超微量核酸检测

NanoPhotometerTM——超微量分光光度计最佳选择摘要：由于传统的紫外-可见分光光度计对样品量的需求较大，而且对所测样品的浓度有一定范围的限制，对于分子生物学实验者来说，对少量又珍贵的核酸蛋白质样品的稀释，无疑是一种糟蹋。为了满足和方便广大生物学科研者的实验需求，德国Implen 公司研发出一款通过改变光程从而达到扩大样品浓度检测范围的目的的超微量紫外—可见分光光度计，它所需上样量只有0.3-2ul，能够检测核酸浓度和纯度，蛋白质A280等，内置BCA，Bradford等多种实用检测方法。同时可使用常规比色皿，用于细胞（细菌）OD600的测量。关键词：超微量，分光光度计，光程，核酸蛋白质浓度，OD600。前言核酸纯度和蛋白质浓度的测定，是分子生物学实验的常规操作之一，传统的紫外—可见分光光度计对样品量的要求较高，一般在500ul（特殊比色皿）以上，而500ul的蛋白质或核酸，对科研人员来说可能是半年来所提取核酸（蛋白质）的总量，因此，常规分光光度计在进行核酸（蛋白质）浓度的测定具有很大的局限性。Implen (德国，慕尼黑) 公司研发的超微量紫外—可见分光光度计通过使用特制的超微量比色皿，使得只需0.3-5ul的上样量就能准确的检测出样品浓度。通过对光程的调节，不但能够检测低浓度的样品（0.2ng/ul）,也能够检测高浓度的样品（18750ng/ul）。NanophotometerTM性能特点具有专利权的样品压缩技术：NanophotometerTM 利用两个光学平面镜将样品固定于上样孔（石英检测窗口和光学平面镜稀释盖）。这种改变光程的技术不依赖样品的表面张力，同时，在很大程度上减少了样品的蒸发，保证了很好的重复性，尤其是溶于易挥发溶剂中的样品。NanophotometerTM有6个不同稀释倍数的样品稀释盖，同时也可使用常规比色皿进行检测。 http://www.wblab.cn/uploadfile/image/20110927164135373.jpg http://www.wblab.cn/uploadfile/image/20110927164141959.jpg http://www.wblab.cn/uploadfile/image/20110927164145737.jpg 由于具有多个稀释倍数的能力，所以NanophotometerTM的检测浓度范围测非常广阔：dsDNA:2-19750ng/ul; ssDNA:2-13875ng/ul; RNA:2-15000ug/ul; Oligo：2-12375ng/ul。蛋白质浓度检测范围在0.04mg/ml至660mg/ml之间。因此，几乎所有样品都不需要稀释而直接可进行浓度测定（适合全波长扫描）。NanophotometerTM 的全波长扫描只需3.5s,每个样品所需要的时间不到5秒钟，快速的检测速度为大量的样品检测节省了宝贵时间。0.3ul的上样量： NanophotometerTM 特制的样品压缩技术，使得所需上样量非常少，仅需0.3ul的样品就可准确检测所测物质的浓度。 2ng/ul到1875ng/ul的检测范围（dsDNA）：NanophotometerTM 特有的样品压缩技术能够将样品自动稀释为1：5，1：10，1：50，1：100和1：250五种倍数，无稀释误差，并减少手动稀释所浪费的时间，保证了样品的稳定性。由于缩短了光程，所以增大了浓度检测的范围。NanophotometerTM 的最小光程为0.04mm，是常规比色皿光程的二百五十分之一，因此比常规紫外—可见分光光度计所测浓度范围大250倍。下表为稀释倍数所对应光程：5→d=2 mm； 10→d=1 mm； 50→d=0.2 mm； 100→d=0.1 mm； 250→d=0.04mm全谱扫描仅需3.5s：NanophotometerTM 的波长范围190—1100nm,系统启动时间小于5s，且无需预热，全波长扫描时间（200—950nm）只需3.5s，宽的波长范围满足常规物质的测定，NanophotometerTM 内置多种波长扫描方法，有单波长扫描、比色测定、波长扫描（自定义范围）、动力学测定、标准曲线测定、多波长扫描（5个波长点）和吸光度比值（两个吸光度比值）。灵活的数据输出方式：NanophotometerTM 的数据输出方式有内置打印机、SD-RAM卡、USB或者蓝牙可供选择。内置打印机可以方便的将实验结果马上打印，方便重要数据的保存和分析；USB接口连接电脑，一些需要长久保留的数据可方便的储存到个人电脑中。卓越的设计：独特的人体工程学理念，超大的背光蓝色液晶显示器，自定义用户界面，易于清洗的可移动样品室，用户友好型操作界面和防滑的控制面板，即使带有内置打印机，也易于携带，可用于户外操作。终身无需校正：密封的光路系统且无拆换部件，采用独特的光程改变技术，使得该NanophotometerTM 超微量紫外—可见分光光度计具有很高的精度，且终身无需校正，免去了昂贵的校正费用，节省宝贵的时间。总结NanophotometerTM 的样品压缩技术使得其具有卓越的检测和稳定性能，在同类产品中，由于它改变光程的技术不依赖于被测溶液的表面张力，从而扩大检测范围，而且这种改变光程的方法不涉及机械磨损或机械疲劳，故光程的改变是非常精确的，终身无需校正。总的来说，Na

超微量分光光度计的新选择 检测核酸或者蛋白样品浓度是最常用的实验操作之一，传统比色皿体积大，需要稀释较多样品，造成珍贵的核酸蛋白样品浪费，而且还要反复清洗比色皿，甚烦。好在有超微量分光光度计的出现。早在2004年生物通就已经大力推荐过基因有限公司引进的NanoDrop微量分光光度计，这种技术利用微量液体张力牵引形成光通路，从而替代比色皿，极具创新性和实用性，并得到2004年年度产品仪器类的创新大奖。（点此链接：Nanodrop：只要1微升就可以检测核酸/蛋白浓度 ）这种首创无需比色皿稀释，只要1ul样品溶液即可直接检测核酸/蛋白/或者细胞浓度的新型分光光度计很快在国内科研用户中得到非常热烈的认同。 并非仅仅是个概念。Nanodrop ND-1000的高吸收光检测能力相当50倍于传统分光光度计，使得多数样本不需要稀释即可进行全光谱（220nm-750nm）检测，无需消耗品，即插即用无需预热，操作极为方便。可以进行核酸定量和纯度检测，蛋白A280检测，Bradford检测，蛋白BCA检测，细胞浊度检测等多种紫外/可见光检测。Nanodrop ND-1000令NanoDrop公司声名大振而迅速确立来其在超微量分光光度计市场的领导地位。 但是对于高通量实验，不说384孔，就是96孔，这么一个一个的加样-检测-清洁下来，不累死也要头晕眼花的。因此，顺应这种需求，NanoDrop公司又推出了NanoDrop ND-8000，可一次同时检测1-8个样本，使得检测速度立刻提升8倍----用8道排枪，只要6分钟可以检测96个样品，而且体积非常紧凑----差不多A4纸大小（32x24cm）。设想看检测96孔样品的浓度----可以节省多少样品，节省多少时间和清洗比色皿的精力阿！新技术真是令人喝彩！ Nanodrop延续这个设计理念到荧光信号检测，推出了ND-3300荧光分光光度计。这个体积只有一本字典大小(20x14x12cm)的仪器却拥有强大的功能----3组LED（UV365，蓝光470和白光500-650）覆盖400-750nm全光谱荧光分析，不需更换滤光片，不论是自行研发或市售荧光染剂都可使用，如 PicoGreen、RiboGreen、Hoechst、FITC、Cy3-Alexa555、Cy5-Alexa647, quantum dots等等。只要1.5-2ul样本量，不需比色皿或者毛细管，无需稀释样品，检测发射光峰值波长的荧光强度和±20nm相对荧光输出，通过标准曲线定量。荧光范围可达10的5次方（0.1nmM-1000nM）,采用2048像素CCD检测，内置滤光片去除395nm以下光波干扰，由于使用三组LED冷光源代替传统高能耗光源，NanoDrop ND-3300能耗超低----只需要电脑的USB接口供电，根本无需外置电源！ NanoDrop ND-3300并不能完全替代传统扫描荧光分光光度计，也不适合检测浓度特别低的样品，其检测浓度下限是1pg/ul，不如酶标仪和传统荧光分光光度计。但是NanoDrop ND-3300能检测样品物质量却实在比酶标仪和传统荧光分光光度计小的多----以PicoGreen为例，ND-3300可以检测少至2pg的DNA样品（2ul，1ug/ul），酶标仪/读板机检测下限50pgDNA样品（浓度读数下限以0.25pg/ul为例）；传统分光光度计下限则是25pgDNA样品(浓度读数下限0.025pg/ul为例)。所以生物通特别提示你注意“检测浓度”和“检测物质量”是不同的概念哦。 NanoDrop在快速超微量样品吸收光/荧光检测领域带来的令人耳目一新的变革，新技术可令每个研究人员直接感受到技术进步的愉悦，好用是很好用，这3台仪器价格不菲。2007年10月赛默飞世尔（Thermofisher）宣布收购Nanodrop公司，并将其产品收归Thermofisher旗下。 现在我们又多了一个新选择----GE Healthcare公司最新推出都NanoVue超微量分光光度计！这是一款非常容易操作的微量分光光度计，可以用来精确检测核酸、蛋白和细菌培养液的浓度。只要0.5-5l的样品加在一种全新设计的样品板上检测即可直接得到结果。由于全新的疏水点样表面使得样品检测完之后还可以用Tips直接回收样品，如果不需要当然也可以简单擦拭彻底清洁样品板，减少样品间交叉污染。检测时间5秒之内即可完成读数、出峰识别和检测峰确认。检测波长范围200nm-1100nm。核酸扫描的可视化功能使得可以检测样品中杂质的存在，对于RNA样品测定非常有用。Press-to-Read功能使得按下检测键后才打开光源检测，减少光源工作时间延长光源使用寿命。整体光学结构为固定化设计，避免搬动造成光路偏移。 NanoVue的设计上内置了很多功能，方便使用者的工作----既然要简化操作，当然是越方便越好！比如，仪器内置寡核苷酸引物的分析方法，只要键入66碱基以下的寡核苷酸序列即可计算获得转换因子（ug/ml），分子量理论吸光度（AU/umol）和理论Tm值。内置多种蛋白定量检测方法，包括Bradford, BCA, Lowry, Biuret和直接紫外法，最多可支持27个标准样品制作标准曲线并可以保存。此外，仪器可以自动测定所需光径也可手动调教以满足特殊要求。可以单点校正或者多点校正、自选波长测定目标样品浓度。大面积高分辨率液晶屏上可显示所有结果，包括标准曲线波长扫描图像，处处体现方便用户的宗旨。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903121121_138121_1631196_3.jpg[/img]