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分子生物学(基因工程)的实验中,经常要做细胞质粒DNA的提取和检测工作,以便获得运载基因的载体DNA;或用于实行电泳检测分析,了解样品是否含有质粒DNA(包括重组质粒DNA),判断其分子量大小,区别不同质粒等等。因此质粒DNA的提取是基因工程实验中最常用的手段之一。质粒是一种染色体外的稳定遗传银子,大小从1kb到200kb不等,大多数来自细菌的质粒是双链、共价闭合环状的分子,并以超螺旋形式存在于宿主的细胞质中。它是细菌内的共生型遗传因子,主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,质粒具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。质粒的分离是利用质粒DNA和染色体DNA在变性与复性中的差异来达到的目的。当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性,由于染色体DNA与质粒DNA拓扑构型不同,染色体DNA双螺旋结构解开,而共价闭合质粒DNA的氢键虽被断裂,但两条互补链彼此相互盘绕仍会紧密地结合在仪器。当加入中和液后,溶液pH恢复至中性,在高盐浓度的情况下,染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构并与蛋白质SDS复合物等形成沉淀;不同的是质粒DNA复性迅速而准确,保持可溶状态而留在上清中。这样,通过离心可沉淀大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质。除去沉淀后上清中的质粒可用酚氯仿抽提进一步纯化质粒DNA。前面提取质粒DNA的方法就是实验室常用的碱裂解法,该法的操作过程如下:首先讲含有质粒的细菌接种到培养基,经过大约12小时的恒温摇陪后弃去上清液,加入中和液后用漩涡混匀器将溶液充分混匀,然后加入碱液进行沉淀,这就是变性与复性,最后的操作就是实验室常用的沉淀的分离、纯化。分离、纯化DNA首先取上清液,加入分离液后采用漩涡混匀器混匀溶液,离心取上清液,加入无水乙醇后混匀,离心后弃上清液,干燥DNA即可。这个实验中常用到漩涡混匀器进行溶液混匀,意大利VELP公司推出多种型号的漩涡混匀器可满足每一个实验室的需要和安全标准。特别是红外漩涡混匀器,这是VELP公司的专利,该漩涡混匀器一旦检测到试管即自动开始震动混匀,不需要施加任何外力,震动速度可调,时间可设,漩涡混匀器稳定性高,非常适合细胞质粒提取实验。
抗核抗体(antinuclear antibody,ANA)又称抗核酸抗原抗体,是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白(DNP)、DNA、可提取的核抗原(ENA)和RNA等作为靶抗原的自身抗体的总称,能与所有动物的细胞核发生反应,主要存在于血清中,也可存在于胸水、关节滑膜液和尿液中。抗核抗体识别是各种细胞核组分(细胞核生化成分),可特征地出现于许多疾病中。ANA鉴别诊断对于一些特定疾病的确认十分必要,而且对自身免疫性疾病的进一步诊断也很有价值。为了确保检测结果的准确性,对此相关部门对抗核抗体谱(IgG)检测制定了标准操作规程。在规程中,对于样品的要求写到,患者样本用样本缓冲液1:101稀释,如可取15μl血清用1.5ml样本缓冲液稀释并用漩涡混匀器进行充分混匀,不可用加样器混匀。选择一款稳定、高效的漩涡混匀器备显重要。化验室样品处理量大,选择一款快捷、省力的漩涡混匀器十分必要。意大利VELP推出了创新性红外感应漩涡混匀器,红外传感是VELP创新性的专利产品。VELP红外感应漩涡混匀器,一旦检测到试管,VELP漩涡混匀器自动开始震动,不需要施加任何外力,而且相比于传统的接触模式,VELP红外传感漩涡混匀器能确保在震动减少过程的急剧变化。VELP漩涡混匀器确保了样品的稳定性。VELP漩涡混匀器最大转速可以达到3000rpm,VELP漩涡混匀器可以满足大部分实验室的需求。VELP漩涡混匀器在实验中解放您的双手,让实验更快捷、更准确!
国采用估测食品和饲料工业蛋白质含量的方法存在缺陷,因此就有不法商人钻了这个空子,三聚氰胺就是其中一个典型的例子。三聚氰胺常被不法商人掺杂进食品或饲料中,以提升食品或饲料检测中的蛋白质含量指标,所以三聚氰胺也被作假的人称为“蛋白精”。其实,蛋白质主要是有氨基酸组成的,其中的平均含氮量约为16%,通常情况下三聚氰胺的含氮量为66%左右。2008年有我们太多的记忆了,其中9月份爆发的婴幼儿奶粉事件一定在记忆的深处。由于奶粉中含有三聚氰胺,导致婴幼儿肾结石、肾衰竭甚至死亡,食品安全卫生问题再一次成为全世界关注的焦点。食品,特别是乳及乳制品中蛋白质含量的主要是采用凯氏定氮法,通过测出含氮量乘以6.25来估算蛋白质含量,因此添加三聚氰胺会是食品中的蛋白质测试含量虚高,从而使劣质食品和饲料在检测机构制作粗蛋白质简易测试时蒙混过关。而2008年前,大部分乳制品都是采用此方法检测产品中蛋白质的含量,经历婴幼儿奶粉事件后,国内乳制品中三聚氰胺检测标准才初步建立。目前乳制品中三聚氰胺的测定方法主要有酶联免疫分析、液相色谱法、毛细管电泳质谱法、荧光法、化学发光法、电化学法等,其中检测机构常用到的是液相色谱法。不管采用哪种方法检测三聚氰胺在乳制品中的含量,首要的是要将检测样品溶解,根据实验的需要,稀释成所需浓度的测定溶液。在这个过程中一个重要的环节是将检测样品充分溶解,这样才能实事求是的反映乳制品的蛋白质含量。意大利VELP公司推出了一款新型的红外漩涡混匀器,此款红外漩涡混匀器采用了特殊的红外系统激活,不需要施加任何外力,漩涡混匀器检测到试管就自动开始震动,解放您的双手,同时确保在震动减少过程的急剧变化且速度可控。对技术人员来说,大量的检测实验如果都是双手不停的操作,一天的工作下来双手一定很酸痛,VELP公司推出的漩涡混匀器恰好能解决这个问题。此外这款VELP漩涡混匀器还具有一下特点:搅拌速度可控,操作时间可读,液晶显示清晰明了,即使在传感模式下也能设置时间,漩涡混匀器可达的最大转速是3000转,能满足大部分实验的要求。红外漩涡混匀器在三聚氰胺检测中稳定性高,VELP漩涡混匀器效率很高。