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蛋白纯化层析柱

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蛋白纯化层析柱相关的方案

  • 蛋白纯化产品解决方案
    对于重组蛋白的分离纯化,一般都会在进行载体构建时,选择N端或C端加上一个标签,如GST,HIS6,FLAG和MBP等,带了这些标签的蛋白就可以通过亲和吸收的填料来到达初步纯化的目的,亲和纯化相对简单,带有标签的蛋白就会吸附到相应的填料上,而不带标签的蛋白会直接流出,简单的清洗杂蛋白后,只需要再把吸附在上面的蛋白洗脱下来即可,几乎不需要摸索分离纯化的条件。含有所需蛋白的分泌液或者裂解液一般体积都相对比较大,最好使用蛋白存化系统(Clear First 2000)的上样泵上样;进完样后,进行杂蛋白的清洗,再用特异的洗脱液将蛋白洗脱,通过自动接收器接收分离后样品即可,整个过程基本可以实现自动化操作。
  • 蛋白质的纯化和鉴定
    蛋白质的产率和纯度是衡量纯化是否成功的重要指标。除有效的色谱分离外,配置良好、可靠的仪器也能影响纯化的成功。制备型反相(RP)液相色谱由于具有高分离能力,经常被用做多肽和小分子亲水蛋白纯化流程的最后一步。虽然大家都知道反相液相色谱所用的溶剂条件会使蛋白结构变性,但也能通过调节适当的条件再使其复性,特别是小分子蛋白。Agilent 1100系列纯化系统是设计良好、合适的反相色谱的系统。
  • 蛋白的分离纯化--选择分离材料
    以蛋白质和结构与功能为基础,从分子水平上认识生命现象,已经成为现代生物学发展的主要方向,研究蛋白质,首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识,但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别,把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中,如盐析,有机溶剂提取,层析和结晶等;二是将混合物置于单一物相中,通过物理力场的作用使各组分分配于来同区域而达到分离目的,如电泳,超速离心,超滤等。在所有这些方法的应用中必须注意保存生物大分子的完整性,防止酸、硷、高温,剧烈机械作用而导致所提物质生物活性的丧失。蛋白质的制备一般分为以下四个阶段:选择材料和预处理,细胞的破碎及细胞器的分离,提取和纯化,浓细、干燥和保存。
  • 蛋白纯化应用案例一
    仪器:蛋白3000样品:乳清蛋白粗品上样量:3 mL色谱柱:60 cm× 26 mm填料:Sephacryl S-200(GE)缓冲液:50 mM Tris-HCl(pH6.8),0.1 M NaCl流速:1 mL/min
  • 蛋白纯化应用案例二
    仪器:Clear-First蛋白3000。样品:BHb(牛血红蛋白)、BSA(牛血清白蛋白)、脂肪酶的混合样品,3种蛋白均为2mg/mL。其中BHb购自国药,BSA购自世泽生物,脂肪酶购自沃凯。上样量:1 mL。色谱柱: Hitrap™ DEAE FF,5mL。缓冲液:A管路为20 mM Tris-HCl(pH8.5),,B管路为20 mM Tris-HCl(pH8.5)其中含0.5 M NaCl。流速:1 mL/min。检测波长:280nm,385nm。
  • Opentrons 磁珠蛋白纯化工作站
    Opentrons OT-2 磁珠蛋白质纯化工作站基于磁珠提取原理,可以自动化完成小规模蛋白质纯化和蛋白质组学样品处理。磁珠蛋白质纯化工作站可以支持多种工作流程。
  • 使用Biotage Isolera 中低压制备液相色谱进行抗蛋白酶降解多肽纯化
    基于蛋白水解酶的催化机制以及蛋白酶抑制剂的结构特点,作者提出了一个长效肽的设计思路。选择了LRHR拮抗剂为模拟化合物,为别再N端和5位,N端和6位进行了氨基酸的修饰和替换。耐士科技作为Biotage中国区总代理,以最优质的服务提供Biotage全系产品。Biotage Isolera 系列是世界上最智能的快速纯化系统,它拥有自己独创的智能参数设置,共有3个系统,多种配置可选。可以让化学家们轻松地完成对从mg级到150g以上样品 的更好的分离。创新的TLC-to-gradient专利技术可以根据薄层层析色谱的数据自动产生适合样品的溶剂洗脱梯度,并建议适合该样品量的色谱柱。通过双波长检测收集馏分,最多可以在单一梯度下同时使用四种溶剂进行洗脱,以达到最大限度提高纯度和收率的目的。通过梯度优化功能,可以实现加大上样量同 时减少溶剂使用量。
  • 苦瓜籽蛋白的提取和分离
    摘要:用比较简便的方法提取苦瓜籽蛋白,并通过硫酸盐沉淀、透析、柱层析等步骤对蛋白进行纯化。关键词:苦瓜籽 粉碎抽提 离心 盐析 透析
  • 牛初乳粉中IgG蛋白的分离纯化及检测方法
    免疫球蛋白G,即抗体,是免疫系统用来识别和中和病原菌和病毒等异物的Y型大蛋白,在生物学上十分重要。Protein G可以结合哺乳动物IgG,与其蛋白结构上的Fc片段进行特异性识别。因此可以选用月旭Welchrom? Protein G Tanrose 4FF(5mL,00081-12012)来分离纯化牛初乳粉中的IgG蛋白、Welchrom? BC-10重力柱(8.3mL,00051-32022)提高纯度,并采用月旭Xtimate? SEC-300(7.8*300mm,5um)进行色谱检测分析实验结果。
  • 低场核磁共振技术在层析填料孔径分布研究中的应用
    层析填料的基质一般为交联多糖(琼脂糖、葡聚糖等)、高分子聚合物等。一般根据层析技术原理(凝胶过滤、离子交换、亲和层析、疏水层析、反相层析)、目的物性质等分类选择填料,来满足过滤、分离纯化、批量吸附、提高载药量等生产需要。层析填料的孔道大小对生物蛋白产品的分离、装载等过程有重要的意义,孔道过大则会导致蛋白全部通过,孔道过小则导致蛋白无法进入孔中,无法有效过滤或装载[1]。蛋白分子尺寸从几纳米到几百纳米不等,因此对不同尺寸的目标对象有效地设计合适的孔径就显得非常关键。
  • 抗抑郁药物临床机制研究-膜蛋白免纯化互作检测
    使用MST技术检测跨膜蛋白TRKB与脑胆固醇和抗抑郁药物的结合。其中跨膜蛋白TRKB并未纯化,直接将过表达GFP-TRKB的HEK293T细胞裂解后取上清。以GFP-TRKB融合蛋白作为荧光信号源,进行MST检测。
  • 人层连蛋白/板层素(LN)检测试剂盒
    人层连蛋白/板层素(LN)检测试剂盒人层连蛋白/板层素(LN)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人层连蛋白/板层素(LN)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人层连蛋白/板层素(LN)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人层连蛋白/板层素(LN)抗原、生物素化的人层连蛋白/板层素(LN)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人层连蛋白/板层素(LN)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 使用 Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱分析聚乙二醇化蛋白质
    通过聚乙二醇化能够改变治疗性蛋白质的物理化学和生物性质(如提高溶解度、降低免疫原性、延长半衰期以及防止蛋白酶破坏),从而显著提高其价值。体积排阻色谱法 (SEC) 是检测分子量大于聚乙二醇化蛋白质杂质的首选方法。由于聚乙二醇介导的与硅胶固定相的相互作用会导致回收率降低、峰形变差以及过度拖尾,因此聚乙二醇化蛋白质的 SEC 分析面临着很大挑战。本应用简报描述了一种用于检测聚乙二醇粒细胞集落刺激因子 (PEG GCSF) 的简单而灵敏的 SEC 方法。采用 AdvanceBio SEC, 130Å , 7.8 × 300 mm, 2.7 μ m 色谱柱在水相流动相下进行 PEG GCSF 的分离和定量分析。线性曲线在 12.5-2000 μ g/mL 的范围内具有优异的相关系数,表明该方法适用于定量分析。该方法具有出色的保留时间和峰面积精度,证明了该方法的适用性。此外,AdvanceBio SEC 还可对强制应激研究中得到的聚集体进行分离与定量分析。
  • 抗体药物的层析纯化工艺及HPLC质量控制方法
    抗体是一种结构复杂的生物大分子,由多个氨基酸组成。即便是天然的抗体,其结构也是各不相同。抗体药物中使用到的单克隆抗体(IgG)在生产工艺(细胞培养、分离纯化)与保存过程中易发生不均一性的变化,包括抗体蛋白的二聚体、多聚体、脱酰胺化、末端氨基酸突变以及糖链部分的结构差异。这些不均一性会使药物的药效、安全性方面受到影响。 而随着生产工艺及分析手段的进步,单克隆抗体类药物的质量控制将更加严格。高效液相色谱(HPLC)作为一种分离技术,在蛋白质、抗体等生物大分子的分离分析方面已得到越来越广泛的应用。近年来,东曹生物的科学家们一直致力于在生物药分离领域开发具有革新性的色谱分离介质,基于尺寸排阻、离子交换色谱等多种HPLC分离技术实现了对抗体多聚体、各种抗体异构体的高效分离,在抗体药物的质量控制方面提供了有效地监控手段。
  • 应用 Agilent MassHunter Easy Access 软件对模式治疗性蛋白进行批次间纯化分析
    本应用简报介绍了如何像生物分析科学家在典型生物药理学环境下进行纯度分析那样,使用 Agilent Easy Access 软件来分析模式治疗性蛋白的批次间纯度。分析模式治疗性蛋白的批次间纯度时,将 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统与 Agilent 6530 精确质量Q-TOF LC/MS 联用,并通过 Agilent Easy Access 软件进行数据分析。LC/MS 平台拥有卓越的色谱分离度和质量精度,结合强大的数据处理能力,可简便、快速地分析批次间的蛋白纯度。本应用简化了工作流程,使用者可以快速做出决策,以作进一步的下游处理。该软件可用于比较蛋白谱图,从而确保监管机构要求的批次一致性。此外,该软件还有助于了解工艺放大或生产过程中纯化后蛋白的杂质谱图。该数据可帮助开发生物仿制药的公司在产品上市前评估其产品与原始药物的相似度,重要性不言而喻。
  • 利用 HPLC 及 Q-TOF 质谱仪分析聚乙二醇及单、二聚乙二醇化的治疗性蛋白 (PDF)
    聚乙二醇化的多肽和蛋白质为生物治疗药物的详细结构表征带来重大挑战,这主要是由于聚乙二醇 (PEG) 具有异质性。本应用简报描述了一种联用 Agilent HPLC 及 Agilent 6520精确质量数 Q-TOF LC/MS 系统分析聚乙二醇及聚乙二醇化蛋白的方法。其使用了一种电荷剥离剂(三乙胺)作为柱后添加剂,这样有助于简化质谱图,因此可更好地阐释结果。结果表明聚乙二醇和聚乙二醇化蛋白质的质谱图质量均得到显著改善。
  • 谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白实验
    法谷胱甘肽-琼脂糖树脂的处理1. 轻轻顛倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器,将树脂混成匀浆。2. 取部分匀浆放入 15 ml 聚丙烯管(每 100 ml 细菌培养物需要 2 ml 匀浆)。3.4° C500 g(2100r/min Sorvall SS-34 转头)离心 5 min, 小心去掉上清。4. 在树脂中加入 10 倍柱床体积的冷的 PBS, 顛倒数次,混合均匀,4° C 500 g(2100r/min SorvallSS-34 转头)离心 5 min, 小心去掉上清。5. 每毫升树脂加入 lml 冷的 PBS, 制成 50% 匀浆,顛倒数次,混合均匀,悬液冰上放置待用。
  • 上海力晶:蛋白药物中三氟乙酸检测产品配置单(离子色谱)
    在蛋白纯化过程通常使用三氟乙酸作为沉淀剂,或者在纯化过程用作淋洗液,或者在合成过程最后洗脱合成的多肽。而这可能导致三氟乙酸最终在成品中残余,而这种残余是非常有害的,因此必须进行检测;另外一种常用的蛋白沉淀剂硫酸铵也需要检测。使用离子色谱是高效高灵敏的检测手段(图-)(戴安应用注解AN)。
  • 自动化液质联用工作流程:采用 AssayMAP 技术进行溶液内蛋白酶解、肽段纯化以及肽段的强阳离子交换分馏
    液质联用鉴定肽段的样品制备,通常由多步骤工作流程组成,包括溶液内蛋白酶解、肽段纯化,以及肽段分馏。该过程通常需要根据样品特性及分析目的( 即定量或表征)定制为具体的应用方法。样品制备工作流程的自动化可提高样品处理能力、降低差异性,并且无需熟练操作人员执行重复工作。然而,自动化平台通常并不用于最初的分析开发,这是因为分析开发者很少具有开发复杂自动化方案的经验。相反,分析通常是采用湿式工作台相关技术进行开发,然后在自动化专家的帮助下移植到自动化平台。采用 AssayMAP 肽段样品制备解决方案,无需掌握专门的技术也能实现自动化操作。开发者可通过一个简单的软件用户界面和灵活的实验方案对关键实验变量进行完全控制,从而能够专注于科学分析研究。如今,分析开发者、科学家或技术员无需具备自动化专业知识也能实现可扩展、精确的自动化操作。采用 AssayMAP 平台,整个工作流程可直接在相同的硬件上进行开发,如需实现高通量样品前处理,也易于对硬件进行扩展,从而可减少或避免已有实验方案实现自动化所需的额外时间和资源。本文将介绍发现(鸟枪法)蛋白组学研究的一种常规液质联用工作流程,包括溶液内酶解、反相肽段纯化,以及肽段的强阳离子交换分馏 (SCX),所有这些操作均由 AssayMap Bravo 液体处理器完成。采用 SCX 小柱通过增加 pH 或离子强度对大肠杆菌蛋白裂解液进行逐步洗脱,在六个 SCX 馏分中鉴定出 15000 多条特定肽段序列,其中 64-67% 的肽段可专属性地在其中一个馏分中得到鉴定。
  • 抗体的纯化实验
    抗体在亲和层析试剂中所占地位日趋重要,所以纯化抗体的方法也倍受关注。抗体通常是从血清、杂交瘤上清或腹水中获得的。尽管直接使用未纯化的抗体溶液可进行一些免疫学实验,但是要获得满意的结果最hao使用纯化的抗体,特别是用于亲和层析的抗体。实际上,纯化的抗体也适用于免疫检测、免疫印迹、酶联试验(ELISA)或细胞染色等。
  • 通用方法在毕赤酵母中快速产生重组肌动蛋白亚型并纯化
    ?肌动蛋白是真核细胞骨架蛋白的重要组成部分,具有多种重要的细胞功能,包括细胞分裂、细胞极性、伤口愈合、肌肉收缩等。本篇文章介绍了一种改进的肌动蛋白表达和提纯方法,使用SPEX 冷冻研磨仪研磨法破碎酵母细胞,适用于所有配备分子生物学设备的实验室中,这将极大地促进肌动蛋白细胞骨架的升华和细胞生物学研究。
  • 上海同田生物技术:荷叶提取物的分离和纯化
    摘要:用三种方法对荷叶提取物进行分离纯化,结合薄层层析(TLC)和颜色反应,对各自分离组分跟随鉴定。结果表明:高速逆流色谱(HSCCC)分离效果好,Sephadex LH-20柱层析分离效果次之,硅胶柱层析分离效果最差;荷叶提取物经高速逆流色谱分离纯化,可以得到两种黄酮醇类单体。
  • 中空纤维切向流过滤结合膜层析制备高纯度HSV-2候选疫苗ACAM529
    ACAM529是一种复制缺陷的预防性候选疫苗,在初步的动物实验中已证明其效力,但为满足进一步的动物及临床实验需要,急需一种可规模放大的下游纯化工艺。本实验使用方法结合DS洗提、Benzonase?处理、深层过滤、膜层析及中空纤维超滤/洗滤,有效提高了疫苗总收率。实验中发现,流体动力学剪切压力对于感染性病毒滴度的损耗非常关键,所以将封闭流道板式膜TFF及微珠层析更换成开放流道的中空纤维TFF及膜层析,从而在纯化步骤的每个阶段都可获得更高的感染性病毒收率。动物实验中获得的疫苗免疫源性及保护性效力数据,也确认了工艺的可行性。
  • 全自动、非接触式、无吸头的基于磁珠的DNA 纯化
    磁珠是用于生物分子简单有效分离和纯化的必不可少的实验室工具。有多种不同表面涂层和化学成分的磁珠可供选择,它们只需最少量的处理,便能用于DNA、RNA和蛋白质的磁性净化。我们提出的自动化解决方案包括创新的正排量配药技术,结合离心式液体抽空,以增压磁珠净化工作流程。
  • 人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)检测试剂盒
    人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)检测试剂盒人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)抗原、生物素化的人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • Opentrons 双流色谱蛋白质纯化工作站
    Opentrons 双流色谱 (DFC) 蛋白质纯化工作站,可以使用 BiotageⓇPhyTip Ⓡ 色谱柱对多达96个样品进行小规模蛋白质纯化。
  • 人视黄醇结合蛋白(RBP)检测试剂盒
    人视黄醇结合蛋白(RBP)检测试剂盒人视黄醇结合蛋白(RBP)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人视黄醇结合蛋白(RBP)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人视黄醇结合蛋白(RBP)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人视黄醇结合蛋白(RBP)抗原、生物素化的人视黄醇结合蛋白(RBP)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人视黄醇结合蛋白(RBP)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 人硫氧化还原蛋白(Trx)检测试剂盒
    人硫氧化还原蛋白(Trx)检测试剂盒人硫氧化还原蛋白(Trx)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人硫氧化还原蛋白(Trx)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人硫氧化还原蛋白(Trx)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人硫氧化还原蛋白(Trx)抗原、生物素化的人硫氧化还原蛋白(Trx)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人硫氧化还原蛋白(Trx)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
  • 人胆固醇酯转移蛋白(CETP)检测试剂盒
    人胆固醇酯转移蛋白(CETP)检测试剂盒人胆固醇酯转移蛋白(CETP)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人胆固醇酯转移蛋白(CETP)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人胆固醇酯转移蛋白(CETP)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人胆固醇酯转移蛋白(CETP)抗原、生物素化的人胆固醇酯转移蛋白(CETP)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人胆固醇酯转移蛋白(CETP)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 人视黄醇结合蛋白4(RBP-4)检测试剂盒
    人视黄醇结合蛋白4(RBP-4)检测试剂盒人视黄醇结合蛋白4(RBP-4)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人视黄醇结合蛋白4(RBP-4)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人视黄醇结合蛋白4(RBP-4)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人视黄醇结合蛋白4(RBP-4)抗原、生物素化的人视黄醇结合蛋白4(RBP-4)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人视黄醇结合蛋白4(RBP-4)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
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