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化学反应过程中的能量以光的形式释放出来,成为化学发光,有些生物体在能量代谢的过程中通过消耗ATP也可发光,为生物发光。化学发光 常用物质包括二氧乙烷衍生物、鲁米诺及衍生物、和丫啶酯。这些试剂可用于各种标本分析、HPLC检测和流动注射分析系统。二氧乙烷衍生物在碱性磷酸酶的作用下水解,形成一种高能量的中间体,这种中间体进一步分解后释放出光子,此类有代表性的物质是AMPPD和CSPD。此方法最为广泛的应用是基于碱性磷酸酶和β半乳糖苷酶的分析系统。碱性磷酸酶(AP)的测定 检测AP,β-葡糖苷酸酶活性的方法是使用一种有商品供应的稳定的1,2-二氧乙烷衍生物,这种发光底物的发光时间为数分钟至数小时。发光强度直接与酶的浓度相关。这种底物可用于1) 微孔板的免疫分析,DNA 探针捕获法和报告基因分析法, 2) 用于蛋白质和核酸分析的96-孔斑点膜。鲁米诺 是一种最古老的和最常用的试剂,在碱性条件下可被过氧化物氧化,同时发光,鲁米诺和过氧化物之间的氧化还原反应需要催化剂,这种催化剂一般为多价金属离子、过氧化物酶如铁、辣根过氧化物酶等,此种方法常用于检测过氧化物、重金属、过氧化物酶的含量,以及由此衍生的检测自由基、进行毒物分析和基于过氧化物酶和葡萄糖氧化酶的分析方法。丫啶酯及衍生物 在碱性条件下可产生瞬时发光,将其作为标记物,已广泛用于免疫分析和分子杂交。
化学发光检测原理概述化学发光作为一种分析工具的吸引之处就在于检测的简单性。化学发光的实质是自身发光,这意味着化学发光的分析测试仪器只需要提供一种可以检测光信号和纪录结果的方法就可以了。自发光检测仪需要一个闭光的样品室和光检测器。最简单的便是相片纸或x-光片,甚至视觉检测器都可以。化学发光检测方法的简单性使得它的应用很简单并且完全可以自动化。但是它的灵敏度又是怎么样的呢?化学发光有如下两个内在的优势:1.绝大多数的样品没有“背景”信号,如它们自身不发光。2.化学发光的检测不是一个比例测试,这是与荧光和吸收或比色测试不同的。在荧光测试中,具有小的Stokes Shift的荧光基团非常难检测。荧光很难从激发波长中分辨出来。另外一个问题是,特别在样品是浑浊的情况下有一部分杂光会进入到检测器。在吸收光测试上,其灵敏度受到限制的根本因素是需要在两个相对较强的信号之间去区分一个较小的差别。需要注意的是检测器对光谱的敏感性近可能接近化学发光的光谱,以得到最大化的灵敏度。一般在自发光仪中的光电倍增管对蓝光有最佳的反应,对红光的末端光谱不太敏感。固态检测器对红光有较好的反应。X-光片广泛用于记录在尼龙膜、纤维素膜或PVDF膜上的化学发光印迹分析。但是我们需要牢记在心的是x-光片仅能够用于检测紫外到蓝光光谱范围内的光信号,虽然有一些特殊的光片对增强的绿光有敏感性。
一直对化学发光测量的检测器类型很感兴趣,请问各位大侠用于化学发光测量的检测器都有哪些?背照式面阵CCD可以用于CCD检测吗?谢谢!