揭秘:嗜肺军团菌的检测过程
2012年初,香港新港府总部多处发现退伍军人杆菌,证实是会议厅的厨房和立法会综合大楼3楼茶水间的两个样本,检出嗜肺军团菌。港府大楼求诊的8名员工,基本都是24岁至42岁青壮年,检测结果显示,无须入院,或可能是流感样型。换季时节,是军团菌高发的季节,由嗜肺军团菌引发的军团菌肺炎在非典型肺炎中是病情严重的一种,未经有效治疗的病死率高达20%。 嗜肺军团菌是一种有鞭毛,革兰氏阴性,军团菌属多形态性的短小球杆菌。嗜肺军团菌不抗酸,无孢子,无荚膜,类似于杆菌。不能分解明胶、糖类或尿素,不可参加酵解反应。嗜肺军团菌无色,也非自身荧光。氧化酶与过氧化氢酶测试呈阳性,为β-内酰胺酶阳性。专性需氧,在自然界可长期存活,如在蒸馏水中可存活100d以上,污水中可存活一年,对热和一般消毒剂敏感。菌落特征为灰白色,有光泽,湿润,圆形,凸起,并有特殊臭味。革兰氏染色不明显,多用镀银法或Giemsa法染色。 嗜肺军团菌 卫生部于2006年颁布了《公共场所集空调通风系统卫生管理办法》、《公共场所集中空调通风系统卫生规范》,规定对集中空调系统冷却水和冷凝水作出了嗜肺军团菌“不得检出”的规定。 流行病学研究阐明,冷凝塔、加湿器及风管等是病原体的来源,空气及气溶胶是病原体的传播媒介。夏季和秋季是军团菌最适宜生长的季节,也是发病率最高的季节。 军团菌的检测军团菌因为个体小,生长缓慢,难检出,并具有传染性,对检测实验室和实验人员的操作有相当高的要求。近日,我要测工作人员联系了广州工业微生物检测中心,了解了嗜肺军团菌的检测方法及检测过程: 嗜肺军团菌的检测 国内外的军团菌检测方法主要依据 ISO11731-1:1998 ISO 11731-2:2004(E)、《军团菌的检测和计数》及《公共场所集空调通风系统卫生管理办法》。定性测试两种方法的检测步骤大致相同,基本包括以下步骤: 1. 采样及运送 采样容器可为无菌玻璃瓶,聚乙烯瓶或无菌采样袋,并且瓶口或袋口能密封;采样量一般在300-400ml 左右,如果经过氯或臭氧消毒的水,采样后加入少量硫代硫酸钠溶液,以中和样品中的氧化物;采样至送达实验室最长时间不得超过2天。 嗜肺军团菌取样 2. 样品处理 对含少量军团菌的样品一般用薄膜过滤法来浓缩样品的浓度,如有杂质的样品可静置沉淀或离心过滤去除,并对样品进行热处理和酸处理以减少非军团菌的生长。 嗜肺军团菌样品前处理 3. 接种和培养 军团杆菌在分类学上是一种独特的需氧革兰氏阴性杆菌,无荚膜,在普通培养基上不生长,属于细胞内寄生菌。目前标准培养基为活性碳酵母浸膏琼脂平板,也称军团菌生长平板(BCYE)。接种在 BCYE 平板上的样品在温度为35-37º C,培养10天,在浓度为2.5% CO2 的环境下培养更有利于军团菌的生长。军团菌的菌落通常呈白色、灰色、有荧光。 接种和培养 4. 军团菌的鉴定 挑取至少3个疑似军团菌的菌落接种至军团菌生长 BCYE 平板和半光氨酸缺失的 BCYE-Cys 平板,在35-37º C条件下培养至少5天,凡是在 BCYE 平板上生长而在平板和半光氨酸缺失 BCYE-Cys 平板上不生长,并且血清学阳性的的则判为军团菌。 嗜肺军团菌检测 嗜肺军团菌检出 嗜肺军团菌的预防 第一,,对军团菌主要滋生地 -- 中央空调系统、冷热水循环系统、冷凝脱水盘、空气加湿器等进行定期清洁处理。定期更换冷却水和冷冻水,避免贮存水长期滞留,保证空调系统注入水的洁净,必要时采取杀菌杀藻等消毒措施;定期清洗空调冷却塔及管道,对大型建筑物的中央空调系统要定期使用消毒抑菌剂清洁。 第二,使用空调(包括冬天使用暖空调)的房间应经常开窗通风,经常保持室内环境的卫生和空气流通,有条件的话对室内空气进行净化和杀菌处理。 第三,使用空调期间,一旦出现发烧、咳嗽、胸痛、呼吸不畅,不应只考虑“感冒”,应及时就诊检查,警惕军团菌病。只要早期发现及时治疗,效果较好。 关于广州工业微生物检测中心 广州工业微生物检测中心通过了CNAS实验室认可及广东省CMA计量认证,已为多家星级酒店、商业广场及企业的生活用水、冷却塔、泳池水等水源提供了检测及咨询服务,出具的军团菌检测报告得到国家卫生监督部门的承认。