LC-MS/MS方法检测动物组织中β-兴奋剂类药物
卫生部近日汇总公布了《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单》,上海月旭公司从公布的黑名单中统计发现,包括三聚氰胺、苏丹红、孔雀石绿、人工合成色素等都在内。针对这些令人触目惊心的食品添加剂,同时也为食品安全检查和监管工作提供有力的技术支持和保障,上海月旭公司迅速组织相关人员研制出了方便、快速、准确的检测方法,现将LC-MS/MS检测动物组织中&beta -兴奋剂类药物的方法公布如下: 1. 适用范围 适用于动物组织中盐酸克伦特罗和莱克多巴胺药物的检测。 2. 提取 将5g动物组织、15 mL乙酸乙酯、3 mL10%碳酸钠溶液置于50 mL离心管中,10000 rpm均质2 min。6000 rpm下离心2 min,将上清液转至另一离心管中。用15 mL乙酸乙酯重复提取一次,合并提取液。 向乙酸乙酯提取液中加入5 mL 0.1 mol/L的盐酸溶液,涡动1 min,然后再6000 rpm下离心1 min,收集下层水相。重复萃取一次,合并下层水相,用2.5 mol/L NaOH溶液调节pH至5.2,待净化。 3. 净化 活化/平衡:依次向Welchrom® P-SCX(60mg/3mL)(上海月旭提供)中加入3 mL甲醇、3 mL水和3 mL 30 mmol/L盐酸溶液,流出液弃去; 上样:将上述提取液加入柱中,流出液弃去; 淋洗:依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗,淋洗液弃去,并将小柱抽干; 洗脱:用2× 2 mL 5% 氨化甲醇洗脱,收集洗脱液,40℃下氮气吹,50%乙腈复溶,过0.22&mu m滤膜,待分析; 4. 色谱质谱条件 4.1 色谱条件 色谱柱: Ultimate XB-C18 液相色谱柱(2.1mm* 100 mm, 3 &mu m)(上海月旭提供) 流动相: A: 0.1%甲酸水溶液 B:乙腈 梯度洗脱,程序见右图: 流速: 0.2 mL/min 进样量: 10 &mu L 柱温: 35 ° C 运行时间:12 min 4.2 质谱条件 扫描模式:MRM 离子源:ESI+ 毛细管电离电压:3.20 Kv 孔电压(cone):45 V 电离源温度:100 ℃ 脱溶剂温度:300 ℃ 锥孔气流速:50 L/Hr 脱溶剂气流速:450 L/Hr 5. 结果 5.1 回收率和重现性实验 将猪肌肉空白样品经过液液萃取初步处理后,分别添加一定量的标准溶液,添加浓度分别为0.5&mu g/kg、1&mu g/kg、5&mu g/ kg、每批次内同一浓度做3次平行实验,共3个批次(样品典型回收率色谱图见附图)。 图1 猪肌肉中添加0.1 mg/kg 盐酸克伦特罗EIC谱图 图2 猪肌肉中添加0.1 mg/kg 莱克多巴胺EIC谱图 本方法中使用到得耗材: 1. 固相萃取小柱 Welchrom® P-SCX 60mg/3mL (P/N:WSP020306)(上海月旭提供) 2. 色谱柱:Ultimate XB-18,50*2.1mm,3&mu m(P/N:Ult3B18205)(上海月旭提供) 3. 13mm,孔径0.22&mu m尼龙针孔滤膜(P/N: WEL-SFNY213022)(上海月旭提供) 4. 12孔固相萃取装置(WEL-Vac-12))(上海月旭提供)