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求一份大肠杆菌方法标准-EAP 1681!!
食品中大肠杆菌的标准是多少
今年,我单位准备增项做水中耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌,作为学化学出身的,做微生物检测真是一头包http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09512.gif,我看了标准,主要问题有2个,第一是在耐热大肠菌群标准中伊红美篮琼脂培养基中典型菌落是什么样子,第二是如何进行准确度的验证,我查了资料,当然也在论坛上发了不少求助帖子,不少同志建议我使用标准菌株,我咨询了路桥公司,采购了大肠杆菌的标准菌株,这标准菌株怎么用呢,我给路桥打了无数电话,终于心里有点谱了,硬着头皮做吧,现在,我把试验经过发上来,欢迎拍砖呀……首先,我学了标准菌株复苏操作说明http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/11/201311150957_477348_1681389_3.jpg,按规定大肠杆菌复苏的培养基是营养琼脂培养基,也有的同志用营养肉汤培养基,为了保证成功,我两种培养基均准备了,营养琼脂培养基是市售平板http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/11/201311151000_477350_1681389_3.jpg,营养肉汤培养基是买的培养基粉,自己加水、灭菌的http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/11/201311151002_477351_1681389_3.jpg,准备好培养基,我在无菌室打开标准菌株http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/11/201311151003_477352_1681389_3.jpg去掉外包装标准菌株是这样的,http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/11/201311151004_477353_1681389_3.jpg,有点儿像一支笔,撕开标准菌株上的不干胶标签仔细观察,可以看到在一端有干粉状物质,拿起标准菌株(有干粉状一端朝下,拧上段部分,可以将标准菌株拧开,下段是干粉部分,上端末端是一个棉签,仔细观察上半部分可见有部分液体,将标准菌株按原状拧好,捏其上半部分,至上端液体流下,与干粉部分完全混合,搅动棉签,是菌粉完全溶解。用蘸着菌液的棉签在营养琼脂培养基上涂抹1/4区域,用接种环从涂抹区域向培养基其他区域划线。在营养琼脂培养基接种完成后,将菌液接种至营养肉汤培养基,将接种好的培养基及空白培养基置于37摄氏度培养箱中培养24小时。第二天,营养琼脂培养基上长出了菌落http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/11/201311151007_477354_1681389_3.jpg,营养肉汤培养基变浑浊了http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/11/201311151008_477355_1681389_3.jpg,第一代标准菌种基本算复苏传代成功了,大肠杆菌确实比较好活!于是,我又将营养琼脂平板上的菌落接种在新的平板上进行标准菌株的复壮,过程不再赘述,第三天,平板上长出了第二代菌株。为了验证典型菌落在伊红美篮琼脂培养基上的状态,我配制了伊红美蓝营养琼脂培养基,并且将第2代标准菌株接种在培养基上于44.5摄氏度培养了24小时,结果如下http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/11/201311151015_477356_1681389_3.jpg,做到这里,标准菌株的复苏传代及大肠杆菌在伊红美篮琼脂上的状态我已经有一点数了。