核酸酶活性检测

[font=宋体][font=宋体]全能核酸酶（[/font][font=Calibri]SuperNuclease[/font][font=宋体]）是一种来自于粘质沙雷氏菌（[/font][font=Calibri]Serratia marcescens[/font][font=宋体]），经基因工程改造的核酸内切酶。可降解双链、单链、线状、环状的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]，完全将核酸降解成[/font][font=Calibri]3~5[/font][font=宋体]个碱基长度的[/font][font=Calibri]5'-[/font][font=宋体]单磷酸寡核苷酸。义翘神州不仅可以提供研究级核酸酶，依托于[/font][font=Calibri]ISO 13485[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]体系，还可提供高效、高质量、应用广的[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级别全能核酸酶。同时我们提供核酸酶残留检测试剂盒，在解决生物制品核酸污染的同时，有效降低酶本身的残留风险。下面通过问答形式向大家详解全能核酸酶：[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 如何处理粘附细胞？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 用[/font][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]洗涤后，向[/font][font=Calibri]100μL RIPA[/font][font=宋体]裂解物（或其他哺乳动物细胞裂解物）中加入[/font][font=Calibri]1-5μL[/font][font=宋体]全能核酸酶，在室温下孵育[/font][font=Calibri]30min[/font][font=宋体]，收集裂解物，离心上清液进行下游实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 如何处理悬浮细胞？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 离心收集悬浮细胞后，将[/font][font=Calibri]100μL RIPA[/font][font=宋体]裂解物（或其他哺乳动物细胞裂解物）加入含有[/font][font=Calibri]1-5μL[/font][font=宋体]全能核酸酶的离心管中，在室温下孵育[/font][font=Calibri]30min[/font][font=宋体]，收集裂解物，离心上清液进行下游实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 如何处组织样本呢？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 研磨[/font][font=Calibri]30[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]100mg[/font][font=宋体]动植物组织后，加入[/font][font=Calibri]100[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]200μL[/font][font=宋体]裂解液和[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]5μL[/font][font=宋体]全能核酸酶，室温孵育[/font][font=Calibri]30min[/font][font=宋体]，收集裂解液并离心上清液进行下游实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 大肠杆菌或其他细菌呢？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 离心收集细菌后，裂解液或研磨破碎后，每[/font][font=Calibri]100μL[/font][font=宋体]加入[/font][font=Calibri]1~5μL[/font][font=宋体]全能核酸酶，室温孵育[/font][font=Calibri]30min[/font][font=宋体]，收集裂解液，离心上清液进行下游实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 如何稀释[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 正常推荐稀释比（终浓度）为[/font][font=Calibri]1:1000[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]1:20000[/font][font=宋体]，其中时间、温度和稀释比是影响反应的积极因素。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 是否用[/font][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]稀释[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 是[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 你能减少剂量吗[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 如果你想减少剂量，可以适当提高反应温度或延长反应时间[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 反应辅因子[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 必须向反应溶液中加入[/font][font=Calibri]2-5mM Mg2+[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 反应缓冲液[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 常用的生物缓冲液，如[/font][font=Calibri]TBS[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MOPS[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]pH6-8[/font][font=宋体]）等[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 稀释后每次使用多少？如何测试梯度？一开始多少钱？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 根据不同的实验要求，添加量可以在[/font][font=Calibri]1/100[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]1/10000[/font][font=宋体]之间。真核细胞所需的量高于原核细胞，因为真核细胞的核酸含量高，并且可以按照[/font][font=Calibri]1/1000[/font][font=宋体]的比例添加真核细胞初始添加量，可以按照[/font][font=Calibri]1/10000[/font][font=宋体]的比例添加原核细胞。由于全能核酸酶活性在室温下较高，因此在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃下消化的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]添加比例高于室温下。普通的[/font][font=Calibri]CoIP[/font][font=宋体]实验、蛋白质表达实验可以适当地略微增加，并且可以按照[/font][font=Calibri]1/100[/font][font=宋体]的比例添加对[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]残基要求高的实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 如何灭活全能核酸酶？如何移除？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： [/font][font=Calibri]EDTA[/font][font=宋体]螯合金属离子的使用可以可逆地抑制全能核酸酶的活性，极端条件下可以引起不可逆的失活，如[/font][font=Calibri]100mM NaOH[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]70[/font][font=宋体]℃处理[/font][font=Calibri]30min[/font][font=宋体]。可以通过阴离子交换柱或[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]法从目标产物中分离全能核酸酶。由于这种核酸内切酶的高稳定性，建议不要在最终产物需要排除核酸酶的应用中使用全能核酸内切酶。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 储存条件[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 储存温度为[/font][font=Calibri]-20[/font][font=宋体]℃。储存缓冲液：[/font][font=Calibri]20mM Tris-HCl pH 8.0[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]50mM NaCl[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]2mM MgCl2[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]50%[/font][font=宋体]甘油。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 全能核酸酶应用[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： [/font][/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、蛋白质提取过程中核酸污染的去除：当重组蛋白质纯化或哺乳动物细胞裂解物下游需要低粘度时，全能核酸酶可用于降低样品粘度，以便于操作；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、有效减少储存的外周血单个细胞（[/font][font=Calibri]PBMC[/font][font=宋体]）的聚集；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、有利于不溶性蛋白在复性前的高质量包合体系制备；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、有效去除带负电荷核酸对双向[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]蛋白样品的影响；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、在宽范围的条件下（[/font][font=Calibri]6M[/font][font=宋体]尿素、[/font][font=Calibri]0.1M[/font][font=宋体]盐酸胍、[/font][font=Calibri]0.4%Triton X100[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]0.1%SDS[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]1mM EDTA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]1mM PMSF[/font][font=宋体]），降解所有形式的（双链、单链、线性、环状）[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6[/font][font=宋体]、根据美国食品药品监督管理局的核酸污染去除程序，去除蛋白质产品中的污染；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]7[/font][font=宋体]、本品可与多种细胞细菌裂解液配合使用，去除粗提液中的核酸，降低溶液粘度，提高蛋白质产量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供不同级别全能核酸酶，[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级条件下生产的[url=https://cn.sinobiological.com/category/supernuclease-kit][b]全能核酸酶[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/category/supernuclease-kit][b]SuperNuclease[/b][/url][/font][font=宋体]，无动物源性，可高效降解单链、双链、线性、环状、超螺旋等任何形式的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]及[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]。超高活性，应用场景广泛且使用量低不易残留，质量、性能、供货能力可靠，并已完成在[/font][font=Calibri]FDA[/font][font=宋体]的药物主文件申报备案（[/font][font=Calibri]DMF Number#:35978[/font][font=宋体]），满足药物申报的规范。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/supernuclease-kit[/font][/font][font=Calibri] [/font]

谁有核糖核酸酶A的液相分析,急急急急!!!非常感谢!

http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201112/2011121813583277.gifTALE第171位Ser删除后的三维构象模型也显现出非常类似的球状结构，图片篇来自Biochemical Journal, 2004, 382: 725-731.2011年6月，位于美国加利福尼亚州卡尔斯巴德市的生命科技公司(Life Technologies)获得美国伊利诺斯州埃文斯顿市双刀片基金会(Two Blades Foundation)和德国哈雷市马丁-路德大学一组植物学家的独占性许可以便对一种新的基因组编辑技术---转录激活子样效应因子(transcription activator like effector, TALE)进行商业化生产。随着生命科技公司新获得的许可，研究人员可能很快能够从几个设计物TALE商业来源中进行选择。而2011年1月，美国明尼苏达大学和爱荷华州立大学开发的类似技术已被许可给法国公司Cellectis，而且该公司已经提供定制的基因特异性的转录激活子样效应因子核酸酶(TALEN)。与此同时，几个研究小组就像学术界之前对ZFN那样正在建立大众都可获取的TALEN来源。当然，现在预测利用只在2007年发现的TALE进行基因组编译的最终影响仍嫌过早。相反，ZFN技术开发了将近15年，并且已经正在人临床试验中进行测试。但是这两种技术的差别是显而易见的。不同于ZFN---该技术的知识产权是由Sangamo生物技术公司和它的商业伙伴Sigma-Aldrich所有，TALE的使用、成本和可获得性则是完全不同的情形。TALEs首先是植物病原菌黄单胞菌(Xanthomonas)上发现的，特异性地结合到DNA，在该病原菌感染过程中对植物基因进行调控。