维生素皂化原理

脂溶性维生素A、D和E是维持动物体正常代谢所必需的营养素，具有促进生长，提高免疫力等作用，已经广泛添加至大规模畜禽养殖所需的饲料中。饲料中维生素ADE检测面临挑战：1.饲料基质复杂；2.维生素ADE在样品制备过程中易受光、热等因素的影响；3.维生素D3添加量低。目前饲料中维生素A、E和D的测定方法主要参考国家标准GB/T 17817-2010、GB/T 17812-2008和GB/T 17818-2010，主要使用皂化萃取法和甲醇直接提取法：其中皂化萃取法主要针对除维生素预混和饲料以外的其他种类饲料，分析过程包括皂化、液液萃取等步骤，维生素D测定需使用反相色谱净化，整个样品分析过程繁琐、费时且试剂消耗量多。本文介绍了一种采用在线固相萃取结合二维液相色谱（Online SPE-2D-LC），同时测定饲料中维生素ADE的快速分析方法。

传统人工提取脂溶性维生素A、D、E的方法过程繁琐，耗时长，避光性不好，皂化不完全，提取效果差，人为误差较大，维生素提取率低。全自动脂溶性维生素分析仪提取维生素A、D、E可在90分钟内自动完成皂化、提取、分离和引入样品的蒸发，最大批处理4个样品。

维生素A的异丙醇溶液在325nm波长下有最大吸收峰，其吸光度与维生素A的含量成正比。本法的灵敏度较比色法高，可测定维生素A含量低于5µ g／g的样品。主要缺点是在维生素A最大吸收波长325 nm附近许多其他化合物也有吸收，干扰测定，故本法适用于透明鱼油，维生素A的浓缩物等纯度较高的样品。对于一般样品，测定前必须先将脂肪抽提出来进行皂化，萃取其不皂化部分，再经柱层析除去干扰物。

维生素是维持机体正常活动必不可少的物质，适量的各种维生素作为饲料添加剂能促进禽畜生长，增强禽畜体质，产生显著的经济效益。GBT17817-2010、17818-2010 和17812-2010 采用HPLC 法分别测定饲料中维生素A、D 和E 的含量，样品均需要经过皂化、乙醚萃取过程，通常Vitamin A 和Vitamin E 在样品中含量较高，受基质干扰较少，可直接进样分析；但Vitamin D 含量较低，易受基质干扰，需要经过制备液相色谱的净化，收集含有Vitamin D 的流出物后，再以RP 或NP-LC 进行分析，前处理过程极其繁琐。本实验拟采用在线二维中心切割方法，同时完成维生素ADE 的测定。

本实验建立了高效液相色谱-串联质谱法同时测定保健食品中维生素A等质量浓度的检测方法，样品中的维生素经皂化反应后，通过高效液相色谱-串联质朴技术，可分别对保健食品中的维生素等 7种脂溶性维生素进行定性和定量分析，实验的精密度和回收率能满足实际检测要求，检出限低，可用于本系统对保健食品等食品中维生素A含量的日常监测。

本文采用在线二维色谱分离法，一维和二维分离均基于反相色谱，样品经过皂化、萃取后，直接进样分析，样品净化在线完成，一次进样完成all-trans 和13-cis 维生素A 和α - 维生素E 的测定，提高了方法的准确性和样品分析效率。

本实验建立了高效液相色谱-串联质谱法同时测定保健食品中维生素D等质量浓度的检测方法，样品中的维生素经皂化反应后，通过高效液相色谱-串联质朴技术，可分别对保健食品中的维生素D2、维生素D3等 7种脂溶性维生素进行定性和定量分析，实验的精密度和回收率能满足实际检测要求，检出限低，可用于本系统对保健食品等食品中维生素D含量的日常监测。

本实验建立了高效液相色谱-串联质谱法同时测定保健食品中维生素E等质量浓度的检测方法，样品中的维生素经皂化反应后，通过高效液相色谱-串联质朴技术，可分别对保健食品中的α-维生素E、β-维生素E、γ-维生素E、和δ-维生素E等 7种脂溶性维生素进行定性和定量分析，实验的精密度和回收率能满足实际检测要求，检出限低，可用于本系统对保健食品等食品中维生素E含量的日常监测。

本文参照国标GB 5009.296-2023《食品中维生素D的测定》，采用二维液相色谱系统，建立了测定乳制品中维生素D2、D3含量的分析方法。样品经皂化和液液萃取后进样分析，对该方法的线性、重现性和加标回收率等性能指标进行了测试。维生素D2、D3线性关系良好，相关系数大于0.999。重复性实验中，维生素D2、D3保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.01-0.04之间和 0.20-3.67之间，重复性良好。方法精确度实验中，维生素D2、D3平均回收率分别在81.0~88.3%之间，相对标准偏差在1.65~3.96%之间。

本文建立了一种二维液相色谱法同时测定配方奶粉中维生素A、D和维生素E（α-生育酚）含量的方法。样品经制备、皂化、液液萃取后进行上机分析，通过对该方法的线性、重现性和加标回收率等性能指标进行了测试。结果表明：各组分线性关系良好，重现性好，回收率高，满足法规测定要求，适用于奶粉中维生素A、D和E的含量测定。

本文使用岛津高效液相色谱仪开发并验证了一种高效、稳定的方法，用于分析婴幼儿配方奶粉中维生素A和维生素E的5种异构体（α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚）。婴幼儿配方奶粉样品进行皂化处理后，使用SHIMSEN Styra HLB柱进行净化后上机分析。结果表明：各组分在线性关系良好，重现性好，回收率高，是用于测定脂溶性维生素的一种简便、低成本、高效且易于操作的技术。

本文建立了 化妆品中维生素 D2和维生素 D3的 HPLC测定 方法。 参照 化妆品安全技术规范（ 2015版） 中 维生素 D2和维生素 D3的 色谱条件， 采用色谱柱 ShimNex CS C18分析 维生素 D2和维生素 D32个化合物 峰形 良好 ，分离度 大于 1.5，满足日常检测需求。此方法可为 化妆品中维生素 D2和维生素 D3的 HPLC分析 提供参考 。

摘要 目的 建立食品 多维片和饮料中水溶性维生素C B1 B2 B6 B12 烟酸 烟酰胺 叶酸和脂溶性维生素AD3 E K1的反相高效液相色谱同时测定方法 方法 样品中水溶性维生素经0.01 molL HCl超声提取 脂溶性维生素经皂化法提取 饮品直接过滤后测定 色谱条件 色谱柱为C18柱 流动相为0.05 molL KH2PO4溶液 pH 6.0 -甲醇 梯度洗脱流速1.1~1.5 mlmin 柱温40℃结果 12种维生素标准曲线的线性范围 VC为0-5μg 烟酸为0-0.5μg 其余均为0-1μg 相关系数均大于0.996 相对标准偏差均小于5.0% 方法检出限为0.073-0.193μg ml 加标回收率为75.5%-118.0% 。结论：所建立的方法快速、简便、灵敏、准确，应用于复合维生素片、米粉、饮料中12种维生素的同时分析，取得了较好结果

本方法参照现有的文献方法，基于二维液相色谱并串联在线固相萃取 (online SPE) 技术，成功建立了食品中维生素 A (VA)、维生素 D (VD) 及三种维生素 E (VE) 异构体的中心切割快速分析方法。此方法将前处理皂化液直接进样，省去了液液萃取等复杂的前处理过程。第一维液相色谱对 VA 和 VE 进行分析，同时对 VD 进行初步净化；第二维液相色谱对 VD 进一步分离，整个分析过程只需一次进样，即可完成样品中 VA、VD 和 VE 的测定。该方法不仅可以节省大量的样品前处理时间，同时可以避免复杂的样品前处理过程导致的回收率不稳定现象。实验结果准确、重现性好，表明该方法可以用于多种食品基质中脂溶性维生素的常规快速检测。

本文使用岛津超高效液相色谱串联质谱联用仪建立了测定婴幼儿配方奶粉中维生素D2/D3的方法。婴幼儿配方奶粉样品进行皂化处理后，使用SHIMSEN Styra HLB通过固相萃取 (SPE) 进行萃取和净化，LC-MS/MS上机分析。2种组分在13 min时间内分析完成，各组分在1～1000 ng/mL浓度范围内线性关系良好。加标回收和精密度实验测试表明，方法重现性好(RSD 80%)，是用于测定脂溶性维生素的一种简便、低成本、高效且易于操作的技术。

维生素是机体必须的营养素，分为水溶性维生素和脂溶性维生素。此次，使用反相柱对维生素B6等9种维生素成分进行了同时分析，以DAD检测器进行了分析，通过使用DAD检测器，检测出的成分可以通过吸收光谱来进行鉴定，因此，用于像食品这样杂质成分较多的样品分析时尤为有效。

维生素是机体必须的营养素，分为水溶性维生素和脂溶性维生素｡ 此次，使用反相柱对维生素C9种水溶性维生素成分进行了同时分析，以DAD检测器进行了分析｡ 通过使用DAD检测器，检测出的成分可以通过吸收光谱来进行鉴定，因此，用于像食品这样杂质成分较多的样品分析时尤为有效。

本文建立了一种采用在线固相萃取-二维液相色谱法同时测定配方奶粉中维生素A、D2、D3和维生素E的5种异构体（α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚）含量的方法。样品经皂化后直接上机进样，仪器自动完成样品的富集、SPE净化、目标组分的分离及测定过程，并通过对该方法的线性、重现性和加标回收率等性能指标进行了测试。结果表明：各组分线性关系良好，重现性好，回收率高，满足测定要求，适用于奶粉中维生素A、D和E的含量测定。

本文建立了 维生素 E含量测定 的 气相 方法。结果表明，采用色谱柱 SH-1 (0.25um*0.25mm*30m )分析 维生素 E 维生素 E理论塔板数为 27121 高于药典要求，维生素 E峰与相邻杂质峰间 的分离度 均 满足《中国药典》 要求。此方法可为 维生素 E含量 的测定 提供参考 。

有关维生素 A、D、E 的新国家标准方法从 2017 年 6 月 23 日起实施，覆盖了婴幼儿食品、乳品、肉与肉制品、食用植物油、坚果、豆类和辣椒粉等多种食品基质，用于检测其中所含的维生素 A (VA)、维生素 D (VD) 和四种维生素 E (VE) 异构体的含量。其中，VD 由于本身含量低、基质干扰严重，该国家标准方法采用液质联用或半制备正相净化的方式对其进行分离检测。但液质联用方法复杂，维护成本相对较高；而正相净化方法易受流动相等条件影响，从而造成结果不准确。本方法参照现有的文献方法，基于二维液相色谱技术，成功建立了食品中 VA、四种 VE 异构体及微量 VD 的中心切割快速分析方法。此方法第一维对 VA 和四种 VE 进行分析，并对 VD 进行初步净化；第二维对 VD 进行进一步分离，整个分析过程只需一次进样即可完成样品中 VA、四种 VE 及微量 VD 的测定。该方法不仅可以节省大量的样品前处理时间，同时可避免正相体系不稳定而导致的 VD 含量检测不准确现象的发生。并且所得结果准确、重现性好，可以用于多种食品基质中脂溶性维生素的常规快速检测。

本文介绍通过优化LC条件，实现对多种脂溶性维生素包括α-胡萝卜素和β-胡萝卜素同时定量。使用本方法对蔬菜汁中的α-胡萝卜素和β-胡萝卜素分别进行定量，同时进行了加标回收试验。由于α-胡萝卜素和β-胡萝卜素不存在酯类结构，因此，可以省略预处理中的皂化处理。可通过简单的萃取操作获得良好的回收率。

在本应用报告中描述了一种定性和定量分析水溶性维生素的应用解决方案。开发了一种单一、耐用的反相高效液相色谱(RP-HPLC) 方法，与其他的许多传统方法只能对各组分单独定量分析不同，本方法可以同时测定10 种不同维生素。使用Agilent Poroshell EC-C18 色谱柱和Agilent 1260 Infinity 液相色谱系统可以实现分离和定量。在波长 200-640 nm 的范围内可以使用二极管阵列监测器(DAD) 进行检测。因为不同维生素的最大吸收波长不同，故需要在８ 种不同的波长下进行数据采集。这种方法部分有效，适用于复合维生素片的常规营养标注分析。建立了每种维生素的检测限(LOD)，定量限(LOQ) 和线性范围。使用安捷伦方法转换软件还可以将该方法有效的转换成较快的使用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统的超高压液相色谱(UHPLC) 方法。

有关食品中维生素 A、D、E 分析的新国家标准方法[1] 从 2017 年 6 月 23 日起实施，覆盖 了婴幼儿食品、乳品、肉与肉制品、食用植物油、坚果、豆类和辣椒粉等多种食品基质。 但是该标准方法中规定的样品前处理过程极其复杂、测定方法多样（同一成分有不同的检 测方法）、检测周期长、目标化合物回收率低且重复性差，极大降低了分析效率。为解决 该国标方法所存在的难点和不足，需要开发一种同时测定维生素 A、D、E 的稳定高效的 二维液相色谱方法。 本方法参照现有的文献方法[2-4]，基于二维液相色谱并串联在线固相萃取 (online SPE) 技 术，成功建立了食品中维生素 A (VA)、维生素 D (VD) 及三种维生素 E (VE) 异构体的中心切 割快速分析方法。此方法将前处理皂化液直接进样，省去了液液萃取等复杂的前处理过 程。第一维液相色谱对 VA 和 VE 进行分析，同时对 VD 进行初步净化；第二维液相色谱对 VD 进一步分离，整个分析过程只需一次进样，即可完成样品中 VA、VD 和 VE 的测定。该 方法不仅可以节省大量的样品前处理时间，同时可以避免复杂的样品前处理过程导致的回 收率不稳定现象。实验结果准确、重现性好，表明该方法可以用于多种食品基质中脂溶性 维生素的常规快速检测。实验结果表明，新的维生素检测方法具有以下优势： – 样品分析通量大幅提高。皂化液直接进样方法与国标方法相比，样品前处理时间由原来的 2–3 小时缩短为 30 分钟左右，分析通量 提高 5 倍以上 – 省去了前处理提取步骤，溶剂使用量大大减少，降低了实验成本，也避免有机试剂对实验人员造成危害。阀切换方法代替繁琐 的净化、浓缩等过程，自动化程度大幅提高 – 按照国标方法的检测低限浓度，考察方法的灵敏度，分析图谱表 明所有物质在最低限均有良好响应

在本应用报告中描述了一种定性和定量分析水溶性维生素的应用解决方案。开发了一种单一、耐用的反相高效液相色谱(RP-HPLC) 方法，与其他的许多传统方法只能对各组分单独定量分析不同，本方法可以同时测定10 种不同维生素。使用Agilent Poroshell EC-C18 色谱柱和Agilent 1260 Infinity 液相色谱系统可以实现分离和定量。在波长 200-640 nm 的范围内可以使用二极管阵列监测器(DAD) 进行检测。因为不同维生素的最大吸收波长不同，故需要在８ 种不同的波长下进行数据采集。这种方法部分有效，适用于复合维生素片的常规营养标注分析。建立了每种维生素的检测限(LOD)，定量限(LOQ) 和线性范围。使用安捷伦方法转换软件还可以将该方法有效的转换成较快的使用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统的超高压液相色谱(UHPLC) 方法。

在本应用报告中描述了一种定性和定量分析水溶性维生素的应用解决方案。开发了一种单一、耐用的反相高效液相色谱(RP-HPLC) 方法，与其他的许多传统方法只能对各组分单独定量分析不同，本方法可以同时测定10 种不同维生素。使用Agilent Poroshell EC-C18 色谱柱和Agilent 1260 Infinity 液相色谱系统可以实现分离和定量。在波长 200-640 nm 的范围内可以使用二极管阵列监测器(DAD) 进行检测。因为不同维生素的最大吸收波长不同，故需要在８ 种不同的波长下进行数据采集。这种方法部分有效，适用于复合维生素片的常规营养标注分析。建立了每种维生素的检测限(LOD)，定量限(LOQ) 和线性范围。使用安捷伦方法转换软件还可以将该方法有效的转换成较快的使用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统的超高压液相色谱(UHPLC) 方法。

在本应用报告中描述了一种定性和定量分析水溶性维生素的应用解决方案。开发了一种单一、耐用的反相高效液相色谱(RP-HPLC) 方法，与其他的许多传统方法只能对各组分单独定量分析不同，本方法可以同时测定10 种不同维生素。使用Agilent Poroshell EC-C18 色谱柱和Agilent 1260 Infinity 液相色谱系统可以实现分离和定量。在波长 200-640 nm 的范围内可以使用二极管阵列监测器(DAD) 进行检测。因为不同维生素的最大吸收波长不同，故需要在８ 种不同的波长下进行数据采集。这种方法部分有效，适用于复合维生素片的常规营养标注分析。建立了每种维生素的检测限(LOD)，定量限(LOQ) 和线性范围。使用安捷伦方法转换软件还可以将该方法有效的转换成较快的使用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统的超高压液相色谱(UHPLC) 方法。

在本应用报告中描述了一种定性和定量分析水溶性维生素的应用解决方案。开发了一种单一、耐用的反相高效液相色谱(RP-HPLC) 方法，与其他的许多传统方法只能对各组分单独定量分析不同，本方法可以同时测定10 种不同维生素。使用Agilent Poroshell EC-C18 色谱柱和Agilent 1260 Infinity 液相色谱系统可以实现分离和定量。在波长 200-640 nm 的范围内可以使用二极管阵列监测器(DAD) 进行检测。因为不同维生素的最大吸收波长不同，故需要在８ 种不同的波长下进行数据采集。这种方法部分有效，适用于复合维生素片的常规营养标注分析。建立了每种维生素的检测限(LOD)，定量限(LOQ) 和线性范围。使用安捷伦方法转换软件还可以将该方法有效的转换成较快的使用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统的超高压液相色谱(UHPLC) 方法。

维生素是机体必须的营养素，分为水溶性维生素和脂溶性维生素此次，使用反相柱对维生素B1等9种维生素成分进行了同时分析，以DAD检测器进行了分析，通过使用DAD检测器，检测出的成分可以通过吸收光谱来进行鉴定，因此，用于像食品这样杂质成分较多的样品分析时尤为有效。

维生素是人体生长发育所必需的营养元素，其中维生素A、维生素D和维生素E是机体维持正常代谢和机能的所必需的脂溶性维生素[1]。除了维生素A、维生素D2和D3，以及α -维生素E（α -生育酚）外，相关研究发现维生素E的其它生育酚异构体对人体也有一定生理作用，其中以β 、γ 、δ -生育酚形式较为常见[2]

本文 建立了 维生素 D2和维生素 D3的 HPLC测定方法 。参照 新国标《食品中维生素 D的测定》征求意见稿中第 2法二维 色谱条件， 采用色谱柱 ShimNex S-C18-PAH分 析 维生素 D2和维生素 D3，结果显示， 2个化合物峰形对称，维生素 D2和维生素 D3达到基线分离 ，满足日常检测需求。此方法可为 食品中维生素 D2和 D3的检测提供 参考 。