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益生菌,这一概念最早来源于希腊语,意思是“对生命有益”(for life)。早在远古时代,人类的日常饮食中就已经含有乳酸发酵类的食品了。 1857年,法国微生物学家巴斯德研究了牛奶的变酸过程。他把鲜牛奶和酸牛奶分别放在显微镜下观察,发现它们都含有同样的一些极小的生物——乳酸菌,而酸牛奶中的乳酸菌的数量远比鲜牛奶中的多。这一发现说明,牛奶变酸与这些乳酸菌的活动密切相关。 1878年,李斯特(Lister)首次从酸败的牛奶中分离出乳酸乳球菌。 1892年,德国妇产科医生Doderlein在研究阴道时提出产乳酸的微生物对宿主--人有益。 1899年,法国巴黎儿童医院的蒂赛(Henry Tissier),蒂赛率先从健康母乳喂养的婴儿粪便中分离了第一株菌种双歧杆菌(当时称为分叉杆菌),他发现双岐杆菌与婴儿患腹泻的频率及营养都有关系。 1900-1901年,Moro,Beijerinck和Cahn各自研究了肠道中的乳酸菌。丹麦人奥拉一严森(OrIa—JerlSerl)首次对乳酸菌进行了分类。 1905年,保加利亚科学家斯塔门·戈里戈罗夫第一次发现并从酸奶中分离了“保加利亚乳酸杆菌”,同时向世界宣传保加利亚酸奶。 1908年,俄国科学家诺贝尔奖获得者伊力亚.梅契尼科夫(Elie Metchnikoff)正式提出了“酸奶长寿”理论。通过对保加利亚人的饮食习惯进行研究、他发现长寿人群有着经常饮用含有益生菌的发酵牛奶的传统。他在其著作「延年益寿」(Prolongation of Life)中系统的阐述了自己的观点和发现。 1915年,Daviel Newman首次利用乳酸菌临床治疗膀胱感染。 1917年,德国Alfred Nissle教授从第一次世界大战士兵的粪便中一株大肠杆菌。这名士兵在一次严重的志贺氏菌大爆发中没有发生小肠炎。在抗生素还没有被发现的那个时代,Nissle利用这株菌在治疗肠道感染疾病(由沙门氏菌和志贺氏菌)取得可观成果。这株大肠杆菌现仍然在使用,它是为数不多的非乳酸菌益生菌。 1919年,怀着对巴尔干半岛有益酸奶和巴斯德研究所微生物研究成果的极大兴趣,伊萨克·卡拉索在西班牙巴塞罗那创立了公司(达能前身)。而且他常常召集许多博士医生到工厂讨论酸奶的益处。 1920年,Rettger证明梅契尼科夫所说的保加利亚细菌(保加利亚乳杆菌)不能在人体的肠道中存活。发酵食品和梅契尼科夫的学说受到怀疑(在那时)。 1922年,Rettger和Cheplin报道了嗜酸乳杆菌酸奶所具有的临床功效,特别是对消化的功能性。 1930年,医学博士代田稔博士在日本京都帝国大学(现在的京都大学)医学部的微生物学研究室首次成功地分离出来自人体肠道的乳酸杆菌,并经过强化培养,使它能活着到达肠内。这种菌后来引用代田博士的名字,取名为Lactobacillus casei strain shirota。这就是后来被称为养乐多菌的益生菌。 1935年,乳酸菌饮料问世,益生菌开始走向产业化。 1945年,无菌动物模型和悉生动物模型建立。 1954年,Vergio引入与抗生素或其它抗菌剂相对的术语“Probiot-ika”,提出抗生素和其它抗菌剂对肠道菌群有害而“Probiotika”对肠道菌群有利。 1957年,Gordon等人在《柳叶刀(The Lancet)》提出了有效的乳杆菌疗法标准:乳杆菌应该没有致病性,能够在肠道中生长,当活菌数量达到107-109时,明显具有有益菌群的作用。同时德国柏林自由大学的Haenel教授研究了厌氧菌的培养方法,提出“肠道厌氧菌占绝对优势”的理论。日本学者光岗知足(Tomotari Mitsuoka)开始了肠内菌群的研究,最后建立了肠内菌群分析的经典方法和对肠道菌群作出了全面分析。 1962年,Bogdanov从保加利亚乳杆菌中分离出了3种具有抗癌活性的糖肽,首次报道了乳酸菌的抗肿瘤作用。 1965年, Lilly D. M.和Stillwell R. H.在《科学》杂志上发表的论文“益生菌—由微生物产生的生长促进因素”中最先使用益生菌Probiotic这个定义来描述一种微生物对其他微生物促进生长的作用。 20世纪70年代初由沃斯(Woese)、奥森(Olsen)等提出16s rRNA寡核苷酸序列分析法来对菌进行鉴定。构建了现已被确认的全生命系统进化树,越来越多的细菌依据16SrDNA被正确分类或重分类,给乳酸菌的鉴定和肠内菌群分析带来极大方便。 1971年,Sperti用益生菌(Probiotic)描述刺激微生物生长的组织提取物。 1974年,Paker将益生菌定义为对肠道微生物平衡有利的菌物。 1977年,微生态学(Microecology)由德国人Volker Rush首先提出。他在赫尔本建立了微生态学研究所,并从事对双歧杆菌、乳杆菌、大肠杆菌等活菌作生态疗法的研究与应用。Gilliland对肠道乳杆菌的降低胆固醇作用进行了研究,提出了乳酸菌在生长过程中通过降解胆盐促进胆固醇的分解代谢,从而降低胆固醇含量的观点。 1979年中国的微生态学研究开始。自中国微生物学会人畜共患病病原学专业委员会下属的正常菌群学组的成立。1988年2月15日中华预防医学会微生态学分会的成立有了学术组织。1988年《中国微生态学杂志》创刊。 80年代初大连医科大学康白教授首先研制成功促菌生(蜡杆芽胞杆菌)。 1983年,由美国Tufts大学两名美国教授Sherwood Gorbach和Barry Goldin从健康人体分离出了LGG(鼠李糖乳杆菌),并于1985年获得专利。LGG菌种具有活性强、耐胃酸的特点,能够在肠道中定殖长达两周。 1988年底丹麦的汉森中心实验室生产出超浓缩的直投式酸奶发酵剂。 直投式酸奶发酵剂(Directed Vat Set, DVS)是指一系列高度浓缩和标准化的冷冻干燥发酵剂菌种,可直接加入到热处理的原料乳中进行发酵,而无需对其进行活化、扩培等其它预处理工作。直投式酸奶发酵剂的活菌数一般为1010 - 1012 CFU/g。 1989年,英国福勒博士(Dr.Roy Fuller)将益生菌定义为:益生菌是额外补充的活性微生物,能改善肠道菌群的平衡而对宿主的健康有益。他所强调的益生菌的功效和益处必须经过临床验证的。 90年代,中国学者张箎教授对世界第五长寿区——中国广西巴马地区百岁以上老人体内的双歧杆菌进行了系统的研究,也发现长寿老人体内的双歧杆菌比普通老人要多得多。同时中医药微生态学建立。杨景云等学者开始对中国的传统中药与微生态关系进行了系统的研究。 1992年, Havennar对定义进行了扩展,解释为一种单一的或混合的活的微生物培养物,应用于人或动物,通过改善固有菌群的性质对寄主产生有益的影响。 1995年,吉布森(Gibson)把能在大肠中调整菌群的食品称为益生元。 1998年,Guarner & Schaafsma给出了更通俗的定义:益生菌是活的微生物,当摄入足够量时,能给予宿主健康作用。 1999年,Tannock作了总结:细菌是人体(还有高级动物和昆虫)中正常居住者。其中胃肠道中发现超过400多种细菌。 2001年,世界粮农组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)也对益生菌做了如下定义:通过摄取适当的量、对食用者的身体健康能发挥有效作用的活菌。联合国粮农组织和世界卫生组织组成的专家联合顾问团强烈建议用分子生物学的手段鉴定益生菌。并推荐益生菌存放于国际性菌物保藏中心。具体的步骤是:先做表型鉴定,再做基因鉴定。基因鉴定的方法有DNA/DNA杂交,16S RNA序列分析或其它国际上认可的方法。然后到RDP上验证鉴定结果。 2001年,法国完成第一株乳酸菌即乳酸乳球菌IL1403的全基因组测序。 2002年,微生物学教授Savage宣布:正常菌群是人体的第十大系统——微生态系统。 2005年,美国北卡罗来纳州立大学Dobrogosz 和Versalovic教授提出了免疫益生菌的概念(Immunoprobiotics)。 2006年,意大利M. Del Pianoa等认为益生菌应该定义为一定程度上能耐受胃液,胆汁和胰脏分泌物而黏附于肠道上皮细胞并在肠道中定殖的一类活的微生物。提出从粪便中分离的“益生菌”有可能多数是浮游菌,而非黏附菌。 2007年,美国《科学》杂志预测:人类共生微生物的研究将可能是国际科学研究在2008年取得突破的7个重要领域之一。12月9~10日,英、美、法、中等国科学家在美酝酿成立“人类微生物组国际研究联盟(IHMC)”,计划2008年4月联合启动“人类元基因组计划”,开始对人类元基因组的全面研究。这项被称为“第二人类基因组计划”的项目将对人体内所有共生的微生物群落进行测序和功能分析,其序列测定工作量至少相当于10个人类基因组计划,并有可能发现超过100万个新的基因,最终在新药研发、药物毒性控制和个体化用药等方面实现突破性进展。 2008年,荷兰乌得勒支大学医学中心研究者在柳叶刀杂志上报道了益生菌可能会引起重症急性胰腺炎患者的肠道致命性局部缺血危险。
文/袁靖琳 (华测检测 食药农化事业部)2002年,联合国世界粮农组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)共同起草了《食品益生菌评价指南》,评价指南中给出了益生菌的定义:“益生菌是活的微生物,当摄入充足的数量时,它会赋予宿主某种健康益处”。随着人们健康意识的增强和经济社会等因素的影响, 益生菌越来越受到人们的重视。益生菌特有的保健功能而引发的相关研究日渐热门。益生菌的应用已被深入的研究并在不断的发展中, 它不仅仅被应用于食品中, 而且在医药、畜牧业也有着广泛的应用。虽然益生菌的研究历史不过百年, 但是发展速度很快, 在菌种开发产品研发方面都取得了进步。目前, 世界上许多科学家也在研究如何利用益生菌中的活性, 激活免疫功能, 使它更好的调节免疫系统、控制肿瘤和抑制癌症、改善肠胃环境,甚至可以用于辅助治疗某些精神类疾病,为人类的健康作更大的贡献。[b]1. [b]益生菌研究史简介[/b][/b]1857年,法国微生物学家巴斯德在研究牛奶酸变的过程中发现了乳酸菌;1878年,李斯特首次从酸败牛奶中分离出乳酸乳球菌;1899年,法国儿童医院的蒂赛从婴儿粪便中分离出双歧杆菌,发现其与婴儿腹泻有关;1900-1901年,丹麦奥拉严森首次对乳酸菌进行了分离;1905年,保加利亚斯塔门格里格罗夫首次发现并从酸奶中分离了保加利亚乳杆菌;1930年,日本代田稔首次成功分离出源自人体肠道的乳酸杆菌,并取名干酪乳杆菌代田株,即后来被称为养乐多菌的益生菌;1935年,乳酸菌饮料问世,益生菌开始走向产业化;1974年,Paker将益生菌定义为对肠道微生物平衡有利的菌物;1988年,丹麦科汉森实验室生产出超浓缩的直投式酸奶发酵剂;1996-1999年,欧共体PROBDEMO CT96-1028项目研究标明了益生菌产品的益生功效;2002年,联合国世界粮农组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)共同起草了《食品益生菌评价指南》,评价指南中给出了益生菌的定义:“益生菌是活的微生物,当摄入充足的数量时,它会赋予宿主某种健康益处”。[b]2. [b]益生菌益生功能简介[/b][/b]多方研究标明,益生菌具有调节体内微生态平衡、恢复正常生理功能、预防或治疗疾病、促进健康的功效。总结归纳为:ü 预防或改善腹泻ü 缓解乳糖不耐症ü 改善便秘ü 辅助治疗幽门螺杆菌引发的肠胃疾病ü 增强人体免疫力ü 促进消化ü 降低血清胆固醇ü 辅助治疗糖尿病ü 延缓衰老2013年,加州理工学院的研究人员发现,益生菌疗法可以减轻小鼠自闭症,这一结果或许将会改变治疗人们对孤独症传统疗法的看法。[b]3. [b]益生菌在食品工业的应用[/b][/b]目前,益生菌大体上可以分为三类:(1)乳杆菌类(如嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌);(2)双歧杆菌类(如长双歧杆菌、短双歧杆菌);(3)革兰阳性球菌(如嗜热链球菌、粪链球菌、乳链球菌);此外,有些酵母菌等也可以归入益生菌的范畴。被应用到食品中的益生菌应具有以下功能性要求:( l) 耐酸耐胆盐 (2) 可粘附在上皮表面并且能在人的胃肠道存活 (3) 免疫刺激, 并不引起某些炎症 (4 )对病原菌有拮抗作用, 如幽门螺杆菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、艰难梭菌等。同时还得具备以下的加工性要求(1)好的感观特性 (2) 抗噬菌体 ( 3 )加工过程中存活 (4 )在产品和储藏过程中稳定。益生菌在食品加工生产过程中被当做天然发酵剂广泛应用--在乳制品行业生产发酵乳、干酪等,《GB 19302-2010国家安全标准 发酵乳》中则明确指定酸乳和风味酸乳使用的菌株仅为嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌(德氏乳杆菌保加利亚亚种);在肉制品行业用于生产发酵香肠;在果蔬行业,用于生产泡菜、果蔬汁饮料;近几年还有研究人员将乳酸菌、酵母和谷物混合也得到了感官风味较好的产品;在婴幼儿食品中则是作为益生菌补充剂。益生菌也被用在了保健品中。保健品中常用的两大类乳酸菌群:一类为双歧杆菌,如婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌;一类为乳酸杆菌,如如嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌等。市场上常见的养乐多便是添加了干酪乳杆菌LcS的具有保健功能的乳酸菌饮料。目前,我国可以用于保健食品的益生菌菌种有:两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)、青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)、德氏乳杆菌保加利亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、干酪乳杆菌干酪亚种(Lactobacillus casei subsp. Casei)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)。[b]4. [b]国内存在的问题[/b][/b]到目前为止,我国尚没有系统的研究和制定益生菌及其发酵乳制品的标准。益生菌及发酵乳制品市场异常混乱,出现功能夸大的虚假宣传,甚至在益生菌发酵乳制品中检验不出该益生菌的现象。较为典型的例子--对于声称添加了某种或某些特定活性益生菌的乳酸菌型饮料,套用《GB7101-2015食品安全国家标准 饮料》—“标示活菌(未杀菌)型的产品乳酸菌数应≥10[sup]6[/sup]CFU/g(mL)”评价产品的合格性显然并不合适,因为这一判定标准仅仅只对活菌数进行了要求,而对于那些声称添加了某种或某些益生菌的产品,消费者无从知晓在这数目≥10[sup]6[/sup]CFU/g(mL)乳酸菌中是否真的含有产品声称的益生菌。此外,在益生菌食品方面,我国尚有许多问题亟待解决。第一,与国外相比,我国消费者对乳制品的消费数量仍然较低;第二,在我国大品牌的益生菌乳制品所用菌种绝大多数依赖于进口国外品牌,如杜邦(丹尼斯科)、拉曼、科汉森等,我国应尽快在菌种选育上下功夫,筛选和培育优良益生菌菌种,打破国外的垄断,开发适合我国消费者口味的产品;第三,高新生物技术与益生菌产品生产相结合,提高益生菌的生物利用率。[b]5. [b]申报及生产益生菌类保健食品小贴士[/b][/b]益生菌类保健食品申报除了要按保健食品注册管理有关规定提交申报资料外,依据益生菌保健食品申报与评审规定(试行)(国食药监注202号)还应注意如下几点:[b][b]5.1菌种应满足的条件[/b][/b](一)必须是人体正常菌群的成员,可利用其活菌、死菌及其代谢产物。(二)生产用菌种的生物学、遗传学、功效学特性明确和稳定。(三)种子批系统。原始种子批应验明其记录、历史、来源和生物学特性。工作种子批的生物学特性应与原始种子批一致,每批主种子批和工作种子批均应按规程要求保管、检定和使用。在适宜的培养基上主种子传代不超过10代,工作种子传代不超过5代。(四)菌种及其代谢产物必须无毒无害,不得在生产用培养基内加入有毒有害物质和致敏性物质。(五)从活菌类益生菌保健食品中应能分离出与报批和标识菌种一致的活菌。[b][b]5.2生产要求[/b][/b](一)必须有专门的厂房或车间、有专用的生产设备和设施;必须配备益生菌实验室,菌种必须有专人管理,应由具有中级以上技术职称的细菌专业的技术人员负责;制定相应的详细技术规范和技术保证。益生菌需建立档案。(二)[color=#333333]生产用菌种及生产工艺不得变更。[/color](三)[color=#333333]所用益生菌菌种在其发酵过程中,除培养基外,不得加入具有功效成分的动植物及其它物质。[/color][b][b]5.3申报附加资料[/b][/b](一)菌种的属名、种名应有对应的拉丁学名。(二)菌种的培养条件(培养基、培养温度等)。(三)菌种来源及国内外安全食用资料。(四)[b]国家食品药品监督管理局确定的鉴定机构[/b]出具的菌种鉴定报告。(五)菌种的安全性评价资料(包括毒力试验)。(六)菌种的保藏方法。(七)对经过驯化、诱变的菌种,应提供驯化、诱变的方法及驯化剂、诱变剂等资料。(八)以死菌和/或其代谢产物为主要功能因子的保健食品应提供功能因子或特征成分的名称和检测方法。(十一)使用《可用于保健食品的益生菌菌种名单》之外的益生菌菌种的,还应当提供菌种具有功效作用的研究报告、相关文献资料和菌种及其代谢产物不产生任何有毒有害作用的资料。当注册的产品工艺是购买活菌冻干粉混合、灌装过程,上述资料可以由活菌种冻干粉原料供应商提供复印件(加盖原料供应商公章),并提供购销凭证。[b][b]5.4益生菌产品要求[/b](一)[color=#333333]能够促进肠道菌群生态平衡,对人体起有益作用的微生态产品。[/color](二)[color=#333333]必须安全可靠,即食用安全,无不良反应[/color][color=#333333]。[/color][/b](三)不提倡以液态形式生产益生菌类保健食品活菌产品。[b](四)活菌类益生菌保健食品在其保质期内活菌数目不得少于10[sup]6[/sup]cfu/mL(g)。[/b](五)益生菌类保健食品如需在特殊条件下保存,应在标签和说明书中标示。[b][b]6.小结[/b][/b]从益生菌首次被定义至今,不到百年的时间里,益生菌这一产业迅猛发展,菌种开发、产品研究等都取得了长足的进步。虽然我国对微生态这一领域研究起步较晚于国外,核心菌种也长期依赖于进口,但令人欣慰的是由内蒙古大学张和平教授带领的科研团队从酸马奶中筛分得到的干酪乳杆菌Zhang、乳双歧杆菌V9、植物乳杆菌P-8 等35 株乳酸菌已经实现了产业化,并且广泛应用于食品工业、健康医疗、畜牧养殖和农业种植等领域。部分产品在国内多家三甲医院已经投入到临床应用。在解决肠道菌群失衡、抵抗力差等方面都有较好效果。随着人们对健康生活的愈加重视,我国益生菌市场迅速发展。如何规范益生菌产品市场、如何充分利用益生菌菌种提高产品价值、如何结合高新技术提高益生菌的生物利用率等等都成为了我国益生菌市场亟待解决的问题。
[color=#333333]益生菌微胶囊就是利用合适的囊材把菌体包裹住,使之与外部隔绝,以达到保护的目的。[/color][color=#333333]微胶囊根据其工艺的不同分为膜壳型和镶嵌型。[/color][color=#333333]膜壳型即是在囊心外包裹囊材形成的微胶囊.而镶嵌型则是由囊心和囊材互相镶嵌而成。[/color][color=#333333]微胶囊有各种形状,如球形、葡萄串形、不规则形等。[/color]益生菌制品质量最重要的标志之一是活菌数,特别是对那些单纯以活菌数为惟一指标的产品来说更为重要。益生菌中应用最多的是双歧杆菌和乳酸菌等,它们在产品保存中极易失活,如何延长保存期成了这类产品的一大难题。国内外都在试图通过基因改造或耐酸耐氧菌株的筛选等来提高菌种对酸和氧的抵抗能力 在工艺技术上,通过微胶囊使菌与氧和酸等不利因素隔离,以提高菌的存活率。