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薄层制板器标准操作规程目 的:建立一个薄层制板器使用操作规程。适用范围:适用于药物定性或定量分析的薄层色谱法的制板。责 任:使用薄层制板器检验人员对本规程实施负责,检验室主任对本规程的有效执行承担监督检查责任。程 序:1. 薄层色谱用的玻璃板必须经过洗液浸泡,并清洗至不挂水珠,干燥备用。2.将层析板搁置于制板器主机上,将所需规格(10×10,10×20,20×5,20×10,20×20cm)玻璃板,水平放置于搁板上。最前面的引板和最后的尾板分别用同等厚度20×5和20×6.3或10×5和10×6.3cm玻璃板。检查玻璃板之间是否水平,厚度不一致要更换成厚度一致的玻璃板。3.吸附剂调配。3.1粘合剂的配制,根据薄层板的用途配制适宜浓度的粘合剂。3.1.1称取0.2或0.3克羧甲基纤维素钠,置于100ml纯化水中,用玻璃棒搅拌,并加热煮沸至溶解。放冷,经四层纱布滤过。如果制含量测定之薄层板,为了减少气泡的影响,使用前先煮沸放冷再用。3.2按附表量取适当的溶液倒入匀浆筒内。3.3按比例称量吸附剂(用于定量分析时先过7号筛)加入匀浆筒内。3.4用玻棒将吸附剂与粘合剂在匀浆筒内搅匀。3.5将电源线两插针插入搅拌螺旋头上,再插上电源插头,螺旋桨动作,将螺旋桨从匀浆筒液面移至底部,使头部盖在筒上,然后放置混合2—3分钟即可。3.6匀浆结束,先拨取电源插头,再拨取插针,取出螺旋桨,即可倒入匀浆槽开始制板。4.制板4.1用所需厚度刮板装于供浆槽口内,将匀好的吸附剂浆液,倒入供浆槽内,即时将开关板至ON位置,制板自动开始,制板完毕自动停止,然后将开关置OFF位置。若进行第二架制板,可将制好的板连搁板架一起移至平稳的地方晾干,安上第二架搁板,按上述操作即可。4.2取下供浆槽及刮棉线清洗并擦干净,备用。5.附表:吸附剂用量粘合剂用量浆液量刮板厚度干板厚度16g 48ml 55ml0.3mm0.15mm20g58ml73ml0.4mm0.20mm26g74ml92ml0.5mm0.25mm32g92ml110ml0.6mm0.30mm6. 每次使用后,填写使用登记。7.注意事项:薄层制板的质量好坏,与浆液的混合方法和浆[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]量有密切关系,应注意以下情况。7.1匀浆器使用前,要清洗干净,小心避免带入杂物。7.2匀浆器开始后,容器内壁上粘附的粉末要用浆液带下去充分混合。7.3匀浆器使用和清洁过程中,注意避免浆液及水从螺旋轴倒流入螺旋桨上部电机中。7.4层析玻璃板可选任意厚度(1—4mm),但必须均匀性好,平整度高的玻璃板。接头处缝隙越小越好。
总RNA分离纯化标准操作规程(SOP)3. 关键词:RNA 分离 纯化4. 目的:建立总RNA分离纯化的操作规程,以保证制备RNA的质量和效率。5. 主体内容:5.1主要仪器研钵,恒温水浴,旋涡振荡器,冷冻台式高速离心机,超低温冰箱,紫外检测仪,电泳仪,电泳槽。5.2试剂1.Trizol试剂(购自Invitrogen公司)2.焦碳酸二乙酯(DEPC)3.氯仿(新开封)4.异丙醇(新开封)5.无RNase灭菌水:用将高温烘烤的玻璃瓶(250℃ 3小时)装蒸馏水,然后加入0.1%的DEPC(体积/体积),处理过夜后高压灭菌。6.75%乙醇:用DEPC处理后的水配制75%乙醇,(用高温灭菌器皿配制),然后装入高温烘烤的玻璃瓶中,存放于4℃冰箱。 5.3 相关器皿的预处理1.塑料制品的处理尽可能使用无菌,一次性塑料制品,已经标明RNase-Free的塑料制品,如果没有开封使用过通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品,原则上都必须处理方可使用。处理步骤如下:1)在玻璃烧杯中注入去离子水,加入DEPC使其终浓度为0.1%。注意:DEPC为剧毒物质,活性很强,应在通风橱中小心使用。2)将需要处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中,注入DEPC水溶液,使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。3)在通分橱中室温处理过夜。4)将DEPC水溶液小心倒入废液瓶中,用铝箔封住含有已用DEPC水处理过的塑料制品的容器,高温高压蒸汽灭菌至少30 min。5)在烘箱中用合适的温度烘烤至干燥。置于干净处备用。2.玻璃和金属制品先用去离子水将器皿清洗干净,晾干,用铝箔包好,然后至烘箱中250℃烘烤3 小时以上。5.4 操作步骤第一部分 匀浆A 从组织中提取总RNA、1)液氮研磨:组织块直接放入研钵中,加入少量液氮,迅速研磨,待组织变软,再加少量液氮,再研磨,如此三次,按照每50~100mg组织加入1ml Trizol,转入离心管进行下步操作。2)匀浆:用电动匀浆器充分匀浆1~2min。注意,组织样品体积不能超过Trizol体积的10%,否则匀浆效果会不好。B 从培养细胞中提取总RNA1)粘壁培养细胞:不需蛋白酶消化,先将培养基去除,然后直接将Trizol加入到培养瓶中消化、裂解细胞,Trizol体积按10cm2/ml的比例加入。2)悬浮培养细胞:直接离心收集细胞后用Trizol重悬、裂解,每1ml Trizol可裂解5×106个动物、植物或酵母细胞,或1×107个细菌细胞。注意,在加入Trizol之前不能用其他缓冲液洗涤细胞,那样会增加mRNA降解的可能性。另外,在裂解酵母或细菌细胞时可以借助匀浆器。第二部分 相分离1.匀浆组织加入Trizol后,室温放置5min,使其充分裂解。注意:此时可以放入-70℃长期保存。[
我们实验室的仪器现在都是将仪器简介挂在墙上,然后将操作规程和点检表放在仪器旁边,不知道这么是否合适。是否放在抽屉里会更好?或者直接将操作规程上墙?大家一般都是如何放置的?