单细胞电穿孔仪

MicroPulser 电穿孔仪是一种简单而灵活的仪器，能安全而可重复地转化细菌、酵母菌和其它微生物体。转化效率大大高于化学方法。系统的独特性包括：? 简单的单键式脉冲激发、附着的电击杯槽、快速充电等特点便于更快速的样品操作? 方便的预设优化程序适合常用的细菌和真菌研究? 电弧抑制系统大大减少了电弧，确保珍贵样品不受损失? 可人工调节多项参数；电压可在200-3000 V 间选择，精度10 V；时间常数可在1.0-4.0 ms 范围内调节，精度0.1 ms? 可提供 3000 V 电压，在大体积电击杯的条件下进一步提高转化效率

美国著名BTX是专业的细胞融合、多功能细胞电穿孔仪 的生产厂家。自从1983年起，苛求的科研工作者就已经把BTX多功能细胞电穿孔仪作为电融合、电穿孔等应用领域的首选仪器。ECM多功能细胞电穿孔仪在转基因的应用领域中得以广泛的应用，其无以伦比的高性能得到了全球同行的厚爱。BTX的多功能细胞电穿孔仪系列产品适用于动植物、细菌、酵母、哺乳动物、人类细胞（包括活体细胞）的转基因等操作，BTX还在网站建立了技术数据库，提供超过5000份的参考目录和600多份的protocols供科研工作者免费查阅。多功能细胞电穿孔仪应用举例&bull 动物细胞转染（系统：ECM630/830）对真核细胞的转染可以通过多种方法获得，例如磷酸钙沉淀、脂质体转染、病毒方法以及电穿孔。电穿孔已经被正式对传统的转染方法不灵的细胞有很好的效果，因此被选为最佳的分子传递系统。电穿孔的好处有可重复性、更高的效率、大量样本处理、无毒性以及容易使用（不需要孵育时间）。Lofin等人（1999）对NIH/3T3细胞进行电穿孔使mRNA进入，以研究细胞周期及细胞分化过程中mRNA对基因表达调节、控制。Bodwell等人（1999）在对COS-7细胞进行电穿孔是使用较长的脉冲时间后获得了较高水平的表达。Warner等人（1997）使用电穿孔方法成功转化了淋巴细胞。Incyte Genomics公司成功使用BTX电穿孔仪转染了ES细胞进行转基因小鼠的生产。BTX ECM399\630\830型仪器、电穿孔杯以及多种特用的电极都用于动物细胞转染用途。&bull 蛋白质电整合/电插入 （系统：ECM630/830）将蛋白质导入细胞以及将蛋白质插入至细胞膜中也可以通过电穿孔来实现。不光肽段，而且包括抗体的多种蛋白，也可以进行导入。Ushio-Fukai等人（1998）对电穿孔插入哺乳动物细胞中的外源蛋白进行了定量。对于这些用途可以使用多种BTX电极。&bull 植物细胞转化（系统：ECM630/830）对植物原生质（玉米、烟草等）及完整植物的电穿孔可以用于产生对农业/园艺有用的转基因作物。植物细胞转化的一个主要目的是对植物细胞进行稳定转化以产生具有优良品质及产量增加的作物。Lin等人（1997）优化了多种植物上用于GUS表达的电穿孔条件，结果显示完整植物细胞以及原生质都可以进行有效转化。Diaz等人（1994）针对小麦及燕麦的叶和根的原生质进行了相似的优化试验，证明了电穿孔对于植物工作的有效性。这些作者也比较了电穿孔与PEG的差别，结果发现电穿孔更有效、更有重复性、更经济。BTX是世界上体内转染用特殊电极的领先者。对于这些用途可以使用多种BTX电极，例如2针阵列、游标尺电极、以及Tweezertrodes。&bull 贴壁细胞的转染----ACT （系统：ECM630/830）除了对盛在普通样品杯的悬浮细胞进行电穿孔外，还可以对多种培养板上的贴壁细胞进行原位电穿孔。这样可以避免用胰酶消化细胞，有助于保持细胞的活性及细胞数目。Lewis等人（1999）使用培养皿电极将基因转染入人类及静脉内皮细胞。Paptis等人（1998）通过对长在导电载玻片的NIH/3T3细胞进行原位电穿孔研究信号转导。Teruel等人（1999）也对位于载玻片上的海马神经细胞转入DNA、RNA以及多种大分子。BTX为贴壁细胞的转染（ACT）提供了PP35-2、366、747、840及Epizap电极系统。请关注不久后为这些用途开发的新产品&bull 高通量筛检----HTS （系统：ECM630/830）高通量筛检及cDNA文库的建立，需要一次处理多个样本的能力。使用传统样品杯花费很大而且有时间限制。然而，96孔板里使用的电极对于这些类型的应用肯定有用。Hoffma-Tsay等人（1994）使用96孔共轴电极在植物融合实验中检测8种化学物质。Peterfy等人（1995）比较了多种类型的多孔电极，将DNA传递入COS-7细胞。Marrero等人（1997）使用多孔电极将抗体电导入血管平滑肌细胞，以诱导细胞增值。BTX目前提供747和840用于这样的用途，并且不断开发新的产品。体内基因导入（IVGD）（系统：ECM830）在体内基因转移的非病毒技术中，直接将质粒DNA注射进入肌肉内是简单、廉价及安全的。Aihara及Miyazaki（1998）第一次指出通过在肌肉内将DNA注射与电穿孔相结合，可以将表达增强100倍。Mir等人（1999）使用多种类型的电极将基因传递进入多种种属的骨骼肌（大鼠、小鼠、兔、猴）。他们的结果显示通过使用电穿孔以及DNA注射：（1）基因转移的效率大大增加了，只是表达增强2-4倍；（2）不同实验之间的差别缩小了，而这正是单独DNA注射的主要缺点；（3）表达持续时间很长（数月），这对于长期临床应用非常重要；（4）不同种属的不同的肌肉都有阳性的反应，说明广泛的可用性；（5）基因表达非常特异仅在局部，而周围组织则没有影响到。这种技术成功用于其他组织，例如肝、睾丸、以及皮肤。最近Vicat等人（1999）通过体内电穿孔仪将基因传递如小鼠脑组织。与被称为有力的脑组织基因转移的非病毒载体的pCMV-luc与PolyEthylenlmine联合的方法相比，电穿孔的效率要高50倍。Nishi等人证明使用电穿孔可以获得有效的神经胶质瘤基因转移。Nishi还显示对实体瘤进行电基因治疗后肿瘤生长阻滞了50-90%。Dean等人将基因电导入完整的肠系膜动脉获得了成功。电穿孔已经被证实确实是进行体基因/药物转移方面一项有前途的技术，有许多新奇的用途。BTX公司特制的2针阵列电极、Genetrodes、卡钳电极、Tweezertrodes提供将基因侵入性以及侵入性转移入组织的方法。卵内基因转移（IOGD） （系统：ECM830）Muramatsu等人（1997）比较了3种转染方法用于将外源基因转入早期鸡胚进行表达。他发现与脂质体转染及基因枪相比，电穿孔是最有效的方法。Takeuchi等人（1999）使用电穿孔技术将早期鸡胚转染了tbx5及tbx4基因，以确定肢芽的翅/腿标志。对于这种用途已经开发出特用的电极。Genetrodes、L形状针电极，被用于测定鸡胚及靶向组织的特定区域。许多研究人员已经转染了眼、心或者肢体组织，方便了发育生物学方法的进一步研究。刚上市的足控开关具有遥控功能，是ECM830可以在不需要手操作的情况下进行激活，这对于卵内、体内以及体外胚胎用途非常重要。体外胚胎基因转移（IVEGD）（系统：ECM830）Tasaki等人（1999）讨论了使用电穿孔在体外小鼠胚胎方面的运用。小鼠胚胎有柱状的结构而且有比家禽更多胚胎培养基操作需求。有可能对胚胎进行电穿孔用于异位表达研究。在小鼠中后脑部的基因表达已经被观察。这个技术也用在交配后9.5天小鼠胚胎，以研究Hu基因在神经分化中的功能。BTX为这些目的提供一种全新的电极：Genepaddles。&bull 胚胎操作/核移植/动物克隆 （系统：ECM2001/830）核移植是将细胞核从供体转入受体的过程。细胞核指导胚胎的发育，导致新生体安全出生。在这个过程中，电融合用于将供体细胞与受体卵细胞融合，并进一步激活细胞分裂，形成胚胎。Meng等人（1997）将核移植技术扩展至灵长类动物模型，克隆出恒河猴。技术的进步使研究人员能够从分裂球进展至更高分化的胚胎细胞以及静止的胚儿细胞，作为核的供应来源。胚胎产生的细胞在体外培养6-13代，然后在转入前使用血清饥饿的方法使细胞静止。如前文所述，Roble、Cibelli以及Stice是第一次在1998年报告使用非老化胚成纤维细胞作为核的供体进行核移植而产生绵羊克隆转基因牛的人。Ian Wilmut在1996年震惊了整个世界，他从成年乳腺的细胞产生出第一个动物克隆&mdash &mdash 多利。使用分化的成年细胞进行克隆的能力打开了核移植广泛运用的大门即基因治疗的令人激动的模式。最近的成功事例PPL Therapeutics公司从成年体细胞克隆出猪。对于这些用途可以使用多种细胞融合样品池及微型载玻片。

美国哈佛仪器旗下BTX公司自1983年成立以来，以电穿孔仪、电融合仪为主要产品,是第一家生产高质量电穿孔仪器的生产厂家,开创了许多在电穿孔、电融合、转染、转化等方面的最新产品和技术,不仅为全球在此领域的研究者提供了BTX专业产品，而且拥有多至25种的配件,包括：电穿孔、电融合、活体导入配件等等，成为全球唯一专业的转基因、电融合、活体转基因仪及配件的生产厂家。 ECM 2001是一台多功能的细胞电融合和电穿孔仪器，独特的交流非正弦波使细胞在双向电泳作用下排列到一起，然后在微秒级时间内转换成直流方波使其融合；融合后又一个短暂的交流脉冲稳定杂合细胞的融合状态，大大提高了细胞融合的效率。ECM 2001单独发生直流方波脉冲，可作为电穿孔系统，撇和多种专业电极，选配多种BTX专业电极，适用于各种要求的电穿孔实验，广泛用于离体和活体电穿孔。产品特性多功能兼有细胞电融合和电穿孔功能，满足从简单转染到细胞融合一系列实验操作。灵活性拥有较宽的电压和脉冲时间范围，可根据实验方案调整所有脉冲参数，可在20Ω低阻抗下操作；融合过程在显微镜下可视操作，提高细胞融合精度。快速高效 通过交流非正弦波和直流方波电脉冲的交替作用，可以简单而快速地完成细胞排列、融合、融合后处理全过程，仅需几秒钟。安全性能电弧淬灭功能，使由电弧引起的损害降至最低；短路保护，避免脉冲发生器遇到短路时被损坏。兼容性除35mm培养皿电极之外的其他所有BTX电极， Enhancer3000监测系统，脚控开关监控仪选配Enhancer 3000可以允许用户监控和记录主要的电流参数，利用选配的通讯模块，可以把数据下载到电脑上或在打印机上打印出来技术参数技术参数 交流参数 独特的非正弦波形 频率 1MHz 电压 0-75V 脉冲时间 0-99 sec 融合后电压 融合前的1/10 融合后时间 1-9 sec 交流 / 直流 间隔时间 50 μsec 直流参数 方波 高压模式 电压 10-3000V，10V调进 波长 1-99μsec，1μsec分辨率 低压模式 电压 10-500V，10V调进 波长 1-99msec，1msec分辨率 10-990μsec，10μsec分辨率 脉冲数 1-9个 脉冲间隔 1 sec 循环数0－9个