猪血清检测

3月17日讯，近日，西藏检验检疫局技术中心收到国家认监委颁发《能力验证合格实验室证书》。根据该证书，西藏检验检疫局技术中心参加的由国家认监委组织开展的猪伪狂犬病血清抗体ELISA试验(CNCA-09-A01-26)能力验证项目，结果为满意。这是西藏检验检疫局在重大动物疫病检测方面首次通过国家认监委组织的能力验证，标志着西藏检验检疫局已具备了检测猪伪狂犬病血清抗体的能力和水平。 　　猪伪狂犬病是由伪狂犬病病毒引起的多种家畜和野生动物的一种高度接触性、急性传染病。猪是伪狂犬病的唯一自然宿主，对其危害大。 往往是分娩高峰的母猪会首先发病，窝发病率可达100%。可致妊娠母猪流产，产死胎及胎儿干尸化。对初生仔猪则引起神经症状，出现运动失调，麻痹，衰竭死亡，病死率100%。成年猪多呈隐性感染，但可引起呼吸道症状。

血清学检测是许多健康问题诊断过程中的关键检测方法，包括器官移植筛查，交叉匹配，疾病诊断，监测等。这些检测在临床决策中起着至关重要的作用，免疫分析是目前可用的最强大，最灵敏的血清学检测方法之一，它基于抗原抗体之间的高度特异性结合，即使在低浓度下也能进行定性和定量检测。有多种免疫测定方法，以下是其中最常见两种检测方法示意图，分别是夹心法（图1A）和直接法（图1B），当选择用于夹心法检测的抗人二抗时（图1A），需要考虑一抗的种属，并使用与该物种有最小交叉反应的二抗。图1：测定方式：A.夹心法，B.直接法免疫分析在多种疾病诊断起重要作用各类免疫测定技术各有优缺点，例如，快速测定法（如胶体金侧向流动法）可在数min 内提供定性结果，可进行即时检测，而ELISA可能需要花费数小时才能完成，但可提供定量数据。而当前严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2（SARS-CoV-2）大流行更加凸显了侧向流动分析的优势，由于该疾病具有快速传播和较高的死亡率等特征，美国FDA已采取相关措施，允许各州未经FDA批准就可开展新的SARS-CoV-2检测。该修订允许使用快速检测试剂盒，该试剂盒定性检测患者针对SARS-CoV-2产生的IgG和IgM抗体，从而显著加大了SARS-CoV-2的检测能力，尽可能地减少病毒的传播。尽管侧向流动检测具有明显的优势，但这种分析方法无法提供定量的数据。表1.几种类型的免疫测定法的优缺点，检测过程，检测的Ig类型免疫测定方法检测过程可检测免疫球蛋白亚型快速测试/横向流动（胶体金）胶体金层析试纸条主要由4个部分组成：在样品区滴加样品后，借助毛细作用，样品泳动至玻璃纤维膜，金标复合物溶解，并与样品进行抗原抗体反应，形成复合物，继续泳动至硝酸纤维素膜的检测区，带有金标记的复合物被检测区抗原或抗体捕获，呈现条带。而质控线不管有无目的样本，都会与金标抗体进行结合并显色，相当于我们的阳性对照，证明金标抗体是正常的。IgG，IgM流式细胞将血清样品添加到带有抗原的细胞或磁珠中，样本中的人源抗体会捕获抗原，再加入荧光探针偶联的二抗（图1B），然后可以通过流式细胞仪分析荧光以给出定量数据。IgG，IgM，IgA流动注射分析（FIA）与流式细胞术相似，将样品注射到含有固定抗原的柱子中，样品中的人源抗体会与抗原结合（图1B），再加入荧光探针或酶偶联抗人的二抗进行检测，用比色或荧光法进行检测。IgG，IgM，IgAELISA法将一抗固定在固体介质表面上，通常是微孔板，随后会捕获抗原（图1A）或将抗原直接包被在板上（图1B），与来自血清的人源抗体结合，加入酶标记的抗人二抗，最后，添加酶底物，从而得到与分析物浓度成正比的比色读数。IgG，IgM，IgA聚合酶链反应（PCR）该过程类似于ELISA，但是第二抗体是与寡核苷酸缀合。然后通过实时PCR进行DNA扩增和检测。IgG，IgM，IgA抗人二抗是各类免疫分析中的关键试剂尽管免疫测定的功能和目的有所不同，但为了在临床上获得准确，可靠数据，开发血清学试剂盒时，高质量试剂至关重要。抗人二抗的质量是开发免疫测定试剂盒时的关键考虑因素，二抗需要谨慎选择，因为它们会结合一种一抗的多个表位上，从而增强了信号的灵敏度和选择性。表2总结了在进行免疫测定选择合适的二抗时需要考虑的多个方面。表2.在免疫分析中选择合适的二抗时的考虑因素以及我们抗体的特征考虑因素Jackson 二抗抗体来源人体样品的血清学检测应使用抗人二抗，以最大程度地减少非特异性结合，以最大程度降低背景信号和假阳性。我们可以提供多种来源的抗人二抗，包括羊驼，驴，山羊，小鼠和兔子。产品类别(完整的IgG还是片段)二抗可以是完整的免疫球蛋白（Ig）G，也可以是F（ab' ）2和Fab片段，完整的IgG分子可适用于大多数检测，而F（ab' ）2和Fab片段可用于避免与具有Fc受体的活细胞的非特异性结合。我们可以提供完整IgG形式的二抗以及F（ab' ）2和Fab片段特异性根据所需免疫测定的特异性，可以制备针对整个Ig分子的二抗，以及针对于Fc或F（ab' ）2结构域特异性的二抗。我们可以提供针对于对整个人源Ig分子的二抗，以及针对于Fc和F（ab' ）2结构域特异性的二抗。亚型大多数免疫测定均只检测IgG型抗体，这种类型抗体占总血清Ig的?75％，是次级免疫反应的一部分。但是，血清中同时也存在IgM和IgA，而且二抗只对同亚型一抗的具有特异性。我们可以提供对IgG，IgM，IgA，IgG+IgM和IgG+IgM+IgA一种或几种亚型有特异性的二抗。亲和纯化和交叉吸附由于在Ig结构域具有高度的结构保守性，建议对抗体进行亲和纯化并进行交叉血清吸附的，以减少交叉反应的可能性。免疫亲和层析可用于分离亲和纯化的抗体。我们可以选择已进行物种交叉吸附的抗体，交叉吸附相关信息会在对应产品说明括号中提供，表示为“ min X”，“X”为相关物种的缩写。偶联标记二抗通常与分子偶联，例如酶，荧光探针或有色颗粒。免疫测定的检测系统将确定标记物的种类。抗人二抗可以与多种标记物偶联，包括生物素，AP，HRP，荧光基团和胶体金纳米颗粒。

有机磷农药中毒的死亡率很高,其重要原因之一是诊断不及时。日本学者Inoue等人研究验证了一种简单快速的新方法——液相色谱法-大气压电离子化-质谱测定法(LC-APCI-MS法),结果证实此方法可以有效测定进入人体血清中的10种有机磷酸盐浓度(J Phar Biomedl Anal 2007, 44: 258)。 　　“液液提取”或“固体萃取”方法是目前临床最常用的有机磷酸盐提取方法,但是对某些特殊成分的化合物如乙酰甲胺磷则无效。 　　Inoue等人采用即液相色谱-质谱联用测定法(LC-MS)研究出一种简单快速的方法用来测定急性中毒患者血清中的10种有机磷农药浓度[乙酰甲胺磷、杀扑磷、敌敌畏、倍硫磷、苯硫磷、敌匹硫磷、甲基乙酯磷(稻丰散)、马拉硫磷、杀螟硫磷、杀螟腈]。这10种有机磷农药在日本使用广泛。 　　具体操作程序如下:使用乙腈脱蛋白后,将每种需检测的生物标本注入一个XTerra MS C18不锈钢试剂盒中,采用10 mmol/L的甲酸铵-甲醇组成的溶剂进行梯度洗脱。 　　结果显示,回收提取率令人满意,绝对回收率为血清标本的82.2%~107.2%,相对回收率为60.0%~108.1%。血清的测定范围(LODs)为0.125~1.000　μg/ml,检测上限为0.25~1.25 μg/ml。从这种检测上限浓度逐渐增加到8 μg/ml时,可以观察到很好的直线相关性。在所有实验标本中,均值在期望浓度的20%范围内,而且相关系数(r2)0.9838。 　　大部分有机磷农药的分析结果显示样本内部和批间分析的精确度、准确度都是令人满意的。从对温度的稳定性角度,对所有有机磷酸盐分析可以发现,敌敌畏和马拉硫磷在室温下就可以最快溶解。杀扑磷和敌匹硫磷在整个为期4周的测定期内对所有温度都相对稳定。 　　该研究证实,将沉淀蛋白法作为样本的提纯程序,这种LC-MS方法快速可行,可以测定人体血清中的有机磷农药,并且在测定血清标本中有机磷农药时具备较高的选择性、敏感性、精确度、准确度、直线性、回归性和稳定性。因此这种简单准确的检测方法,可以成功地应用于临床急性有机磷农药中毒事件中。 　　 用于血清有机磷检测的液相色谱-质谱联用设备

5月5日晚，为调查假鸭血流向，记者将牙签放入即将送出的货物中做记号。　　 　　宰杀车间，一工人用桶接猪血，拿到血豆腐加工车间制作。　　 　　血豆腐加工车间，工人将猪血勾兑成假鸭血。　　 　　深夜，厢式货车将假鸭血送到稻香村农大店。　　 　　中瑞食品厂院内的加工车间，赤膊工人制作假鸭血豆腐。　　 　　稻香村北师大店内，一名售货员正在销售自称中瑞食品厂送来的鸭血。 　　近日，本报接到市民反映，北京一些食品加工企业用猪血冒充制作假鸭血豆腐。 　　记者调查得知，这些假鸭血除了流入一些批发市场外，甚至还进入了稻香村的店铺，以出厂价6倍的价格销售。 　　国际食品包装协会常务副会长董金狮表示，鸭血豆腐自身有一定营养价值，有补血和清热解毒的作用，但用猪血冒充制作鸭血豆腐，不但以次充好、违法经营，而且要把猪血做得非常像鸭血，可能会在加工过程使用添加剂，会对人的身体健康产生危害。 　　北京第五肉联厂院内，屠宰车间机器轰鸣。 　　电动传送带上，一头头被电晕的生猪依次输送到工人面前。一名工人用尖刀扎进生猪下巴，向上一拉，血喷涌而出。 　　鲜血连同生猪身上的污水，以及粘连的猪粪、猪毛和其他杂物，一起流入下方的血槽内。 　　5月2日上午，一身青色工装的刘学军(化名)提着塑料桶，站在血槽前。工装左胸前印着“北京第五肉联厂”。 　　他拿着舀子，从血槽中一勺勺舀出猪血，倒进桶中。桶满的时候，用舀子一搅拌，黏稠鲜红的猪血，冒出几丝气泡。 　　“新鲜的猪血，用来做血豆腐。”刘学军说。 　　正规肉联厂院内猪血制“鸭血” 　　屠宰车间北侧，不足20米远，就是刘学军自称承包做血豆腐的车间。车间门口，停着一辆厢式货车，车厢内摆放着几筐血豆腐。 　　5月2日，记者以饭店采购血豆腐为名，进入刘学军的加工车间。 　　约40平方米的车间内，砌着两个水泥池子。池子里，混浊的水泡着成筐成筐的血豆腐，向外冒出蒸汽，腥味随之扑面而来。一名工人正用热水管冲泡血豆腐，地面上积满了热水。 　　“你是要猪血豆腐还是鸭血豆腐?”刘学军问。 　　记者看到，池子里的血豆腐有的块大，有的块小。 　　“大块的是猪血豆腐，小块的是鸭血豆腐，都是屠宰场新鲜的血做的。”刘学军说。 　　“这个屠宰场不屠宰鸭子吧。”记者说，“都是内行，你别蒙我”。 　　听了这话，刘学军坦言，“鸭血豆腐也是猪血做的”。 　　记者从水池内捞起一小块所谓的“鸭血豆腐”，其外表光滑鲜亮，摸起来柔嫩，掰开后，血豆腐内呈现许多不规则的小气孔。而大块的“猪血豆腐”，颜色较暗，摸起来略显坚实，里面的气孔较大。 　　“猪血做的鸭血豆腐，跟真的一样，根本看不出来，也吃不出来。很多批发市场和超市都从我们这儿订货。”刘学军说。 　　“你放心吧，几乎整个北京的鸭血豆腐，都是猪血做的，哪有那么多鸭子。”刘学军说，价格上，猪血豆腐1.3元一大块，“鸭血豆腐”1.3元两小块，都是1.3元一斤。 　　“我可以卖给你，但万一被人查出来，你别说是从我这儿批发的，说了我也不承认，鸭血豆腐都不开票。”刘学军说。 　　店铺内“鸭血”提价5倍 　　为弄清假鸭血豆腐销往何处，记者多日在第五肉联厂附近蹲守。 　　每天下午四五点左右，刘学军都会驾驶一辆红色电动三轮车，满载10余筐血豆腐，驶入第五肉联厂发货处。 　　北京第五肉联厂发货处，停放着数十辆厢式货车。夜晚到凌晨，这些货车载着各种肉制品，运往北京各地的批发市场和超市。 5月6日早上，记者到稻香村农大店购买鸭血，售货员正在装袋。 记者从稻香村农大店出售的“鸭血”中找到牙签，证实为假鸭血。 　　5月3日下午5点多，刘学军将十几筐血豆腐运到发货处，将一筐筐血豆腐搬上一辆牌照为京AJ4594的红色厢式货车。 　　当晚10点40分，红色厢货启动，驶出肉联厂。20分钟后，货车停靠在北京稻香村食品有限公司回龙观店门前。司机和店内工作人员从车上抬出几筐血豆腐，抬进店内。 　　随后，记者继续跟车发现，这辆红色厢货又分别驶入稻香村农大南路店和农大店。 　　据了解，北京稻香村食品有限公司是一家驰名中外的老字号企业，专门销售糕点、速冻食品等，在北京拥有多家店铺。 　　5月4日，记者探访稻香村回龙观店、农大南路店、农大店，这些店铺内均设有冷食专柜，且摆放有血豆腐出售。记者询问是否有鸭血豆腐，回龙观店表示需要问下总部有没有货，得到的答复是暂时没货。农大店则称，有鸭血豆腐但需提前订货，第二天可取货。随后，记者预订30斤鸭血豆腐和10斤猪血豆腐。 　　5月5日上午10点，记者来到稻香村农大店。店员抬出一个红色塑料筐，与第五肉联厂血豆腐车间的筐一模一样，里面正是记者订购的30斤鸭血豆腐和10斤猪血豆腐。 　　“鸭血是第五肉联厂的，你放心就是了。”店员说。 　　算账时，出厂时1.3元每斤的价格，到了稻香村农大店就变成，鸭血豆腐每斤8元，猪血豆腐每斤5元。 　　随后，稻香村农大店出具购物小票只显示名称为“排酸猪血”的单价和金额，“鸭血豆腐”没有任何显示，只是金额240元。记者索要发票，工作人员开具的发票也只显示为食品，“不能开出明细。”工作人员说。 　　假鸭血豆腐进出稻香村店铺 　　那么稻香村农大店销售的鸭血，是否就是刘学军的车间用猪血制成的? 　　记者再次从稻香村农大店预订了鸭血豆腐，对方承诺5月6日早上可取货。　　5月5日，天气炎热。下午4点15分，刘学军驾驶红色三轮车，载着七八筐血豆腐，从血豆腐加工车间驶出，直奔北京第五肉联厂发货处。 　　到了发货处，刘学军还是找到那辆京AJ4594红色厢式货车。拉开厢货门，他将两筐血豆腐放进车厢后，又往其他厢货上货。 　　当日下午，刘学军往返加工车间和发货处四趟，共运送血豆腐二十余筐，除了往厢货内上货外，有几筐血豆腐还被搬进肉联厂附近的超市。 　　晚上8点，天色渐暗。记者站在京AJ4594厢货车旁，看到车厢内两个红色塑料筐，盛着大量血豆腐。血豆腐的形体大小，正是此前记者在血豆腐生产车间暗访时，刘学军介绍的“鸭血豆腐”。 　　此时，“鸭血豆腐”装车已有4个多小时，厢货内弥漫着腥臭味。 　　为证实“鸭血豆腐”的流向，记者将此前做过标记的六根半截牙签，分别插入血豆腐中。 　　当晚10点40分，京AJ4594厢货装上冷鲜肉和猪蹄后，驶往北京多个稻香村店。11点30分，厢货如期来到稻香村农大店，几名店员将盛放血豆腐的红筐搬进店内。 　　5月6日上午8点30分，记者前往稻香村农大店取货。 　　店员从柜台下抬出满满一筐血豆腐，“鸭血都给你准备好了，今早刚到的。” 　　记者称单位报销严格，要求开具完整信息的小票。店员表示为难，“你跟你们单位领导好好说说，不能开全，这个空白就是鸭血。”随后，在记者的一再要求下，店员只给记者开了一张“鸭血款”的收据。 　　8点45分，记者抬着装有“鸭血豆腐”的红筐走出农大店，将血豆腐逐一掰开。筐内的水温适中，可见未作保鲜处理，从运送到售出，血豆腐已放置达15个小时以上。 　　在一片散发腥臭味的“鸭血豆腐”内，昨晚标记的六根半截牙签，赫然出现。 　　稻香村北师大店神秘“鸭血” 　　记者调查，并非只有稻香村农大店出售猪血做的“鸭血豆腐”。 　　5月3日上午9点多，稻香村北师大店内人头攒动，提着菜篮子的顾客进进出出。冷鲜食品的柜台里，摆放着大块的鲜肉和两筐血豆腐。 　　记者自称是单位食堂采购，店员指着大块的血豆腐说，这是猪血，“也有鸭血豆腐卖”。 　　记者反复强调，来稻香村采购鸭血豆腐就是图个放心，一定要货真价实。 　　售货员打起保票，“尽管放心，我们的冷鲜肉和血豆腐都是北京中瑞食品厂供应的，保证是真正的鸭血豆腐。” 　　记者在该店订下20斤鸭血豆腐，对方承诺第二天上午来取货。店员还保证，他们店的血豆腐都是每天上午8点到11点和冷鲜肉一起送来，全是新鲜的。 　　5月4日早晨7点多，记者来到稻香村北师大店门外，该店尚未营业。 　　早上8点，该店铺营业开门，大块的冷鲜肉和血豆腐已经摆上柜台。 　　店铺附近卖早点的人员证实，这家店的货物基本都是早上五六点钟送来，根本不是售货员说的“上午8点到11点”。 　　上午近9点，记者到店内取货，店员从柜台下一只塑料桶内取出一块一块分割好的“鸭血豆腐”，装进4个塑料袋子交给记者，并开具“鸭血豆腐”发票。 　　“鸭血6.8元一斤，因为你买得多，按5.5元一斤。”店员笑着说。 　　随后，记者联系中瑞食品厂，该食品厂工作人员称，他们只做冷鲜肉配送的生意，并不制售鸭血豆腐。 　　那么，稻香村北师大店销售的“鸭血豆腐”究竟从何而来? 　　“猪血多兑水就变鸭血” 　　5月4日下午2点，记者来到位于大兴黄村的中瑞食品厂，询问厂内“有没有做血豆腐的”。经多名工人指点，记者在该厂一处平房内找到制作血豆腐的车间。 　　距离车间10多米远，就有一股血腥味扑鼻而来。一辆运送猪血的罐车停在车间门口，门内不断有污水流出。 　　记者踩着污水进入车间，一筐筐制作好的血豆腐映入眼帘，左边放着的筐内，分割好的血豆腐体形较大，门右边则放着四五筐体形较小的血豆腐。 　　三四十平方米的车间内，满地污水。靠墙放有四五个一米多高的铁皮容器，容器下都架有燃气管和燃气灶。一只铁皮容器里，大块的血豆腐摆得满满当当。 　　见有人上门，车间内两女一男迎上来，记者佯称做饭店生意，每天需要上百斤血豆腐。 　　“你要多少都有。” 一名男子自称李老板，见来了大客户，满脸堆笑介绍，这里猪血和鸭血豆腐都有，说罢拿起进门处右手边红筐里体形较小的血豆腐说，这就是做好的“鸭血豆腐”。 　　李老板抓起大小不同的两种血豆腐，教起记者如何辨别，“你看，猪血豆腐气孔大，鸭血豆腐看上去没什么气孔。” 　　李老板还自称，多家大型超市和饭店的血豆腐都是出自他们家，“我每天做的猪血豆腐和鸭血豆腐都有好几百斤，光今天鸭血豆腐就做了280斤。” 　　记者质疑，中瑞食品厂只销售冷鲜猪肉，哪里来的鸭类产品。 　　李老板先是一愣，然后笑着说，自家制作的“鸭血豆腐”的确是用猪血做成的，“我告诉你，市场上的鸭血豆腐都是用猪血做的，现在根本就没有技术能检查出血豆腐是用哪种血做的。” 　　见记者脸露疑惑，李老板索性拿起两块血豆腐，“就是兑水多少，兑水多，血豆腐就嫩，当鸭血豆腐卖，加水少，豆腐硬实，就当猪血豆腐卖。” 　　对此，国际食品包装协会常务副会长董金狮表示，要把猪血做得非常像鸭血，可能会在加工过程使用添加剂。中国农业大学食品科学与营养工程学院副教授李兴民也表示，假的鸭血豆腐基本都是用劣质的猪血或牛血制成的。为了增加血豆腐的防腐性和韧性，不法商贩还可能加入甲醛、工业色素等，会对人体的肝脏和肾脏造成伤害。 　　售血豆腐须有检疫票据 　　记者从多家京城知名火锅店了解到，猪血豆腐触手有坚实感，切面气孔较大，吃起来有嚼劲，鸭血豆腐质地平滑，气孔很小，口感细嫩柔滑，而且猪血豆腐越涮越硬，鸭血越涮越嫩，甚至用筷子一夹即碎。 　　对于记者从稻香村农大店和北师大店购买的两份“鸭血豆腐”，一家知名火锅店的大厨表示都是猪血仿冒。他透露，为了买到真正的鸭血，他们都是去菜市场买成碗的鲜鸭血，让大厨亲自制作。记者表示要拍张真鸭血豆腐的照片时，火锅店老板马上予以拒绝。 　　5月11日下午，新发地牛羊肉大厅内，有五六家销售猪血豆腐、鸭血豆腐的摊位，所售的血豆腐都是盒装，均3.5元一斤。 　　一名女摊主表示，市场上不允许销售散装的血豆腐，“盒装的都是检疫合格的，散装的一般都没有检疫。” 　　而在家乐福超市广渠门店生食区，记者看到所销售的猪血豆腐，都贴有“动物产品检疫合格”的标签，每斤售价15.3元。 　　北京动物检疫部门表示，活猪、鸭只要检疫合格，其身体分割部位生产的如猪血豆腐、鸭血豆腐是允许销售的，但销售者须有相关的检疫票据，未经检疫的不允许出售。 　　5月11日下午，北京稻香村食品有限公司总部工作人员称，稻香村各个加盟店实行自行取货，没有统一配送。 　　■ 小贴士 　　如何鉴别真假鸭血 　　1、看气孔。真鸭血豆腐在未煮熟时没有气孔，表面光滑。用刀切，切面会有大小不一的气孔。而假的鸭血豆腐在未煮熟时就有蜂窝状气孔，刀切后，切面会出现大小均匀的气孔。 　　2、看颜色。真的鸭血豆腐呈暗红色，而假的却接近咖啡色。 　　3、看口感。真鸭血细、滑、嫩，吃在嘴里像豆腐一样。假鸭血往往在加工过程中添加一些淀粉和其他化学品，一般有韧性，可以拉伸，吃起来口感很韧，像果冻一样。 　　4.夹一夹。最简单的方法是用筷子去夹，夹不断的就是假鸭血，很容易夹碎的就是真鸭血。

前 言重组腺相关病毒 (AAV) 载体由于其良好的安全性、高转导效率和在非分裂细胞中的长期基因表达，已发展成为最有前途的基因治疗技术。基于 AAV 的基因疗法对于治疗遗传性失明、肌肉萎缩或出血性疾病等遗传疾病具有很大的前景。存在多种天然存在的和工程改造的 AAV 血清型，它们的衣壳序列不同，因此在细胞嗜性上有所不同，在AAV研发工作中快速地评估不同血清型的AAV是十分重要的。# 文献解读 #https://doi.org/10.1016/j.xphs.2019.10.031在这篇文章里，作者提出使用nanoDSF 技术测量，作为确定 AAV 衣壳 Tm 的一种简单替代方法。该研究表明，nanoDSF 测量是一种简单、准确和快速的 SO-DSF 替代方案，它能够以出色的精度表征 AAV 衣壳稳定性，并且不需要任何其他染料。AAV 颗粒由 3 个结构病毒蛋白（VP1、VP2 和 VP3）和一个大约 4.7 kb 的单链 DNA 基因组组成，其中包含 2 个反向末端重复序列 (ITR) 之间的 2 个基因 Rep 和 Cap。Rep 编码多种非结构性 Rep 蛋白，这些蛋白对于病毒基因组复制和包装至关重要。Cap 包含一个开放阅读框，它以大约 1:1:10 的比例从不同的起始密码子产生 VP1、VP2 和 VP3 蛋白。不同的 AAV 血清型不仅具有不同的细胞趋向性和转导谱，而且它们的结构特性和稳定性也不同。后一个特征也反映在热稳定性上，并导致衣壳的血清型特异性解链温度 (Tm)。nanoDSF 方法基于 AAV 衣壳蛋白序列中色氨酸残基的内在荧光，其在 AAV 血清型中高度保守，其光谱特性取决于其局部环境。从疏水环境到亲水环境的变化会导致在紫外范围内激发时色氨酸的发射光谱发生红移。通过这种简单的测量，可以在 1 小时内确定不同 AAV 血清型的 Tm，检测浓度大约 2Ⅹ1011 cp/mL，样品体积仅为 10 μL。文中作者对不同血清型的AAV进行了检测，并且检测了不同生产实验室生产的AAV都是可以得到很好的区分，其中，除了AAV3/AAV8及AAV9/AAV10这两对不能很好的有效区分，作者报导对于其他AAV血清型都是可以很好的快速区分的，并且仪器的准确度与重复性都是十分优秀的。为了检测仪器的对不同血清型AAV的区分度，作者使用不同血清型的AAV进行混合后，如上图所示，不同比例混合下的AAV可以很好的在Promethus上得到区分。而检测样品的浓度可以低至2Ⅹ1011 cp/mL，样品体积仅为 10 μL，可以很好的节省实验样品进行更多地其他分析。在本研究中，使用nanoDSF方法来确定AAV衣壳的Tm，作为血清型鉴定的方法。使用nanoDSF测量Tm是一种简单、快速（30-60分钟）和高通量（48个样品/30-60分钟）的方法，用于以低成本和低材料输入（2Ⅹ1011cp/mL，10 μL）测定AAV-Tm，从最终产品和过程控制样品中很容易获得如此少量的材料。由于nanoDSF测量也允许检测与工艺相关的杂质，因此该方法是一种非常有吸引力的高通量筛选方法，用于在纯化过程中监测样品纯度和分析批次间的一致性。尽管 nanoDSF 可以快速可靠地确定 Tm，因此可以了解 AAV 衣壳的类型，但最明显的问题是具有非常相似的热稳定性水平的 AAV 衣壳，例如 AAV3 和 AAV8 或 AAV9 和 AAVrh10无法进行区分。但这一限制可以通过测量不同的缓冲液来克服，在这些缓冲液中，AAV 血清型表现出不同的热稳定性并允许区分对。除此之外，该方法很容易区分所有AAV血清型表现出不同的热稳定性并被有效区分出来。此外，可以精确测量 AAV的混合物，并且可以在 1:10 的浓度比下区分 1 个样品中的 2 种血清型。由于nanoDSF方法在常用的配方和储存缓冲液及洗涤剂中具有独特的稳定性，不会受到缓冲液成分影响，因此它为AAV血清型鉴定提供了一种快速、经济、可靠的方法。新品PR Panta蛋白稳定性分析仪

炎症因子是炎症反应及其介导的疾病中参与免疫调控的一类重要细胞因子，包括肿瘤坏死因子（TNF）、白介素（IL）、转化生长因子（TGF）等。目前已经证实炎症因子与多种临床疾病的发展密切相关，包括细菌感染、新生儿败血症、心血管疾病、类风湿性关节炎等各种急性和慢性炎症疾病，甚至在肿瘤的发生发展中也起到了重要作用。因此，血清炎症因子是监控疾病进程的核心指标，通过对炎症因子的检测可以更好的评估患者免疫状态，为临床管理提供重要参考。然而，这些炎症因子在血清中的含量极低，现有的一些常规技术由于受到灵敏度的限制无法达到检测需求，难以及时预测疾病的转归。 图1 基于ZIF-8@Ag NWs 复合纳米材料的电化学传感芯片结构图以及免疫传感策略验证结果近期，上海大学的张源课题组提出了一种合理有效的电化学免疫传感器件设计策略。该团队以ZIF-8@Ag NWs为电极材料，结合3D 打印（NanoArch S140，摩方精密）和丝网印刷技术，开发了一种多通道的电化学免疫传感芯片，用于血清中炎症因子IL-6和IL-8的联合检测。该传感芯片可同时检测pg/mL至ng/mL浓度范围内的IL-6和IL-8，即使在复杂的BSA环境中也可达到10 pg/mL的检测限。临床血清样本分析表明该传感检测方法对18例炎症疾病患者组和18例对照组表现出良好的区分结果。相关成果以In-situ formation of “electron conductive wires” threaded ZIF-8 membrane for multiplexed immunoassay of human interleukins为题发表在《Nano Research》期刊上。图2 临床血清样本的检测分析结果。(a) 固定有Anti-IL-6的工作电极对血清的检测结果 (b) 固定有Anti-IL-8的工作电极对血清的检测结果 蓝色柱为健康对照组，橙色柱为患者 (c) 基于IL-6、IL-8检测结果的主成分分析数据。

同位素内标-气相色谱-高分辨双聚焦磁质谱法检测血清中多溴联苯醚背景介绍　　多溴联苯醚(PBDEs),是一种持久性有机污染物(POPs),根据苯环上溴原子的取代个数和位置的不同,共有10类209种同系物。由于其阻燃性能良好,被广泛应用于纺织品、玩具、建筑材料和电子设备等产品中。PBDEs的化学结构稳定,亲脂性强,容易释放到环境中,并通过食物链对生物体产生生物蓄积与生物放大作用,产生甲状腺毒性、神经毒性、内分泌毒性、生殖毒性、肝脏毒性、细胞毒性、致癌性等。　　PBDEs对人体健康的影响已成为世界范围内高度关注的问题,目前针对多溴联苯醚人群暴露情况的研究,分析样本主要为血液、母乳和各种组织(脂肪、胎盘等)。由于多溴联苯醚是脂溶性化合物,在尿液中含量较低且多以羟基化代谢物的形式存在,脂肪组织的采样具有侵害性,且母乳和胎盘的采样仅限于一部分特殊人群,而血液样本相对较易获得,所以血液样本的测定是研究多溴联苯醚对人群健康影响的主要途径。　　人体血清基质复杂,PBDEs含量较低,因此需提高富集效率并尽可能降低基质干扰,提高检测灵敏度。目前,液液萃取法、固相萃取法和加速溶剂萃取法是样品提取时较常使用的方法,样品净化主要使用凝胶色谱法和固相萃取柱净化法,检测方法主要有液相色谱-质谱法(LC-MS)、气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)、气相色谱-负化学源质谱法(GC-NCI/MS)和气相色谱-高分辨双聚焦磁质谱法(GC-HRMS)。　　LC-MS前处理步骤相对简便,但对PBDEs分辨能力较弱、灵敏度较低,更适合易热降解的高溴代多溴联苯醚的测定；GC-MS/MS、GC-NCI/MS选择性、灵敏度较高,对复杂基质抗干扰能力强,适用于痕量PBDEs的测定,但样本需求量较大,需采集2~5 mL血清样本；GC-HRMS同时备有静电场离子分析器和磁场质量分析器,因而使仪器同时具有能量聚焦和方向聚焦的双聚焦功能,灵敏度高、检出限低,适用于小体积样本中痕量和超痕量PBDEs的测定。　　目前常用的GC-HRMS样品前处理步骤中主要采用凝胶色谱和酸性硅胶柱对样品进行净化,其中凝胶色谱法样本需求量较大(2 mL),酸性硅胶柱对实验人员填装操作要求较高,且无法同时测定多种PBDEs组分(如BDE-209等),批量样品检测时效率较低。　　本方法探索使用少量血清(0.5 mL),采用GC-HRMS结合液液萃取和硅胶柱净化的方法,建立了人血清中14种PBDEs的测定方法,并用该方法对某地区15份青少年人群血样进行了检测,以期了解该地区青少年人群PBDEs的暴露水平。　　样品前处理　　血清样品解冻后移取0.5 mL于12 mL玻璃离心管中,分别加入200 μL硫酸、0.5 mL甲醇和20 μL内标使用溶液后混匀。先加入6 mL正己烷充分摇振后,以3500 r/min离心10 min,收集上层有机相；再加入6 mL甲基叔丁基醚,重复萃取,合并两次萃取液,于40 ℃、5 Pa氮吹25 min至0.5 mL。依次用2 mL甲醇和2 mL正己烷活化硅胶固相萃取柱,将浓缩液转移到硅胶柱上,先收集流出液,再用10 mL二氯甲烷-正己烷(1:1, v/v)溶液洗脱,合并流出液与洗脱液,40 ℃氮吹30 min至近干。向试管中加入10 μL正己烷复溶,振荡混匀,转移至棕色进样小瓶中,待测。　　色谱条件　　色谱柱:Rtx-1614毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.1 μm)；进样方式:不分流进样；进样口温度:290 ℃；传输线温度:320 ℃；升温程序:初始温度150 ℃,保持2 min,以15 ℃/min升温至250 ℃,保持1 min,再以25 ℃/min升温至290 ℃,保持3 min,然后以25 ℃/min升温至320 ℃,保持12.5 min；载气:氦气,恒定流量1.0 mL/min；进样量为1 μL。　　质谱条件　　电子轰击(EI)离子源,源温:280 ℃；电子能量:35 eV；电压选择离子检测(VSIR)；分辨率:10000。14种PBDEs及其同位素内标的质谱参数见原文表1。　　质量控制　　样品前处理环境应在每次实验开始前和结束后进行清理,避免有目标物残留。实验过程中所用玻璃离心管、试剂、进样小瓶、固相萃取柱、枪头均做空白对照实验,未检出14种待测PBDEs。　　文章信息　　色谱, 2022, 40(4): 354-363　　DOI: 10.3724/SP.J.1123.2021.10017　　王梦梦, 谢琳娜, 朱英*, 陆一夫*　　中国疾病预防控制中心环境与人群健康重点实验室, 中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所, 北京 100021

侵袭性真菌感染高发于器官移植、血液系统肿瘤、艾滋病等人群，死亡率极高，其诊断和治疗已成为世界性难题。　　中国工程院院士、海军军医大学第二附属医院(上海长征医院)廖万清4日接受采访时直言：“在血清学检测技术方面，中国的生物科技企业已经掌握了关键技术，全国各大医院用的基本都是中国自主开发的产品，产品销售到全球各个国家。近年来，中国企业还开发了真菌血清学化学发光法检测等新平台；曲霉菌抗体等新靶标也逐步在临床应用，帮助慢性曲霉病以及曲霉过敏症精准诊断。”　　据全球抗真菌病行动基金会(GAFFI)统计，曲霉菌、隐球菌、念珠菌、肺孢子菌等常见真菌病原体每年导致1490万人感染，170万人死亡，已成为全球重大公共卫生的挑战之一。专家呼吁要加强真菌病的早期精准诊断，以提高临床救治率。　　廖万清院士介绍，精准的检测是遏制抗生素滥用的关键，可以为患者带来获益。快速、精准、低成本的临床诊断技术，对于启动早期精准治疗、遏制病原传播有着重要的意义。“以往真菌感染难以诊断。很多不明原因感染而病死的患者，经过尸检才确诊真菌感染。”廖万清院士指出，“随着真菌病诊断技术的进步，这一情况已大为改善，大部分患者入院第二天，甚至当天就用上了对症的抗真菌药。”　　如今，真菌病分子诊断技术速度快、精度高，是真菌诊断未来发展方向。今年三月，中国药监局批复了真菌多联检荧光PCR三类注册证。上海长征医院皮肤病科专门从事真菌病分子诊断研究的方文捷医生告诉记者：“这标志着中国临床真菌病诊断进入了‘分子时代’”。　　上海长征医院皮肤病科主任潘炜华教授认为，要积极开发真菌识别的AI模型。真菌菌种在显微镜下及培养基中有较为鲜明的特征，通过大量图形进行AI训练，可形成很好的识别模型，辅助基层医院医生进行诊断。据悉，他所在的上海长征医院皮肤科团队正在攻克这一方向的技术难题。　　记者当日了解到，廖万清院士、潘炜华教授团队从传统诊断技术、分子诊断技术以及AI技术在真菌诊断上的进展等方面，系统性阐述了国内外真菌感染诊断领域的重要研究成果。相关研究成果发表在国际生物医药领域权威期刊《生物医药科学杂志》上。在采访中，记者了解到，抗击真菌感染，需要临床学科协同防控。《侵袭性肺部真菌病诊断路径中国专家共识》在上海启动撰写。该共识由廖万清院士发起，邀请国内医学真菌学、血液科、感染科、重症医学科领域逾30位知名专家共同撰写，将以临床思维串联最新的检验技术进展，拟形成针对侵袭性肺真菌病临床诊断路径的中文和国际共识。廖万清表示，这一成果将有力地促进侵袭性肺部真菌病的规范化诊治。

近日，中国科学院合肥物质科学研究院健康与医学技术研究所研究员杨良保团队、王宏志团队，与中科院合肥肿瘤医院药学中心合作，在抗肿瘤药物血药浓度的定量检测方面取得进展。科研团队利用收缩组装的液态3D热点矩阵作为微反应器，建立了高稳定、高灵敏的表面增强拉曼光谱（SERS）定量检测血药浓度新方法。相关研究成果发表在Analytical Chemistry上。　　表面增强拉曼光谱（SERS）是一种分子光谱，具有快速、高灵敏和指纹识别的特性。杨良保团队致力于SERS方法原理与检测应用方面的研究工作，并取得了一系列成果。定量检测是SERS方法的终极目标之一，但在控制热点的均匀性和使目标分子进入热点区域等方面存在难题。该研究利用液体三相平衡原理控制液滴的收缩，不仅形成高密度、高稳定的液态3D热点矩阵（图1），而且使抗肿瘤药物能够自主进入热点区域。结合该团队自主研发的手持式拉曼光谱仪，能够实现对肿瘤病人血清中抗癌药物在线定量检测（图2）。　　该方法对抗癌药物5-氟尿嘧啶表现出50 ppb灵敏度和50-1000 ppb的定量检测范围（图2）。与传统的固体纳米阵列和胶体聚集SERS方法相比，收缩组装的液态3D热点矩阵可以增强分析物在等离子体热点空间的富集能力，实现高灵敏度和高稳定的SERS定量检测。这种收缩组装的3D热点矩阵在定量检测复杂样品（如血清、生物体液）中的分析物、动态监测抗癌药物代谢过程和生化反应动力学方面颇具潜力。　　研究工作得到中科院科研仪器设备研制项目、国家自然科学基金、安徽省重点研究与开发计划等的支持。图1.3D热点矩阵形成原理图图2.手持式拉曼光谱仪检测血清中的5-氟尿嘧啶

液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)在人体血清(浆)类固醇激素检测中展现出优于传统免疫学方法的特异性高、分析测量范围宽、多标志物同时检测等特点，已成为国际内分泌学领域相关疾病实验室诊断的首选方法。目前，国内医学实验室开展血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS检测多参考已发表学术论文和仪器厂家说明书提供的通用操作和检测程序。然而，血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS检测的技术难度大，临床实验室检验人员大多数缺少质谱领域专业培训和实践经验，而通用程序缺乏针对性和实操性，尤其我国尚无针对该检测程序和质量保证的系统性文件，导致实验室间检测结果存在较大差异，阻碍了该技术的临床应用。为规范我国血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS检测，共识从检验前、中、后程序及其质量保证进行详细说明，并提出针对性建议，为实验室开展该检测项目提供参考，以推动我国血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS检测的临床应用和结果一致性。　　类固醇激素是一类具有环戊烷多氢菲母核的脂肪烃化合物，根据化学结构及生理功能可分为肾上腺皮质激素(糖皮质激素、盐皮质激素)、性激素(雌激素、雄激素、孕激素)及维生素D [ 1 ] ，在人体生长发育、能量代谢、免疫调节、生育功能调节等方面发挥重要作用。血清(浆)类固醇激素异常与先天性肾上腺皮质增生(congenital adrenal hyperplasia，CAH)、原发性醛固酮增多症、库欣综合征、多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)、儿童发育延迟或性早熟等多种内分泌疾病密切相关 [ 2 ] ，因此其检测广泛应用于多种内分泌疾病的临床研究、诊断以及健康评估。传统免疫学方法尽管自动化程度高，但特异性相对不足，且线性范围窄，难以实现精准检测。液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS)具备特异性高、分析测量范围宽等性能优势，且能在短时间内同时准确测定多种类固醇激素及中间代谢产物，是目前精准、全面定量分析血清(浆)类固醇激素的首选方法 [ 3 , 4 ] 。　　尽管已有众多研究报道多种类固醇激素的LC-MS/MS检测，包括方法开发和优化 [ 5 , 6 ] 、生物参考区间建立 [ 7 ] 等，国外已有针对血清(浆)雄激素、雌激素LC-MS/MS检测程序的指南 [ 8 ] ，国内有LC-MS/MS临床应用通用建议共识及25羟-维生素D和雄激素LC-MS/MS检测的共识 [ 9 , 10 , 11 ] ，但依然缺乏涵盖检验前、中、后阶段的LC-MS/MS检测操作程序和质量保证的指南和共识。基于此，为规范我国血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS检测，中国质谱学会临床质谱专家委员会组织专家参阅国内外相关文献并结合临床应用经验，面向医学实验室临床质谱检验人员，针对肾上腺皮质激素和性激素LC-MS/MS分析全流程的质量保证进行详细说明并提出建议，为实验室开展血清(浆)类固醇激素检测项目提供参考，以推动我国血清(浆)类固醇激素检测的临床应用和结果一致性，提升我国类固醇激素异常相关疾病的精准诊断能力。　　01血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS检验前质量保证　　(一)标本采集　　人体类固醇激素浓度受多种因素影响，包括昼夜节律、生理周期、采血体位和药物等，应根据临床具体需求和激素水平影响因素，制定合理采样流程，并推荐给标本采集人员和患者。例如：皮质醇分泌通常在清晨6：00—8：00达到峰值浓度，因此峰值监测推荐清晨采集患者血液标本 连续监测则采样时间点应相对固定 [ 12 ] 醛固酮仰卧位采血比直立位采血检测结果低50% [ 13 ] 女性患者进行血清(浆)雌激素检测时需明确卵泡期、黄体期等信息，对于无规律月经周期女性，需明确绝经(特别是早绝经)原因，如自然绝经、外科手术、辐射、药物作用等 [ 14 , 15 ] 。　　含有分离胶的促凝管中存在睾酮干扰峰，且分离胶可吸收类固醇激素，标本体积和储存时间也可不同程度影响检测结果 [ 16 ] 。新生儿CAH二级筛查中，EDTA采血管可导致17α-羟孕酮、雄烯二酮及11-脱氧皮质醇的LC-MS/MS检测结果偏高，造成假阳性 [ 17 ] 。另外，更换采血管品牌或批号也可能影响待测物色谱峰分离度，应制定包括峰分离度、保留时间漂移范围等色谱参数的可接受标准，以监测潜在干扰峰的影响强弱及变化。　　建议1 针对有昼夜和/或周期节律的类固醇激素，实验室应根据其临床预期用途，指导患者和采血人员选择合适的采血时机，例如清晨采血检测皮质醇、睾酮水平，卵泡期采血检测雌激素水平。推荐采用不含分离胶的血清(浆)采血管采集标本，新生儿二级CAH筛查推荐采用肝素抗凝剂采血管。　　(二)标本保存和运输　　实验室应根据类固醇激素质谱检测的标本保存条件及检测频率进行标本的稳定性验证 [ 18 ] 。标本稳定性验证实验应至少包括环境温度、冷藏和/或冷冻条件下的稳定性，如果标本存在冻存后复查的可能，还需考察反复冻融对标本稳定性的影响。另外，标本采集、运输及前处理阶段的稳定性也需进行评估。标本稳定性实验均需使用新鲜血清(浆)，通过比较新鲜采集和保存后的血清(浆)标本检测结果评估其稳定性。　　如果实验室根据参考文献报道或试剂说明书设置标本保存条件，需包含明确的稳定性、标本类型、类固醇激素浓度、保存温度范围、保存时间以及保存后标本浓度较新鲜标本的变化百分比。为确保标本保存后类固醇激素检测结果“稳定”或“无明显变化”，需明确测量程序、含量计算程序及含量变化的可接受范围。如果这些信息缺失，实验室应自行建立标本稳定性的可接受条件。　　建议2 实验室应根据标本保存的实际需求，使用新鲜标本对来自文献报道或试剂说明书的标本稳定性进行验证，或自建稳定性可接受的标本保存条件。建议血清(浆)标本中类固醇激素稳定保存的条件及时间见 表1 。　　02 血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS检验质量保证　　(一)标本前处理　　标本前处理方法取决于待测物的理化性质、灵敏度要求和分析方法。其目的是将待测物从血清(浆)及其他潜在干扰物质中分离、提取、纯化，并实现对待测物的浓缩。大多数糖皮质激素(如17α-羟孕烯醇酮、17α-羟孕酮、11-脱氧皮质醇、皮质醇、可的松)和盐皮质激素(如孕烯醇酮、孕酮、脱氧皮质酮、皮质酮)为疏水结构，均可与相应转运蛋白结合存在于血液中，游离形式约占1%。但血液中，约50%醛固酮以游离形式存在。睾酮和雌二醇与白蛋白结合力弱，与性激素结合球蛋白(sex hormone binding globulin，SHBG)结合力强，2%~4%睾酮呈游离形式，60%~75%睾酮与SHBG结合，20%~40%睾酮与白蛋白结合 [ 1 ] 。平衡透析可去除血中结合型类固醇激素进而检测游离型激素水平，但测量程序要求更高的灵敏度。如果结合型类固醇在水解前无法被直接检测，则需水解后进行检测，并明确结合型类固醇是否完全水解，且水解步骤不会导致类固醇降解，如硫酸雌酮在提取之前需通过水解酶获得游离型雌酮。亲脂性性激素(雄烯二酮、睾酮、双氢睾酮、雌酮、雌二醇、雌三醇)较亲水性性激素(硫酸脱氢表雄酮、硫酸雌酮)在血液中浓度低，因此亲脂性性激素的LC-MS/MS测量程序通常需要更复杂的标本前处理以消除基质干扰并浓缩待测物以达到理想的定量限(limit of quantification，LOQ)。　　血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS检测的标本前处理流程通常包括：(1)取等量临床标本、标准品、质控品和基质空白 (2)加入内标物 (3)提取 (4)纯化 [ 19 ] 。对易氧化的类固醇激素，前处理时需尽可能避免发生氧化以防待测物降解及产生干扰物。例如，在样品浓缩时使用惰性气体(如氮气)，而非加热真空离心浓缩。去除可能干扰检测或影响前处理的物质后，宜将分析物转移到液相色谱流动相洗脱溶剂中，保持初始浓度比例，以备后续分析。推荐使用与待测物具有相似结构和离子化性质的同位素标记物(或结构类似物)作为类固醇激素LC-MS/MS检测内标物，例如氘代或 13C标记的类固醇。通过比较已知浓度内标物与待测物的信号，校正样本前处理、色谱分离、离子化过程及基质效应所产生的误差。类固醇激素的同位素内标物大多为商品化试剂，如无商品化试剂，应优先选择使用非内源性但与待测物结构类似的合成类固醇作为内标物，并确保内标物与待测物具有相同或相近保留时间。内标物的相对分子质量应至少比相应待测物大3，氘代或 13C标记数量控制在7，化学纯度应≥98%，同位素内标物纯度≥97%。　　内标物需加入到所有校准品、质控品和待测标本中，且应在提取或纯化步骤之前或同时加入。加入内标物后需静置足够长的时间(通常15~30 min)以平衡内标物与结合蛋白的相互作用，抵消因蛋白结合导致的检测浓度偏低，如睾酮和睾酮-d 3需30 min完成平衡(22 ℃)。内标物的质谱信号强度应在不同分析批次中保持稳定，平衡时间不足可能会导致内标物信号强度不稳定。　　建议3 使用与待测物有相同理化性质的商品化同位素标记物作为类固醇激素LC-MS/MS检测内标物( 表2 )，浓度设置在校准曲线的中浓度或医学决定水平附近，实验室应制定内标物信号强度波动的批间可接受范围。　　血液中存在的大量蛋白质、多肽、小分子化合物等可引起LC-MS/MS的离子源和检测器饱和，导致离子抑制或分辨率不足，干扰检测结果。因此，LC-MS/MS分析前应提取待检测物，去除无机化合物(如盐)、蛋白质、脂质(如甘油三酯)和磷脂等物质的干扰，提高检测灵敏度、重复性和稳定性。　　LC-MS/MS分析标本的提取方法包括蛋白沉淀(protein precipitation，PPT)、液液萃取(liquid-liquid extraction，LLE)、固相萃取(solid-phase extraction，SPE)等。PPT利用蛋白沉淀剂使蛋白变性沉淀，离心后直接取上清液进行检测，不适用于含量较低或有蛋白结合特性的类固醇激素。LLE利用溶剂的相似相溶原理，将目标化合物从液体混合物中分离出来，因操作繁琐且需要消耗大量有机溶剂，故临床常用固相支撑液液萃取(supported liquid extraction，SLE)替代传统LLE，降低有机溶剂消耗。而SPE采用固体颗粒色谱填料(通常填充于小柱型装置中)对样品不同组分进行化学分离，较SLE具有更优的去磷脂干扰能力，是类固醇激素标本提取的首选方法，但也具有操作步骤多、成本高等缺点。针对类固醇激素的不同极性，脂溶性激素通常选择亲脂基团填料的SPE方法萃取待测物，非脂溶性激素选择亲水基团或阴阳离子交换填料的SPE方法萃取待测物。为进一步去除与待测物共同洗脱的干扰物，可联合LLE和SPE，或吹干提取物后用不同溶剂重新提取。其中，通过高效液相色谱(high performance liquid chromatography，HPLC)可在线进行SPE，以减少手工操作，节省时间和人力成本，但目前尚无多种类固醇激素在线SPE提取解决方案。也有通过使用单个或多个提取柱串联色谱柱，如提取/上样柱、一次性SPE柱、二维色谱，提高色谱分离效率和检测灵敏度，使血清(浆)标本无需或只需经简单蛋白沉淀处理即可进行分析。　　建议4 根据待测类固醇激素理化性质及测量灵敏度要求推荐使用SLE或SPE标本提取方法。　　(二)类固醇激素LC-MS/MS定量分析　　LC-MS/MS通过结合HPLC的高效分离浓缩能力与三重四极杆质谱的高特异性和高灵敏度定量性能，准确测量标本中浓度极低、理化性质相似的类固醇激素，其特异性较免疫学分析明显提高。　　1. HPLC分离：HPLC是一种基于待测物在固定相和流动相中具有不同分配系数的分离技术。通常使用对非极性分子具有高亲和力的非极性固定相(如 18C、五氟苯基等)色谱柱分离类固醇激素 [ 20 ] ，通过流动相极性变化将吸附于色谱柱上的类固醇激素重新溶于流动相，从而实现逐步洗脱分离。通过开发精密的流动相梯度洗脱程序和使用适合的色谱柱可以分离结构非常相似的类固醇激素及其代谢物，包括一些同分异构体(如21-脱氧皮质醇、11-脱氧皮质醇)。通过依次洗脱标本中所有待测物，降低检测信号的复杂度，分离组分信号随时间出现一组近似高斯分布的色谱峰群，生成检测信号强度随时间变化的色谱图。另外，流动相中通常加入挥发性添加剂(如0.01 mol/L甲酸铵、0.1%甲酸)，其浓度不应超过0.5%，以增强化合物离子化，而不应含非挥发性流动相添加剂。色谱柱可选择粒径较小的分离柱，实现短时间内更好的分离效果，也可根据文献综合选择。色谱柱应在寿命期限内使用，并根据检测量、峰型、保留时间、分离度、柱压等参数判断是否需要更换。实验室应做好色谱柱的日常维护，在每日检测结束后进行日常冲洗程序，并最终将色谱柱保持在95%及以上的甲醇或乙腈中，尽可能地延长色谱柱的使用寿命及使用质量。　　建议5 为有效分离结构相似的类固醇激素及其代谢产物，推荐实验室使用 18C或五氟苯基填料，色谱柱粒径≤3 μm，有机相梯度洗脱程序：0.5~4.0 min，40%~55% 4.0~6.5 min，55%~75% 6.5~7.5 min，75%~99%。　　2. 串联质谱检测：类固醇激素LC-MS/MS测量程序使用的离子源主要包括电喷雾电离(electrospray ionization，ESI)和大气压化学电离(atmospheric pressure chemical ionization，APCI)。在常规临床检测中，醛固酮、皮质醇、11-脱氧皮质醇、21-脱氧皮质醇、可的松、睾酮、孕酮、17α-羟孕酮、皮质酮、雄烯二酮、脱氢表雄酮可采用ESI或APCI离子源。与ESI相比，APCI离子源温度更高，脱溶剂更充分，因此基质效应更小。然而，APCI更适用极性较小的类固醇激素，如3β-羟基-5-烯类固醇 [ 21 ] ，在需同时检测多个类固醇激素的临床应用中具有局限性。　　类固醇激素分子经离子源电离后进入三重四极杆质量分析器，根据质荷比进行分离，并采用多反应监测(multiple reaction monitoring，MRM)或选择反应监测(selected reaction monitoring，SRM)模式采集数据。最终借助质量分析器选择特定母离子和子离子，通过母离子/子离子对和各分析物及内标物的色谱图及峰面积对目标化合物进行定量。不同仪器，其离子对信息及检测参数并不完全相同，每个化合物通常选择2个离子通道分别作为定性离子和定量离子通道( 表3 )。基于定性离子、化合物极性及内标物分离峰综合判断目标化合物的分离峰。　　建议6 类固醇激素LC-MS/MS检测选择ESI或APCI离子源，采用MRM或SRM模式，应在性能验证时优化质谱参数。　　3. LC-MS/MS测量程序性能验证和/或确认：测量程序的性能要求取决于其预期临床用途、待测类固醇激素生物学变异及仪器灵敏度水平。如检测女性、儿童血清睾酮，测量程序的灵敏度需要达到0.02 ng/ml 同时检测浓度差异大的多个分析物，如雌二醇、雌酮、雄烯二酮，需验证测量程序对每个分析物的分析性能是否满足临床需求。值得注意的是，由于血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS测量程序包含的人工操作步骤多，各实验室环境条件、仪器设备配置、人员水平相差大，因此即使实验室使用商品化试剂盒(Ⅰ、Ⅱ类)，也应进行性能确认或验证。LC-MS/MS测量程序性能验证和/或确认程序可参考共识 [ 22 ] 或美国临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)C62-A [ 23 ] ，并根据生物变异、临床指南、政策法规等设定性能验证中每项参数的可接受标准。　　(三)类固醇激素LC-MS/MS测量程序的分析性能指标　　类固醇激素相关疾病的临床诊断对检测指标及灵敏度有不同需求，实验室应综合临床需求及仪器灵敏度确定LC-MS/MS测量程序分析性能。　　1.肾上腺皮质激素：皮质醇是最主要的肾上腺皮质激素(约占75%~95%)，血液中总皮质醇、游离皮质醇水平及昼夜节律变化常用于辅助诊断原发性和继发性肾上腺功能不全、库欣综合征、艾迪生病。正常成人清晨血清总皮质醇浓度通常在20~50 ng/ml，经平衡透析后的游离皮质醇浓度约占总皮质醇5%，可更准确反应皮质醇水平及节律，推荐检测血清(浆)游离皮质醇(LOQ≤1 ng/ml)。皮质醇联合17α-羟孕酮、雄烯二酮常用于筛查11-羟化酶或21-羟化酶缺乏型CAH。大多数(约90%)CAH由21-羟化酶基因变异导致，患者血清雄烯二酮水平通常升高5~10倍，17α-羟孕酮水平升高幅度更大，而皮质醇水平较低或无法检测。不同年龄、性别人群17α-羟孕酮及雄烯二酮水平差异较大，推荐实验室检测17α-羟孕酮(LOQ≤0.1 ng/ml)，检测区间上限设定在参考区间上限10倍以上 [ 24 ] 。　　硫酸脱氢表雄酮、孕烯醇酮、孕酮、17α-羟孕烯醇酮、11-脱氧皮质酮和18-羟皮质酮常用于已排除11-羟化酶、21-羟化酶缺乏型CAH，及确认3β-羟基类固醇脱氢酶缺乏和17α-羟化酶缺乏型CAH。在非常罕见的17α-羟化酶缺乏症中，雄烯二酮、所有雄激素前体(17α-羟孕烯醇酮、17α-羟孕酮、硫酸脱氢表雄酮)、睾酮、雌酮、雌二醇和皮质醇水平降低，而盐皮质激素(孕酮、11-脱氧皮质酮和18-羟皮质酮)水平明显升高。醛固酮是典型的盐皮质激素，常用于辅助诊断原发性醛固酮增多症(如肾上腺肿瘤、肾上腺皮质增生)和继发性醛固酮增多症(如肾血管疾病、盐耗竭、钾负荷、肝硬化腹水、心力衰竭、妊娠、Bartter综合征)，以上情况醛固酮水平通常可升高10~100倍。因此，建议醛固酮LOQ≤0.02 ng/ml，检测区间上限设定在参考区间上限100倍( 表4 )。　　2.雄激素：LC-MS/MS较易检测正常成年男性雄激素水平，但对低雄激素水平人群，如女性、儿童以及性腺功能减退的男性，则要求测量程序具有更高的灵敏度。对成年女性，睾酮水平通常用于评估由肾上腺合成异常和PCOS导致的高雄激素血症及相关的女性多毛症、月经紊乱、不孕等疾病。对儿童，睾酮水平通常用于评估外生殖器性别模糊、性早熟或发育延迟，以及用于CAH的诊断。建议女性或儿童的睾酮测量程序LOQ≤0.02 ng/ml，并需配置高灵敏度LC-MS/MS系统，并对样品进行离线或在线前处理，如LLE、SPE或多个提取步骤结合(如PPT结合SPE) [ 8 ] 。　　双氢睾酮以及双氢睾酮/睾酮比值可用于诊断雄激素缺乏症、监测雄激素替代治疗或5α-还原酶抑制剂疗效，建议采用双氢睾酮非衍生化法LC-MS/MS检测(LOQ≤0.05 ng/ml)。雄烯二酮还可用于诊断和评估女性高雄激素血症、多毛症、不孕症，儿童性早熟、发育延迟、CAH，以及肾上腺、性腺肿瘤。在CAH、女性高雄激素血症等疾病中，雄烯二酮水平明显升高，但在3β-羟基类固醇脱氢酶缺乏症、17α-羟化酶缺乏症及类固醇合成急性调节蛋白缺乏症等罕见病及2岁以下儿童中，其水平较正常成人明显降低，建议其LOQ≤0.02 ng/ml。雄烯二酮检测的子离子与睾酮子离子具有相同的质荷比，因此实验室需验证睾酮和雄烯二酮的色谱分离度。　　脱氢表雄酮和硫酸脱氢表雄酮除联合肾上腺皮质激素用于CAH辅助诊断以外，还可用于鉴别诊断肾上腺功能不全或亢进。与性激素联合可用于区分肾上腺功能初现与性早熟，诊断儿童CAH和女性PCOS。儿童脱氢表雄酮水平较低(通常1~8岁儿童2 ng/ml)，为了准确诊断儿童肾上腺功能初现、性早熟，建议脱氢表雄酮LOQ≤0.02 ng/ml，硫酸脱氢表雄酮LOQ≤30 ng/ml。　　3.雌激素：对低浓度雌激素的准确检测可用于儿童性发育延迟或性早熟的评估，以及绝经后女性乳腺癌发病风险或芳香酶抑制剂治疗效果评估。非衍生化前处理，ESI负离子模式下检测雌二醇、雌酮及雌三醇建议LOQ≤0.01 ng/ml [ 25 ] 。硫酸雌酮在体内的浓度是雌二醇和雌酮的10~50倍，且半衰期较长，因此可用于雌激素水平状况评估。　　建议7 实验室应根据临床需求、待测类固醇激素生物学变异及仪器灵敏度水平，建立分析性能满足要求的类固醇激素LC-

非洲猪瘟病毒提取检测试剂盒(AB盒)FT-FWSJ_风途批发_非洲猪瘟病毒提取检测试剂盒(AB盒)_Go tšwa ga poledišano ya sešireletši sa go dira modumo ya sešireletši sa go tswalela ka Afrika (AB Kit)_好试剂选风途错不了　　非洲猪瘟的爆发对我国养殖业构成了空前的挑战，将对我国养猪业及相关产业的发展产生深远的影响。近期有报道称，从部分猪血浆蛋白粉中检测出非洲猪瘟病毒核酸，这几乎宣告了猪源性饲料添加剂( 如血浆粉、血球粉、肉骨粉)的死刑。如何解决这些添加剂的出路和替代途径是需要研究的重要课题。目前频繁的生猪调运和简易的运猪车辆，是疫情长距离扩散的主要风险因素，亟待建立可监测、可追溯、符合生物安全的生猪/猪肉调运和监管系统。　　【产品名称】　　通用名称：病毒DNA提取试剂盒　　英文名称：Extraction Kit for Virus DNA　　【预期用途】　　本试剂盒主要用于疑似病毒等病原感染抗凝血、血淸、拭子、组织、饲料及环境中的病毒DNA的提取，纯化的核酸可适用于各种常规操作及PCR试验。　　【试剂盒组分】　　I、试剂盒组成及贮藏条件名称20 T50 T1、吸附柱20个50个2、收集管20个50个3、裂解液5 mL11 mL4、洗液I13 mL32 mL5,洗液II13 mL32 mL6.洗脱液1.2 mL3 mL　　2、 保存条件及有效期：室温下保存，有效期12个月.　　3、 需自备材料：无水乙醇、1.5 mL无菌离心管、1.5 mL无菌离心管(长臂型)、生理盐水、研钵、无菌　　1mL, 2OOuL、10uL枪头、记号笔等。　　【操作步骤】　　一、样品制备　　1、 血液样品：抗凝血样品置离心管中，8000转/分钟离心2分钟，取上层血浆 非抗凝血样品置离心 管中，待凝固后，8000转/分钟离心2分钟，取上层血清，置于灭菌离心管中，编号待检。　　2、 组织样品：采集脾脏、肝脏、淋巴结、扁桃体等病变组织样品0.1g.组织匀浆器或研钵中充分匀浆或研磨，加入1 mL生理盐水混匀，8000转/分钟离心2分钟，取上清于灭菌离心骨中，编号待检。　　3、 口腔液：进食前用拭子/口腔液采集袋或自制棉线绑纱布团吸引动物咀嚼，收集口腔液大于 500uL， 8000转/分钟离心2分钟，取上清于灭菌离心管中，编号待检。　　4、 饲料：取适量研磨后的饲料(约0.2g)，放入含1 mL生理盐水或PBS(PH为7.4)缓冲液的2 mL EP 管屮，振荡混匀，8000转/分钟离心2分钟，取上清于灭菌离心管中,编号待检.　　5、 灰尘：用无菌棉签蘸取适量环境表面上的灰尘，放入含1 mL生理盐水或PBS(PH为7.4)缓冲液的2 mL EP管中，振荡混匀，8000转/分钟离心2分钟，取上清于灭菌离心管中，编号待检。　　二、DNA的提取　　1、取裂解液200uL加入无核酸酶1.5 mL离心曾屮，分别加入血浆/血清/组织液等样品液200uL. 震荡混匀10秒或颠倒混匀10次，室温放置5分钟(如果室内温度较低时.需放置25C水浴温育)，再加入200uL无水乙醇，颠倒混匀10秒 若样品浑浊则先12000转/分钟离心1分钟处理，取上清液，以避免堵塞柱子 　　2、 将液体转入套有收集管的吸附柱中， 12000rpm离心1分钟：　　3、 弃收集管液体，向吸附柱中加600uL洗液I , 12000 rpm离心1分钟 　　4、 弃收集管液体，向吸附柱中加600uL洗液II， 12000 rpm离心I分钟 　　5、 弃收集管液体，12000 rpm离心2分钟，以彻底去除残留洗液 　　6、将吸附柱转入新的无核酸酸1.5mLEP管(长臂型)中，向柱中央滴加50 uL洗脱液，静置1分钟, 12000 rpm离心1分钟，EP管中液体即为病毒DNA。　　【注意事项】　　1、 实验前诺仔细阅读本试剂盒说明书，严格按照操作步骤执行.在操作过程中对时间、试剂体积等 粘确控制可以获得好的结果。　　2, 样本应新鲜采集使用，或低温运输储存 　　3, 样本具有潜在感染风险，核酸的提取应在核酸提取实验室的生物安全柜中进行。　　4、 核酸提取冇关耗材确保高温灭菌，提取后核酸尽快进入下一步试验或冷冻保存待用。　　5, 试剂使用前应混合均匀，试剂具有一定腐蚀性，使用时请戴手套、口罩做好防护。　　6. 低温下裂解液出现结晶数属正常现象，可在60°C水浴加热助溶后使用。　　7、 实验产生的废弃物应及时收集，远离PCR实验室进行无害化处理。　　仅供兽医诊断使用　　非洲猪瘟病毒荧光PCR核酸检测试剂盒说明书　　【兽药名称】　　通用名称：非洲猪瘟病毒荧光PCR核酸检测试剂盒　　汉语拼音:Feizliouzhuwen Bingdu Yingguang PCR Hesuan Jianceshijihe　　英文名称：African swine Fever Virus (ASFV) PCR Nucleic Acid Diagnostic Kit　　商品名称：无　　【主要成分与含量】试剂盒中含有如下组分:试剂盒组分含量阳性对照250μL/管×1管 阴性对照250μL/管×1管 PCR反应液850μL/管×1管 萌混合液150μL/管×1管 说明书1份/盒【作用与用途】 本试剂盒可用于血液、脾脏、肝脏、淋巴结、 样品中非洲猪瘟病毒核酸的检测。扁桃体、肾脏、肌肉、环境样品等　　【用法与判定】　　1 用法　　1.1待检样品釆集、保存及运输　　1.1.1样品釆集　　(1) 活猪样品 无菌采集抗凝血或血清5mL　　(2) 病死猪剖检样品或屠宰场剖检样品 无菌采集死猪的牌、肺、肾、扁桃体、淋巴结、肌肉等组织样品。2〜8°C低温运至实验室用于检测。　　(3) 病猪污染的周边环境 采集与病猪相关场所的粪便、饲料、污水样品。2〜8°C低温运至实验室用于检测。　　1.1.2样品保存 采集的样品在2〜8°C保存应不超过24小时，-70°C条件下保存，避免反复冻 融。　　1.1.3样品运输泡沫箱加冰袋后密封进行运输。包装和运输应符合农业农村部《高致病性动 物病原微生物菌(毒)种或者样品运输包装规范》和交通运输部门关于危险品运输管理的有关规定。　　1.2样品处理　　1.2.1血液样品处理 抗凝血样品置于离心管中，8000 r/min离心2分钟取上层血浆，编号待 检。非抗凝血样品置于离心管中，待凝固后，8000 r/min离心2分钟取200μL上层血清，编号待检。　　1.2.2组织样品处理取适量脾脏、肝脏、淋巴结、扁桃体、肌肉等组织，置于研磨器或研磨管中研磨，再加适量生理盐水混匀，制成约10%的组织匀浆，8000 r/min离心2分钟，取200μL上 清于RNase/DNase-free无菌离心管中，编号备用。　　1.2.3环境样品处理　　1.2.3.1粪便、饲料样品处理方法取适量的粪便、饲料放入盛有PBS缓冲液的研磨管中研磨混匀，制成约10%的匀浆液.8000 r/min离心2分钟，取200μL上清于RNase/DNase-free无菌离心 管中，编号备用。　　1.2.3.2污水样品处理方法 直接取200μL污水进行核酸提取。　　1.3病毒核酸的提取用磁珠法或柱式法进行DNA核酸提取。　　1.4荧光PCR反应：　　1.4.1从试剂盒中取出荧光PCR反应液、酶混合液，室温融化后，2000 r/min离心5秒。设被 检样品、阳性对照和阴性对照总和为n,则反应体系配制如下：　　试剂 体系　　PCR 反应液 17× (n+1) μL　　酶混合液 3× (n+1) μL　　1.4.2在新的RNase/DNase-fire 1.5 ml离心管中加入上述试剂，充分混匀后瞬时离心。按照20μL/ 管分装量将试剂分装至荧光PCR反应管。　　1.4.3在上述制备好的荧光PCR反应管中分别加入阴性对照、阳性对照各5μL、处理好的待测核酸各5μL,终体积25μL/管，盖好荧光PCR反应管盖，混匀后瞬时离心，转移到荧光PCR仪器 上。　　144将PCR反应管放置在荧光PCR仪样品槽中，在荧光PCR仪上运行以下程序：步骤条件循环数UNG处理50 ℃, 2分钟1预变性95 ℃, 3分钟1预扩增95 ℃： 8 秒 55 ℃： 8 秒 5PCR扩増95 ℃： 8 秒 55 ℃： 8 秒 40　　荧光通道选择FAM,在PCR扩增阶段每个循环的55℃时采集荧光信号。设置扩增体系为25μL, 同时要选择passive reference和quencher为none的模式。(注：若荧光PCR仪(如AB17500)按说明 书中的反应程序设置后因持温时间短无法运行，可将预扩增和PCR扩增条件变更为95C： 5秒 55°C： 30 秒)　　2结果判定　　2.1试验有效性判定　　阳性对照有典型扩增曲线且Ct值≤30.且阴性对照无Cl值或无扩增曲线，线形为直线或轻微斜线，无指数增长期。则判试验结果有效。否则，此次试验视为无效。　　2.2样品判定　　2.2.1阳性：样本检测结果Ct值≤35且有明显指数增长期，判定检出非洲猪瘟病毒核酸。　　2.2.2可疑：样本检测结果Ct值在35〜38范围内。此时应对样本进行重复检测，如果重复实验 结果Ct值仍在35〜38范围内，有明显指数增长期.则判定为阳性，否则为阴性。　　2.2.3阴性：样本检测结果Ct值38或无Ct值，判定未检出非洲猪瘟病毒核酸。　　【注意事项】(1)实验前请仔细阅读本试剂盒说明书，严格按照操作步骤执行，在操作过 程中对时间、试剂体积等精确控制可以获得好的结果。　　(2) 实验室应严格按照有关规定分区管理，依照配液区-模板提取区-扩增区-分析区顺序 进行基因检测。各区间人员、器材、试剂及空气流向应有严格要求。　　(3) 核酸提取有关耗村确保洁净、无DNase/RNase,提取过程尽量低温、快速，完成后进入 下一步实验或冻保。　　(4) 对于顶部采光仪器要带新的一次性PE手套对荧光PCR管封盖，对于底部采光仪　　器要避免徒手或使用过的手套接触荧光PCR管底，检测过程中使用不带荧光物质一次性乳胶手套。　　(5) 冻存试剂使用前应于室温下完全融化，瞬时离心使液体完全沉于管底。避免反复冻融， 以免影响试剂性能。　　(6) 样品、阳性对照等在使用后及时封盖，.避免组分间及气溶胶等的污染造成假阳性。　　(7) 扩增产物禁止开盖，实验产生的废弃物应及时收集，远离PCR实验室进行无害化处理。　　【规格】50头份/盒　　【贮藏与有效期】试剂盒置-20°C以下避光保存，有效期12个月。　　【批准文号】兽药生字163668871

仪器信息网讯 由新型冠状病毒(SARS CoV-2)引起的新冠肺炎疫情仍在继续，严重威胁着全球公众健康。截至2021年4月，全球新冠肺炎确诊病例累计已超过1.282亿例。故迅速检测该疾病、及时隔离受感染个体显得尤为重要。目前广泛使用的基于聚合酶链式反应(PCR)和免疫分析的检测方法存在假阴性和诊断延迟的问题。因此，迫切需要高准确度、快速高通量的新冠肺炎检测方法用于大规模人群筛查。重庆市人民医院、复旦大学和国家蛋白质科学中心(北京)等单位的研究团队合作发展了一种基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)的血清多肽指纹图谱分析方法，以高效检测新冠肺炎。该方法准确、成本低、通量高、样品消耗少(一次检测仅需5 μL血清)，不需要苛刻、洁净的检测环境，且操作简便，对于非专业人员非常友好。此外，血清样本的采集很大程度降低了采样人员的暴露风险。因此，该方法在大规模人群筛查、常规检测和诊断应用方面具有巨大潜力，有望在疫情控制中发挥重要作用。相关研究成果近期作为封面文章发表在 Analytical Chemistry 期刊上。点击图片阅读论文　　研究团队首先采用MALDI-TOF MS分析了146例新冠肺炎患者和152例对照病例(包括73例临床症状相似的非新冠肺炎患者、33例结核病患者和46例健康人)的血清样本。使用最小绝对收缩和选择算子(LASSO)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)和交叉验证递归特征消除(REFCV)共3种机器学习方法对测试集(198个样本)中的血清多肽谱图进行特征峰筛选，筛选出25个峰作为新冠肺炎和对照组之间的差异特征峰。　　图1. 基于血清多肽指纹图谱的新冠肺炎快速筛查诊断模型的建立流程　　随后，利用逻辑回归(LR)、支持向量机(SVM)、随机森林(RF)、朴素贝叶斯(NB)、梯度增强决策树(GBDT)、K-最近邻(KNN)、决策树(DT)和自适应增强(Adaboost)共8种机器学习方法，以这25个特征峰构建用于新冠肺炎筛查诊断的分类模型。并绘制了已构建的不同机器学习模型的接收器工作特性(ROC)曲线，使用曲线下面积(AUC)评估分类器的性能。由结果可知，所有模型的AUC均高于0.99。其中，LR、SVM、RF、GBDT、DT和Adaboost模型的AUC为1。　　图2. 基于多种机器学习算法的新冠患者血清多肽指纹图谱差异特征峰筛选　　紧接着，在独立于特征峰筛选和模型生成的测试集(100个样本)中测试了25个特征峰的分类效果，获得了最佳的分类模型—LR模型，该模型在识别新冠肺炎患者方面显示出98%的敏感度、100%的特异度和99%的准确率。　　图3. 在100例测试集中使用基于机器学习的分类模型鉴定新冠肺炎患者　　研究团队进一步通过血清样本的蛋白质组学分析对25个特征峰进行注释，25个特征峰中有15个被鉴定为完整蛋白质或蛋白质片段。经分析，这15个蛋白涉及淀粉样纤维形成、中性粒细胞脱颗粒、结核分枝杆菌感染、体液免疫反应、受体介导的内吞、急性炎性反应和MAP激酶活性调节等过程。其中，中性粒细胞脱颗粒及急性炎性反应相关蛋白的富集变化已在其它新冠肺炎的组学研究中被报道。　　在这项研究中，新冠肺炎患者血清的取样时间从症状出现起3至28天不等，涵盖了相对较长的疾病进展期。所研究的对照组由近一半具有相似临床症状的非新冠肺炎患者(共73例)、33例结核病患者和46例健康人组成。从非新冠肺炎个体中，尤其是具有相似症状的非新冠肺炎患者中筛查新冠肺炎患者一直以来都是新冠诊断的难题，意义重大。本项研究中样本的长期疾病进程覆盖、对照组样本组成的多样化均显示本方法在新冠肺炎患者快速筛查中有巨大应用前景。　　论文并列第一作者为颜令硕士、易佳博士、黄长武主任技师和张剑博士，乔亮研究员、孙薇副研究员及廖璞教授为共同通讯作者。该项目得到了国家自然科学基金委员会(National Natural Science Foundation of China)、中华人民共和国科技部(Ministry of Science and Technology of the People' s Republic of China)和北京市科委(Beijing Municipal Science & Technology Commission)的支持。

11月14日，2020年“筑梦暨南”社会奖助学金颁奖典礼在暨南大学礼堂举行，涵盖了社会类奖学金，助学金及赋能多元类奖励项目，现场共有22位捐赠代表为165位优秀学子代表颁奖。伊创科技董事会秘书王玲华女士应邀出席，并为优秀学子代表颁发“伊创奖学金”。伊创科技捐赠设立“伊创奖学金”，旨在用于奖励暨南大学环境与气候研究院学习成绩优异、科研能力突出、取得良好科研成果的优秀研究生。通过“学术新星”、“奉献标兵”、“学术报告奖”以及“助学奖”四大奖项，全方位、多角度的为研究生潜心学术保驾护航，鼓励和支持培养学生刻苦钻研的拼搏精神与创新创造的实践能力。伊创科技在暨南大学设立“伊创奖学金”，通过捐赠教育基金的形式，支持教育事业发展，一方面，希望能以己薄力，推动优秀学子奋楫笃行、行稳致远。另一方面，伊创科技深耕于“水质在线监测和气体在线监测两大环境监测领域”十余载，作为环保行业的成员之一，坚守初心、牢记使命与社会责任，希望能凭借微薄之力量，助力科研工作发展，为建设绿色家园添砖加瓦。

质谱技术在体外诊断中发挥着重要的作用，其中基于LC-MS/MS的三重四级杆质谱主要用于药物、维生素D、新生儿遗传代谢物、氨基酸等小分子的定量生化检测，国内外多款型号的LC-MS/MS获得了医疗器械注册证。另一方面，用于大分子检测的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF）也逐渐应用于临床，多款用于微生物蛋白指纹图谱检测的MALDI-TOF质谱获医疗器械注册证，并在临床微生物鉴定中发挥着重要的作用。此外，用于核酸分析的MALDI-TOF系统也逐渐进入体外诊断领域。人体血清多肽和蛋白指纹图谱与疾病的发生和发展密切相关，国际上大量的研究机构一直在致力于该领域的研究和临床应用。近日，汇健科技首台（套）用于血清多肽和蛋白指纹图谱检测的ClinMS-Plat® I飞行时间质谱仪正式获得NMPA医疗器械注册证（浙械注准20242221307）。此次获批的ClinMS-Plat® I飞行时间质谱仪由质谱仪主机（离子源模块、检测器模块、飞行管、机架模块、外壳、真空泵）和软件组成，产品基于MALDI-TOF方法，结合配套试剂可用于人体血清样本中多肽或蛋白指纹图谱的采集，是国内首台（套）用于血清多肽或蛋白指纹图谱分析的临床质谱仪。仪器针对性地根据血清多肽分子量进行了检测区域内(m/z680~18600Da) 信噪比、分辨率、出峰谱型的调校，严格控制仪器台间变异系数。该质谱仪在注册审评前经过了严格的临床研究。临床试验采用随机、盲法、配对的临床试验设计。收集受试者促凝全血分离的血清样本并进行编盲，受试者血清样本经配套试剂预处理后用ClinMS-Plat® I飞行时间质谱仪进行多肽及蛋白指纹图谱检测，输出分析结果。三家临床试验机构对受试者样本在待考核仪器上的检测结果与金标准相比，统计分析结果显示灵敏度为91.94%（P=0.95，置信区间87.48%-94.91%），特异度91.14%（P=0.95, 置信区间 86.83%~94.13%），诊断符合率91.52%（P=0.95， 置信区间 88.57%~93.76%）；Kappa值为0.8300。由于多肽与蛋白组学信息在疾病诊断中具有重要的价值，因此，ClinMS-Plat® I的获批在体外诊断领域具有重要的意义。ClinMS-Plat® I质谱仪与配套试剂盒（Bio-pSi® 系列）使用，单次检测可获得包含数百个血清多肽分子的指纹图谱。汇健科技结合人工智能算法构建了包含数万例肿瘤人群队列样本、数十万例次检测数据的人工智能判别模型（汇健智云® ）。未来，该款型号的质谱仪将与诊断试剂、AI分析软件三者共同组成一整套体外诊断分析系统（下图），可用于各种肿瘤、泌尿系统疾病，神经系统疾病等多种疾病筛查、辅助诊断和复发转移评估等领域。ClinMS-Plat® I 是一款具有卓越性能和创新功能的高端医用质谱，具有如下优势：快速：独特的多肽富集技术，自动化批量检测，96个样本全流程仅需2小时；精准：多肽及蛋白指纹谱检测多个标志物，相比单一或少量标志物组合，结果更可靠；稳定：通过质控技术有效控制多肽及蛋白质谱峰强度变异系数，结果稳定性、重复性高；灵敏：相关多肽检测限可达fmol/μL级别。ClinMS-Plat® I曾入选工信部人工智能医疗器械（智能辅助诊断产品方向）创新任务榜单，是2022年质谱领域唯一进入榜单的项目；同年入选了浙江省首台(套)产品工程化攻关重点项目的高端医疗装备；2023 年入选“浙江省制造业首台（套）重点领域（高端医疗器械）关键技术指标清单”。汇健科技也与省内多家知名临床医院合作研究多肽组学技术在临床诊断中的应用，获得了多项浙江省重点研发计划和浙江省“尖兵领雁”计划的支持。我们相信，ClinMS-Plat® I的推出将推动多肽和蛋白组学在体外诊断领域的应用。我们将竭诚为临床机构、研究机构和IVD企业提供优质的创新质谱产品和服务，并期待与行业友商携手合作，在ClinMS-Plat® I平台上开发具有重要临床价值的诊断试剂，共同开创组学技术在精准医学中的应用，为人类健康做出贡献！延伸阅读1. 血液循环多肽（BCP）是目前液体活检最理想的标志物之一多肽是分子量为0.2~20KD的蛋白，主要由RNA上短的开放阅读框（Open Reading Frame, ORF）翻译或者组织蛋白在蛋白酶的作用下切割产生，处于基因调控网络和蛋白作用网络下游。其种类以及包含的生物学信息更加丰富，能迅速反应生物体内“正在发生的变化”。大量研究表明：在肿瘤发生发展过程及肿瘤细胞的迁移过程中，肿瘤微环境的多肽会发生片段长度、片段种类、糖基化修饰、磷酸化修饰等变化，通过质谱仪的检测可敏感地指示多肽指纹图谱的变化。此外，肿瘤组织高压和血管的高通透性，促使产生的低分子量肿瘤相关特异性多肽可快速、高效进入血液循环系统，使得血液循环多肽（Blood circulating peptides, BCP）包含了组织癌变信息，通过检测分析BCP指纹图谱可早期发现癌症的发生和发展。此外，BCP检测技术在阿兹海默症、呼吸道感染、泌尿系统疾病、内分泌系统疾病中也将发挥重要的应用。血液样本中，多肽含量极其微量，在质谱检测中容易受到高丰度蛋白的干扰，此前SELDI® 芯片，ClinProt® 磁珠等产品也曾用于血液多肽的提取和捕获。汇健科技创始团队从2012年开始发明了Bio-pSi® 微纳颗粒，实现了血清多肽的高效捕获，并在MALDI-TOF上呈现高稳定高灵敏的血清多肽指纹谱信号。2.飞行时间质谱工作原理飞行时间质谱(TOFMS)是一种高分辨率的质谱技术，广泛应用于物质分析领域。TOFMS工作原理可以分为离子化、加速和飞行三个步骤。具体来说，它基于不同化合物的质量-电荷比(m/z)的差异，通过高电压脉冲使其形成离子，然后引入到一个带有电场的追加管道中。在追加管道内，各种离子被加速并飞行到检测器处，到达时间取决于其质量和速度。检测器收集到的信号产生一个质谱图，其中离子信号的强度与m/z值呈正比。此外TOFMS还需要配合数据处理软件来分析和解读得到的质谱图。这些软件将质谱图转化为离子的m/z值和相对强度，从而识别不同的化合物。质谱图中每一个峰都对应着一个化合物的离子，通过比较不同样品之间的质谱图，可以确定它们之间的差异和相似性。参考文献Julia Tait, Lathrop,Douglas A, Jeffery,Yvonne R, Shea et al. US Food and Drug Administration Perspectives on Clinical Mass Spectrometry.[J] .Clin Chem, 2016, 62: 141-147.

本文来源： 柯瑞斯质谱平台摘 要目的　 建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时快速检测微量血清中维生素A、维生素D(25-OH-VD2、25-OH-VD3)、维生素E(α-、β-和γ-生育酚)的方法。 方法　 血清中脂溶性维生素经甲醇-乙腈(50:50, v/v)沉淀蛋白、正己烷萃取，以Phenomenex Kinetex F5色谱柱为分离柱，2.5mmol/L甲酸铵-0.1%甲酸水溶液和甲醇为流动相，梯度洗脱，电喷雾电离(ESI~+)、多反应监测(MRM)模式下检测，同位素内标法定量。结果　 血清中6种脂溶性维生素线性范围内线性关系良好，相关系数r0.995；6种脂溶性维生素的检测限为0.20～1.25ng/mL，定量限为0.39～3.88ng/mL；加标回收率为86.6%～107.7%，日内精密度9.6%，日间精密度9.3%。NIST标准参照品SRM 968f验证方法准确度，结果偏差均在5%以内。结论　 本方法准确度高、重现性好、用血量少，适于婴幼儿等采血困难者微量血样中多种脂溶性维生素的同时快速检测。正 文维生素在人体生长代谢过程中发挥着重要作用，是人体必须的微量营养素，缺乏或过量都会对人体健康产生不利影响。维生素A、D、E是脂溶性维生素，研究表明缺乏这些维生素会增加患夜盲症、骨质疏松、心血管疾病及免疫系统相关疾病的风险[1],婴幼儿及未成年人缺乏其对生长发育的影响则更为明显[2-4]。目前维生素检测的方法主要有高效液相色谱法[5-7]、液相色谱-串联质谱法[8-14]等，其中液相色谱-串联质谱法因其灵敏度高、重现性好、可同时快速检测多种维生素已成为很多临床实验室的首选方法。但是目前的液相色谱-串联质谱方法血液需求量较大[10,13],检测项目单一[8-9,14]或检测时间较长[11],不能满足临床同时快速检测多个项目的需求，特别是婴幼儿采血困难采血量很难满足需求。虽然已有部分学者建立微量检测方法用于维生素检测，但是这些方法需要衍生化过程，前处理复杂耗时较长[8-9,14]。因此，建立能够用微量血液同时快速检测多种维生素的方法满足临床不同年龄段的检测需求显得尤为必要。此外，视黄醇，维生素D的代谢产物25-OH-VD2、25-OH-VD3,α-生育酚是脂溶性维生素A、D、E在血液循环中的主要存在形式，常作为脂溶性维生素检测的首选指标[15-18]。γ-生育酚是维生素E主要的饮食摄入形式，但其与α-生育酚转移蛋白(α-TTP)的亲和力较低，在体内含量较α-生育酚低，但是，近年来文献报道其在人体健康活动中也扮演着重要角色[19]。本文建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时快速检测微量血清中视黄醇，维生素D(25-OH-VD2、25-OH-VD3)和α-、β-、γ-生育酚的方法，满足临床各年龄段尤其是对婴幼儿同时快速检测多种维生素的需求。１实验部分１.１　 仪器与试剂　液质联用仪；高速冷冻离心机；涡旋振荡仪；超声波振荡器；氮吹仪(Agela)；紫外分光光度计。视黄醇、25-OH-VD2、25-OH-VD3、α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚均购自美国Sigma-Aldrich；视黄醇-d6标准品购自上海谱芬生物；25-OH-VD2-d3购自美国IsoSciences、25-OH-VD3-d6、α-生育酚-d6标准品购自加拿大TRC 血清质控样品购自美国NIST 收集安徽省第二人民医院近期健康体检正常儿童血液样本17份，避光保存。LC-MS级甲醇，色谱级乙腈、正已烷及甲酸均购自美国Fisher；甲酸铵、牛血清白蛋白(BSA)购自美国Sigma-Aldrich；色谱级乙醇购自国药集团。实验用水由Milipore纯水仪(美国密理博)提供。１.２　 标准溶液和内标溶液的配制　 用无水乙醇配制视黄醇标准品储备液100μg/mL；α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚标准品储备液各1000μg/mL，并用紫外分光光度计对其浓度进行校正[18,20]。用甲醇配制25-OH-VD2标准品储备液25μg/mL和25-OH-VD3标准品储备液100μg/mL，视黄醇-d6标准品储备液100μg/mL，25-OH-VD2-d3标准品储备液50μg/mL，25-OH-VD3-d6标准品储备液50μg/mL，α-生育酚-d6标准品储备液1000μg/mL。将各目标化合物标准储备液用复溶液(初始流动相)稀释混匀，配制成混合标准溶液(视黄醇2.50μg/mL、25-OH-VD2 0.20μg/mL、25-OH-VD3 0.40μg/mL、α-生育酚50.00μg/mL、β-生育酚5.00μg/mL、γ-生育酚 5.00μg/mL)；将各同位素标品储备液用甲醇稀释混匀，配制成混合内标工作液(视黄醇-d6 2.00μg/mL、25-OH-VD2-d3 0.10μg/mL、25-OH-VD3 0.20μg/mL、α-生育酚-d6 20.0μg/mL)。取4g BSA溶解于100mL水中配成4% BSA溶液。１.３　 样本前处理　 取血清样品20μL至2mL离心管中，加入10μL同位素内标工作液，80μL水，2000r/min涡旋振荡30s后加入200μL甲醇-乙腈(50∶50,v/v)，2000r/min混匀60s；加入800μL正己烷，2000r/min，混匀5min，然后4℃，12000r/min离心5min；吸取600μL上清液至1.5mL离心管中，室温下氮气吹干；加100μL初始流动相复溶，涡旋振荡60s，4℃，12000r/min离心5min，上清液转移至进样瓶中待分析。１.４　 色谱 － 质谱条件　 采用Phenomenex Kinetex F5(100mm × 2.1mm, 2.6μm)色谱柱，柱温35℃，流动相A含2.5mmol/L甲酸铵和0.1%甲酸的水溶液；流动相B含2.5mmol/L甲酸铵和0.1%甲酸的甲醇溶液，梯度洗脱程序：0～2.0min，70%B，2.0～2.5min，70%～88% B，2.5～3.5min，88% B，3.5～3.51min，88%～81%B，3.51～11.0min，81% B，11.0～12.0min，81%～70%B，流速0.5mL/min。进样量：20μL。采用多反应监测(MRM)、电喷雾正离子模式(ESI+)，离子源温度 150℃，脱溶剂温度500℃，毛细管电压3kV，脱溶剂气流速1000L/h；6种脂溶性维生素的MRM 离子参数见表1。２　 结果与讨论２.１　 前处理条件优化　 对血清前处理过程中蛋白沉淀剂(甲醇、乙腈、乙醇)的选择及萃取溶剂正己烷的用量(400μL、600μL、800μL)进行了优化，结果表明，甲醇-乙腈(50∶50,v/v)，沉淀效果最好，色谱图杂峰明显减少；正己烷用量较大时萃取更完全，信号值更高。另外，考察了不同复溶液体系：甲醇-水(50∶50,v/v)、甲醇-水(70∶30,v/v)、甲醇均含2.5mmol/L甲酸铵和0.1%甲酸对色谱分离的影响，结果如图1所示，使用b组复溶液即初始流动相时视黄醇响应值较a组增加1倍以上，c组视黄醇峰宽变大且峰形不对称。同时b组中25-OH-VD3和25-OH-VD2响应值是a组的2倍、c组的4倍以上，且峰形明显改善有利于25-OH-VD3和 25-OH-VD2的分离检测。最终，采用血清样加水混匀后用200μL沉淀剂(甲醇：乙腈(50∶50,v/v)沉淀蛋白，800μL正已烷液液萃取，取600μL上清液氮吹，初始流动相复溶进样。２.２ 　 液 相 色 谱 条 件 优 化 　 Kinetex F5色谱柱可以实现所有组分包括β、γ-生育酚的分离。此外，25-OH-VD3同分异构体3-epi-25-OH-VD3在婴幼儿体内含量较高，对维生素D含量测定影响较大[21]，该色谱柱可以实现25-OH-VD3和3-epi-25-OH-VD3的分离，减少3-epi-25-OH-VD3对检测结果的影响。故采用Kinetex F5色谱柱进行所有组分的分离(见图2)。研究发现在流动相中加入甲酸铵后其促进目标化合物离子化的效果较加入乙酸铵好，响应值增加明显，故在水相和有机相中均加入2.5mmol/L甲酸铵。２.３　 线性范围、检出限和定量限　 将混合标准溶液用复溶液逐级稀释，得到一系列标准工作液，各取20μL，分别加入10μL内标工作液和80μL 4% BSA溶液，其余操作同样本前处理。由于人血中存在内源性脂溶性维生素，故在标曲制作中加入4% BSA。以各目标化合物的色谱峰与其相对应的同位素内标色谱峰的峰面积比值-浓度比值作图，得到各目标化合物的标准系列工作溶液的直线拟合方程，并计算相应的线性相关系数。6种脂溶性维生素的标准曲线和线性范围见表2。结果表明，6种脂溶性维生素在对应的浓度范围内线性关系良好，相关系数0.995，标准溶液色谱图如图3所示。每个浓度重复检测6次，满足相对标准偏差20%且信噪比S/N≥3的最低浓度值定为检测限，满足相对标准偏差20%且信噪比S/N≥10的最低浓度值定为定量限。6种脂溶性维生素检测限为0.20～1.25ng/mL，定量限为0.39～3.88ng/mL(见表2)。２.４　 方法精密度　将低、中、高三个浓度标准品溶液加入4% BSA混合血清样本经本法处理后进行检测，每个浓度重复6次，连续检测三天，计算日内精密度为0.9%～9.6%，日间精密度为3.0%～9.3%(见表3)。该方法同时测定6种脂溶性维生素的日内精密度和日间精密度均在15%以内，方法精密度满足检测需求。２.５　 方法准确度　 将低、中、高浓度的标准品溶液加入混合血清样本中按本法进行前处理后进行检测，每个浓度重复6次，计算加标回收率，3个水平的加标回收率为86.6%～107.7%，相对标准偏差(RSD)为1.46%～9.39%(见表4)。该方法加标回收率均在80%～120%以内，方法准确度高满足检测需求。２.６　 方法验证　 采用建立的UPLC-MS/MS方法对美国国家标准技术研究所(NIST)制定的标准参照品SRM 968f进行检测，每个水平重复2次取平均值，验证方法准确度。结果表明，除25-OH-VD2含量较低未能检出外，其它检测结果与靶值偏差均在5%以内，该方法检测结果准确可靠(表5)。２.７　 实际样品测定　 使用本方法对17份健康儿童血液样本进行检测，其中视黄醇含量为0.22～0.43μg/mL，25-OH-VD2含量为未检出～5.19ng/mL，25-OH-VD3含量为6.83～49.21ng/mL，α-生育酚含量为5.63～12.73μg/mL，β-生育酚含量为0.03～1.37μg/mL，γ-生育酚含量为0.11～1.68μg/mL。本法适用于微量临床血液样本6种脂溶性维生素的同时快速检测。３结　 论本研究建立了超高效液相色谱串联质谱法同时测定微量血清样本中多种脂溶性维生素的方法，并对前处理过程中的蛋白沉淀试剂、萃取液用量，复溶液等进行了优化，以减少色谱图中噪音干扰，改善色谱峰形，提高检测灵敏度。并比较了不同色谱柱对多种脂溶性维生素尤其是不同类型维生素E的分离效果，最终选择Phenomenex Kinetex F5色谱柱，该色谱柱可以实现β-生育酚和γ-生育酚的有效分离。本研究中只需20μL血清就能够快速完成6种脂溶性维生素的测定。该方法测定样本需求量少、操作简单、检测结果准确快速可实现大量临床样本的同时检测，尤其对采血较为困难的婴幼儿可以实现少量血液样本检测多数项目的需求。参考文献（略）本文引用来源： 李雪梅,吴慧慧,陈竞,赵盼,唐玉菲.超高效液相色谱-串联质谱法同时快速检测微量血清中6种脂溶性维生素[J].现代预防医学,2022,49(07):1297-1302.

仪器信息网讯 新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)暴发,对人民群众的生命安全和身心健康造成了严重损伤。SARS-CoV-2核酸检测作为COVID-19诊断的主要指标受多种因素影响致其假阴性率较高。为提高诊断效率国家卫生健康委员会早在《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(第七版)》中就提出将SARS-CoV-2特异性抗体列为疑似病例确诊的病原学证据之一。近日，路明克斯（Luminex）公司宣布推出全新Guava® SARS-CoV-2多抗原抗体检测试剂盒，用于流式细胞仪，助力全面免疫分析。血清学检测有助于疾病的防治和疫苗研发核酸检测方法作为新冠病毒肺炎确诊的关键技术，在疫情期间发挥着巨大作用，然而，核酸检测多采用咽拭子，新冠病毒感染人体后，上呼吸道(咽部)的病毒含量低，在感染过程中，随着人体机能的增强，病毒载量会有一个相对降低的过程，再加上采样不规范、运输和存储等过程中可能导致病毒RNA的降解，都导致了核酸检测可能出现“假阴性”结果。相反，血清学检测方式中使用的样本是血清，血清中一般不含有冠状病毒或含病毒量较低，可以大大降低医护人员的职业暴露风险；同时血清学检测方法不仅可以用于感染的诊断，也可以检测感染者体内特异性抗体的变化情况、人群的易感状况等，有助于疾病的防治和疫苗研发。血清学检测有利于研究人员通过测量血液（血清或血浆）中 SARS-CoV-2 抗体的存在来确定受试者是否已感染严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2），也就是导致 COVID-19 的病毒。抗SARS-CoV-2 抗体检测依赖于免疫反应，并可能受多种因素影响，包括病毒暴露量、症状发作后评估阶段、年龄、性别和健康状况。因此，血清学检测的灵敏度和特异性对于准确可靠检测抗SARS-CoV-2 抗体来说非常重要。科普：实验室检测新冠病毒判断人体内是否感染了新冠病毒，有两种常用的实验室检测方法，一种是核酸检测，一种是血清学抗体检测。1、核酸检测核酸检测主要是检测鼻咽拭子、咽拭子、痰液等标本中是否有新冠病毒核酸，检测结果阳性代表感染了新冠病毒。通过核酸检测筛查新冠病毒感染者，是实现“早发现”和“早诊断”最重要的手段和措施，有助于后续尽早给予治疗和干预，减少重症和死亡。人群核酸检测能协助判定疫情规模和流行阶段，同时可用于判断传染性的大小和作为解除隔离的依据。2、血清学抗体检测血清学抗体检测主要检测血清中针对新冠病毒的特异性抗体，即人体在感染新冠病毒后产生的具有免疫功能的蛋白质。在感染的不同时期，出现的抗体类型不同，所以血清学抗体检测主要用于判断既往感染、恢复期诊断、流行病学回顾性调查以及疫苗效果评估等。抗体检测阳性提示被检查者处在恢复期，或者曾经感染过，或者接种过疫苗，需要结合核酸检测结果作出综合分析。助力免疫反应全面评估，路明克斯全新试剂盒该试剂盒是一种新型的、基于微球的免疫分析试剂盒，用于流式细胞仪，可同时分析血清和血浆样本中针对三种SARS-CoV-2抗原（核衣壳蛋白（N）、刺突蛋白受体结合域（RBD）以及刺突蛋白S1亚基（S1））的IgG、IgM和IgA抗体表达。通过对荧光强度和数据结果简单直观地解读，可轻松分析体内相关抗体的水平，为免疫反应提供更全面的评估。Guava® SARS-CoV-2抗体检测试剂盒针对Guava® Muse® 细胞分析仪和Guava® easyCyte™ 系统上进行了系统性的优化，亦可兼容任何配置有488nm或532nm激光器的流式细胞仪。Guava easyCyte流式细胞仪（点击查看）Guava Muse细胞分析仪（点击查看）据悉，针对血清样本中SARS-CoV-2抗体同型特异性分析，其工作流程十分简易：仅需三步即可完成从样本到数据的过程：从抗体孵育，上机检测到数据输出，整体流程不超过75分钟。将50μL人血浆和血清样品以1：400稀释、孵育，然后在Guava® Muse® 细胞分析仪上进行分析。结果如图所示，在样本中清晰地检测到SARS-CoV-2特异性的IgG、IgM和 IgA抗体。综上，该试剂盒主要具有：同时进行分析三种SARS-CoV-2特异性抗原；更加完整的抗体图谱；更加全面的免疫反应评估；简单、快速获取结果；检测通量灵活等特点。

对SARS-CoV-2患者免疫反应的表征，是了解COVID-19疾病进展或者疫苗功效的关键。SARS-CoV-2抗原例如刺突蛋白（Spike Protein），S1和S2亚基，S1受体结合域（S1 RBD）以及病毒核衣壳蛋白（Nucleocapsid Protein）均可以刺激机体产生体液免疫应答，产生相应抗体。因此，不同抗原的反应性可能揭示了疾病进展的不同阶段。例如，与核衣壳的反应性可能是病毒早期感染的敏感性指标，而与S1 RBD和刺突蛋白的其他部分的反应性可能与病毒的中和有关。血清学免疫检测的常见方法是酶联免疫吸附测定（ELISA）法。但这种方法会面临：每个孔只检测一个抗原，所以提供针对SARS-CoV-2的复杂免疫学信息受限；因为抗原信息提供有限，容易产生假阳性；手动操作时间长，数据重现性较差。为了克服这些局限，全自动Western多抗原血清学检测试剂盒已上市！！全自动Western多抗原血清学检测试剂盒的特点：一份样品可检测5个抗原血清反应性指标：刺突蛋白（Spike Protein）、S1亚基、S2亚基、S1受体结合域（S1 RBD）、病毒核衣壳蛋白（Nucleocapsid Protein）；提供5个抗原的分子量信息，且不影响灵敏度；通过相对峰面积定量抗原反应性，提供SARS-CoV-2病人的复杂免疫学反应信息；血清样品量可低至1μl；全自动Western，无人为操作误差；检测速度快，3小时出结果。检测原理：应用举例：一份样品提供多种抗原信息为了测试血清样品对这些抗原的反应性，对聚合酶链反应（PCR）确认为COVID-19阳性的4位患者的血清样品以及2份阴性样品进行全自动Western的血清学检测。结果显示，PCR阳性血清样品与试剂盒中包含的抗原具有高度反应性，PCR阴性血清样品没有反应性发生。其中PCR阳性3号样品中，可以显示出该血清样本对5个抗原（刺突蛋白（Spike Protein）、S1亚基、S2亚基、S1受体结合域（S1 RBD）、病毒核衣壳蛋白（Nucleocapsid Protein））均有反应性。一份样本提供多种体液免疫学表征当对相对峰面积进行定量时，结果显示了与患者血清样品中的5种抗原中的每一种的IgG反应性的高度可变性。例如，患者4的血清样本与核衣壳的反应性高（占总峰面积的68％）。而患者1、2、3的血清样本与核衣壳的反应性低得多（分别为7％，3％和34％），但与Spike蛋白反应性增加。这预示着患者4血清样本中显示其对早期感染的指标敏感，而患者1、2和3的血清样本中可能已产生与靶向刺突蛋白上的表位相结合的中和抗体。良好的稀释线性对PCR阳性血清样品从1：40到1：138240进行稀释系列，一式两份，并使用SARS-CoV-2多抗原血清学检测模块进行分析。结果显示，信号随着血清样品浓度的降低而降低（图A-C），并且该测定法显示出良好的线性，在3.5 log滴定系列中，五个抗原中的四个抗原的R2≥0.99，第五个抗原的R2≥98％（图D）。高重复性超过检测极限或≥1：69120的血清稀释液的CV小于15％，这表明该方法在重复测量中具有极好的可重复性。结论：随着SARS-CoV-2入侵机体的发展，可能会出现几种不同的抗原，这些抗原会导致体液免疫反应异常，而针对这些抗原的抗体的出现可能表明了疾病进展和病毒中和的不同阶段。因此，传统ELISA检测仅用一种抗原包被的蛋白只能捕获非常有限的免疫学反应信息。但借助适用于全自动Western（Jess/Wes）的SARS-CoV-2多抗原血清学检测试剂盒，可以同时分析COVID-19中常见的多达5种不同抗原在人血清或血浆样品中的IgG反应性。这使得能够对体液反应进行更深入的分析，并且揭示了血清反应性之间的差异，而这种差异是传统ELISA试剂盒无法获取的。参考文献：

p 　　“走廊里介绍的过敏检测还有吗?”科技日报记者问。 br/ /p p 　　“生物共振检测?没有了，更新的技术出来了，那个就不用了。”医生一边敲键盘填写电子病历，一边答道。 /p p 　　在北京积水潭医院皮肤科门诊外的宣传栏上，该院皮肤科特色医疗介绍的第一条赫然写着：“我科采用生物共振仪，可对400多种过敏原进行无创检测及脱敏治疗。” /p p 　　这是从2003年开始引进中国的一种德国检测设备，至今活跃在国内多家医院。然而所谓的生物共振技术，却在最近被爆是没有科学依据的“伪科学”。 /p p 　　 strong “特色医疗”不约而同停用 /strong /p p 　　8月12日至14日，科技日报记者暗访4家北京地区的医院，其中2家三甲医院，1家三乙医院，1家民营医院。这些医院都在官网声称，可以利用进口的生物共振治疗仪来检测过敏原。 /p p 　　“听说咱们医院有进口的仪器，不抽血就能检测过敏原?”记者在民航总医院咨询皮肤科医生。 /p p 　　此前有网友爆料，曾在这家医院用生物共振治疗仪查过敏原，并晒出了检测结果。民航总医院官网在介绍该院皮肤科的特色医疗时，标题便是“德国BICOM生物共振系统对常见过敏性疾病过敏原的检测”。 /p p 　　“那个机器已经坏了，查不了。原来是450元一次。”医生不假思索地说。 /p p 　　“以后还可以进行这项检测吗?” /p p 　　“这个机器是进口的，很多零件都坏了，估计修不好了。”医生回答。 /p p 　　也许是巧合，记者在4家医院问起这个检测项目时，答案竟不约而同地一致：现在不做了。虽然如此，记者在全国多家医院官网搜索到推荐介绍此类生物共振治疗仪的信息。有的甚至放在首页醒目位置。 /p p 　　出现在这些医院官网上的生物共振治疗仪，主要有两个品牌，百康(BICOM)和摩拉(MORA)，均来自德国。它们均声称，能存储40多类共计5000多种常见过敏原和药物电磁信息，且检测过程无创伤、无痛苦。 /p p 　　至于其原理，则更加不明觉厉：可以检测人体生物电磁信息，分离出人体病理信息并“反转后回输给人体”消除病理性信息。通过这种方式，既能实现过敏原的检测，又能实现病人的脱敏。 /p p 　　 strong 生物共振真的可以查过敏? /strong /p p 　　“这种仪器进入国内很多年，确实很多医院在用，而且听说在某些地区，医保可以报销。”北京世纪坛医院变态反应科主任医师石海云在接受科技日报记者采访时说。 /p p 　　记者查询发现，百康和摩拉生物共振治疗仪分别在2003年和2005年通过国家监管部门批准。它们的适用范围都是对患者过敏性疾病的治疗。 /p p 　　在医药器材交易网站上，可以找到生物共振治疗仪的销售信息。上海聚慕医疗器械有限公司在线销售的德国百康生物共振治疗仪，报价为92.8万元一台，“三天内发货”。 /p p 　　“主流科学家认为它没有依据。”谈到生物共振治疗仪的功能，石海云说。 /p p 　　石海云介绍，正规的过敏原检测方法主要有两种。一种是体外试验，就是先抽血，再检测血清里的特异性抗体。“如果某种过敏原对人体致敏，人体会产生特异性的过敏原抗体，又叫IgE抗体。这种方法的原理就是寻找体内特异性的IgE抗体。”石海云解释说。 /p p 　　另一种是体内试验，让过敏原与人体发生接触，包括皮肤点刺试验和斑贴试验等。“如果对某种物质过敏，过敏原会与人体产生的IgE抗体发生反应，间接反映到皮肤上。”石海云说，这样就可以判断人体对某种过敏原是否过敏。 /p p 　　“但是生物共振技术，我们不知道它的机理是什么。查过敏原是查体内特异性抗体，生物共振技术却说要查频谱，到底有什么道理，大家也不知道。”石海云笑着说，“我觉得这个东西应该是个保健品吧。” /p p 　　北京大学第一医院皮肤科教授、中国医师协会皮肤科医师分会前任会长朱学骏也曾在微博上介绍，查过敏原较为正确的方法是血特异性IgE检测，皮肤点刺可作为过筛试验。“国内有些医院开展的生物共振试验，并没有经过严格的临床试验，结果是很不可靠的。”朱学骏在微博上表示。 /p p 　　 strong 同一技术，国内外境遇冰火两重天 /strong /p p 　　在国内和国外，生物共振技术的境遇可谓冰火两重天。 /p p 　　与在国内堂而皇之进入多家医院，甚至被标榜为“特色医疗”不同，石海云告诉记者，他开会时曾与德国专家聊过生物共振治疗仪，“他们说这个在德国并不是主流的东西”。 /p p 　　国际权威学术机构也认为其宣传存在误导。 /p p 　　2006年，瑞士过敏和免疫协会在德国《皮肤病学杂志》刊登官方声明，认为生物共振技术的疗效缺乏科学依据，并指出生物共振技术的宣传具有误导性。这份声明总结说，生物共振疗法的例子很好地展示了，“伪科学语言可以将毫无意义的废话描述为科学”。 /p p 　　在生物共振治疗仪的“老家”德国，媒体对该技术也多有关注。2012年德国《南德意志报》官网在报道该技术时介绍，曾有大量科学实验对生物共振疗法进行测试，然而结果都是否定的。因此德国商品检验基金会强烈不推荐这种技术，并认为生物共振疗法“必须被看做纯粹的投机和对病人的误导”。 /p p 　　“这种仪器试图辨别人体在健康和生病状态下产生的不同的波……然而并没有科学证据证实这一点。”2013年，德国《明镜周刊》官网在介绍生物共振疗法时说。 /p p 　　国内外互联网上关于生物共振技术的内容也形成鲜明对比。在百度百科或互动百科查找与生物共振相关的关键词，可以看到“先进的过敏性疾病诊断治疗系统”“系统治疗有效率为83%”等说辞。而在维基百科，生物共振疗法(Bioresonance therapy)直接被斥为“伪科学”。 /p p 　　一位不愿具名的三甲医院儿科医生告诉记者，虽然他所在的医院没有引入这种设备，但他了解到很多医院都在用。而且业内人士基本都知道生物共振治疗仪只是一个创收工具，对病人没有任何益处。这令他非常反感：“用这些连基本原理都不成立的仪器来指导治疗，这不是在坑病人吗?” /p p br/ /p

细胞在体外能够成功生长，培养基的选择及培养方法的优化十分关键。细胞在单纯的培养基中不能存活，各种类型的细胞培养中必须提供某些生长因子、黏附和伸展因子、微量元素等营养物质。传统培养基中一般会添加动物血清如牛血清等。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。其中胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。 血清培养的优势与局限采用天然来源的血清作为细胞培养添加物，优势在于提供丰富全面的细胞生长必需的营养，并且提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，调节其活性。结合蛋白还能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。血清还是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。但血清的使用也存在一定局限性。(1)血清可能含有细胞生长抑制因子和毒性因子，存在潜在毒性；(2)血清的获取成本高，价格较为昂贵；(3)血清由于成分不完全明确，给细胞培养的标准化带来困难，同时也给细胞表达目的产物纯化等下游操作带来困难。 无血清培养优势由于常规血清培养基存在上述问题，近年来无血清培养基越来越受到重视，其开发和应用渐成趋势。无血清培养基不含动物血清或其他生物提取液，仍可使细胞在体外较长时间生长、增殖或维持。无血清培养基可以针对特定的细胞类型配制专用的培养基，如爱必信生物研发推出的人间充质干细胞培养基，可以帮助精确地控制细胞的增殖和分化过程等。无血清培养基尤其应用于哺乳动物细胞的大规模工业培养。同时，它也是研究细胞生长、增殖、分化及基因表达调控的有力工具。无血清培养基具有以下优点：(1)其组成明确，可避免血清不同批次带来的质量变动，提高可重复性。(2)避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染风险。(3)避免血清不明组分对实验研究的影响。(4)有利于体外培养细胞的分化。(5)可提高细胞产物的表达水平并易于纯化。 所以，说了这么多，您是在进行细胞的常规有血清培养还是无血清培养呢？您更看好哪一方呢？爱必信生物提供优质、高性价比的血清产品，降低您的常规细胞培养成本！ 货号 品名 规格 价格 abs972 胎牛血清(优级) 500ml 3465 abs973 胎牛血清(优级),辐照 500ml 3675 abs974 胎牛血清(标准级) 500ml 2541 abs975 胎牛血清(标准级),辐照 500ml 2751 abs993 无外泌体胎牛血清 50ml 2478 abs976 新生牛血清(超级) 500ml 2268 abs980 澳洲新生牛血清 500ml 1155 abs981 BHK细胞专用新生牛血清(特级) 500ml 1685 abs983 Vero细胞专用新生牛血清(特级) 500ml 1685 abs985 二倍体细胞专用新生牛血清(特级) 500ml 1685 abs987 CHO细胞专用新生牛血清(特级) 500ml 1685针对现今越来越旺盛的无血清培养需求，爱必信生物特研发推出无血清干细胞培养的全面解决方案：！ 产品用途 货号 品名培养基 abs9401 Xeno-Free人间充质干细胞培养基（无酚红） abs9402 Xeno-Free人间充质干细胞培养基 abs9403 人多能干细胞条件培养基 abs9404 人多能干细胞完全培养基 abs9405 人多能干细胞分化培养基 abs9419 人脐带间充质干细胞无血清培养基(无酚红） abs9420 人脂肪干细胞无血清培养基(无酚红）基质胶 abs9410 即用型基质胶潜能分化 abs9406 人间充质干细胞成软骨分化试剂盒 abs9407 人间充质干细胞成脂分化试剂盒 abs9408 人间充质干细胞成骨分化试剂盒分化鉴定 abs9414 成脂检测染液 abs9415 成骨检测染液 abs9416 成软骨检测染液消化液 abs9409 人多能干细胞消化液 abs9411 Xeno-Free细胞消化液冻存液 abs9417 无血清细胞冻存液（科研级） abs9412 ES/iPS细胞冻存液 abs9413 无血清细胞冻存液（治疗级）添加物 abs9120 B27 NeuroMix (50x) abs44077956 Recombinant Human Transferrin重组人转铁蛋白更多细胞培养产品： 产品用途 货号 品名血清 abs972 胎牛血清(优级) abs973 胎牛血清(优级),辐照 abs974 胎牛血清(标准级) abs975 胎牛血清(标准级),辐照 abs976 新生牛血清(超级) abs980 澳洲新生牛血清 abs993 无外泌体胎牛血清抗生素 abs9245 青霉素-链霉素-庆大霉素混合溶液(100×三抗) abs9246 青霉素-链霉素-两性霉素B混合溶液(100×三抗) abs9244 青霉素-链霉素溶液(100×双抗) abs47014828 Hygromycin B(潮霉素B)消化液 abs47047375 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) 不含酚红 abs47014935 Accutase Cell Detachment Solution abs47014937 Trypsin (0.25%), Phenol Red abs47014938 Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol RedDMSO abs9187 二甲基亚砜(DMSO)(细胞培养级)添加物 abs9156 BSA（细胞培养级） abs42019847 Insulin重组人胰岛素 abs9169 Insulin, from Bovine Pancreas abs9119 Bovine Pituitary Extract (BPE) abs80002 鸡胚提取物Absin特色产品线（全部现货）：WB相关：ECL发光液、预染marker、预制胶；IHC相关：二抗试剂盒、组化笔；IP/CoIP试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；ELISA试剂盒；重组蛋白；抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)... 爱必信(上海)生物科技有限公司联系邮箱：info@absin.cn公众平台：爱必信生物

海能仪器与济南大学签订设立“海能赤子奖助学金”，旨在奖励和资助品学兼优的学生，以赤子之心，报效祖国。2017年5月23日，“海能赤子奖助学金”颁发仪式在济南大学12教学楼703会议室举行。济南大学信息科学与工程学院党委书记邱鲁军、学生工作处副处长孙喜武、信息科学与工程学院党委副书记副院长董晓宁、济南海能仪器常务副总黄静、海能仪器代表及获奖学生出席颁奖仪式，信息科学与工程学院党委副书记、副院长董晓宁主持仪式。颁奖仪式上，济南大学学工处副处长孙喜武宣布获得奖助学金学生名单，为学生一一颁奖并合影留念。奖学金获得者合影留念助学金获得者合影留念信息学院丁菲菲代表获奖学生发言，表达了对海能仪器和学校的感激之情，并表示今后将继续努力，勤奋学习，刻苦钻研，决不辜负海能仪器的关怀和学校的培养。海能仪器常务副总黄静在讲话中表示：设立奖助学金是海能仪器为社会尽一份责任，希望帮助贫困学子能够安心读书，激励优秀学子努力奋斗，将来为社会和国家做出更多的贡献。同时，黄总也为即将走上社会的学子们进行了职业规划分享，学子获益良多。济南大学信息科学与工程学院党委书记邱鲁军代表学校向设立此奖项的海能仪器表示衷心的感谢。海能仪器关心学子成长，关注学校发展，是一家具有社会责任感的企业。不仅帮助家庭困难的学生顺利完成学业，还激励了众多有志青年成长。希望同学们通过努力，成为有用的人才，以回报来自社会的关怀。海能代表、学校领导及获奖助学生合影

11月13日，2018年度济南大学—海能赤子奖助学金颁奖座谈会在济南大学行政楼901会议室举办，济南大学相关领导、老师、学生代表及海能仪器代表参加颁奖座谈会。 “海能赤子奖助学金”旨在通过奖助学金的形式，奖励品学兼优，热爱科学仪器事业，胸怀“赤子之心”，立志为科学仪器事业繁荣贡献力量的本科生、研究生，帮助贫困学子安心读书，激励优秀学子努力奋斗，将来为科技进步和社会发展做出更多的贡献。 本年度，共有11名化学化工学院学生获奖，其中6名同学获得2018年“海能赤子奖学金”，5名同学获得2018年“海能赤子助学金” 。 海能仪器对获奖学生表示祝贺，同时期待加强彼此间的互动，增进友谊，产学研相结合，借助高校人才科研力量，实现合作共赢。 颁奖结束后，海能仪器代表为大家分享了科学仪器行业发展现状及科学仪器在各个领域的应用情况，在场学生积极参与讨论，气氛热烈。 未来，海能愿进一步加强校企合作，助力人才培养。也祝愿学子们以优异的成绩走出校门，发挥自己的能力和特长，为科技进步和社会发展做出更多的贡献！

购买过牛血清的生产实验人员都知道，胎牛血清和新生牛血清价格有很大不同。胎牛血清价格很贵，新生牛血清相对便宜。同样是牛血清，为什么会产生这样大的差异呢？先来看看牛血清大体的分类：胎牛血清、新生牛血清和小牛血清，而划分三者之间的是根据对不同年龄段的牛采血所得到的不同的血清产品。胎牛血清（Fetal Bovine Serum）是在母牛怀孕5-8个月时，通过胎牛心脏穿刺采血获取的血清。新生牛血清（Newborn Calf Serum）是来自刚出生~出生后2周内的新生牛静脉取血。小牛血清（Calf Serum）采自出生后2周至1年内的小牛静脉取血。牛血清作为实验室广泛推崇的天然培养被应用于细胞培养。但这三种牛血清由于取血时间不同，其成分存在着一些差异。胎牛血清含有胚胎发育所必需的生长因子。而一些生长因子到胎牛10个月时就消失了。胎牛血清和新生牛血清相比，两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同。胎牛血清因富含丰富的营养还有细胞生成必须的成分所以大多时候用来培养干细胞等一些珍贵难养的细胞，而新生牛血清和小牛血清由于其性价比高价格低廉等因素更适合大量采购使用，在生物工业和疫苗生产等领域应用更多。某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需新生牛血清即可。使用浓度一般在5%-10%，有特殊要求的浓度在20%。另需要说明的是，不同牛血清除了来源不同，处理工艺和检测指标也有区别，因此也导致了成本和价格的不同。

“比脸大”猪排是如何检测的，你知道吗？ —— 奥豪斯助力食品检测安全 （三）记忆中的炸猪排回忆起儿时老上海的味道。一块正宗的上海炸猪排，配上一碟泰康黄牌的辣酱油。在金黄香酥的脆皮包裹中，薄薄的猪肉松软可口。猪排金黄酥脆，一口可以咬出肉汁来。而蘸酱则鲜中带辣，配合肉香，忍不住就是一句“老嗲额！”现在源自韩国综艺的“比脸大”猪排更是火爆市场。那你知道，为了食品安全，“比脸大”猪排要进行的相关检测吗？沙门菌感染沙门氏菌在自然界有广泛的宿主，少数沙门氏菌对宿主有选择性，绝大多数对人和动物均适应，可寄居在哺乳类、爬行类、鸟类、昆虫及人的胃肠道中，种类繁多的家养和野生动物的感染率在1%～20%以上。故各种家禽、家畜在喂养、屠宰、运输、包装等加工处理过程中均有污染的机会。如家禽、家畜屠宰时的卫生条件差，肠腔的沙门氏菌就可污染肉类。此外，肉类等也可在贮藏、市场出售、厨房加工等过程中通过各种用具或直接互相污染，其中在零售市场购买的生肉有1%～58%污染了沙门菌。蛋类或蛋制品的污染来源，可以是禽类卵巢或输尿管，也可以由粪便、肥料、泥土中的沙门氏菌穿过完整蛋壳进入蛋内。一般在许多由蛋混合制成的蛋粉或其他制品中，感染率相当高；乳类及其制品如冰淇淋、袋装熟食等也会受到沙门氏菌的污染。以上各种动物源性食物是引起沙门氏菌感染的最常见媒介物。因沙门氏菌病经粪口途径传播，故摄入污染了沙门氏菌的食物或饮料感染方式。什么是沙门氏菌沙门氏菌属（Salmonella）是一大群寄生于人类和动物肠道内生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌统称为沙门氏杆菌。1880年Eberth首先发现伤寒杆菌，1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌，由于Salmon发现本属细菌的时间较早，在研究中的贡献较大，遂定名为沙门氏菌属。现有67种O抗原和2000个以上血清型，所致疾病称沙门氏菌病。与人类关系密切的沙门氏菌有：伤寒沙门氏菌（S.typhi），甲、乙、丙型副伤寒沙门氏菌(S.paratyphiA、B、C)，鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)，猪霍乱沙门氏菌(S.choleraesuis)，肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)等十余种。一般可简称伤寒杆菌，甲、乙、丙型副伤寒杆菌，鼠伤寒杆菌，猪霍乱杆菌，肠炎杆菌。沙门菌PCR检测方法由病原微生物引起的食物性疾病众多，且多事发突然。 探索，研究快速的检测方法，一直是科学家们致力的方向。常规的病原微生物检测需要数十小时至数天；普通PCR一般都是对被检标本先进行18-24h的增菌，然后再进行PCR测定；定量PCR虽然能将检测时间缩短到2-3h，但是对多种病原菌同时检测的效果还不够理想。为此，特地设立了沙门菌PCR检测方法，对实验过程进行了摸索和改进，大大提升了检测效率。根据沙门菌hilA基因、志贺菌ipaH基因及副溶血性弧菌TDH基因设计特异性PCR引物，被检样品经4h 振荡后金属浴裂解制备DNA模板，使用全自动毛细管电泳核酸检测系统分析PCR扩增产物。该方法操作方便，分析时间短，特异性和灵敏度高， 可用于公共卫生突发事件食源性病原菌的快速检测。在该实验中，金属浴的控温稳定性是实验的必备条件。奥豪斯多功能干式金属浴就非常适用于具有温度稳定需求的应用。其试管和模块壁紧密接触，提高保暖性，提高加热效率。以下，就让小编为您介绍吧：实验室的控温专家 ——奥豪斯干式金属浴金属浴也叫干式恒温仪,恒温干浴器，和水浴原理都是一样的，只不过导热物质由水换成了金属，一般是模块化的金属块，和水浴比较起来升降温速度都快很多，而且金属块更容易灭菌，体积也小，便于在操作台等局限性空间内使用金属浴广泛应用于样品的保存、各种酶的保存和反应、核酸和蛋白质的变性处理、PCR 反应、电泳的预变性和血清凝固等。奥豪斯多功能干式金属浴非常适用于具有温度稳定需求的应用。大功率的恒温模拟控制型号属于经济型号，数显控制型号可提供卓越的温度均匀性与稳定性，适用于需要重复结果的应用，40多个模块供选择。产品特点模拟控制型号温度的准确度为设定温度的+/-1.0°C，数显控制型号温度的准确度为设定温度的+/-0.1°C，两种型号均可提供0.1°C的卓越的温度一致性。 数显控制型号的金属浴允许用户温度校准组件校正模块的温度，可实现LED屏显示的温度值和外部温度校准组件显示温度值保持统一。数显控制型号操作面板配有分别显示温度和时间的独立LED屏。所有型号均采用了微处理器，温度的准确度控制在±0.1°C，以提供可重复结果。参考文献:肖勇，吴家林，凌霞，张敬平，倪陪华，沙丹 《沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌多重PCR检测方法的研究》1.无锡市疾病预防控制中心，浙江 无锡 214023 2.上海交通大学，上海 200025

p 　　3月13日，农业农村部发布关于加强屠宰环节非洲猪瘟检测工作的通知。其中明确指出要提高检测能力，规范样品检测。 br/ /p p 　　通知中特别要求，各级畜牧兽医主管部门要指导屠宰企业建设符合PCR检测技术要求的实验室，组织检测试剂供应单位对屠宰企业检测技术人员进行培训。鉴于各地实验室的需求，PCR产品的市场或将迎来增长。 /p p 　　此外，通知中还提到，要鼓励和支持具有非洲猪瘟检测资格的兽医实验室提供规范的社会化服务，承接屠宰企业委托检测任务；要加强县级动物疫病预防控制机构非洲猪瘟实验室检测能力建设，满足暂时不具备非洲猪瘟监测能力的小型屠宰企业委托检测的需求。 /p p 　　详细内容如下： /p p style=" text-align: center " 农业农村部关于加强屠宰环节非洲猪瘟检测工作的通知 /p p 　　各省、自治区、直辖市及计划单列市农业农村(农牧、畜牧兽医)厅(局、委、办)，新疆生产建设兵团畜牧兽医局，部属有关事业单位： /p p 　　为贯彻落实2月26日国务院非洲猪瘟防控工作专题会议精神，推动农业农村部公告第119号(以下简称《公告》)落实落地，切实做好屠宰环节非洲猪瘟检测工作，现就有关事项通知如下。 /p p 　　一、统一思想认识 /p p 　　生猪屠宰是连接生猪产销的关键环节，根据我国非洲猪瘟疫情形势和国内外防控经验，开展屠宰环节非洲猪瘟检测是降低病毒扩散风险、切断病毒传播途径的有效手段。各级畜牧兽医部门要坚决贯彻国务院专题会议精神，统一思想认识，明确目标任务，督促生猪屠宰企业落实主体责任，开展非洲猪瘟自检，严禁未经检验检疫和非洲猪瘟检测不合格的肉品流入市场。 /p p 　　二、明确工作进度 /p p 　　各地畜牧兽医部门要督促生猪屠宰企业积极作为，创造条件，尽早开展非洲猪瘟自检。要根据企业规模和市场辐射范围等条件，明确实施期限。跨省销售生猪产品和年屠宰10万头以上的屠宰企业以及生猪屠宰、加工一体化企业最迟于4月1日前开展非洲猪瘟自检 年屠宰5万头以上的屠宰企业最迟于5月1日前开展自检 其他屠宰企业最迟于7月1日前开展自检。在规定期限内不能落实检测要求的，由畜牧兽医主管部门依照《生猪屠宰管理条例》及有关规定进行处理。 /p p 　　三、提高检测能力 /p p 　　各级畜牧兽医主管部门要指导屠宰企业建设符合PCR检测技术要求的实验室，组织检测试剂供应单位对屠宰企业检测技术人员进行培训。要鼓励和支持具有非洲猪瘟检测资格的兽医实验室提供规范的社会化服务，承接屠宰企业委托检测任务。要加强县级动物疫病预防控制机构非洲猪瘟实验室检测能力建设，满足暂时不具备非洲猪瘟监测能力的小型屠宰企业委托检测的需求。 /p p 　　四、规范样品检测 /p p 　　驻场官方兽医要监督生猪屠宰企业严格按照《公告》要求进行检测。也可根据实际情况，在确保全覆盖的前提下，进行入场前检测，即在生猪进场前以车为单位采集全部生猪血液样品，均匀混合后进行检测。屠宰过程中发现疑似非洲猪瘟典型病变的，要立即停止屠宰，将可疑生猪转至隔离间，并采集病变组织和血液样品进行检测。用于生产饲料原料的猪血，在出厂前按每车次采集3个样品进行检测。样品的采集、运输与保存应当符合《非洲猪瘟疫情应急实施方案(2019版)》的要求。 /p p 　　五、严格结果处置 /p p 　　生猪屠宰企业检出非洲猪瘟病毒核酸阳性的，应当立即停止生产，将检测结果报告驻场官方兽医，并及时将阳性样品送所在地省级动物疫病预防控制机构确诊。确诊为阴性的，及时通知企业恢复生产。确诊为非洲猪瘟病毒核酸阳性的，按照《非洲猪瘟疫情应急实施方案(2019年版)》的规定采取应急处置措施。48小时后，可向当地畜牧兽医部门申请评估，经评估合格的，可恢复生产。对扑杀的生猪(包括已屠宰的同批次生猪)按照财政部和农业农村部印发的通知予以补助。 /p p 　　畜牧兽医部门检测发现，或食品加工、流通环节检测后追溯发现屠宰企业因检测不到位、造假等原因造成非洲猪瘟病毒核酸阳性生猪产品流出屠宰厂(场)的，应当就地销毁生猪产品，责令屠宰企业召回同批次产品并按规定销毁，暂停屠宰活动，彻底清洗消毒，15日后，经评估合格后方可恢复生产。对扑杀的生猪、销毁的生猪产品不予补助。 /p p 　　六、严格监管措施 /p p 　　各地要结合落实非洲猪瘟检测要求，在5月1日前组织对生猪屠宰企业进行全面清理，对未取得排污许可证、不符合动物防疫要求的企业一律立即停产整改 7月1日前整改不达标的，坚决依法取消定点屠宰资格。要鼓励屠宰企业通过兼并、重组、标准化示范创建，提升规模化、规范化、标准化水平。 /p p 　　各地要会同公安、市场监管部门，持续开展严厉打击注水注药、私屠滥宰等屠宰领域违法专项行动，对违法犯罪行为保持高压态势，严防屠宰领域违法行为死灰复燃，为屠宰企业健康发展创造良好环境。 /p p 　　农业农村部将于7月对各地落实屠宰企业非洲猪瘟检测和清理整改工作进行检查，检查结果将列入今年加强重大动物疫病防控延伸绩效管理指标体系。 /p

血清专题：你的实验有必要做血清热灭活吗?细胞培养是很多下游实验的基础，细胞培养的好坏会直接影响后续实验的成功和稳定，而血清作为细胞培养的主要试剂对实验的重要性不言而喻！血清的热灭活是很多培养者感兴趣的话题，价格不菲的血清中含有诸如生长因子、维生素、氨基酸等珍贵物质，而将它们置于56℃的温度长达30分钟是完全没有必要的。尽管如此，在大多数实验室之中血清的热灭活还是作为常规来执行，多数实验者并没有考虑热处理对血清中的生长因子、氨基酸等成分带来的负面影响，下面我们就对血清的热灭活来探讨探讨。血清灭活的目的是什么？ 1 血清热灭活目的主要是为了去除血清中补体等对热敏感的物质，但是在胎牛血清中对补体的灭活则明显没有必要。 2 研究人员曾对商业胎牛血清中的补体成分进行测定，他们发现胎牛血清中含有的C1、C6仅达成年动物血清的1-3%，而其它补体成分仅有成年动物的5-50%，至于补体的主要成分C3在胎牛血清中则几乎不能检出。通过补体固定实验，也未发现有明显的溶血现象。多数实验室在培养前将培养液进行预热的过程，也对热敏的补体有灭活的作用。 3 热灭活另一个目的是为了使支原体失活。 血清使用前是否都必须热灭活？ 1 在免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。而对于其他大多数的细胞来说是不需要热灭活血清的。 2 很多情况下，热灭活并不会改善细胞的生长，却降低了支持细胞生长的能力。即使在少数有促进的情况下，其促进的比率也是微不足道。另外，血清的热灭活导致的沉淀常常被认为是微生物污染，从而给用户带来不必要的麻烦。 3 建议，对血清进行灭活的用户，需要通过试验来证实其必要性。 血清热灭活对细胞生长有帮助吗？细胞生物学家比较了正常热灭活胎牛血清对各种细胞株的生长能力影响，发现11株细胞中，热灭活对6 株细胞有负面影响（红）、3株无影响（绿）、2株有微弱正面改善（黄） 血清热灭活应该怎么操作？ 1 融化血清，并充分混匀其内容物。 2 对照瓶装等量水，插入温度计。 3 将血清瓶和对照瓶放入56℃水浴箱。 4 当温度达到56℃，立即开始计时。 5 每5分钟，旋转血清瓶一次，轻微规则摇晃，以使瓶中血清受热均匀一致。 6 56℃，30分钟后，立刻去除血清。注意事项：血清灭活时，避免接触到加热管，防止受热不均匀，导致灭活失败，血清灭活后，冷水浴冷却。 为什么血清灭活后产生大量沉淀？ 1 血清灭活后出现的沉淀大多数是纤维蛋白析出，属正常现象。灭活过程多次摇晃使血清受热均匀可以降低蛋白的析出。 2 当血清在未完全化冻状态时直接置56℃水浴、灭活过程中局部受热过高、加热时间过长就会产生胶状沉淀，这样的血清质量严重受损，是无法继续正常使用的。

28日，作为广东省激光行业协会副会长单位的正业科技，委派激光智能制造事业部刘琼经理代表公司与激光协会一行十多人，走进肇庆市封开县开展爱心助学活动。正业科技与协会代表一起向当地大洲助学会捐赠了爱心助学金，以微薄之力助寒门学子圆读书梦。助学会负责人表示一定会把善款用在所需要帮助的孩子身上，让他们能够继续接受教育。走访慰问困难家庭封开县位于广东省西北部，是省内经济发展落后地区，仍有许多家庭收入微薄，甚至难以支持孩子上学，需要社会的扶持。活动期间，正业科技与协会一行走访慰问当地困难家庭，了解到他们生活中的实际困难，鼓励他们坚定信心，以乐观的心态积极生活，并给他们送上一点爱心。参观当地试验区29日，正业科技与协会一行参观了“粤桂合作特别试验区”，封开县副县长邓志斌详细介绍了试验区的发展情况。“粤桂合作特别试验区”位于广东省肇庆市和广西壮族自治区梧州市交界处，面积140平方公里，广东广西各70平方公里，由粤桂两省区共建，致力于打造珠三角连接大西南枢纽门户的发展定位。看到试验区一幢幢崭新的标准厂房、基础配套建设忙碌进行，建设成效令人欣喜、倍感震撼。以往封开县还没有一个成型成规模的工业园区，试验区的建设将会为当地带来更多就业机会，同时也意味着更好推进当地脱贫致富。多年以来，正业科技一直践行“爱心正业，感恩随行”公益理念，积极履行企业社会责任，不仅资助优秀学子和寒门弟子，还通过组织志愿者活动、帮扶困难职工、赞助竞赛型公益文化活动等形式来传播正业人满满的爱心，为公益事业贡献力量，荣获“友善东莞”热心公益单位，也赢到社会民众的赞许和信任。正业科技公益回顾▲正业科技热心资助在莞江西学子▲东华理工大学“正业科技优秀研究生奖助学金”颁奖仪式▲在广东扶贫济困日暨东莞慈善日公益活动中捐赠20万元▲热心公益单位牌匾▲赞助东莞全明星慈善篮球赛

康宁旗下Cellgro澳洲胎牛血清已于2012年12月31日到货，欢迎广大经销商及用户踊跃订购！ Cellgro胎牛血清是由Mediatech公司生产。Mediatech公司总部位于美国弗吉尼亚州的赫恩登，拥有符合美国FDA（21 CFR,820）cGMP标准的生产厂房。公司创建于1984年，是一家集研发、生产、销售、技术服务为一身的生物技术公司。旗下的cellgro品牌产品遍及全球，产品种类齐全，产品质量处于行业领先地位，已被广泛应用于各大院校、科研机构、医药及生物技术企业。　　 Mediatech公司的经营理念是不仅要为客户提供优质的产品，而且要将产品质量作为对客户的一种承诺。多年来，公司始终坚持不懈的致力于创新和改进生产工艺及操作流程的标准化。Mediatech公司是全球率先通过ISO13485:2003认证的细胞培养液制造商之一。 胎牛血清是细胞培养中最常见的补充剂。特定浓度的胎牛血清可提供多种化合物，已经证实这些化合物能满足细胞培养的特定代谢要求，包括不同的生长促进因子和多种不明确的组分。

明明是一瓶优质的血清偏偏出现沉淀和血清质量有关吗？会影响细胞培养吗？如何避免沉淀？出现沉淀如何处理？ “血清沉淀，其实属于常见现象，并不会影响血清的品质，大家不必惊慌！但很多人对这一现象还不是很了解。”为此，我们对“血清沉淀”的几个常见问题进行了总结，供广大科研青年参考。 血清沉淀是什么？血清中经常会出现肉眼可见的沉淀，其成分有多种类型，产生的原因有很多，主要有纤维蛋白、磷酸钙还有一些其它成分。1. 纤维蛋白（Fibrin）血清中肉眼可见的沉淀物大多属于这一类型。由于在生产过程中，血清采集、过滤（3 次 0.1 μm过滤）和灌装处理都是在低温条件下快速完成, 此时血清中纤维蛋白原（Fibrinogen）处于溶解状态。但在解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集，形成肉眼可见的沉淀。下图是血清因反复冻融而造成纤维蛋白原的凝集2. 磷酸钙（Calcium Phosphate）这是一种常见的沉淀成分，通常会造成血清出现云雾状浑浊。当产品在 37℃保存时，这种现象尤其明显，在倒置显微镜下可观察到小黑点的存在。这些小黑点在布朗运动的作用下四处游动，常被误认为是微生物污染。3. 其他成分（Other） 血清中的其他成分也会形成沉淀，例如胆固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等血清沉淀会影响细胞培养吗？1. 细胞生长我们在出厂前都会对血清进行一系列质检测试，确保血清质量达到严格标准。血清测试和细胞培养经验也表明，其沉淀成分不会影响血清作为细胞培养添加物的表现。这一点得到了众多客户和其他血清供应商的肯定。解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集，形成肉眼可见的沉淀。2. 怀疑污染磷酸钙颗粒经常会被当成微生物污染而引发不必要的担忧。一般情况下，当操作人员融化血清后注意到有雾状浑浊时，常将其存放在 4℃冰箱中观察，并考虑接下来是否继续使用。但这样会使沉淀进一步增多，反而会使血清更加浑浊，进而误以为存在血清污染。并且，在倒置显微镜下，可在血清中观察到四处游动的小黑点（磷酸钙颗粒的布朗运动），更容易使人误以为存在微生物污染。为防止这类误解的产生，我们不建议客户培养血清来验证是否存在污染，而是将血清直接接种在细菌培养基上进行培养，以观察是否有细菌的增殖。并且，进行革兰氏染色，并在油镜（100 X 10 倍）下观察可直接确认是否存在微生物污染。怎样操作可以尽量避免沉淀出现？1. 正确解冻首先，应按照逐步解冻的方式正确解冻血清：从-20℃取出后，置于 4℃冰箱缓慢解冻，最后置于室温完成解冻。如果直接从-20℃拿到室温或 37 ℃水浴解冻，则非常容易产生沉淀。在解冻过程中，请注意时不时缓慢摇晃瓶子，减少沉淀的产生。为避免反复冻融，建议您将血清分装使用。2. 使用和保存注意事项血清沉淀很难预测和避免，出现沉淀后也无需担忧，这并不会影响血清的品质。已知血清沉淀在以下条件下会有增多的可能：1) 热灭活；2) 37℃培养；3) 反复冻融；4) 伽马射线照射； 5) 2-8℃长期保存； 6) 长期保存于可自动化霜的冰箱中（温度不稳定）。血清沉淀的形成机理多种多样，具体的机理尚不十分明确。我们尚不能准确预测和控制血清沉淀的产生。目前市面上所有品牌的血清产品都存在沉淀现象，这一点可以在各品牌官方网站上关于沉淀问题的声明上得到证实。出现血清沉淀该如何处理？我们建议您采用2000 rpm 离心5分钟，取上清使用就好，比过滤方便，不需要另外准备滤心和针筒，又不容易污染。总 结：血清产品中出现沉淀属于常见现象，但不会影响血清的品质，对细胞培养而言也是没有任何问题的，大家可以放心使用！

12月5日，从省粮食和物资储备局传来消息，按照《省级猪肉储备管理办法》的要求，拟选承担省级猪肉储备检测单位，该局现开展申报工作，申报时间截止2023年12月8日，过期将视为自动放弃。　　省级猪肉储备检测工作分为质量公检和非洲猪瘟检测两项工作。申报的具体要求包括，承担省级猪肉储备质量公检单位需取得省级资质认定证书，具备独立开展饲料、畜禽产品检测能力，具有必备设备，实验室人员需具备畜牧领域相关背景，检测能力能够满足饲料、畜禽产品违禁药物、重金属、霉菌毒素检测有关要求。承担省级猪肉储备基地非洲猪瘟检测单位需取得相关资质，具备实验室条件，具有必备设备，实验室人员需具备兽医领域相关背景，检测能力能够满足非洲猪瘟病原学和血清学检测有关要求。

血清瓶洗瓶机主要用于清洗实验室中使用的各种血清瓶和其他玻璃器皿，如试管、离心管、培养皿等。使用血清瓶洗瓶机可以减轻实验室工作人员的工作负担，降低他们的工作强度。工作人员可以将更多的时间和精力投入到其他实验工作中，提高整个实验室的工作效率。血清瓶洗瓶机的实验方法：准备清洗液：根据需要选择合适的清洗剂，可以是酸、碱、有机溶剂等，并按照清洗剂的说明进行配制。预处理：将需要清洗的血清瓶放入预处理区域，进行初步的清洁处理，如去除标签、松脱粘附物等。清洗：将准备好的清洗液加入血清瓶洗瓶机中，根据设备操作说明设定相应的清洗程序，如温度、时间、清洗方式等。漂洗：在清洗完成后，使用清水进行漂洗，以去除残留的清洗剂和污渍。干燥：漂洗完成后，使用干燥设备或自然风干的方式将血清瓶烘干，以确保无水分残留。检测与评估：对清洗后的血清瓶进行检测和评估，以确保其清洁度符合要求。可以使用显微镜、化学检测等方法进行检测。存储与使用：将清洗合格的血清瓶存储在干燥、通风的地方，并按照需要使用。