis of Bevacizumab in human plasma using nano-surfaceand molecular-orientation limited (nSMOL) proteolysis Application of nano-surface and molecular-orientation limited proteolysis to LC–MS bioanalysis of cetuximab Validated LC–MS/MS analysis of immune checkpoint inhibitor Nivolumab in human plasma using a Fab peptide-selective quantitation method: nano-surface and molecular-orientation limited (nSMOL) proteolysis Validated LC/MS Bioanalysis of Rituximab CDR Peptides Using Nanosurface and Molecular-Orientation Limited (nSMOL) Proteolysis. 2. 岛津中国分析中心应用报告nSMOL前处理技术结合Skyline软件加速抗体药物LCMS分析方法开发 基于nSMOL技术和Skyline软件的曲妥珠单抗LC-MS/MS定量分析方法开发 nSMOL技术结合Skyline软件对贝伐珠单抗药物的UHPLC-MS/MS定量方法开发 采用nSMOL试剂盒建立人血浆中贝伐珠单抗定量分析方法的重现性验证 nSMOL技术不同酶解缓冲体系对曲妥珠单抗灵敏度的影响 有关详情，请您向“岛津全球应用技术开发支持中心”咨询。咨询电话：021-22013542 期待我们的工作会给您带来有益的帮助! 关于岛津 岛津企业管理（中国）有限公司是（株）岛津制作所于1999年100%出资，在中国设立的现地法人公司，在中国全境拥有13个分公司，事业规模不断扩大。其下设有北京、上海、广州、沈阳、成都分析中心，并拥有覆盖全国30个省的销售代理商网络以及60多个技术服务站，已构筑起为广大用户提供良好服务的完整体系。本公司以“为了人类和地球的健康”为经营理念，始终致力于为用户提供更加先进的产品和更加满意的服务，为中国社会的进步贡献力量。更多信息请关注岛津公司网站www.shimadzu.com.cn/an/。岛津官方微博地址http://weibo.com/chinashimadzu。岛津微信平台

克隆母牛后代产的牛奶秘密、非法地进入英国市场，更可怕的是，这种牛奶上没有作任何标记，蒙在鼓里的消费者根本无法辨认，很容易就会误将其当做普通牛奶买回家。英国食物标准局8月2日表示将会调查此事件，并称销售克隆牛所生产的牛奶是违法行为。　　英国克隆牛奶非法流入市场 消费者愤怒毫不知情　　克隆牛奶 英牧场主饲养克隆母牛　　据英国《每日邮报》报道，一名英国牧场主已经承认，他饲养的一头克隆母牛的后代产下的牛奶被偷偷地拿到市场上销售。该牧场主表示，他选择秘而不宣是因为公众不认可克隆技术，消费者一旦知情就不会再购买他们的牛奶。　　据悉，用于生产充满争议的“克隆牛奶”的克隆牛最开始是在美国被培育的，它们由克隆荷兰奶牛的卵子与普通公牛的精子相结合，产生的胚胎被冷冻后送往英国，并在英国被植入母牛体内，由此产生的后代可以用于大量产奶和繁殖的目的。　　据报道，英国食品标准局此前进行的一项研究发现，英国公众普遍反对克隆食品。　　法律规定：销售“克隆牛奶”非法　　根据英国食品标准局(FSA)的规定，产自克隆动物的食品在销售前都必须得到批准。　　FSA发言人说，自2007年，FSA就立法规定，克隆动物及其后代的肉类和奶类产品都被视为新资源产品，必须得到有关当局检验，获政府许可才能面市。他说，到目前为止，FSA未收到任何此类申请，也没作出任何此类授权，因此，这种牛奶的销售，被视为非法。　　上个月，欧洲议会议员投票支持一项立法法案，禁止克隆动物的肉类食品和其他制品进入欧洲的食品供应链。这项法案有望在今年9月正式成为欧盟法律。与欧洲相比，美国对克隆动物食品的态度比较宽松。美国食品与药品管理局曾表示，“克隆牛奶”适于人类饮用。　　是否能喝 英国专家各执一词　　由于这种牛奶并无特别标记，消费者并不知道自己所喝的可能就是“克隆牛奶”。世界农场动物福利协会首席政策顾问彼得史蒂文森表示，“如果‘克隆牛奶’真的进入英国食品市场的话，我会感到非常震惊。若果真如此，表明这个国家的食品生产监管存在严重漏洞。”　　而有的专家则表示，民众无需对克隆食品心存担忧。伦敦玛丽女王大学的遗传学家库兰博士说，只要动物本身是健康的，它产出的奶也应该是健康的。　　我国专家：国内市场目前没卖的　　中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室研究员丁方荣表示，从科学理论角度来讲，“克隆牛奶”适合人饮用，没有问题。因为全世界的克隆牛群体已经很大，克隆奶牛肯定会像普通奶牛一样产奶，因此就催生了“克隆牛奶”进入市场销售的现象。目前我国还没有“克隆牛奶”流入市场。　　克隆食品争议多　　关于克隆动物产的奶或肉是否存在安全问题，科学界一直存在争议。据称，已有证据证明，这些产品可能导致早产、致畸或夭折。　　不少欧洲专家认为，克隆产品尚未发现存在任何食品安全风险。但不少人反对，认为克隆产品可能导致新的疾病由动物传染给人类。英国防止虐待动物协会等大批组织，都反对将克隆动物生产的产品流入食品渠道。一家组织的政策顾问就批评，英国政府早在3年前就已知道克隆牛的存在，却一直没有采取任何措施，确保公众远离这些克隆肉类制品、奶类制品。　　英国食品标准局进行的一项调查发现，民众普遍反对克隆肉类制品、奶类食品进入市场：“大多数人的结论是他们不想吃这种食物。”

据英国《每日邮报》9月16日报道，英国食品标准局15日承认，两年之内克隆动物及其产品将在消费者不知情的情况下遍布英国的超市和农场，但是却无法建立追踪及标注这些克隆动植物食品的有效机制。　　据英国8月5日媒体报道，英国农场主将产自“克隆母牛”的公牛屠宰后暗中销往市场，由于“克隆牛肉”没有通过食用安全检测，消息一经曝光，立即在英国消费者当中引发轩然大波。英国食品标准局随后对此展开调查。　　9月15日英国食品标准局的表态令人震惊，他们承认无法对克隆动物产品的贸易进行制止和规范，其结果就是消费者在不知情的情况下购买了来自克隆动物的肉奶制品。　　苏格兰国家农场联合组织主席麦克莱伦称，“这一问题不只是英国的问题，是个世界范围的问题。”麦克莱伦建议政府修改法律，在无食品安全担忧的情况下，将克隆动物制品合法化。　　英国食品标准局称，克隆动物的后代种群将不断扩大，将很难追踪他们的所在国家和地区，还有他们的数量。　　“克隆并不是转基因，其克隆的产物并没有发生基因序列的变化。”英国国立医学研究院主任罗宾教授指出，“产自克隆奶牛后代的牛奶和牛肉都是正常的。克隆可以提高后代质量，对人体是完全无害的。”事实也表明，目前世界范围内尚未发现因克隆原因而导致的食品安全事件。但是世界农场动物福利协会首席政策顾问彼得说：“现在在没有完全弄清楚克隆动物的肉类是否能食用的情况下，最好的办法是严格控制克隆动物，将其列在监控之内。”　　上世纪90年代疯牛病疫情暴发后，英国人开始小心购买牛肉制品和乳制品，这次虽有专家保证克隆牛后代肉制品“安全”，但不少英国人仍不免为此担心，他们认为克隆动物食品违反了自然法则。

我国的水稻研究已进入了一个全新的领域，目前华大基因农能平台已经完成400多个水稻基因的转基因克隆工作，依托华大基因强大的高通量测序技术，今后将进一步加快水稻转基因育种研究工作。这是记者在6月29日结束的&ldquo 水稻基因组学与农业应用研讨会&rdquo 上获悉的消息。　　作为世界上最早种植水稻的国家，水稻一直在我国的粮食生产中起着举足轻重的作用。　　本次会议邀请了来自中国科学院、中国农业科学院、中国水稻研究所、华中农业大学等国内高校、研究所近百名专家与会。中国水稻研究所钱前教授的报告《超级稻产量等性状基因的精确定位与分子育种》，以近年来水稻育种研究中的热点&ldquo 分子育种&rdquo 为本次研讨会展开了序曲，引起与会专家们的广泛关注。　　华大基因等国内多家单位曾于2002年率先合作完成籼稻基因组框架图与精细图的绘制工作，并在国际着名杂志《科学》发表科学专论。华大基因研究院农能平台的张耕耘博士说，目前华大基因农能平台已经完成400多个水稻基因的转基因克隆工作，依托华大基因强大的高通量测序技术，今后将进一步加快水稻转基因育种研究工作。　　&ldquo 尽管我国的杂交水稻技术目前在国际上处于领先地位，但随着国际育种公司加速基因资源的争夺、新的优质品种不断涌现，如果不加强分子育种技术研究，我们的水稻育种研究将面临被国际水平赶超的危险。&rdquo 华大基因研究院李瑞强博士接受采访时说。

随着生物制药(抗体，蛋白和疫苗等)在新药研发中占据越来越重要的地位，以及细胞株和菌株在生物工业和生物药物生产领域的应用越来越广泛。对哺乳动物细胞系和微生物细胞株筛选和建立的需求越来越多。传统的方法在细胞和微生物克隆的挑选上往往费时费力，而且容易因为人工操作而带来误差，导致重复性低，准确性差。Molecular Devices提供了大规模地对哺乳动物细胞，细菌、真菌、酵母、链霉菌及藻类进行有效地自动化筛选，并对筛选出来的细胞进行后续的生长监控的解决方案。　　秉承着分享的精神，一直致力于将推广和介绍生命科学领域当前最新技术的Molecular Devices，为广大的克隆筛选用户提供一个探讨克隆筛选新技术、分享克隆筛选技术在药物研发和菌株优化的使用经验以及应用技巧的平台，于9月中旬，在上海成功举办了&ldquo 2013 高效克隆筛选用户研讨会&rdquo ，70位克隆筛选领域的专家和学者出席了本次用户会议，会议现场气氛活跃，讨论热烈，互动积极。　　 嘉宾签到　 大会现场　　 Molecular Devices全球副总裁大中华区总经理江滔先生，致欢迎词，并对Molecular Devices公司在生命科学领域以及克隆筛选领域十多年的的发展经验进行了简短的介绍。 台湾工业技术研究院生医与医材研究所，正研究员，周民元博士为大家介绍&ldquo 高产哺乳动物细胞系筛选系统在生物治疗研发中的应用&rdquo 的相关实验和技术　　 中国科学院天津工业生物技术研究所副所长，孙际宾博士，为大家做题目为：认知和发展工业菌株的综合性方法&mdash &mdash 系统生物技术的讲座　　 Molecular Devices公司克隆筛选系统应用科学家，Pallavi Tawde博士，与大家讲解ClonePix 2 & QPix筛选平台的应用及实验技术分享　　 江苏恒瑞医药股份有限公司副总经理陈亮，为大家介绍高通量荧光筛选技术在生物制药中的应用经验。　　 诺和诺德(中国)研究发展中心，高级科学家陈海滨博士，讲解高通量自动化克隆挑选技术在酶定向进化中的应用。　　 Molecular Devices公司克隆筛选系统产品经理黄国庆，为大家介绍ClonePix 2 & QPix筛选技术的核心价值及新产品信息。　　与会专家和学者对此次高效克隆筛选用户大会提供的交流和互动平台表示非常欢迎，也感谢Molecular Devices让他们了解到国内外目前最新的克隆筛选的技术和应用 同时，对Molecular Devices公司的高通量克隆挑选产品有了更为全面和深入的认识，并对应用MD的克隆挑选产品和服务能够成功解决科学研究以及生物药物开发以及筛选中的实际问题充满信心。

项目编号：GZZJ-ZFG-2023074项目名称：华南理工大学全自动微生物克隆筛选系统采购项目预算金额：220.0000000 万元（人民币）最高限价（如有）：220.0000000 万元（人民币）采购需求：包组号序号标的名称数量（单位）简要技术需求或服务要求（具体详见采购需求）最高限价万元（人民币）11全自动微生物克隆筛选系统1套用于获取克隆形态学参数和克隆定位。系统可以根据克隆形态学参数（克隆大小、圆度、纵横比，克隆之间的距离等）对目的克隆的筛选，挑选符合要求的克隆。在工业微生物研究、酶定向进化，蛋白表达，生物燃料，宏基因组学，噬菌体展示技术，肠道微生物，文库筛选管理等方面具有广泛应用。人民币220万元经政府采购管理部门同意，本项目允许采购本国产品或不属于国家法律法规政策明确规定限制的进口产品，具体详见采购需求。本项目采购标的所属行业为：工业合同履行期限：国内供货：在合同签订后（30）天内完成供货、安装和调试并交付用户单位使用。境外货物：办理免税证明后（90）天内。本项目( 不接受 )联合体投标。对本次招标提出询问，请按以下方式联系。1.采购人信息名称：华南理工大学地址：广州市天河区五山路381号联系方式：文老师020-871129622.采购代理机构信息名称：广州中经招标有限公司地址：广州市越秀区寺右一马路18号泰恒大厦14楼1409室联系方式：陈小姐、庄小姐 020-87385151、020-37639369、020-87371812、020-873722963.项目联系方式项目联系人：陈小姐、庄小姐电话：020-87385151

王正敏(资料图)　　近日中科院院士王正敏遭学生王宇澄举报学术抄袭、科研剽窃等。王宇澄称王正敏至少57篇论文涉抄袭，还&ldquo 克隆&rdquo 国外&ldquo 人工耳蜗&rdquo 样机冒充自主研发。央视记者调查发现，王正敏团队以各种名义报项目，仅2012年就获经费4000多万。　　王正敏(卫生部听觉医学重点实验室主任)，耳鼻咽喉-头颈外科学家。复旦大学附属眼耳鼻喉科医院教授，主任医师。2013年11月14日被学生举报，披露其院士评选内幕。 　　■事实+　　学生举报老师或涉利益纠葛　　早在2012年初，王宇澄已向校方提交过举报材料，复旦大学学术规范委员会随即启动调查工作，并于去年8月形成调查报告，同时上报中科院。去年11月，针对王宇澄的举报，复旦大学回应称，经查未发现王正敏存在学术不端，但确有学术不规范之处。　　王宇澄曾是王正敏的学生与亲密助手。学生认为自己在导师评选院士过程中立下汗马功劳，却未获回报。师徒最终反目。&ldquo 我帮他申请上了院士，他却抛弃了我。&rdquo 王宇澄称，王正敏在当选院士后对自己多方为难，导致他在医院难以立足，这是他愤而举报的原因。王正敏的另一位学生用&ldquo 鸡毛蒜皮&rdquo 来形容王宇澄的举报。他始终认为，这只是利益纠葛下的闹剧。(腾讯新闻综合南方周末、中国广播网等报道)　　以下为央视节目文字实录：　　&ldquo 院士造假遭举报&rdquo 事件真相之一 院士遭举报 论文造假专著抄袭　　【导语】　　前不久，复旦大学附属眼耳鼻喉科医院医师王宇澄举报他的导师、中国科学院院士王正敏涉嫌学术抄袭、科研成果剽窃、院士申报材料造假等问题。那么真相到底是什么?记者经过一个多月的明察暗访，发现了举报背后更多鲜为人知的秘密。　　【正文】　　王正敏是复旦大学附属眼耳鼻喉科医院的医生，2005年增选为中国科学院院士。在王正敏申报院士的时候，王宇澄正是他的秘书，目睹了王正敏为当上院士论文造假的全过程。王宇澄说，在王正敏的《中国科学院院士增选候选人论著目录附件材料》中，被列入的271篇论文至少有57篇涉嫌造假。其论文造假的手法之一便是将自己的专著《耳显微外科》一书的内容，拆分成14篇论文，发表在《中国眼耳鼻喉科杂志》上。　　【同期】复旦大学附属眼耳鼻喉科医院医师 王宇澄　　这是他杂志，这是他的书，是一模一样的，第一章耳聋手术，他这个论文也叫耳聋手术，发表过以后呢，他又在2005年报院士的时候把它当做正式研究论文放进去，这样有14篇。　　【正文】　　王宇澄说，王正敏论文造假的手法之二是&ldquo 一稿多投&rdquo ，一篇论文在国内刊物发表了以后，又在国外刊物上发表，这样在计算学术成果时当成两篇学术论文。　　【正文】　　王正敏论文造假的手法之三是，把发表在《中国眼耳鼻喉科杂志》上的非研究性文章，包括&ldquo 发刊词&rdquo 、&ldquo 专家笔谈&rdquo 、&ldquo 我如何做&rdquo 等栏目的小品文，也列入了《中国科学院院士增选候选人论著目录附件材料》。　　【同期】复旦大学附属眼耳鼻喉科医院医师 王宇澄 01：23：35　　这个自己担任主编的中国眼耳鼻科杂志刚刚创刊时候的创刊词，他当做正式的研究性论文 还有选择题，给学生做的选择题，也把它当做研究性论文，还有一些医学史，就是医学的这一段历史的介绍，所以这样的类似的零零总总有43篇。　　【正文】　　王宇澄举报王正敏依靠违规学术成果当选中科院院士的材料里，还有一项最主要的指控是关于著作抄袭，被抄袭者是王正敏的导师，被誉为&ldquo 耳神经科学之父&rdquo 的瑞士苏黎世大学教授乌果.费绪。王宇澄告诉记者，王正敏的第一本专著《耳显微外科》有一百多幅耳部手术的手绘图，和乌果.费绪教授专著中的图片相同，但并未注明图片来源，书中参考文献里也没有提到费绪教授的专著。而王正敏的另外两部专著《颅底外科学》和《王正敏耳显微外科学》，也同样存在类似的抄袭行为。2003年王正敏开始写作他的第三本专著《王正敏耳显微外科学》，王宇澄参与了编辑工作，目睹了王正敏抄袭的全过程。　　【同期】复旦大学附属眼耳鼻喉科医院医师 王宇澄01：43：58　　他让我们拿出了他自己选择的国外很多专著(图片)，然后让我们去把它扫描，扫描过以后把这个英文，就旁边的注解的英文换成中文，这里面大概有两百多幅，但是他参考文献并没有写他的这个书这个图片的来源。　　【正文】　　根据2011年的《复旦大学对学术不端行为的处理规定》，&ldquo 将他人论著中的内容，录作为自己的研究成果而不注明出处&rdquo ，&ldquo 将外文作品的全部或部分翻译或改写作为自己著作的内容，而不加明显的注释的行为等&rdquo 均属于抄袭。《中国科学院院士增选工作中院士候选人行为守则》明文规定，&ldquo 被推荐人附件材料&rdquo 的提供者要对材料的真实性负责，包括不得编造学术、专业技术经历和国籍证明，不得作虚假陈述，不得提供关于研究成果等方面的不实信息。　　&ldquo 院士造假遭举报&rdquo 事件真相之二 &ldquo 克隆&rdquo 国外样机 获国家专利巨额经费　　【导语】　　复旦大学学术规范委员会认定王正敏在申报科学院院士过程中，申报论文材料有&ldquo 不实事求是&rdquo 行为。不过随着记者调查的深入，隐藏在王正敏院士背后更多的秘密被揭开。2003年，王正敏领衔的技术团队成功研发了拥有完全自主知识产权的国产人工耳蜗，那么这种人工耳蜗又是如何被研发出来的呢?　　【正文】　　人工电子耳蜗是近年来迅速发展起来的一项聋人康复新技术，重度听力言语障碍病人植入后，通过言语康复训练以后，可以像正常人一样用听觉和言语与人交流、融入社会。1982 澳大利亚科利尔22型人工耳蜗通过FDA认可，成为世界首先使用的多通道耳蜗装置。王正敏作为中国最早做人工耳蜗植入手术的医生之一，他最早提出了研发中国的人工耳蜗。于是，他找到范宝华，让他想办法得到了澳大利亚科利尔公司的人工耳蜗样机。　　【同期】复旦大学附属眼耳鼻喉科医院 范宝华1 4：00　　澳大利亚产品是我想办法问人家要了一个样机　　记者：澳大利亚人工耳蜗样机　　范宝华：嗯 参考参考　　【正文】　　那么，王正敏研发团队接下来做了什么呢?记者找到了上海听觉医学研究所的高级工程师沈义虎。　　【同期】上海听觉医学研究所高级工程师 沈义虎 沈工1 01：05　　当时买了澳大利亚的产品回来，我亲手给它全部打开，模仿它嘛，芯片破解出来，线圈镀出来 还要反过去做芯片了。　　【正文】　　沈义虎是王正敏研发团队的主要研发人员之一，具体负责破解国外人工耳蜗样机的芯片。这位研发人员承认，他们的人工耳蜗并不是真正意义上的自主研发，而是模仿了澳大利亚科利尔公司的产品。　　【同期】上海听觉医学研究所高级工程师 沈义虎 06：05　　他(王正敏)说完全知识产权谁考核他 有人考核他吗 国内没有人考核他的 自己说了算的 你说那些专家委员会他们知道什么 他们不知道的　　【正文】　　这位研发人员告诉记者，他们通过对科利尔人工耳蜗芯片内部电路的提取、分析、整理，研究他们的芯片技术原理、设计思路、工艺制造和结构机制，然后依葫芦画瓢做出了自己的芯片，这个过程花了近两年的时间。但为了避免科利尔公司找麻烦，他们在外观等和线路等环节做了修改。　　【同期】复旦大学附属眼耳鼻喉科医院 范宝华2 3：15　　65%用他(国外)的技术 35%用自己的　　【正文】　　1997年，王正敏团队研发的&ldquo 多道程控人工耳蜗&rdquo 获得了国家发明专利，2004年，复旦大学附属眼耳鼻喉科医院与上海力声特医学科技有限公司签订技术转让合同，对国产人工耳蜗进行产业化。记者在调查中发现，为了争取国家、省市科研经费，王正敏研发团队和上海力声特医学科技有限公司以各种名义向有关部门申报项目。　　记者了解到，仅在2012年，他们就获得国家级项目两个，获得专项经费4000多万，其中，&ldquo 国产人工耳蜗及临床技术研究项目&rdquo 获得国家卫生部专项科研经费2171万元 &ldquo 上海力声特人工耳蜗建设项目&rdquo 获得国家工信部经费2138万元。　　【&ldquo 院士造假遭举报&rdquo 事件真相之三】&ldquo 仿制品&rdquo 有隐患 志愿者受伤害　　【导语】　　根据规定，人工耳蜗要上市销售，必须先要通过临床试验。2009年，上海力声特公司招募了49名人工耳蜗临床试验志愿者，免费为他们植入了力声特人工耳蜗。4年过去了，人工耳蜗有没有为他们带来&ldquo 福音&rdquo 呢?记者最近对8名志愿者进行了调查，结果出乎意料。　　【正文】　　家住山西朔州的梁珍失业已经快两年了，失业的原因是他的人工耳蜗坏了，耳朵听不见了，这让他非常痛苦。　　【同期】力声特人工耳蜗临床试验志愿者 梁珍　　它坏了之后就像又进了地狱一样，那种感受非常非常的痛苦，只能等待就是特别特别痛苦的一个过程。　　【正文】　　梁珍告诉记者，小时候一场突如其来的大病让他双耳听力严重受损。2009年，他报名参加了力声特人工耳蜗临床试验志愿者，在复旦大学附属眼耳鼻喉科医院免费植入了这家公司生产的人工耳蜗。　　【同期】力声特人工耳蜗临床试验志愿者 梁珍00：21：28　　他们就是说产品终身不会坏的 就是坏了之后终身保修　　【正文】　　但是让梁珍没有想到的是，植入的人工耳蜗仅仅用了2年就坏掉了。 梁珍多次和上海力声特公司联系，希望能重新植入一个新的人工耳蜗，但对方称要等新的产品出来以后才能植入，这一等就是一年多。　　【同期】力声特人工耳蜗临床试验志愿者 梁珍　　他们就开始拖延了，就是说产品需要慢慢的升级，升级了之后自然会通知你的，到后来就没有通知，再后来就联系不上了。　　【正文】　　梁珍说，在植入人工耳蜗以前，他的右耳还有一些残余听力，但是做了手术以后，完全丧失了听力。记者在调查中发现，像梁珍这样的志愿者不在少数，记者通过互联网采访了湖南、河北、上海、新疆等地的7名力声特人工耳蜗志愿者，除了上海的一名志愿者因车祸撞坏了耳蜗以外，其余的6名志愿者人工耳蜗仅使用两年左右就坏了，使用时间最短的只有6个月。记者了解到，目前志愿者仍在等待力声特公司的新产品上市。他们坏掉的耳蜗至今仍残留在耳朵里，身体已经受到不同程度的伤害。　　【同期】河北无极县一志愿者家人　　做完手术效果一直不太很好，后来就一直没戴过，我只是听他说漏电。　　记者：漏电有什么反应吗?　　志愿者家人：漏电舌头发麻啊。　　【正文】　　有志愿者告诉记者，上海力声特公司为了掩盖事实，威胁他们如果把耳蜗坏了的事情说出去，公司将不会给他们植入新的耳蜗，很多志愿者因此不敢向外界透露他们的信息。由于力声特公司对外界封锁了志愿者的信息，记者只采访到了其中的8人，其他志愿者的耳蜗使用情况至今仍是一个谜。力声特人工耳蜗为何出现这些质量问题呢?上海力声特医学科技有限公司医学总监夏正毅认为，王正敏研发团队转让给力声特公司的技术早已过时了。　　【同期】上海力声特医学科技有限公司医学总监 夏正毅23：00　　这个产品是王院士发明的 2000年的产品 产品现在都15年 15年前的手机现在还会用吗 对吧 道理是一样的　　【正文】　　记者在进一步的调查中了解到，在技术转让的过程中，范宝华成立了自己的耳蜗公司。他透露说，自己并没有把全部技术转让给力声特公司，而且还在技术资料里做了手脚。　　【同期】复旦大学附属眼耳鼻喉科医院 范宝华3 16：20　　转让给力声特的技术资料那么厚一摞，没有那么简单的 资料是死的，里面还有假的，能搞起来将就将就吧　　【&ldquo 院士造假遭举报&rdquo 事件真相之四】人工耳蜗虚假炒作 上市公司成赢家　　【导语】　　上海力声特医学科技有限公司是上市公司海南海药的控股子公司，王正敏研发团队研发的人工耳蜗尽管存在这样那样的问题，但是它并没有给海南海药带来任何负面影响，反而拉动股价不断攀升，这其中有什么奥秘呢?　　【正文】　　今年11月初，海南海药董事长刘悉承发布一份公开资料称，公司新品人工耳蜗在今年12月份会规模生产，明年有望产生利润。此消息一发布，海南海药股票立马反弹，每股上涨了1.25元。那么，力声特公司12月份到底有没有规模生产呢?12月中旬，记者来到这家公司的生产车间，并没有看到任何规模生产的迹象。　　【同期】上海力声特医学科技有限公司生产负责人　　记者：现在有多少人　　负责人：现在五十来个人吧　　记者：五十来个人 都是学生吗 都挺年轻的 刚招的　　【正文】　　记者看到，在生产车间，只有1个工人在工作 在公司的库房，记者看到的都是空包装盒，并没有看到他们生产的新产品。　　【同期】上海力声特医学科技有限公司 工人　　记者：一年能生产多少　　工人：今年一年几百台　　记者：几百台　　【正文】　　经过调查，上海力声特公司发布的今年12月规模生产的消息并不属实。　　【同期】上海力声特医学科技有限公司医学总监 夏正毅　　目前来讲不宜打得太开 因为一方面就像你所讲的 产品质量不是特别好 到时候弄得太多过两年 过五年不好还得召回 何必呢 对不对　　【正文】　　今年4月中旬，海南海药公告称，公司控股子公司上海力声特医学科技有限公司近期与大连市中心医院、大连市慈善总会签署了《大连市夕阳复聪项目合作协议》，由上海力声特向大连市中心医院销售REZ-1人工耳蜗300套。此消息一公布，又一次引发了海南海药股票的波动。但是记者来到大连市慈善总会核实情况后得知，这又是海南海药发布的虚假信息。　　【同期】大连慈善总会项目负责人　　记者：你们跟上海力声特公司订购了300套人工耳蜗是不是　　负责人：不是 没有　　【正文】　　记者随即又来到大连市中心医院，医院负责人也否认了向力声特公司订购300套人工耳蜗的事实。　　【同期】大连市中心医院五官科主任 张庆丰　　我们订了一个合同、意向 我们没有执行 当时我们就跟他讲 我们看了看他有好多情况 我们就说我们要进行一次临床试验以后才能决定 但是我们现在通过我们的临床试验发现没有像他们说的那么好　　【正文】　　记者注意到，海南海药发布订购300套力声特人工耳蜗的消息之前，海南海药的股价是每股9.40元，但在一周之内就涨到11.29元，每股上涨了1.89元。　　【同期】大连市中心医院五官科主任 张庆丰　　海南海药的董事长刘总 就坐在你这个位子 我就是这么告诫他的 你不要把这些东西当做商业炒作 你炒多大你最后栽多大　　【正文】　　记者注意到，从上海力声特公司与复旦大学附属眼耳鼻喉科医院签订人工耳蜗技术转让合同以来，在近十年时间里，尽管国家投入了数千万的科研经费，该公司至今没有研发出任何新产品，也没有显著的销售业绩，但海南海药的股票不仅没有下降，反而大幅增长。　　【同期】上海力声特医学科技有限公司医学总监 夏正毅　　这就是他(刘总)高明的地方 他只要维持这个股票的稳定 给大家看到预期的增长 完全靠公司盈利是挣不了钱的 靠资本运作 (公司)10年六千万(元)变成六个亿　　【正文】　　记者注意到，海南海药股票在2004年收购人工耳蜗技术到2013年的近十年时间，从最低的每股2.9元涨到了最高的近40元，每股涨了13倍多。　　【同期】复旦大学附属眼耳鼻喉科医院 范宝华3　　他这个公司不是为了生产(人工耳蜗) 他主要为了上市 骗 赚钱　　【正文】　　记者调查发现，从国产人工耳蜗的研发到批准上市，海南海药集团是最大的赢家，收益不低于6亿元 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院除了拥有上海力声特公司20%的股份之外，他们还分享了国家投入的数千万元的人工耳蜗专项科研经费 王正敏院士因为国产人工耳蜗的发明专利，在2005年顺利的增选为中国科学院院士。不过力声特人工耳蜗临床试验的志愿者，正在承受手术失败后的煎熬。　　【同期】力声特人工耳蜗临床试验志愿者 梁珍　　希望大家能够伸出双手的时候救救我，希望我能够康复起来，重新再做第二次耳蜗(手术)，让我重新听到，重新找到一份工作，开始我自己正常的生活。(原标题：&ldquo 院士造假遭举报&rdquo 事件真相)

人类诱导多能干细胞(hiPSCs)是一类可用于疾病建模、药物开发和组织工程领域的多能诱导干细胞。与CRISPR-Cas9等功能强大的基因编辑技术结合后，可根据不同患者的特性进行疾病相关遗传变异的研究和识别。 然而，培养hiPSCs的步骤较为繁琐，细胞对异常的处理和操作非常敏感，任何操作的问题都有可能导致细胞和遗传毒性应激的积累，进而导致不良分化和多能性丧失。基因编辑建立单细胞衍生的hiPSC克隆过程中常用的技术往往过于复杂或粗暴，导致单细胞克隆效率低下。此外，它们在确保衍生培养物单克隆性方面存在局限性。为此，英国iotaSciences公司推出了可实现100%单细胞分离的isoPick单细胞可视化分选系统，有效解决了培养hiPSCs单克隆过程中的困难。 如右上图所示，单细胞可视化分选系统isoPick采用纳升级的网格式单细胞腔室技术（GRID技术），可实现高通量、高自动化的单细胞可视化分选；确保分选所得的单细胞样品中只有一个单细胞，结果可验证、可追踪；分选过程非常温和，能够确保更高的单细胞存活率，达到更佳的克隆生长效果。单细胞可视化分选系统isoPick可全自动进行单细胞的分选、拾取并转移1.5 µ l至200 µ l的液体至PCR管或96孔板中。 使用isoPick从GRIDs内分选hiPSC单细胞置于Laminin-521,Vitronectin-N, Synthemax和iMatrix (Laminin-511)4种不同基质且含有培养基的96孔板中。以第7-10天内的时间计算得出的单细胞克隆效率可以发现，无论使用的包被基质或hiPSC细胞系，平均克隆效率均70%（上图），明显高于其他通常使用的方法(包括FACS)，表明isoPick对敏感单细胞的温和处理，能够确保细胞的高存活率和更好的克隆生长效果。 isoPick使用户能够以快速、高效、自动化的方式从多样、异质的细胞群体中分离单个细胞。GRID腔室非常适合用于观察和记录单个细胞的分离过程。 用户可将单个细胞分离并直接置入96孔板用于细胞克隆。相比传统方法，这种方法用简单的线性工作流程，显著提高了细胞分离与克隆效率，操作流程高度自动化，可以将样品无缝衔接单细胞组学的后续操作。单细胞可视化分选系统的优势：全自动化流程操作非常简单 对细胞无损伤结果可追踪分离效率高达100%直接转移到PCR管或96孔板结构紧凑，体积小巧文献举例： 单细胞可视化分选系统相关文献发表于Cell、Advanced Science、Small Methods、Nature Communications 等期刊，如下摘引了近年三篇具有代表性的文献和大家分享。Soitu C, Stovall‐Kurtz N, Deroy C, et al. Jet‐Printing Microfluidic Devices on Demand[J]. Advanced Science, 2020, 7(23): 2001854.Gangoso E, Southgate B, Bradley L, et al. Glioblastomas acquire myeloid-affiliated transcriptional programs via epigenetic immunoediting to elicit immune evasion[J]. Cell, 2021, 184(9): 2454-2470. e26.Deroy C, Nebuloni F, Cook P R, et al. Microfluidics on Standard Petri Dishes for Bioscientists[J]. Small Methods, 2021, 5(11): 2100724.Deroy C, Wheeler J H R, Rumianek A N, et al. Reconfigurable microfluidic circuits for isolating and retrieving cells of interest[J]. ACS Applied Materials & Interfaces, 2022, 14(22): 25209-25219.Oliveira N M, Wheeler J H R, Deroy C, et al. Suicidal chemotaxis in bacteria[J]. Nature Communications, 2022, 13(1): 7608.样机体验： 为更好地服务中国科研工作者，Quantum Design 中国引进了单细胞可视化分选系统-isoPick样机，将为大家提供为专业的售前、销售、售后技术支持，欢迎各位老师参观试用！