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最近突发奇想,微生物检测细菌总数这一项目要求培养时间是48h,那要是超过两天会是什么样呢?所以在本月的全分析检测中,我多过了一天取培养皿,看看是什么样的,把结果用照片的方式给大家分享一下。由于害怕在中途取出来后拍照会干扰检测结果,所以原本的检测结果没有照片,只有多培养一天后才肆无忌惮拍出来的照片。http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09511.gif 以下是标准操作规程:1.1 标准依据本方法标准依据《生活饮用水标准检验法》(GB/T5750.12-2006)。1.2 方法原理 细菌总数是指水样在一定条件下培养后(培养基成分,培养温度和时间、pH、需氧性质等)所得lmL水样所含菌落的总数。按本规范规定所得结果只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数。1.3 试剂与培养基1.3.1 营养琼脂成分: A.蛋白胨10g B.牛肉膏 3g C.氯化钠 5g D.琼脂 10~20g E.蒸馏水 1000mL1.3.2 制法:将上述成分混合后,加热溶解,调整pH为7.4~7.6,分装于玻璃容器中(如用国产含杂质较多的琼脂时,应先过滤),经121 ℃灭菌20min,存于冷暗处备用。目前我们采用的是购置的已经配好的粉末,直接溶解灭菌就可使用1.4 仪器1.4.1 高压蒸汽灭菌器。1.4.2 干热灭菌箱。1.4.3 培养箱36±1℃。1.4.4 电热套。1.4.5 放大镜或菌落计数器。1.4.6 灭菌试管、平皿(直径9cm)、刻度吸管、采样瓶等。1.5 检验步骤1.5.1 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取lmL充分混匀的水样,注入灭菌平皿中,倾注约15mL已融化并冷却到45 ℃左右的营养琼脂培养基,并立即旋摇平皿,使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种,同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。1.5.2 待冷却凝固后,翻转平皿,使底面向上,置于36±1 ℃培养箱内培养48h,进行菌落计数,即为水样lmL中的细菌总数。1.6 菌落计数及报告方法 作平皿菌落计数时,可用眼睛直接观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏。 下图是多培养一天后的检测结果,黑色圈出来的两个黄色菌落是原有的,蓝色圈出来的是第三天新长出来的,是白色的菌落,我全部数了一下,是48个。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/03/201403181548_493577_2397801_3.jpg 看来培养的时间一长了还真有影响,菌落一下多了好多,标准中说不管大小,都要计数,限值是100个/mL,对检测结果的影响还是很大的。 PS:另外还有一件事情是我不能理解的,同一个培养基培养出来的菌落为什么颜色不一样呢?欢迎大家来讨论http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/03/201403181558_493580_2397801_3.jpg 上图中黑色圈出来的菌群是黄偏红色的,绿色圈出来的是白色菌落,橘色圈出来的是黄色菌落,大家知道是为什么?http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/03/201403181612_493583_2397801_3.jpg上图也是一黄一偏橘黄色下图很明显是偏红色的菌落http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/03/201403181612_493584_2397801_3.jpg
[align=center]平皿计数法测菌落总数验证[/align][align=center]化工室:张苗苗[/align]一、 范围及定义1、范围 本标准规定了用平皿计数法测定生活饮用水及其水源水中的菌落总数。2、定义 菌落总数是指水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养24h后,所得1mL所含菌落的总数。二、仪器1、高压蒸汽灭菌器2、生化培养箱3、菌落计数器4、pH计或精密pH试纸5、灭菌试管、平皿,刻度吸管,采样瓶等。三、检验步骤1、以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样,注入灭菌平皿中,倾注约15ml以融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基,并立即旋摇平皿,使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种,同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。2、待冷却凝固后,翻转平皿,使底面向上,置于37℃培养箱培养24h,进行菌落计数,即为水样1mL中的菌落总数。四、菌落计数作平皿菌落计数时,可用菌落计数器检查,以防遗漏,在记下各平皿的菌落数后,应求出同稀释度的平均菌落数,供下一步计算时应用。再求同稀释度的平均数时,若其中一个平皿有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半,而其中一半中菌落数分布又很均匀,则可将此平皿计数后乘2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。五、计算和报告计数结果不同稀释度的选择1、首先选择平均菌落数在30~300之间者进行计算,若只有一个稀释度的平均菌落数符合此规范时,则将该菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中实例1) 2、若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30~300之间,则视二者之比值来决定,若其比值小于2应报告两者的平均数(如表1中实例2)若其比值大于2应报告其中稀释度较小的菌落总数(如表1中实例3)。若等于2应报告其中稀释度较小的菌落数(如表1中实例4).3、 若所有的稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中实例5)4、 若所有的稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中实例6)5、 若所有的稀释度的平均菌落数均不在30~300之间,则应以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中实例7)6、 菌落计数的报告:菌落数在100以内时按实有数报告;大于100时,采用两位有效数字,在两位有效数字后面的数值以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示。 [b]表1 稀释度选择及菌落总数报告方式[/b][table][tr][td=1,2][align=center]实例[/align][/td][td=3,1][align=center]不同稀释度的平均菌落数[/align][/td][td=1,2][align=center]两个稀释度菌落数之比[/align][/td][td=1,2][align=center]菌落总数/(CFU/mL)[/align][/td][td=1,2][align=center]报告方式/(CFU/mL)[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]10[sup]-1[/sup][/align][/td][td][align=center]10[sup]-2[/sup][/align][/td][td][align=center]10[sup]-3[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]1365[/align][/td][td][align=center]164[/align][/td][td][align=center]20[/align][/td][td][align=center]-[/align][/td][td][align=center]16 400[/align][/td][td][align=center]16 000或1.6×10[sup]4[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]2760[/align][/td][td][align=center]295[/align][/td][td][align=center]46[/align][/td][td][align=center]1.6[/align][/td][td][align=center]37 750[/align][/td][td][align=center]38 000或3.8×10[sup]4[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]2890[/align][/td][td][align=center]271[/align][/td][td][align=center]60[/align][/td][td][align=center]2.2[/align][/td][td][align=center]27 100[/align][/td][td][align=center]27 000或2.7×10[sup]4[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]150[/align][/td][td][align=center]30[/align][/td][td][align=center]8[/align][/td][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]1 500[/align][/td][td][align=center]1 500或1.5×10[sup]3[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]多不可计[/align][/td][td][align=center]1650[/align][/td][td][align=center]513[/align][/td][td][align=center]-[/align][/td][td][align=center]513 000[/align][/td][td][align=center]510 000或5.1×10[sup]5[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]6[/align][/td][td][align=center]27[/align][/td][td][align=center]11[/align][/td][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]-[/align][/td][td][align=center]270[/align][/td][td][align=center]270或2.7×10[sup]2[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]7[/align][/td][td][align=center]多不可计[/align][/td][td][align=center]305[/align][/td][td][align=center]12[/align][/td][td][align=center]-[/align][/td][td][align=center]30 500[/align][/td][td][align=center]31 000或3.1×10[sup]4[/sup][/align][/td][/tr][/table]对自来水的检测结果如下:[table][tr][td]接种量[/td][td]10[sup]-1[/sup][/td][td]10[sup]-2[/sup][/td][td]10[sup]-3[/sup][/td][td]10[sup]-1[/sup][/td][td]10[sup]-2[/sup][/td][td]10[sup]-3[/sup][/td][td]10[sup]-1[/sup][/td][td]10[sup]-2[/sup][/td][td]10[sup]-3[/sup][/td][/tr][tr][td]计数结果[/td][td]26[/td][td]10[/td][td]3[/td][td]23[/td][td]9[/td][td]3[/td][td]25[/td][td]10[/td][td]2[/td][/tr][tr][td]菌落总数CFU/mL)[/td][td=3,1]260[/td][td=3,1]230[/td][td=3,1]250[/td][/tr][/table]六、结论 此方法均符合GB/T5750.12-2006七、注意事项 1、所有玻璃器皿如试管、平皿,刻度吸管,采样瓶等都应灭菌。 2、做样品稀释的液体,每批都要有空白对照。 3、计数时应仔细观察
看到电视画面上日本做微生物检测涂布平皿用的是金属耙子(应该是购买的成品),不过好像国内并没有见到,不知道您用的是什么样的?