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超声细菌分散计

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超声细菌分散计相关的论坛

  • 关于细菌超声破碎的小总结

    细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式,一种是在强启动子条件下的高效表达,由于蛋白的过度表达,使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲,以固体颗粒的形式堆积于胞间质中,这就是所说的包涵体,另外一种是间质内的可溶性表达,即可以发生正常折叠,具有生物活性。一般情况下,细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包涵体和可溶性表达的蛋白分离开。超声破碎的条件一般是300 w,10 s/10 s,20分钟,具体条件可根据自身情况而定。 超声前菌体的准备:菌液离心后,先用PBS将菌沉淀洗2-3遍,然后按原菌液体积的1/5-1/10加入裂解液重悬菌体,裂解液的成分:50 mMTris-HCl, pH8.0, 2 mM EDTA,100 mM NaCl,加溶菌酶至100 ug/ml,0.1%Triton X-100。切记冰浴超声! 如何判断是否超声完全:根据网友的经验,一般有以下几个方面: 1. 外观判断:超声前菌悬液是浑浊的,超声完全后变的透明、清澈。2. 液体的粘滞性:超声后菌液从枪头滴下不粘连。3. 高速离心:有用高速离心检测超声破碎程度的(一般用6,000 g 10 min, 比一般离心收集菌体的转速高一点)。 沉淀是未破碎或破碎不完全的菌体。 4. 染色:破碎后的菌液涂片,革兰氏结晶紫溶液染色0.5分钟,镜检。超声后加入核酸酶消除核酸对蛋白的污染。一些需要注意的问题: 1. 蛋白以包涵体形式表达,追求的是高破碎率,要求细胞碎片很小,而另一种蛋白是可溶形式表达,所以细胞碎片不能很小,两种情况要求不同但目的相同,都是便于后期的固液分离。2. 如果超声时出现黑色沉淀,说明超声功率太强。3. 超声时间太长、功率太高对蛋白活性肯定有影响。4. 尽量防止泡沫的产生。

  • 【分享】关于细菌超声破碎的一些经验总结

    细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式一种是在强启动子条件下的高效表达,由于蛋白的过度表达,使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲,以固体颗粒的形式堆积于胞间质中,这就是所说的包涵体,另外一种是间质内的可溶性表达,即可以发生正常折叠,具有生物活性。一般情况下,细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包涵体和可溶性表达的蛋白分离开。 超声破碎的条件一般是300w,10s/10s,20分钟,具体条件可根据自身情况而定。超声前菌体的准备:菌液离心后,先用PBS将菌沉淀洗2-3遍,然后按原菌液体积的1/5-1/10加入裂解液重悬菌体,裂解液的成分:50mMTris-HCl, pH8.0, 2mM EDTA,100mM NaCl,加溶菌酶至100ug/ml,0.1%Triton X-100。切记冰浴超声!

  • 空调散热片上细菌哪来的?

    今天看见一条消息,88%空调散热片细菌总数超标 最高超标可达1000倍以上据经济之声《天下财经》报道,中国疾控中心、上海市疾控中心等机构对上海、北京、深圳进行实地家用空调入户调研发现:88%的空调散热片细菌总数超标,84%的空调散热片霉菌总数超标;空调散热片中检出细菌超标最高可达1000倍以上。散热片上也能滋生细菌吗?

  • 馒头细菌超三百倍 北京市质监局公布4种不合格食品

    这馒头细菌超三百倍 4种不合格食品"脏"得吓人 一桶山泉水,菌落总数超标300多倍;一个馒头的大肠菌群超标300多倍……北京市质监局今天公布生产环节发现的4种不合格食品,这些市民经常购买的食品实测出的细菌多得吓人,有3种食品的细菌数都达到标准值的百倍以上。这些"脏"食品在进入流通领域之前被拦下。 市质监局在对本市食品生产企业监督抽查中发现,北京燕兴隆饮料有限公司生产的桶装峨眉山山泉水,菌落总数实测值是标准值的380倍;北京祥聚源食品有限公司生产的萨琪玛,霉菌计数实测值是标准值的2.2倍;北京马池口三和福盛豆制品厂生产的袋装香干,菌落总数实测值是标准值的426倍多;而北京乐佰力食品有限责任公司生产的"名旺沁园"袋装馒头,大肠菌群实测值更达到标准值的366倍多。

  • 【求助】什么分散剂可用

    各位大虾,本人对钨粉和碳化钨粉做了好多粒度测试实验,但遇到一个很棘手的问题——团聚。超声对它不是很明显,我想有没什么好的分散剂可进行分散处理。有没哪位做过这方面的牛人指点下,本人比较急着做实验,非常感谢!!!

  • 三成脸盆细菌总数超标

    为确保春节期间市民酒店住宿的卫生安全,近日,瓯海区卫生监督所对辖区内10家旅店的公共用品用具开展卫生监测。检验结果显示,所送的样品中三成脸(脚)盆细菌总数超标。 此次行动,瓯海区卫生监督所卫生执法人员对10家住宿旅店的毛巾、茶具、床上卧具(床单)、脸(脚)盆、马桶坐垫、拖鞋做了随机采样,共采集120份样品。经过瓯海区疾病预防控制中心检验,毛巾、茶具、床上卧具(床单)的细菌总数、大肠菌群指标均合格。有4家旅店脸(脚)盆细菌总数超标,3家旅店马桶坐垫细菌总数超标, 2家旅店拖鞋霉菌超标。其中,景山锐思特汽车店的马桶细菌总数超出8倍;温州铜锣湾假日酒店有限公司脸盆细菌总数超标,拖鞋霉菌数超出正常值的56倍。 从监测类别看,脸(脚)盆合格率最低,为70%。其他公共用品用具合格率均在85%以上。合格率从高到低分别为毛巾、茶具、床上卧具、拖鞋、马桶坐垫、脸(脚)盆。

  • 关于粒度分析中的试样浓度,分散时间,分散介质,分散剂等

    一般情况下,粉体试样浓度较小时 ,所测得的粒径较小、粒度分布范围较窄(由粒度分布曲线看出) 当粉体试样浓度较大时 ,因复散射及颗粒团聚 ,所测得的粒径偏大、粒度分布范围较宽 ,测试结果误差较大.但并不能说明粉体试样浓度越小越好 ,因为浓度小到一定程度时 ,样品中的颗粒数已大大减小 ,而太少的颗粒数会产生较大的取样及测量随机误差 ,致使样品不具有代表性 ,所以测量时也应该控制浓度的下限范围。由于各种仪器超声分散器功率的差异,这里需要自己做试验。进行粉体的粒度测试时 ,选择的分散介质不仅应该对粉体有浸润作用 ,而且又要成本低、无毒、无腐蚀性.通常使用的分散介质有水、水+甘油、乙醇、乙醇+甘油、异丙醇等.对大多数粉体而言 ,乙醇的浸润作用比水强 ,因而更容易使颗粒得到充分分散。分散剂中使用最多的是表面活性剂,主要有:阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性表面活性剂、非离子表面活性剂、特殊类型表面活性剂等,同时分散剂的浓度对测定结果也有一定影响 ,使用时应加以控制。

  • 【原创】粒度分析的关键在于取样和分散

    粒度仪种类多,同一个样品用不同仪器测量结果不同很常见,事实上粒度分析的正确与否,主要在于取样和分散,取样均匀,样品能够分散均匀,结果自然不会差,比如标准样品,大家测的都很好。但现实样品呢?不同人取不同样就会有不同结果,不同分散剂会有不同测试结果,不同超声时间会有不同结果,不同的折射率有不同的结果,所以建立所谓的标准测试流程远比纯粹的结果对比重要。原则上而言,进样量越大,测试结果和原始样品的一致性越高,粒度分析本来就是一个统计学的模型!

  • 激光粒度仪湿法分散样品的方法

    [font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#333333]1、被测粉料若悬浮在水面或在水中分散不理想。可采用甘油的水溶液或乙醇作介质,在样品池中进行超声波分散后测试。[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#333333]2、超声波分散时间大约为15-30秒,测试结果稳定,不在跳动,则说明分散均匀。有些样品由于强度低,超声分散时间过长,则会使测试结果越来越细:分散时间太短则样品未能充分分散,影响测试结果。[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#333333]3、一些样品溶于水,则改用酒精、异丙醇、甘油或该样品的饱和溶液做介质。有些特殊粉体需要用正庚烷等有腐蚀性的介质,就必须更换专用部件或采用测试皿静态测试。[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#333333]4、为使样品分散均匀,一般需要加入分散剂。常用分散剂有六偏磷酸钠、硅酸钠、多偏磷酸钠等。根据经验,一般采用餐具洗洁精加水(1:3)作分散剂,每次用胶头滴管加1~2滴。用量不宜过多,否则将产生气泡。影响测试结果的准确性。不过分散过程中产生气泡这点不用担心。[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#333333]5、一般来说,样品加入量约为0.1-0.5g.样品不同加粉量有所不同。粉越细,样品用量越少。[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#333333]6、激光粒度仪测试的颗粒,计算机处理时被视为等效球体,被测样品如为片状、棒状、针状等,当最大尺寸或者最小尺寸处于迎光面时两者的测试结果差异会很大,因为在流动状态下的试样,最大尺寸处于迎光面的几率大于最小尺寸的几率,特征越明显,其几率偏差越大。反应客观情况下的结果比处于等几率情况下的结果偏粗。[/color][/size][/font]

  • 57.10 光合细菌生物转化槲寄生转化机理及其抗肿瘤作用物质基础初步研究

    作者:牛红军(山西医科大学)摘要: 目的:初步研究光合细菌生物转化槲寄生的转化机理,并且对光合细菌生物转化槲寄生培养液中具有细胞毒活性的蛋白质和总三萜类物质进行研究。 方法: 实验一:(1)采用pH计测定光合细菌转化槲寄生过程中培养液pH的变化趋势;(2)聚丙烯酰胺凝胶电泳法获得光合细菌(PSB)蛋白质、酯酶、过氧化物酶及超氧化物歧化酶的电泳图谱;(3)槲寄生提取液中添加吲哚,以PSB进行生物转化,通过HPLC法测定靛蓝的生成量来反映PSB加氧酶活性。 实验二:将光合细菌转化槲寄生培养液(PSBT)离心,得到PSBT上清液和菌体沉淀。菌体沉淀用超声波辅助冻融法破碎,离心,上清液即为PSBT菌体沉淀提取液。取PSBT上清液及PSBT菌体沉淀提取液,进行硫酸铵沉淀和透析,分别得PSBT上清液总蛋白提取液和菌体沉淀总蛋白提取液。取不同浓度的总蛋白质提取液,用MTT法测定细胞毒活性。 利用AKTA purifier 10层析系统,Hitrap Desalting和CM Fast Flow等层析柱,采用不同缓冲液体系对PSBT上清液总蛋白提取液进行蛋白质纯化。 实验三:采用紫外分光光度法对槲寄生提取物和PSBT中三萜类化合物进行比较研究;分别采用薄层色谱法和高效液相色谱法(HPLC)对齐墩果酸进行定性分析和含量测定,HPLC色谱条件:色谱柱为Diamonsil C18 (200mm×4.6mm, i.d.5μm),流动相为甲醇-0.18%的磷酸水(86:14),检测波长210nm,柱温25℃,流速1ml/min。结果: 实验一:(1)接种PSB后,纯PSB培养液pH缓慢上升,PSBT的pH迅速下降;(2)PSBT中菌体蛋白质、酯酶、过氧化物酶及超氧化物歧化酶的电泳图谱与纯PSB培养液中菌体的电泳图谱不同;(3)未得到PSBT和纯PSB培养液中菌体的超氧化物歧化酶(SOD)电泳图谱;(4)加入吲哚后,PSBT中有靛蓝类物质生成,而纯PSB培养液中无靛蓝产生。 实验二:各蛋白质样品的细胞毒活性: (1)上清液总蛋白对HO-8910细胞的半数抑制浓度(IC50,mg/mL,按照槲寄生提取液中原药材含量计算,下同):①IC50200mg/mL:沼泽红假单胞菌转化槲寄生水浸提培养液(浸沼,JZ)是0.18,槲寄生水浸提培养基(浸对,JD)是20,球形红细菌转化槲寄生水浸提培养液(浸球,JQ)是60:②200mg/mLIC502000mg/mL:槲寄生水提培养基(水对,SD)、沼泽红假单胞菌转化槲寄生水提培养液(水沼,SZ)和球形红细菌转化槲寄生水提培养液(水球,SQ);③IC502000mg/mL:球形红细菌转化槲寄生醇提培养液(醇球,CQ)、沼泽红假单胞菌转化槲寄生醇提培养液(醇沼,CZ)和槲寄生醇提培养基(醇对,CD)。 (2)上清液总蛋白对SGC-7901细胞的半数抑制浓度(IC50. mg/mL):①IC50 200mg/mL:JD是8,JZ是20,JQ是78,CQ是150;②200mg/mLIC502000mg/mL:SQ。 (3)菌体沉淀总蛋白对HO-8910细胞的半数抑制浓度(IC50. mg/mL):①IC50 200mg/mL:SZ是84,CZ是122;②200mg/mLIC502000mg/mL:JQ和JZ;③IC502000mg/mL:纯球形红细菌培养液(球,Q)、纯沼泽红假单胞菌培养液(沼,Z)、SQ和CQ。 (4)菌体沉淀总蛋白对SGC-7901细胞的半数抑制浓度(IC50. mg/mL):①IC50 200mg/mL:JZ是14,JQ是18;②200mg/mLIC502000mg/mL:CZ、CQ和SZ。 (5)其它蛋白样品对肿瘤细胞几乎没有抑制作用。 SZ上清液总蛋白、SQ上清液总蛋白和SD总蛋白在CM Fast Flow层析柱的各种层析条件下都至少得到一个穿透峰和一个洗脱峰,另外,SQ上清液总蛋白在pH5.0的缓冲液体系中还额外分离得到的一个洗脱峰;SZ上清液总蛋白和SQ上清液总蛋白都在pH6.5的缓冲液体系中多分离得到一个小穿透峰。 实验三:CQ和CZ的总三萜含量与CD相比分别增加36%、14.7%;CQ和CZ的齐墩果酸含量与CD相比分别增加925%、281%;SQ、SZ及SD的总三萜和齐墩果酸含量均很低。 结论: (1)培养液中加入槲寄生后,光合细菌参与槲寄生的生物转化反应的某些酶被抑制或激活;(2)各种蛋白质提取液中,PSB转化槲寄生水浸提培养液上清液总蛋白的抑瘤活性最大。各种浓度JZ上清液总蛋白、JQ上清液总蛋白和JD总蛋白的细胞毒活性随作用时间变化的规律不同,但都具有时间-剂量依赖性。由此可知:PSB生物转化后,蛋白质的抑瘤活性规律发生了变化,抑瘤活性的蛋白质组分发生了改变。(3)PSBT中有新的蛋白质组分生成,说明光合细菌可以转化槲寄生成分生成新的蛋白质;(4)槲寄生醇提培养基经过光合细菌生物转化后,总三萜和齐墩果酸含量均增加,球形红细菌转化生成总三萜和齐墩果酸的能力比沼泽红假单胞菌强。三萜类化合物含量的增加可能是PSBT抗肿瘤作用增强的部分物质基础。

  • 【转帖】我国通报三例超级细菌病例

    本报讯 在携带NDM-1耐药基因的“超级细菌”被报道两个多月之后,中国也分别在宁夏两名新生儿和福建一名老年癌症晚期患者样本中,检测到这一基因。其中,老年患者已因癌症去世,两名新生儿已治愈。  三病例分别来自宁夏福建  昨日,中国疾控中心疾控应急办不明原因疾病处置办公室主任倪大新,在通气会上通报了上述情况。  近期,中疾控和中国军事医学科学院的实验室,在对既往收集保存的菌株进行NDM-1耐药基因检测,共检出3株NDM-1基因阳性细菌。  其中,中疾控实验室检出的2株细菌为屎肠球菌,由宁夏自治区疾病预防控制中心送检,菌株分离自该区某医院的两名新生儿粪便标本。另一株由中国军事医学科学院实验室检出,为鲍曼不动杆菌,由福建省某医院送检,菌株分离自该医院的一名住院老年患者标本。  不会在普通公众间传染  浙江大学医学院第一医院、传染病诊治国家重点实验室教授肖永红说,携带NDM-1基因只是细菌获得抵抗能力,而不是获得新的攻击能力。它本身致病的能力或者传染性跟原来一样,并没有增强。只不过对抗菌药物的抵抗能力增强,因此,对一般的公众不会引起疾病的传染,他说,这一耐药菌主要对老弱病残人群容易受到感染,感染以后治疗困难。普通公众不用恐慌。  ■ 通报  宁夏患儿病因不能确定  【患者情况】  宁夏两名患儿分别在3月8日与3月11日,在宁夏回族自治区某县级医院出生,为低体重儿。两名婴儿都在出生后2-3日出现腹泻和呼吸道感染症状,其中一名患儿还伴有缺氧表现,随即转入儿科病房治疗。  中疾控传染病预防控制所所长徐建国说,在中国疾控中心传染病所和宁夏疾控中心合作中,从宁夏某县级医院里分离的疑似小肠结肠炎标本里,发现了有两株携带了该耐药基因,后经鉴定为屎肠球菌。  “因为这是回顾性调查,是8月底到9月份开展的,那个时候两个孩子早已经治愈出院了,我们做了回访,现在检测的结果是这两个孩子已经没有这种(耐药)细菌。已经治愈。”徐建国表示。  对于是否是“超级细菌”引起两名患儿患病的问题,倪大新解释说,屎肠球菌是人类肠道寄生的正常菌群之一,我们每个人都有,通常并不致病。两名患儿虽检出携带耐药基因的菌株,并不一定表明患儿所患疾病由该菌引起。  而有专家也对记者说,从病原菌的角度来说,还没有肠球菌引起腹泻的情况发生。

  • 【原创大赛】IKA T25分散机在农残检测中的使用与维护

    【原创大赛】IKA T25分散机在农残检测中的使用与维护

    在农残检测中,首先要面临的问题就是如何把目标物尽可能完全高效地从样品中提取出来,目前提取的常用方法有浸泡(震荡)、超声辅助萃取、均质提取、索氏提取等方法,其中广泛高效应用的应该就是均质提取了,而均质提取最常用到的就是IKA T25分散机,所见过的十几家检测机构都用到它。从我们十年来的使用情况来看,IKA T25分散机确实很好用。分散的目的是将不可溶的固体、液体或气态物质分散到液体中,在农残检测中是让农药目标物均匀分散于有机溶剂中完成农药的提取步骤。T25分散机主要由支架、支臂、固定螺丝、分散机主机、分散刀具组成。分散机带动分散刀具完成均质操作。装配完成如下图一。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212200925_414029_1623180_3.jpg分散刀头外壳为定子,内部径向轴承带动的分散刀具为转子。由于转子的高速运转,被分散的介质被自动吸入分散头,然后这些介质呈放射状以较高速度通过转子与定子之间。施加在分散介质上的巨大加速度产生极大的剪切力。另外,定-转子间介质的高速旋转扰动也促使介质达到最佳的分散效果。分散效果很大程度上取决于剪切梯度以及颗粒在剪切区域停留的时间。通常数分钟的分散就可以达到均质所需的效果。长时间的分散仅对于可得到粒度范围内介质的粒径起到明显的改善作用,但过长时间的分散会使介质的温度升高。因此在一定转速下的均质分散并不是持续的时间越长越好。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212200926_414030_1623180_3.jpg图二:IKA T25分散机工作原理图IKA T25分散机(基本型)调速轮共有五档分别对应6500转/分、9500转/分、13500转/分、17500转/分、21500转/分。因为分散刀具的高速运转时极容易导致介质液体溅出(在农残检测中就可能造成目标物的损失),所以一般进行分散均质操作时只要使用1-3档就可以满足均质提取的要求。我们主要按以下时间顺序进行农残检测的均质分散操作的:开机1档 30秒2档 60秒3档 30秒2档 60秒1档 30秒关机4档、5档只有在用水洗分散刀具清除样品嵌留时才能用到。为了尽可能保持分散机的优良性能,延长它的使用寿命,以下正确的使用和维护是必不可少的。1、均质器只适用于对处理过程中产生的能量不发生反应且可能产生危险的介质。同时被处理的介质也不能与其它方式产生的能量反应并产生危险,比如光照等。不能用均质器处理易燃、易爆介质,或在易燃易爆的环境中操作仪器。处理易挥发溶剂,要在通风橱中进行。2、使用电源电压必须和铭牌所示的额定电压一致。3、注意经过长期使用,存在磨损,转动部件可能会脱落。仪器震动可能导致固定螺丝的松动,仪器使用前要检查有无损坏或存在安装不牢固的现象,松动的部件要重新牢固安装,拧紧,将仪器牢固固定在支架的竖杆上,操作时要在平稳、防滑、干燥的台面上进行,确保仪器在操作过程中支架台不会移动。确保盛放介质的容器平衡,确保旋转刀具安装到位,固定旋钮安装牢固,并拧紧旋钮可靠固定刀具。确保整个系统良好的稳定性。4、在使用中要防止外部介质、液质渗入仪器内部。5、根据处理介质的种类,操作时要佩戴合适的防护设备。操作时分散转速不要设置太高,以防止介质液体溅出,对身体、衣物及周围物件造成污染或破坏。6、不同仪器的分散器具不要随意混用,以防意外发生。7、不要操作没有旋转刀具的仪器。也不要在干态下操作仪器,没有介质的冷却作用,垫圈和轴承可能会被严重磨损。8、在调试仪器前,确保仪器处于最低转速,然后逐渐提高转速。否则仪器将以设定的速度高速运转,如果由于转速过高导致被分散的介质溅出容器,要降低仪器转速。9、开启仪器前,确保分散刀头浸入待处理介质45mm以下;容器中待处理介质的深度不得少于55mm;分散刀头距容器底部不少于10mm,防止介质液体溅出。10、不是手持型的,不能用于手持操作。固定搅拌容器以防旋转,慎用玻璃容器装待分散介质,玻璃容器需要用弹性夹具固定,因为分散刀具在介质内高速旋转,容易产生巨大的吸力,极易导致玻璃容器破裂。11、如果仪器运转期间出现不平衡或异常噪声,应该立即停止,检查确认故障并更换分散刀具。12、不要长时间让分散刀具处于高速旋转状态,此时分散刀具和径向轴承可

  • 【分享】细菌的分布及外界因素对细菌的影响

    一、细菌的分布: 微生物种类繁多,繁殖迅速,分布广泛,不论自然界的空气、土壤、水,生活中的食物、各种物体和器械表面,以及动物和人的皮肤粘膜、与外界相通的腔道中都广泛存在着数量极其庞大的各种微生物,其中以细菌、放线菌最多。因此,了解微生物在自然界及正常人体的分布,对于在医疗实践及某些科学实验中树立无菌观念有着重要的意义。 (一)空气中细菌的检查(设计性实验选题) (二)水中细菌的检查(设计性实验选题) (三)人体皮肤表面细菌的检查(设计性实验选题) 【附录】细菌菌落的计数方法 ①选择生长均匀,无片状菌苔生长的平皿观察。一般先用肉眼观察,用记号笔在平板底上进行点数(以免遗漏),然后再持放大镜检查有无遗漏的微小菌落。 ②如菌落多而密集,可用分区法或菌落计数器计数。分区法是用记号笔在平皿底部通过圆心做垂直线,分为http://www.bbioo.com/bio101/UploadFiles/200611/20061113123705956.gif四区,再分别选择菌落密集和稀疏的两个区,再做平分线,使每一小区为平皿面积的1/8 或1/16,然后再分别挑选菌落稀疏和密集的两小区 进行计数,所得数乘以8或16,即为该平皿的菌落总数。(图4-1) ③简易的菌落计数器是一块玻璃板上刻划有144个面积为1平方厘米的正方形小格。将长有菌落的培养皿放上,计算10个小方格内的菌落数,如为30个,则平均1小方格为3个菌落。若培养皿直径是9厘米,则半径为4.5厘米,整个培养皿上的菌数是3个×3.1416×(4.5)2=191个菌落。二、外界因素对细菌的影响微生物和外界环境有密切的关系,当外界环境适宜就能进行正常的新陈代谢生长繁殖;当外界环境条件发生巨大改变,可导致微生物的主要代谢活动发生障碍,生长停顿,甚至死亡。在医学上常用人工的方法造成对微生物不利的环境,来抑制或杀灭微生物,以达到消毒灭菌的目的。其方法大致可分为物理、化学和生物三大类。 (一)物理因素对细菌的影响 1、温度对细菌的影响2、紫外线杀菌试验 (二)化学因素对细菌的影响 化学消毒剂的杀菌作用(三)生物因素对细菌的影响 噬菌体的特异性裂解细菌试验 【材料】大肠杆菌、痢疾杆菌的肉汤培养物、痢疾杆菌噬菌体、普通肉汤、普通琼脂平板。 【方法】 (1)将琼脂平板划分成三等份,注明1、2、3。 (2)分别以接种环取菌后,在1、3处涂布痢疾杆菌,2处涂布大肠杆菌。http://www.bbioo.com/bio101/UploadFiles/200611/20061113123903343.gif(3)分别沾取一接种环的痢疾杆菌噬菌体加于1、2处中央,(注意不要交叉污染),另取一接种环的肉汤放于3处中央。 (4)置37℃孵育24小时后取出,观察噬菌斑出现的位置(见图4-2),并记录之。 (四)细菌对抗生素的敏感性试验---纸片扩散法   又称Bauer-Kirby法。是将干燥的浸有一定浓度抗菌药物的滤纸片放在已接种一定量某种细菌的琼脂平板上,经培养后,可在纸片周围出现无细菌生长区,称抑菌圈。测量抑菌圈的大小,即可判定该细菌对某种药物的敏感程度。体外药敏结果可作为病人治疗选用药物的参考。 【材料】金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌18~24小时培养物、普通琼脂平板、小镊子;含有青霉素、庆大霉素、红霉素、复合磺胺、链霉素等抗生素的干燥滤纸片。 【方法】 (1)将金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌培养物密集均匀地涂布整个平板。 (2)将含有抗生素药物的滤纸片用烧灼灭菌的镊子分别贴于平板表面,相互间应间隔一定距离。 (3)37℃培养24小时后,观察结果。 【结果】 根据药物纸片周围抑菌圈直径的大小来判断该菌对各种药物的敏感程度。判断标准见表4-1 (五)中草药对细菌的抑菌作用测定

  • 快速测试细菌对抗生素的反应盒问世

    科技日报讯(记者常丽君)据物理学家组织网7月1日(北京时间)报道,瑞士洛桑联邦理工学院(EPFL)研究人员将纳米力学传感器与激光技术结合,最近造出了一种火柴盒大小的设备,能在几分钟内测出细菌对抗生素的反应,从而找出有效的疗法,而不必再花几个星期。相关论文发表在最近出版的《自然·纳米技术上》。 药物滥用增加了耐多种抗生素细菌的数量,如果有一种工具能快速探测并识别出细菌对抗生素的反应,是非常有用的。而现有方法要几周甚至一个月,医生需要培养细菌然后观察它们的生长,比如肺结核甚至要花一个月,才能确定某种抗生素对它是否有效。而研究小组结合了激光与纳米技术,将这一过程的时间减少到几分钟。 细菌的活动会在纳米尺度造成振动,但这些生命特征的信号很难觉察,而新检测设备能将细菌新陈代谢的显微运动转化为容易看见的电信号。该设备有一个极小的振动杠杆,只比头发丝略粗,探测到细菌的代谢活动时,杠杆就会以细菌代谢活动的频率振动,以此能确定有没有某种细菌。这种振动是纳米级的,为了检测这种振动,研究人员发射一束激光到杠杆上,激光会反射回来,信号被转换为电流信号。医生和研究人员就能像读“心电图”一样,根据读取的电流信号做出分析解释。如果电流信号是平直的,就说明细菌已经全死了。 有了这种方法,医生能轻松快速地确定某种细菌是否已被抗生素有效地“制伏”,这对那些耐药性的菌种尤其关键,在医疗阶段和化疗测试中都很有用。EPFL研究人员乔瓦尼·迪特尔说:“这种方法快速而准确。不仅能帮医生确定所用抗生素的适当剂量,还能帮研究人员找到最有效的方法。” 目前该测试工具已经缩小到仅火柴盒大小。“如果把它与压电设备结合而不是激光,还能进一步缩小到微芯片大小。”迪特尔说,这样结合起来能在几分钟内测试出一系列抗生素治疗某种细菌的效果。 研究人员还评估了新工具在肿瘤学领域的应用,有望用于检查肿瘤细胞在抗癌药物作用下的新陈代谢,评价某种抗癌疗法的效果。 总编辑圈点 从弗莱明爵士发现青霉素以来,可以说人类进入了一个“抗生素的时代”。近几十年的中国尤为如此,无论感冒发烧还是外伤感染,抗生素都是绝大多数医生和病患的首选。在救人无数的同时,人们对它的过分依赖也导致了严重的后果,比如说耸人听闻的“超级细菌”。对于帮助人们合理使用抗生素,新技术看上去无疑相当给力——给细菌拍个心电图,什么剂量的哪种抗生素能左右它们的死活,一目了然。现在还不知道这项技术离临床有多远,在此之前,我们仍然呼吁:安全用药,杜绝滥用抗生素!《科技日报》(2013-07-02 一版)

  • 【求助】碳管的分散

    请教各位有分散单壁碳管的好一点的办法吗,我现在用的是乙醇超声,但是怎么超都只能看见bundle

  • Co铁氧体用什么分散剂比较好?

    实验制备的是纳米级的粉末颗粒。可是最近做电镜扫描,出来的颗粒都快到微米量级了!!从图片上看团聚现象很强烈,能明显的看到大的颗粒看起来就像是石榴一样里面由许多小的颗粒组成。问问大家在做tem前应该怎么样进行分散。我之前做扫描前就装在无水酒精里面超声了几分钟,可以加什么试剂当做分散剂,量是多少?

  • 【原创大赛】细菌生化鉴定试验你了解几何?——三糖铁培养基的灵活应用

    细菌生化鉴定试验你了解几何?——三糖铁培养基的灵活应用摘要:糖类是细菌合成菌体成分必需的原料,各类细菌对各种糖类的分解能力也有差异,葡萄糖、乳糖、蔗糖是三糖铁培养基的三种糖,通过细菌对这三种糖的利用和分解产物做生化鉴定已经很有历史了。笔者通过对三糖铁培养基的应用,总结了三糖铁培养基在细菌鉴定中的灵活应用。总结:三糖铁培养基在肠道菌的鉴定中起到很重要的作用,只要灵活准确应用,将会在细菌的生化鉴定试验的第一步中起到关键性的作用。

  • 测试前分散及问题求教

    样品粘结的厉害,有很多硬块,预超声了20多分钟后检查还是有硬粒。象这种样品大家一般是粉碎后才测粒径还是直接就测试。【样品组成的粒度本身很小的。只是生产时可能控制问题出来的产品结块了。】分散的度是什么,就是说象上面的情况,难分散的一定要想办法分散了才能测试吗?还有个问题:测试硅酸树脂粒度,如果以水作介质,应该用什么做分散剂为好。有没做过的请指点下,谢谢!显微镜下粒度测试时设定的参数中有个密度选项,那个是什么意思?怎么设定为好?分析方式中有一个R-R分布模式,这个方式的意思是什么,反应的是粒度的哪方面的特征?请前辈指点,谢谢!

  • 【分享】水果蔬菜中多种杀菌剂的基质固相分散液相色谱测定方法研究

    [size=16px][font=Times New Roman][b]摘 要:[/b] 采用基质固相分散(MSPD)代替液液分配和固相萃取, 从蔬菜水果中提取、净化10种常用杀菌剂农药残留, 用C18硅胶交联剂作为固相吸附剂, 乙酸乙酯作为洗脱液, 用HPLC /PDA和LC - MS进行分析检测。10种杀菌剂在015~5 mg/kg含量的添加回收率在65%~110%之间, 相对标准偏差小于10% , 使用HPLC、PDA和LC - MS的检出限分别在0102~012 mg/kg和01002~0101mg/kg之间。该方法节省溶剂, 提取和净化一步完成, 适用于新鲜水果和蔬菜中10种杀菌剂的残留分析。[/font][/size][size=16px][font=Times New Roman][b]关键词:[/b] 基质固相分散(MSPD) 杀菌剂 蔬菜 水果 高效液相色谱 液相色谱- 质谱[/font][/size]

  • 【分享】GFP在大肠杆菌中的诱导表达和细菌蛋白的超声破碎抽提

    本实验讲义是在接受了去年实验的成功经验和失败的教训的基础上编写的。实验的名字叫“分子生物学技术综合实验”,原来是想把它设计成一个彼此连贯、前后呼应的系列实验。但由于经费和条件的限制,还是放弃了这个念头。 实验分成两个部分:前一部分是DNA的操作,主要是DNA片段的亚克隆的方法;后一部分是蛋白的操作,主要是凝胶电泳和免疫杂交。两个部分的分量大致相当,但后一部分做起来对学生的收获可能更大些,因为很少有本科生能一个人原原本本地亲手做一做免疫印迹实验的。它的操作虽然并不复杂,但成本却很高,特别如果使用的是从公司购买的抗体的话。 实验讲义在文字上,主要参考了魏群主编的《分子生物学实验指导》,而在实质内容上,DNA操作部分更多的是参考了萨姆布鲁克等人的《基因克隆》第二版的中译本,蛋白质部分主要是根据自己平日工作的积累。 希望同学们能够珍惜这次机会,认真地做实验,真正地掌握些实实在在的实验操作技能,为今后的学习和工作打下基础。千万不要忽视实验技能的培养和提高,生物学的成就毕竟主要是通过实验干出来的。转化后细菌菌落的快速裂解及质粒大小的检查 一般情况下,可以根据质粒的大小来确定它是否带有插入片段。以下方法足以产生在琼脂糖凝胶的单个泳道上加样所需的DNA量。操作方法如下: 1. 使转化得到的细菌在含有氨卞青霉素的琼脂培养基(LB)上生长至菌落直径达1mm左右。 2. 用灭菌的牙签挑取单菌落的一小部分,在含氨卞青霉素的LB琼脂平板上划线。至少挑选20个左右的菌落照此划线,平板于37℃培养过夜,然后保存于4℃,直到相应菌落的回收。 3. L 灭菌的10mmo1/Lm在划线培养的同时,将每一菌落的剩余部分用牙签一一转移并洗脱到事先加有50 EDTA(pH8.0)的1.5mL离心管中。L配制的0.2mo1/Lm 4. 每管加50 NaOH、0.5%SDS、20%蔗糖溶液,振荡30秒。 5. 于70℃温育5分钟,然后冷却到室温。L 2mol/Lm 6.加3 KCl、0.2%溴酚蓝的溶液,振荡30秒。 7. 冰浴5分钟。 8. 用微量离心机于4℃以12000g离心3分钟,使细菌碎片的沉淀。 9. L上清液加入样品槽内(5×2.5mm,长×宽)。m制备1%的琼脂糖凝胶(5mm厚),将50 10. 染料迁移到凝胶全长的2/3—3/4时,于室温将凝胶放入溴化乙锭溶液(0.5ug/mL水溶液)中,浸泡20—30分钟。 11. 紫外灯下观察、拍照。 通过与同时点样的载体质粒的比较,不难发现重组子:比载体质粒迁移慢的很可能是含有插入片段的重组DNA。可从保存于4℃的重新划线的平板上挑出相应的菌落,接种于2mL含抗菌素的LB培养液中培养过夜,然后提取质粒,用做重组时相同的限制酶做酶切鉴定。重组子应该可以切下预期大小的插入片段。

  • 炎炎盛夏是细菌们的狂欢季, 高温之下, 细菌繁殖加速, 容易引起食物中毒。

    炎炎盛夏是细菌们的狂欢季,  高温之下,  细菌繁殖加速,  容易引起食物中毒。

    [align=center][color=#333333]炎炎盛夏是细菌们的狂欢季,[/color][/align][align=center][color=#333333]高温之下,[/color][/align][align=center][color=#333333]细菌繁殖加速,[/color][/align][align=center][color=#333333]容易引起食物中毒。[/color][/align][align=center][color=#333333]环境室:计曼[/color][/align][align=center][img=,690,557]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907011732007508_954_2904018_3.png!w690x557.jpg[/img][color=#333333] [/color][/align][align=center][color=#333333] [/color][/align][align=center][b][color=#1792a3]常见的几种食源性致病菌[/color][/b][/align][b] NO.1 沙门氏菌[/b]沙门氏菌是最常见的食源性致病菌,食物中毒多因食用了被沙门氏菌污染的食物所致。一般在夏季常见,但冬春季节也时有发生。[b]中毒症状[/b]一般食后6~24小时发生呕吐、腹痛、腹泻,有黄绿色水样便,有时带脓血,多数病人发烧在38℃以上,重者甚至抽搐昏迷。从发病到痊愈一般需要1~3周时间。[b] 中毒食物:[/b]引起沙门氏菌中毒的常见食物有:禽畜肉和蛋类等,其污染的肉、蛋常常没有变色、变味,很容易被忽视。[b]NO.2 副溶血性弧菌[/b]这种菌又称嗜盐菌,比较喜欢多盐环境,在海水和盐腌的食品上生存。是沿海地区食物中毒重要病因之一。[b] 中毒症状[/b][img=,32,32]file:///C:\Users\ADMINI~1\AppData\Local\Temp\ksohtml5764\wps8.png[/img]人吃了被该菌污染的食物后,8~18小时内就可发病,临床表现为呕吐、腹痛、频繁腹泻,一般为水样或血样便,部分病人有畏寒发烧,出现脱水表现。[b]中毒食物:[/b]引起副溶血性弧菌中毒的常见食物有:海鱼、海蜇、海蛤、贝类等海产品及用盐浸的食物。[b]NO.3 金黄色葡萄球菌[/b]金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌,分布在空气、水、土壤、不洁乳类和淀粉中,上呼吸道感染或化脓性皮肤病的人常带有此菌,因此有"嗜肉菌"的别称,可引起许多严重感染。而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量,卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》,允许金黄色葡萄球菌限量存在。食物污染后很快产生肠毒素,这种毒素能耐高温,在100℃的条件下60分钟才能杀灭。[img=,32,32]file:///C:\Users\ADMINI~1\AppData\Local\Temp\ksohtml5764\wps9.png[/img][b]中毒症状[/b]吃了带有肠毒素的食物,2~4小时就可发病,主要症状为恶心、剧烈反复呕吐、上腹疼痛、腹泻,但体温正常,多数人在1~2天即可痊愈。[b]中毒食物:[/b]引起金黄色葡萄球菌中毒的常见食物有:剩饭、剩菜,鱼肉蛋等。[b]NO.4 肉毒杆菌[/b]此菌的芽孢很耐热,在土壤、淤泥、粪便中可生存。它污染食物后,在不透空气的条件下生长繁殖并产生毒素。[b] 中毒症状[/b]肉毒杆菌毒素毒性很强,可以侵入中枢神经,中毒后没有胃肠道症状,而是头痛、头晕、视力模糊、吞咽困难,直至呼吸肌麻痹引起死亡。[b]中毒食品:[/b]引起肉毒杆菌中毒的常见食物有:罐头食品、豆浆、臭豆腐、腊肠等。[align=center][color=#0000ff] [/color][/align][align=center][color=#0000ff] [/color][/align][align=center][color=#0000ff]记[/color][/align][align=center][color=#0000ff]预防细菌性食物中毒,你要这么做![/color][/align][b][color=#1b1ebd]一、防止污染[/color][/b][img=,690,459]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907011732198656_8396_2904018_3.png!w690x459.jpg[/img]1. 患肠道传染病、皮肤感染的人不得从事食品加工。2. 养成饭前便后正确洗手的习惯。3. 保持食品加工场所卫生,严格分开生熟食品加工用具,防止老鼠、苍蝇、蟑螂孳生。4. 厨房的刀具、案板、抹布要经常清洗、消毒。[color=#1b1ebd][/color][color=#1b1ebd]二、[/color][b][color=#1b1ebd]控制细菌繁殖[/color][/b]1. 食物要低温贮存,冰箱可以延缓食物中的细菌繁殖生长,不能杀灭细菌。2. 腌制、干制等都是控制细菌繁殖的有效方法。[b][color=#1b1ebd] [/color][/b][img=,690,460]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907011732349582_6055_2904018_3.png!w690x460.jpg[/img][b][color=#1b1ebd] [/color][/b][color=#1b1ebd]三、[/color][b][color=#1b1ebd]外出就餐需留意[/color][/b][img=,500,330]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907011732474192_7330_2904018_3.png!w500x330.jpg[/img][b][color=#1b1ebd] [/color][/b]1. 外出就餐时应选择具有餐饮服务许可证、就餐环境及管理较好、量化分级管理等级较高的餐饮服务单位就餐。2. 就餐前注意观察食物是否感官异常,不吃腐败变质和未烧熟煮透的食品,不在无证饭店、路边摊点用餐。[b][color=#1b1ebd] [/color][/b]

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