色谱柱断检测

[align=center][font=宋体][font=宋体]色谱仪故障诊断的注意事项[/font] [font=宋体]—— 基线与检测器本底信号[/font][/font][/align][align=center][font='Times New Roman'][font=宋体]概述[/font][/font][/align][font=宋体][font=宋体]基线是色谱系统在正常工作条件下，仅有流动相通过系统时输出的时间[/font][font=宋体]——检测器响应强度曲线。基线的稳定情况影响色谱分析方法的检出限与线性范围，色谱工作者在进行色谱系统故障诊断和维修时，需要谨慎考察其基线的状况。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]某些色谱仪的检测器系统可以在无流动相通过的状态下工作，此时检测器输出的时间[/font][font=宋体]——检测器响应曲线为检测器本底信号。色谱工作者在诊断和维修基线不良故障时，色谱本底信号的确认比较重要，可以显著的提高故障诊断工作的效率。[/font][/font][align=center][font=宋体]简介[/font][/align][align=center][font=宋体][font=宋体]第一节[/font] [font=宋体]基线[/font][/font][/align][font=宋体][font=宋体]色谱系统仅有流动相通过时，输出的时间[/font][font=宋体]——强度曲线为基线，理想情况下是一条平行于时间轴的水平线，如图[/font][font=Times New Roman]1[/font][font=宋体]所示。[/font][/font][align=center][img=,378,212]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308152145100102_136_1604036_3.jpg!w690x387.jpg[/img][font=Calibri] [/font][/align][align=center][font=宋体][font=宋体]图[/font][font=Calibri]1 [/font][font=宋体]基线[/font][/font][/align][font=宋体]色谱系统的基线状态与色谱检测器、色谱柱与色谱分析环境的稳定和洁净程度有关，基线不良会导致色谱分析方法的检出能力以及线性范围劣化，是色谱工作者日常操作中经常遇到的问题。[/font][font=宋体]色谱系统基线状态的评价，主要通过基线噪声、漂移和基线强度这几个参数来进行。[/font][font=宋体][font=Times New Roman]1 [/font][font=宋体]基线噪声[/font][/font][font=宋体][font=宋体]由于电气特性、色谱仪工作环境、检测器原理等原因，色谱系统在实际工作中采集到的基线，总是存在一定幅度基线扰动。一般将较短时间内（几秒至几十秒）的基线扰动称之为基线噪声，如图[/font][font=Times New Roman]2[/font][font=宋体]所示。[/font][/font][font=宋体]基线噪声幅度较大，会导致色谱分析方法的检出限和线性范围劣化。[/font][align=center][img=,286,121]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308152145185553_7539_1604036_3.jpg!w562x238.jpg[/img][font=Calibri] [/font][/align][align=center][font=宋体][font=宋体]图[/font][font=Calibri]2 [/font][font=宋体]基线噪声[/font][/font][/align][font=宋体][font=Times New Roman]2 [/font][font=宋体]基线漂移[/font][/font][font=宋体][font=宋体]一般情况下，色谱系统基线随时间的缓慢变化称为基线漂移，如图[/font][font=Times New Roman]2[/font][font=宋体]所示。基线漂移一般表征色谱仪工作环境或者色谱系统工作状态的不稳定。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]基线如果发生负向的漂移，与色谱系统尚未达到稳定状态或者色谱系统逐渐[/font][font=宋体]“自清洁”有关。例如[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url]的[/font][font=Times New Roman]ECD[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]TCD[/font][font=宋体]检测器，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]的示差检测器，因其工作原理基线稳定需要较长时间，在此期间往往会观察到负向漂移的基线。[/font][/font][font=宋体][font=宋体][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url]高温灼烧检测器或用更加清洁的流动相冲洗[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]检测器时，也会观察到类似的向下漂移的基线。此种状态下表征色谱系统存在一定污染，但是污染情况正在减弱。可以老化清洗检测器以缩短此[/font][font=宋体]“自清洁”过程。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]基线的正向漂移需要分情况考虑，如果色谱系统配置有双极性检测器（例如[/font][font=Times New Roman]TCD[/font][font=宋体]、双[/font][font=Times New Roman]FID[/font][font=宋体]检测器），正向漂移也可能与检测器未充分平衡有关，未必存在异常情况。其他情况下基线正向与检测器污染或者流动相不良有关，需要进行检查和处理，可能需要维护流动相、辅助气源或者清洁老化检测器。[/font][/font][font='Times New Roman'] [/font][align=center][img=,287,125]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308152145249748_3281_1604036_3.jpg!w496x216.jpg[/img][font=Calibri] [/font][/align][align=center][font=宋体][font=宋体]图[/font][font=Calibri]3 [/font][font=宋体]基线漂移[/font][/font][/align][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Times New Roman]3 [/font][font=宋体]基线强度[/font][/font][font=宋体][font=宋体]水平基线在色谱系统输出强度轴上的截距，称为基线强度（或基线水平），如图[/font][font=Times New Roman]4[/font][font=宋体]所示，基线水平的幅度将影响色谱分析的检出限。[/font][/font][align=center][img=,352,196]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308152146457866_1237_1604036_3.jpg!w690x384.jpg[/img][font=Calibri] [/font][/align][align=center][font=宋体][font=宋体]图4[/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]基线强度[/font][/font][/align][font=宋体][font=宋体]对于一般的单极性输出检测器而言（如[/font][font=Times New Roman]FID[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]FPD[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]ECD[/font][font=宋体]检测器），检测器最终输出的信号为检测器全部输出信号强度与基线强度的差值。基线强度越高，检测器最终输出信号越低。[/font][/font][font=宋体]例如使用同一台色谱仪，使用相同条件采用两根色谱柱分析同一样品时，可能出现峰面积差异较大的情况，一般情况下可能与色谱柱本底信号不同有关，此时基线强度较高的色谱柱，获得的色谱峰面积较小。当使用液体固定相的填充柱时，尤其是固定相沸点较低，流失较明显的情况下，这种现象较为明显。[/font][font=宋体]例如某根色谱柱发生污染，基线强度增大时，出现色谱峰强度降低的情况。将色谱柱充分老化之后再次进样，出现基线强度降低，色谱峰强度明显增加的现象，也是基线强度变化对色谱峰高的影响。[/font][font=宋体][font=宋体][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url]的[/font][font=Times New Roman]TCD[/font][font=宋体]和[/font][font=Times New Roman]ECD[/font][font=宋体]检测器、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]的示差检测器需要较长时间稳定，如果在检测器尚未达到平衡状态下进样，此时峰面积较小。随着检测器逐渐达到稳定状态，再次进样，峰面积增大。[/font][/font][font=宋体][font=宋体][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url][/font][font=Times New Roman]FPD[/font][font=宋体]的基线强度极为重要，表征气源和检测器的洁净程度，显著影响色谱分析灵敏度和检出限，如果基线强度过高，会造成色谱分析灵敏度下降，甚至不出峰或者出现倒峰现象。[/font][/font][align=center][font=宋体]第二节 [/font][font=宋体]检测器本底信号[/font][/align][font=宋体]色谱系统基线的状态，与检测器状态、色谱仪工作环境（如仪器电源稳定性、实验室温湿度稳定性、实验室空气状态、流动相稳定和洁净程度）与色谱柱情况有关。基线噪声、漂移状态不良，是色谱系统运行中常见的故障，基线不良故障的诊断，一般情况下建议简化系统，首先考察检测器的本底信号。一般情况下，检测器本底信号状态较差，那么色谱系统的基线状态就不会良好。如果检测器本底信号状态良好（噪声、漂移和基线强度较低），那么故障与检测器一般无关。[/font][font=宋体][font=宋体]色谱系统某些型号的检测器（例如[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url]的[/font][font=Times New Roman]FID[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]FPD[/font][font=宋体]检测器，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]的紫外检测器、示差检测器、荧光检测器）可以工作在没有流动相通过的状态下，此时检测器输出的信号为检测器本底信号。[/font][/font][font=宋体]检测器的本底信号与基线不同，一般仅与色谱仪器电气环境或者检测器本身电气或污染状态有关，而与色谱仪器工作参数无明显相关。例如色谱系统温度、流动相流速等参数的修改，一般不会影响检测器本底信号的噪声幅度、漂移或者强度水平。[/font][font=宋体][font=宋体]例如[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]的[/font][font=Times New Roman]FID[/font][font=宋体]和[/font][font=Times New Roman]FPD[/font][font=宋体]检测器如果发生基线噪声较大，基线强度较大，分析灵敏度较低的情况时，建议首先熄灭检测器火焰，并且切断燃气助燃器和尾吹气供应，以考察检测器的本底信号。[/font][/font][font=宋体]如果此时基线噪声幅度较大，故障一般与色谱电气环境、检测器硬件故障或者严重污染有关。如果此时基线噪声幅度较低，那么故障一般与色谱仪工作环境（流动相、实验室温湿度）或色谱柱有关。[/font][font=宋体][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]的紫外检测器、示差检测器、蒸发光检测器，也可以考虑将检测器流动相排空，考察检测器本底信号，用以排除流动相的因素。此外通过对紫外检测器光路能量的考察，也可以对色谱实验室的空气环境予以评估，如果此时光路能量值衰减较快，一般表征实验室空气环境较差，空气中存在较多的有机物质。[/font][font=宋体]检测器本底信号一般与色谱系统的电气环境（电源质量、色谱仪系统接地情况、外围电气干扰、实验室空气环境、电气接触不良、机械振动）、检测器本身电气故障、电脑或者色谱数据工作站相关。[/font][font=宋体]其中来自电气环境的本底信号噪声，往往与检测器工作参数的设置无关。例如修改检测器量程、衰减或波长等参数时，如果检测器本底信号的噪声幅度无明显变化，那么噪声一般与色谱系统的电气环境有关，例如电源不良、接地不良、其他电气设备干扰、电气接触不良或存在机械振动。[/font][font=宋体] [/font][align=center][font=宋体]小结[/font][/align][font=宋体]简述色谱系统基线和检测器本底信号的特点。[/font]

下面给出Waters参考资料上面的测试条件，可用于C18柱效的测定。 流动相： 甲醇85%/水15% 检测波长：254 nm 流速：1.0 ml/min 压力：1440 psihttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412031947_525790_2960432_3.jpg上图给出了 峰名 样品名称 保留时间 拖尾因子 理论塔板数 1# 苯 4.467 1.105 20044 2# 萘 6.355 1.025 23393 请问：如何根据给出的条件，检测其它的色谱柱？ 1：“苯”“萘”的配制浓度是多少？ 2： 注射体积是多少？ 3：如何使用判断色谱柱的性能程度？

Pgrandsil-STC-C18色谱柱检测报告说明：由于业务需要，根据某色谱柱厂商要求，对其提供的色谱柱进行某些性能及技术指标的测试，并详细记录了实验现象及数据，通过计算总结给出检测报告。实验报告部分1.目的1. 测试和评价某厂商提供的色谱柱是否合格2.原理和依据1. JJG705-2002液相色谱仪2. GB/T26792-2011 GB/T22388-20083. 厂家色谱柱评价方法4. 个人经验判断3.测试内容由于仅测试被测试色谱柱性能指标，因此仅关注如下指标序号测试科目要求检验目的1保留时间3-10min检测保留性2定性重复性1500检测柱性能5拖尾因子0.8-1.2检测填料和键合是否流失6柱压400-1500psi检查有无堵塞或坍塌7不同条件测试趋势与理论相符检查保留能力测试时将依据但不限于以上内容。主要评价指标和计算方法如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308171252_458254_2369266_3.jpg1) 峰高(Height)：峰顶点至基线的距离；2) [fon

在整个毛细管气相色谱中，柱子的安装尤为重要，柱子安装的好坏直接影响到检测结果。下面是我看到的一篇论文《毛细管气相色谱柱的使用及常见故障分析》中截取的一段分享给各为版友，希望对大家有帮助：1、 毛细管柱与进样器的连接对于分流进样，毛细管柱的入口端一定要伸过分流进样器的分流出口（见图1a），就是使毛细管柱的入口处于载气的高流速区域。如果毛细管柱的入口在分流进样器的分流出口以下（见图1b），处于载气的低流速区域，得到的色谱图就不理想，所以必须将毛细管的入口伸过分流进样器的分流出口，这样才会得到尖锐的峰形。对于分流/ 不分流进样，毛细管的入口应接到进样器的底部（见图1c），这样可以使汽化管中的样品完全进入柱子，也不会出现气流清洗不到的“死区”。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/03/201503251604_539624_2452211_3.png 对于有些有特殊要求的气相色谱，毛细管气相色谱柱与进样器的连接，可以按仪器使用说明书的要求进行安装。2、 毛细管色谱柱与检测器的连接在毛细管气相色谱柱连接到检测器之前，先接通载气，看一下柱子的出口是否有载气通过，（将柱子的出口浸入乙醇中看是否有气泡出现）如果没有载气从柱子出来，说明柱前的系统中有的地方漏气或柱子堵塞，应找出原因加以解决。然后将柱子的未端尽可能的伸到检测器（FID）的喷嘴以下的1~2mm 处，并使柱子的出口处于气流的最高流速区域（即氢气引入口以上），如果柱子不能直接伸到检测器的喷嘴下1~2mm 处，但必须伸到尾吹气入口的上部使柱子的末端处于气流的高速区域。

如附件图示，该图是检测氨基酸中平衡色谱柱出现图谱，非常的困惑，求解！在发帖前做了以下措施，（甲醇，乙腈，水，流动相均是1周前用过的）但是结果依然不理想。1 之前色谱柱被不小心装反了方向，所以用小流速0.2ml的乙腈：水60:40 活化色谱柱,至少是4个小时以上。2 怀疑检测池进入气泡，纯甲醇小流速冲洗检测池 2个小时3 怀疑色谱柱的污染物进了检测池，又反冲检测池，甲醇，水每十分钟交替冲洗，至少5个小时以上。4 磷酸清洗检测池5 灯校正和诊断正常。6 取下过滤头再次平衡，出现同样的图谱。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/08/201008021422_233712_1827472_3.jpg[/img]

流动相比例和色谱柱长度对关黄柏检测的影响 关黄柏是一种药材，属于芸香科植物黄檗的干燥树皮，去除外表粗皮，晒干既得。一般为黄色，黄绿色，棕黄色等。味极苦，具有清热去火、除湿止泻、解毒止痛等多种药物功效，可治疗和预防多种疾病，是中药材中比较便宜而实用的一种。 现在药典对中药材都有严格的检测项目，关黄柏也不例外。下面我们具体介绍下关黄柏高效液相色谱检测方法及效果。实验部分1.原理 取关黄柏适量，粉碎过药典筛三号筛，60%乙醇溶解提取，注入高效液相色谱系统，经C18色谱柱分离，紫外检测器检测，外标法（保留时间定性、峰面积定量）计算出结果。2.仪器及试剂 仪器：高效液相色谱仪（紫外检测器+梯度泵+柱温箱+在线脱气机等），超声波清洗仪，溶剂过滤器，电子天平，药典筛（三号筛）等。 试剂：乙腈（色谱纯），磷酸二氢钠（分析纯），磷酸（分析纯），乙醇（分析纯），超纯水，盐酸小檗碱对照品、盐酸巴马汀对照品等。3.样品制备 对照品溶液制备：分别准确称取盐酸小檗碱对照品、盐酸巴马汀对照品各2.5mg于50ml容量瓶中，加60％乙醇适量，使对照品完全溶解，再加60％乙醇至刻度，摇匀，配制成各含50μg/ml的混合对照品溶液，备用。 供试品溶液制备：取关黄柏适量，充分粉碎后过药典筛三号筛，精密称取过筛粉末0.2g于50ml容量瓶中，加入60％乙醇30-40ml，超声处理1小时，放冷，加60％乙醇至刻度，摇匀，0.45um有机相微膜滤过，滤液待测。 4.色谱条件检测器：紫外检测器检测波长：345nm色谱柱：Promosil C18 ( 250 mm × 4.6 mm，5μm )流动相：A（乙腈）：B（0.02mol/L磷酸二氢钠溶液）=25：75（V：V）流速：1.0ml/min柱温：30℃进样量：10μl5.色谱图对照品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212212_562126_2536753_3.png供试品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212212_562127_2536753_3.png供试品局部放大色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212212_562128_2536753_3.png 上面这种流动相方式，供试品色谱图被测物峰后面杂质没被洗脱出来，这样进几针样品后色谱柱柱容量就会下降，很有可能会影响到后面的检测。6.流动相改为：A（乙腈）：B（0.02mol/L磷酸二氢钠溶液）=30：70（V：V），其它条件不变，效果如下。色谱图对照品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212212_562129_2536753_3.png供试品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212212_562130_2536753_3.png供试品局部放大色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212213_562131_2536753_3.png 上面这种流动相方式，色谱图中被测物保留时间缩短了，但分离度也差了，也可能有一些杂质没被洗脱出来，检测结果的准确性可能会受到一定程度影响。7.下面采用梯度洗脱方式，其它条件不变，梯度表：序号时间（min）A（%）B（%）102575220257534065354419010 50901055125756652575色谱图对照品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212213_562132_2536753_3.png供试品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212213_562136_2536753_3.png供试品局部放大色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212213_562134_2536753_3.png 这种流动相方式效果就很好，既达到保留时间短的效果，又保证了分离度，检测结果准确、可靠，连续进样也不会受到影响。8.色谱柱长由250mm变为150mm，流动相仍采用：A（乙腈）：B（0.02mol/L磷酸二氢钠溶液）=25：75（V：V），其它条件不变，效果如下。色谱图对照品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508220959_562145_2536753_3.png供试品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212213_562136_2536753_3.png 这种方式，被测物的保留时间更短了，但分离度也更差了，色谱柱理论塔板数也明显低了，这种方式不适合该样品检测。 看来流动相和色谱柱对检测效果影响很大，主要体现在保留时间、分离度和色谱柱理论塔板数上。9.总结1）对于反相色谱来说流动相中有机相比例越高被测物保留时间越短，分离度越差，色谱柱理论塔板数越低，反之相反。2）流动相中有机相比例低到一定程度，样品中某些成分可能洗脱不出来，一是可能影