方法彩色光度计

752型分光光度计为紫外光栅分光光度计，测定波长200nm～800nm。 1.结构原理 752型分光光度计由光源室、单色器、样品室、光电管暗盒、电子系统及数字显示器等 部件组成，仪器的工作原理如图1所示。 仪器内部光路系统如图2所示。 从钨灯或氢灯发出的连续辐射经滤色片选择聚光镜聚光后投向单色器进狭缝，此狭缝正好位 于聚光镜及单色器内准直镜的焦平面上，因此进入单色器的复合光通过平面反射镜反射及准 直镜变成平行光射向色散光栅。光栅将入射的复合光通过衍射作用形成按照一定顺序均匀排 列的连续单色光谱，此时单色光谱重新返回到准直镜，然后通过聚光原理成像在出射狭缝上 。出射狭缝选出指定带宽的单色光通过聚光镜落在试样室被测样品中心，样品吸收后透射的 光经光门射向光电管阴极面。根据光电效应原理，会产生一股微弱的光电流。此光电流经电 流放大器放大，送到数字显示器，测出透光率或吸光度，或通过对数放大器实现对数转换， 显示出被测样品的浓度C值。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=91635]752型分光光度计结构原理及使用方法.doc[/url]

请问哪里可以校正以下仪器：爱丽色色彩色差计，美能达公光光度计、密度仪（测菲林网点密度用）

[b][b][color=#008000]设计原理[/color][color=#008000]:[/color][/b][/b]紫外可见分光光度计是基于紫外可见分光光度法原理，利用物质分子对紫外可见光谱区的辐射吸收来进行分析的一种分析仪器。主要由光源、单色器、吸收池、检测器和信号处理器等部件组成。光源的功能是提供足够强度的、稳定的连续光谱。紫外光区通常用氢灯或氘灯。见光区通常用钨灯或卤钨灯。单色器的功能是将光源发出的复合光分解并从中分出所需波长的单色光。色散元件有棱镜和光栅两种。可见光区的测量用玻璃吸收池，紫外光区的测量须用石英吸收池。检测器的功能是通过光电转换元件检测透过光的强度，将光信号转变成电信号。常用的光电转换元件有光电管、光电倍增管及光二极管阵列检测器。分光光度计的分类方法有多种：按光路系统可分为单光束和双光束分光光度计；按测量方式可分为单波长和双波长分光光度计；按绘制光谱图的检测方式分为分光扫描检测与二极管阵列全谱检测。[align=left]可见分光光度计（又名可见光度计、分光光度计）是可见光分光光度法是采用新型单片机技术，开发出能够进行定量测量（标准曲线测量，可对物质进行浓度直读）；OD值直接测量（吸光度、透过率和能量等直读）；动力学测试（测出物质浓度随时间变化OD值的变化）；光谱扫描（可以对某一种物质进行全波段扫描，分析物质的特征波长，判断实验过程的误差）；多波长测试（可以对物质同时进行多个波长的测试，分析物质的相关特性）；还有可以进行DNA蛋白质测试、总磷总氮测试、重金属测试、农药残留测试、食品安全检测、热力发电金属离子测试等。[/align] [b][color=#008000]波长范围[/color][/b]可见分光光度计的波长适用范围一般从350nm左右开始到1100nm左右，紫外可见分光光度计的波长适用范围一般从190nm到1100nm。从这点区别上看就是波长的适用范围不一样，紫外可见分光光度计多了从190到350nm左右这段波长。[b][color=#008000]光源不同[/color][/b]可见分光光度计的光源一般只用钨灯，而紫外可见分光光度计是用钨灯 氘灯两个光源，同时还多了这两个光源灯的切换部件。这是因为钨灯的光谱范围主要在可见到近红外这段，氘灯主要在紫外端。也正是因为光源的不一样，紫外可见分光光度计也多了一个专门提供氘灯工作的氘灯电源了。[b][b][color=#008000]光学器件不同[/color][/b][/b]由于玻璃能吸收紫外波，而对可见到近红外端有比较好的透过性，所以可见分光光度计的一些光学部件可以使用玻璃，而紫外可见分光光度计就不能使用玻璃部件，一般使用石英光学部件。同时由于这个原因，在比色皿的选择上也就有不同了，可见分光光度计可以使用玻璃制的比色皿，而紫外可见分光光度计一般使用石英制的比色皿了。 [b][color=#008000]接收器不同[/color][/b]由于紫外可见分光光度计多了紫外波，所以在接收器的选择上也就不一样了。多了对紫外波的灵敏响应功能，这类接收器的价格就比可见分光光度计的接收器贵了很多了。

分光光度计是利用物质对光的选择性吸收的特性，以较纯的单色光作为入射光，测定物质对光的吸收，从而对物质进行定性或定量分析的仪器。在使用过程中常常会出现测量误差，这些误差又是如何产生的呢？一、仪器本身性能带来的误差1、复色光对比耳定律的偏离比耳定律成立的前提条件是入射光是单色光，但是精度再高的仪器，即使是双单色器的分光光度计，也只能获得近乎单色的光，无法获得纯单色光，它仍然含有狭窄光通带，具有复色光的性质。而复色光会导致比耳定律的正或负偏离。固定狭缝的紫外分光光度计光谱带宽一般为1nm或2nm，可调狭缝的可以做到0.1nm；可见分光光度计带宽6nm、snm，甚至十几纳米。光谱带宽应该是越小越好，但是随着光谱分辨率的提高，仪器的灵敏度降低，所以选择仪器时要综合考虑各种条件的影响。当溶液浓度较小且单色光较纯时，可近似认为符合比耳定律。2、杂散光的影响杂散光是指进入检测器的处于待测波长光谱带宽范围外的其他波长组分，它是光谱测量中误差的主要来源。产生原因有：分光光度计的色散元件、反射镜、透镜及单色器内壁灰尘等。在分光光度计工作波段边缘波长处，由于单色器透光率、光源辐射强度、检测器灵敏度都较低，杂散光的影响更为显著。杂散光限制仪器的分析上限可引起严重的测量误差，实际工作中，在定量分析时，一般在吸收峰或其附近处测量样品吸光度，如果在分析波长处含有杂散光，这时样品的透光率较小，而杂散光大部分透过，使测量吸光度低于真实吸光度。3、仪器噪声对测t的影响仪器噪声也是仪器的一个重要指标，它表征仪器做稀溶液的能力。是叠加在待测量的分析信号中的不需要的信号，扫描100%T和0%T线，可观察到分光光度计的绝对噪声水平，如果仪器噪声较大，会掩盖较小的测量信号，一般用噪音的二倍来表示仪器的灵敏度。4、波长和吸光度准确度样品的每一个值都是在一定的波长下测得的，如果波长误差很大，测出的值肯定不准。吸光度准确度也是用户对仪器的直接要求，更应引起足够的重视。国家计量检定规程规定双光束紫外可见分光光度计透射比准确度为A级士0.6%， B级土1.0%。二、测量条件的选择1 参比溶液和溶剂的选择分光光度计的测量实际上是以通过参比池的光强度作为入射光强度来测定试样的吸光度，先调节仪器使透过参比池溶液的吸光度为零，然后让同一束光通过样品，使得吸光度比较真实地反映待测物质的浓度，所以参比溶液的选择非常重要。如果仅有待测物质与显色剂的反应产物有吸收，可用纯溶剂或蒸馏水作参比溶液。如果显色剂有颜色，并在测定波长下有吸收，则用显色剂溶液作参比溶液，所加人显色剂及其它试剂的量，与试样中的加入量应一致。如果样品中其它组分本身的颜色对测定有干扰，而所用显色剂没颜色，则用不加显色剂的样品溶液作参比液。正确选择合适的溶剂，对提高分析的准确度起重要作用。为减小溶剂中杂质的影响，应选择高纯度的溶剂；溶剂应不与待测物质发生化学反应；待测物在溶剂中要有一定的溶解度；在测定的波长范围内，溶剂本身没有吸收，注意常用溶剂的最短可用波长；当用挥发性大的溶剂时，测量过程中吸收池应加盖。2 测试波长的选择当用分光光度计对溶液进行测定时，首先需要选择合适的测量波长。选择的依据是该被测溶液的吸收曲线。在一般情况下，我们总是选择最大吸收波长作为测量波长，这样可以提高灵敏度。而在有些情况下最大吸收峰很尖锐、吸收过大或附近有干扰存在，就不能选最大吸收波长，而必须在保证有一定灵敏度的情况下，选择吸收曲线中的其它波长进行测定(曲线较平坦处对应的波长)，以消除干扰。绘制吸收曲线是正确选择波长的有效手段和方法。

光度计是每个化学分析实验室必备的常用仪器设备之一，在各种定量和定性分析中得到了广泛的应用。 　 　分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。 而分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。 常用的波长范围为：(1)200～400nm的紫外光区,(2)400～760nm的可见光区,(3)2.5～25μm（按波数计为4000cm～400cm）的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。 单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比，其关系如下式： 　　A=-log(I/I。)=-lgT=kLc 　　式中 :A 为吸收度； 　　I。为入射的单色光强度； 　　I 为透射的单色光强度； 　　T 为物质的透射比； 　　k 为吸收系数； 　　L 为被分析物质的光程 　　c 为物质的浓度 　　 物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后,可用同样条件将该供试品配成溶液，测定其吸收度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收,但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多，且常使用单色光纯度较差的仪器，故测定时应用标准品或对照品同时操作。 　　 分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。仪器主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。

1.1复色光对比耳定律的偏离比耳定律成立的前提条件是人射光是单色光，但是精度再高的仪器，即使是双单色器的分光光度计，也只能获得近乎单色的光，无法获得纯单色光，它仍然含有狭窄光通带，具有复色光的性质。而复色光会导致比耳定律的正或负偏离。固定狭缝的紫外分光光度计光谱带宽一般为1nm或2nm，可调狭缝的可以做到0.Inm；可见分光光度计带宽6nm、snm，甚至十几纳米。光谱带宽应该是越小越好，但是随着光谱分辨率的提高，仪器的灵敏度降低，所以选择仪器时要综合考虑各种条件的影响。当溶液浓度较小且单色光较纯时，可近似认为符合比耳定律。

1复色光对比耳定律的偏离比耳定律成立的前提条件是人射光是单色光，但是精度再高的仪器，即使是双单色器的分光光度计，也只能获得近乎单色的光，无法获得纯单色光，它仍然含有狭窄光通带，具有复色光的性质。而复色光会导致比耳定律的正或负偏离。固定狭缝的紫外分光光度计光谱带宽一般为1nm或2nm，可调狭缝的可以做到0.Inm；可见分光光度计带宽6nm、snm，甚至十几纳米。光谱带宽应该是越小越好，但是随着光谱分辨率的提高，仪器的灵敏度降低，所以选择仪器时要综合考虑各种条件的影响。当溶液浓度较小且单色光较纯时，可近似认为符合比耳定律。2杂散光的影响杂散光是指进人检测器的处于待测波长光谱带宽范围外的其他波长组分，它是光谱测量中误差的主要来源。产生原因有:分光光度计的色散元件、反射镜、透镜及单色器内壁灰尘等。在分光光度计工作波段边缘波长处，由于单色器透光率、光源辐射强度、检测器灵敏度都较低，杂散光的影响更为显著。杂散光限制仪器的分析上限可引起严重的测量误差，实际工作中，在定量分析时，一般在吸收峰或其附近处测量样品吸光度，如果在分析波长处含有杂散光，这时样品的透光率较小，而杂散光大部分透过，使测量吸光度低于真实吸光度。3仪器噪声对测t的影响仪器噪声也是仪器的一个重要指标，它表征仪器做稀溶液的能力。是叠加在待测量的分析信号中的不需要的信号，扫描100%T和0%T线，可观察到分光光度计的绝对噪声水平，如果仪器噪声较大，会掩盖较小的测量信号，一般用噪音的二倍来表示仪器的灵敏度。4波长和吸光度准确度样品的每一个值都是在一定的波长下测得的，如果波长误差很大，测出的值肯定不准。吸光度准确度也是用户对仪器的直接要求，更应引起足够的重视。国家计量检定规程规定双光束紫外可见分光光度计透射比准确度为A级士0.6%， B级土1.0%。

[color=#00008B]分光光度计简单原理：由光源产生复合光，通过色散系统，分解为波长连续的单色光，单色光通过生化样品时，生化样品会吸收单色光，通过检测出射光的强度S和入射光的强度R，透射率T=S/R,如果连续调整波长（即扫描），就可以得到在生化样品关于波长分布的透射率，其透射率关于波长的分布和样品的成分和浓度相关。从而判断样品的成分，浓度。可见分光光度计是以全新的设计理念,博采众家之长,充满现代气息的外型设计,卓越的数据处理和控制功能为该仪器鲜明的特点[/color]

分光光度定义　　分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。常用的波长范围为：(1)200～400nm的紫外光区,(2)400～760nm的可见光区,(3)2.5～25μm（按波数计为4000cm～400cm）的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。关系式　　单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比，其关系如下式： 　　A=-log(I/I。)=-lgT=kLc 　　式中 :A 为吸收度； 　　I。为入射的单色光强度； 　　I 为透射的单色光强度； 　　T 为物质的透射比； 　　k 为吸收系数； 　　L 为被分析物质的光程 　　c 为物质的浓度 　　物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后,可用同样条件将该供试品配成溶液，测定其吸收度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收,但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多，且常使用单色光纯度较差的仪器，故测定时应用标准品或对照品同时操作。 结构　　分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。仪器主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。

一：吸光光度法基于物质对不同波长的光波具有选择性吸收的能力而建立起来的分析方法。（一） 光线：光线的波长： 200nm-400nm 紫外线*400-750nm可见光*750nm 红外线光具有波粒二相性，波长不同，其能量不同。（二） 物质的吸收光谱及颜色：1． 物质的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收光谱[/color][/url]和原子发射光谱：原子的最外层电子可以选择性吸收特征波长的电磁波成为激发态而产生的光谱称为[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收光谱[/color][/url]。激发态原子恢复到基态，则释放出特征波长的光子，形成原子发射光谱。不同的溶液其光谱不同，即不同溶液对不同波长的光其吸收能力不同，对某一特定波长的光存在吸收峰。2． 可见光由赤橙黄绿青兰紫等能量不同的光线组成，当可见光穿过某一溶液时，由于特定波长的光被吸收而使溶液呈现相应的颜色。（如CuSO4由于吸收了可见光中的黄光(600nm)而成蓝色）不同颜色的溶液对不同波长的光其吸收能力不同。（三） 光吸收的基本定律（Lambert-Beer 定律）：一束平行单色光（Io）通过有色的透明溶液时，一部分的光可以透过溶液（It），另一部分被溶液吸收（Ia）,还有一部分被器皿表面反射（Ir）,则：Io=It+Ia+Ir 。那么，该溶液透光率为: T = It / Io 。1． Lambert 定律：设有一束平行单色光,通过液层厚度为b 的均匀透明溶液,则溶液对光的吸收能力:A=Ig(Io/It)=Ig(1/T)=k2bk2 为吸光系数，为常数。与入射光波长、溶液性质、浓度和温度有关；A 为吸光度（又称光密度O.D 或消光度E），当入射光波长、吸光溶液的浓度和温度一定时，A 与b 成正比。2． Beer 定律：设有一束平行单色光,通过浓度为c 的均匀透明溶液,则溶液对光的吸收能力:A=Ig(Io/It)=Ig(1/T)=k4ck2 为常数。由Beer 定律可知：当入射光波长、吸光溶液的厚度和温度一定时，A 与c 成正比。3． Lambert-Beer 定律：综合1.2.得： A=Kbc ,即：当入射光波长、吸光溶液的性质和温度一定时，A 与b、c 成正比。（四） 吸光光度法的基本原理：1、 不同物质，由于其分子结构和原子组成不同，故对光的吸收光谱不同（如：CuSO4），在测定不同颜色的物质浓度时要用最大吸收的波长的入射光，这样测量的灵敏度最高。2、 同一种物质，若浓度不同，则对同一波长的入射光的吸收能力（吸光度）也不同，且成正比关系。3、 应此，利用特定波长的单色光（通常用最大吸收波长的入射光）照射不同浓度的某一溶液时，所得的吸光度大小应与溶液浓度呈线性关系，故可利用该线性关系通过计算或查标准曲线来求得未知溶液的浓度。（五） 吸光光度法特点：1． 灵敏度高：mg%级、甚至ug%级。2． 准确度高：误差2-5%3． 操作简便、快速，仪器设备不复杂，价格低廉，故应用广泛。二 ：分光光度计的使用：（一） 分光光度计的基本原理：利用吸光光度法的原理，采用棱镜或光栅等分光器获得纯度较高的单色光来测量未知溶液的浓度的方法。（二） 常用分光光度计：可见光、紫外、红外分光光度计，荧光分光光度计，火焰分光光度计等。（三） 722 型分光光度计的结构（略）（四） 722 型分光光度计的使用及注意事项1、 插上插头，接通电源，打开暗箱盖，预热20min。* 注意：分光光度计在接通电源而不用时，必须打开暗箱盖，以免光电管老化。2、 将准备好的试剂倒入比色杯中，用吸水纸擦去比色杯外侧水珠，并依次放入比色杯架中。* 注意：手拿比色杯毛面，试剂倒入杯中满2/3 即可，不得将比色杯放在仪器上。3、 调节所需波长，灵敏度调至“1”，选择旋钮至“T”。4、 调“0”：打开暗箱盖，用调“0”旋钮调节。5、 调“100%”：盖上暗箱盖，用调“100%”旋钮调节，让光线通过“空白管”。6、 重复调“0”和调“100%”数次。* 注意：若调不到“0”和“100%”，可将灵敏度调至“2”或更高，不得用力强行旋转旋钮，以免损坏。7、 将选择选扭由“T”调至“A”，此时读数应由“100”至“0”，若不为“0”，可用“消光零”旋钮调节。8、 拉动拉杆，分别读取“A 标”和“A 样”。9、 取出比色杯，弃去溶液，洗净晾干，备用。（五） 计算1．利用标准管计算测定物含量：A 样=K 样b 样c 样A 标=K 标b 标c 标因为入射光的波长，溶液性质和温度以及比色杯的厚度都一样，即：K 样=K 标 b 样=b 标所以：A 样/ A 标= c 样/ c 标得：c 样= c 标×A 样/ A 标2． 利用标准曲线进行计算：3． 偏离Lambert-Beer 定律的原因1） 由于非但色光引起的偏离。2） 由于溶液本身原因引起的偏离：① 由于介质不均匀引起的偏离② 由于溶液中化学反应引起的偏离三：实验：CuSO4 浓度的测定C 标= 比色波长=650nm比色结果： A 标= A 样=计算：C 样=C 标*A 样/A 标

1）区别：　　光谱分析仪：用于测量发光体的辐射光谱，即发光体本身的指标参数。 　　分布光度计：用于产生单色光，并对某物质对该单色光的吸收进行分析。即 使用某种发光体通过单色仪产生某一波长的单色光，并将该单色光照射于被测量物质上，再通过光电传感器接收照射在物质后的光信号，根据此光信号分析该物质。2）应用：　　光谱分析仪：照明灯具厂家（节能灯\LED\白炽灯\荧光粉\紫外光源\红外光源等等的发光参数）。　　分布光度计：医药环境等的物质检定（纯度检验\推测化合物的分子结构\氢键强度的测定\络合物组成及稳定常数的测定等等）。3）精度：　　与仪器的配置有关，无法做简单比较，包括单色仪的分光精度\光电传感器的灵敏度等\电路放大等等。

大家好，众所周知，按光路分，紫外可见光分光光度计的类型无外乎三种：单光束分光光度计，单波长双光束分光光度计，双波长双光束分光光度计。单光束分光光度计结构简单，只有检测池，没有参比池，复合光经单色器过滤出想要的特定波长的光进行样品含量的测定。优点：操作简单，光强度大，光信噪比高。 缺点：不能抵消因杂散光、光源波动、电子学的噪声等对测试结果的影响。单波长双光束分光光度计结构稍微复杂，一般分为三种，一种为有两束光，一束光通过比色皿，一束光不通过比色皿，有两只光电转换器。一种为两束单色光，两只比色皿，一只光电转换器，一种为两束单色光，两只比色皿，两只光电转换器。问题出来了，为什么会有光电转换器数量的不同呢？ 两只光电转换器会存在不一致，导致测量误差，那为什么会有存在的必要呢？大家知道，如果是一只光电转换器的光度计，在最后的计算时，两束光的比值做为测定结果显示（一般透射光/反射光）那么两只光电转换器的光度计在计算时也是这样吗？其实会导致结果的误差的。我个人理解是不是跟光的强度有关，双光电转换器可以增加光的强度，提高检测的灵敏度。

分光光度计是用不连续的波长采样反射物体或透射物体的一种测量仪器。由于不同物体分子的结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同，因此，每种物体都具有特定的吸收光谱。能从含有各种波长的混合光中，将每一种单色光分离出来，并测量其强度的仪器叫做分光光度计。分光光度计所使用的波长范围不同，可分为紫外光区，可见光区、红外光区以及全波段分光区。因此，分光光度计可分为可见光分光光度计。紫外／可见光分光光度计、荧光分光光度计、红外分光光度计等。无论是哪一类分光光度计主要都是由光源、单色器、狭缝、吸收器检测器系统5部分组成的。分光光度计通常提供用白光采样的照明光源。以及包括扩散后折射的反射光，而且允许测量在不连续波长时反射的总光量。分光光度计的准确度是由很多因素决定的，但是最重要的因素之一是光谱波段（即在所测量的光谱中每点波长的范围）。使用分光光度计可以绘制吸收光谱曲线，具有尖峰分光光度法曲线的介质要求分光光度计能通过狭窄的波段，典型的波长间隔是5nm，比较便宜的仪器通常能通过1Onm或20nm的波段。

紫外-可见分光光度计的类型很多，但可归纳为三种类型：单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。　　单光束分光光度计　　其光路示意图如前图(紫外-可见分光光度计的基本结构图)所示，经单色器分光后的一束平行光，轮流通过参比溶液和样品溶掖，以进行吸光度的测定。这种类型的分光光度计结构简单，操作方便，维修容易，适用于常规分析。国产722型，751型、724型、英国SP500型以及BackmanDU-8型等均属于此类光度计。　　双光束分光光度计　　其光路示意如下图所示，经单色器分光后经反射镜(M1)分解为弧度相等的两束光，一束通过参比池，另一束通过样品池。光度计能自动比较两束光的强度，此比值即为试样的透射比，经对数变换将它转换成吸光度并作为波长的函数记录下来。双光束分光光度计一般都能自动记录吸收光谱曲线。由于两束光同时分别通过参比池和样品他，还能自动消除光源强度变化所引起的误差。这类仪器有国产710型、730型和740型，日立220系列，岛津-210，英国UNICAMSP-700等等。　　双波长分光光度计　　其基本光路如下图所示。由同一光源发出的光被分成两束，分别经过两个单色器，得到两束不同波长的单色光;再利用切光器使两束光以一定的频率交替照射同一吸收池，然后经过光电倍增管和电子控制系统，最后由显示器显示出两个波长处的吸光度差值ΔA(ΔA=A1-A2)。　　双波长分光光度计的优点：对于多组分混合物、混浊试样(如生物组织液)的分析，以及存在背景于扰或共存组分吸收干扰的情况下，利用双波长分光光度法，往往能提高方法的灵敏度和选择性。利用双波长分光光度计，能获得导数光谱。通过光学系统转换，使双波长分光光度计能很方便地转化为单波长工作方式。如果能在两波长处分别记录吸光度随时间变化的曲线，还能进行化学反应动力学研究。

[color=#b22222]分光光度计[/color]是利用物质对光的选择性吸收的特性，以较纯的单色光作为入射光，测定物质对光的吸收，从而对物质进行定性或定量分析的仪器。在使用过程中常常会出现测量误差，这些误差又是如何产生的呢?[align=center][img]http://shop.superyears.com/static/uploads/editor/img/1513044388.jpg[/img][/align][color=#daa520][b]1仪器本身性能带来的误差[/b][/color][b]1.1复色光对比耳定律的偏离[/b]比耳定律成立的前提条件是人射光是单色光，但是精度再高的仪器，即使是双单色器的分光光度计，也只能获得近乎单色的光，无法获得纯单色光，它仍然含有狭窄光通带，具有复色光的性质。而复色光会导致比耳定律的正或负偏离。固定狭缝的紫外分光光度计光谱带宽一般为1nm或2nm，可调狭缝的可以做到0.Inm [color=#b22222]可见分光光度计[/color]带宽6nm、snm，甚至十几纳米。光谱带宽应该是越小越好，但是随着光谱分辨率的提高，仪器的灵敏度降低，所以选择仪器时要综合考虑各种条件的影响。当溶液浓度较小且单色光较纯时，可近似认为符合比耳定律。[b]1.2杂散光的影响[/b]杂散光是指进人检测器的处于待测波长光谱带宽范围外的其他波长组分，它是光谱测量中误差的主要来源。产生原因有:分光光度计的色散元件、反射镜、透镜及单色器内壁灰尘等。在[color=#b22222]分光光度计[/color]工作波段边缘波长处，由于单色器透光率、光源辐射强度、检测器灵敏度都较低，杂散光的影响更为显著。杂散光限制仪器的分析上限可引起严重的测量误差，实际工作中，在定量分析时，一般在吸收峰或其附近处测量样品吸光度，如果在分析波长处含有杂散光，这时样品的透光率较小，而杂散光大部分透过，使测量吸光度低于真实吸光度。[b]1.3仪器噪声对测t的影响[/b]仪器噪声也是仪器的一个重要指标，它表征仪器做稀溶液的能力。是叠加在待测量的分析信号中的不需要的信号，扫描100%T和0%T线，可观察到[color=#b22222]分光光度计[/color]的绝对噪声水平，如果仪器噪声较大，会掩盖较小的测量信号，一般用噪音的二倍来表示仪器的灵敏度。[b]1.4波长和吸光度准确度[/b]样品的每一个值都是在一定的波长下测得的，如果波长误差很大，测出的值肯定不准。吸光度准确度也是用户对仪器的直接要求，更应引起足够的重视。国家计量检定规程规定双光束[color=#b22222]紫外可见分光光度计[/color]透射比准确度为A级士0.6%， B级土1.0%。[color=#daa520][b]2测量条件的选择[/b][/color][b]2.1参比溶液和溶荆的选择[/b][color=#b22222]分光光度计[/color]的测量实际上是以通过参比池的光强度作为人射光强度来测定试样的吸光度，先调节仪器使透过参比池溶液的吸光度为零，然后让同一束光通过样品，使得吸光度比较真实地反映待测物质的浓度，所以参比溶液的选择非常重要。如果仅有待测物质与显色剂的反应产物有吸收，可用纯溶剂或蒸馏水作参比溶液。如果显色剂有颜色，并在测定波长下有吸收，则用显色剂溶液作参比溶液，所加人显色剂及其它试剂的量，与试样中的加入量应一致。如果样品中其它组分本身的颜色对测定有干扰，而所用显色剂没颜色，则用不加显色剂的样品溶液作参比液。正确选择合适的溶剂，对提高分析的准确度起重要作用。为减小溶剂中杂质的影响，应选择高纯度的溶剂 溶剂应不与待测物质发生化学反应 待测物在溶剂中要有一定的溶解度 在测定的波长范围内，溶剂本身没有吸收，注意常用溶剂的最短可用波长 当用挥发性大的溶剂时，测量过程中吸收池应加盖。[b]2.2测试波长的选择[/b]当用[color=#b22222]分光光度计[/color]对溶液进行测定时，首先需要选择合适的测量波长。选择的依据是该被测溶液的吸收曲线。在一般情况下，我们总是选择最大吸收波长作为测量波长，这样可以提高灵敏度。而在有些情况下最大吸收峰很尖锐、吸收过大或附近有干扰存在，就不能选最大吸收波长，而必须在保证有一定灵敏度的情况下，选择吸收曲线中的其它波长进行测定(曲线较平坦处对应的波长)，以消除干扰。绘制吸收曲线是正确选择波长的有效手段和方法。[color=#daa520][b]3、分光光度计的检验小妙招[/b][/color][b]波长准确度的检验[/b][color=#b22222]分光光度计[/color]在使用过程中，由于机械振动、温度变化、灯丝变形、灯座松动或更换灯泡等原因，经常会出现刻度盘上的读数与实际通过溶液的波长不符合的现象，因而导致仪器灵明度降低，影响测定结果的精度，需要进行检验。检验波长准确度最简单的方法是用干涉滤光片或镨钕滤光片测量仪器的吸收峰值, 如果测出的值与滤光片标准值之差超出规程规定, 则需要进行波长调节。[b]透射比正确度的检验[/b]用透射比标准值分别为10 %、20 %、30 %左右的光谱中性滤光片，可见光区分别在440、546、635nm波长处，以空气为参比，分别测量各滤光片的透射比，紫外光区用重铬酸钾溶液分别在235、257、313、350nm波长处，以高氯酸溶液为参比，测量其透射比。[b]稳定度的检验[/b]在零点不受光的条件下，用零点调节器将仪器调至零点，观察3分钟读取透射比的变化，即为零点稳定性。在仪器测量范围两端向中间靠10nm处，调节零点后，盖上样品室盖(打开光门)，使光电管受光，调节透射比为95%(数显仪器调至100%)察3分钟读取透射比的变化，为光电流稳定性。[b]光的检验[/b][color=#b22222]可见分光计[/color]棱镜式仪器在420nm处，光栅式仪器在360nm处，紫外分光计在220nm处分别用符合规定的截止滤光片，以空气为参比，测量其透射比值，即为仪器在相应波长下的杂散辐射率。

紫外-可见分光光度计由5个部件组成：①辐射源。必须具有稳定的、有足够输出功率的、能提供仪器使用波段的连续光谱，如钨灯、卤钨灯（波长范围350～2500纳米），氘灯或氢灯（180～460纳米），或可调谐染料激光光源等。②单色器。它由入射、出射狭缝、透镜系统和色散元件（棱镜或光栅）组成，是用以产生高纯度单色光束的装置，其功能包括将光源产生的复合光分解为单色光和分出所需的单色光束。③试样容器，又称吸收池。供盛放试液进行吸光度测量之用，分为石英池和玻璃池两种，前者适用于紫外到可见区，后者只适用于可见区。容器的光程一般为0.5～10厘米。④检测器，又称光电转换器。常用的有光电管或光电倍增管，后者较前者更灵敏，特别适用于检测较弱的辐射。近年来还使用光导摄像管或光电二极管矩阵作检测器，具有快速扫描的特点。⑤显示装置。这部分装置发展较快。较高级的光度计，常备有微处理机、荧光屏显示和记录仪等，可将图谱、数据和操作条件都显示出来。常用仪器类型则有：单波长单光束直读式分光光度计，单波长双光束自动记录式分光光度计和双波长双光束分光光度计。file:///C:/Documents%20and%20Settings/Administrator/Application%20Data/Tencent/Users/530712138/QQ/WinTemp/RichOle/4L@W4W7{F$_W8()09F8_M89.jpg◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆列举部分仪器的个别参数，供参考：技术参数：1.光源 ：氘灯、钨灯；2.检测器：1024二极管阵列检测器、光电倍增管3.波长范围：190～1100nm；4.波长准确度：优于0.2nm（氘灯486.0nm和656.1nm特征谱线）5.波长重复性：优于0.02nm6.光谱带宽：1nm7.分辨率:﹥1.68.杂散光：0.03%T（340nm,NaNO2溶液ASTM方法）9.光度精确度：0.005A(440、590nm处吸光度值1.0A中性密度滤光片)；10.基线平滑度：±0.001Abs；11.稳定性：±0.001Abs/h；〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓分割线〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓请您来解析：1、二极管阵列检测器的优势有哪些？你觉得是否有必要配置该检测器呢？2、杂散光的参数是体现什么性能？3、单光束和双光束在使用上有什么性能差别？4、紫外可见分光光度计在使用和维护上有哪些问题是容易忽视的？5、采购一台紫外可见分光光度计，你都会关心哪些参数？6、仪器验收，都做了哪些参数？如何做？欢迎大家参与讨论，补充自己想交流的参数，说说自己的认识或者提出自己的疑问！！！往期回顾：【参数解读】热解析仪的技术参数解读与使用

紫外可见分光光度计的组成和应用紫外-可见分光光度计由5个部件组成：①辐射源。必须具有稳定的、有足够输出功率的、能提供仪器使用波段的连续光谱，如钨灯、卤钨灯（波长范围350～2500纳米），氘灯或氢灯（180～460纳米），或可调谐染料激光光源等。②单色器。它由入射、出射狭缝、透镜系统和色散元件（棱镜或光栅）组成，是用以产生高纯度单色光束的装置，其功能包括将光源产生的复合光分解为单色光和分出所需的单色光束。③试样容器，又称吸收池。供盛放试液进行吸光度测量之用，分为石英池和玻璃池两种，前者适用于紫外到可见区，后者只适用于可见区。容器的光程一般为0.5～10厘米。④检测器，又称光电转换器。常用的有光电管或光电倍增管，后者较前者更灵敏，特别适用于检测较弱的辐射。近年来还使用光导摄像管或光电二极管矩阵作检测器，具有快速扫描的特点。⑤显示装置。这部分装置发展较快。较高级的光度计，常备有微处理机、荧光屏显示和记录仪等，可将图谱、数据和操作条件都显示出来。仪器类型则有：单波长单光束直读式分光光度计，单波长双光束自动记录式分光光度计和双波长双光束分光光度计。应用范围包括：①定量分析，广泛用于各种物料中微量、超微量和常量的无机和有机物质的测定。②定性和结构分析，紫外吸收光谱还可用于推断空间阻碍效应、氢键的强度、互变异构、几何异构现象等。③反应动力学研究，即研究反应物浓度随时间而变化的函数关系，测定反应速度和反应级数，探讨反应机理。④研究溶液平衡，如测定络合物的组成，稳定常数、酸碱离解常数等。

分光光度计及使用维护中的注意事项 一、分光光度计及其分类 利用分光光度法或技术工作的仪器叫分光光度计,可分为如下几类: 一、 分光光度计检定(测试)的主要项目对分析结果的影响 1)波长准确度 分光光度法原理要求照射在样品池上的单色光必须对应于样品吸收光谱中的某一个吸收峰的波长。由于仪器的制造和调整误差，单色光的实际波长与仪器的波长读数值间都存在一定的误差。样品中绝大部分的主要吸收峰都有一定的宽度，对波长准确度要求允许宽些。但是，当吸收峰宽度较小，而且吸收峰两侧边缘比较陡直，此时波长准确度的影响就必须引起注意。 2)透射比（吸光度）准确度 很显然,透射比或吸光度的误差越大,测试结果的可信性越差,从而影响到测试数据的准确性. 3)杂散光 杂散光是由于光学元件制造误差以及光学和机械零件表面的漫反射形成的。杂散光是分析样品的非吸收光，随着样品浓度的增加，杂散光的影响也随之增大，将给分析结果带来一定的误差。在紫外的短波区域光源强度和检测器的灵敏度均明显减弱，杂散光的影响更不能忽视。因此，杂散光的大小也是仪器性能的一项重要指标。 二、与分光光度计正确使用和维护有关的几个注意事项 （在使用仪器前，必须仔细阅读其使用说明书） 1）若大幅度改变测试波长，需稍等片刻，等灯热平衡后，重新校正“0”和“100%”点。然后再测量。 2）指针式仪器在未接通电源时，电表的指针必须位于零刻度上。若不是这种情况，需进行机械调零。 3）比色皿使用完毕后，请立即用蒸馏水冲洗干净，并用干净柔软的纱布将水迹擦去，以防止表面光洁度被破坏，影响比色皿的透光率。 4）操作人员不应轻易动灯泡及反光镜灯，以免影响光效率。 5）WFZ800-DA、756型等分光光度计，由于其光电接收装置为光电倍增管，它本身的特点是放大倍数大，因而可以用于检测微弱光电信号，而不能用来检测强光。否则容易产生信号漂移，灵敏度下降。针对其上述特点，在维修、使用此类仪器时应注意不让光电倍增管长时间暴露于光下，因此在预热时，应打开比色皿盖或使用挡光杆，避免长时间照射使其性能漂移而导致工作不稳。 6）放大器灵敏度换挡后，必须重新调零。 7）比色杯的配套性问题。比色杯必须配套使用，否则将使测试结果失去意义。在进行每次测试前均应进行比较。具体方法如下；分别向被测的两只杯子里注入同样的溶液，把仪器置于某一波长处，石英比色杯；220nm、700nm装蒸馏水，玻璃比色杯：700nm处装蒸馏水，将某一个池的透射比值调至100%，测量其他各池的透射比值，记录其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范围内则可以配套使用，若超出此范围应考虑其对测试结果的影响。 四、分光光度计操作中容易出现的几个典型故障及其排除方法 1）仪器不能调零。可能原因：a）光门不能完全关闭。解决方法：修复光门部件，使其完全关闭。 b）透过率“100%”旋到底了。解决方法：重新调整“100%”旋钮。c）仪器严重受潮。解决方法：可打开光电管暗盒，用电吹风吹上一会儿使其干燥，并更换干燥剂。d）电路故障。解决方法：送修理部门，检修电路。 2）仪器不能调“100%”。可能原因：a）光能量不够。解决方法：增加灵敏度倍率档位，或更换光源灯（尽管灯还亮）。b）比色皿架未落位。解决方法：调整比色皿架使其落位。 c）光电转换部分老化。解决方法：更换部件。d）电路故障。解决方法：调修电路。 3)测量过程中,“100%”点经常变动。可能原因：a）比色皿在比色皿架中放置的位置不一致，或其表面有液滴。解决方法：用擦镜纸擦干净比色皿表面，然后将其安放在比色槽的左边，上面用定位夹定位。b）电路故障（电压、光电接收、放大电路）。解决方法：送修。 4)数显不稳。可能原因：a）预热时间不够。解决方法：延长预热时间至30分钟左右（部分仪器由于老化等原因，长时间处于工作状态时，也会工作不稳）。b）光电管内的干燥剂失效，使微电流放大器受潮。解决方法：烘烤电路，并更换或烘烤干燥剂。c）环境振动过大、光源附近空气流速大、外界强光照射等。解决方法：改善工作环境。d）光电管、电路等其它原因。解决方法：送修。 五、提高分光光度计透射比检定及使用精度的几种方法 在分光光度计的使用或检定中,透射比(吸光度)的准确度是衡量仪器工作性能的一项重要指标,它的准确程度直接关系到所测数据的可信性及科学性。所以提高此项指标的使用及检定准确度显得尤为重要。下面结合近年来对分光光度计的检定或修理实践,把如何提高透射比的测试及使用精度的几点方法列表叙述如下： 六、小结 综上所述，以下几个问题应引起仪器操作人员注意：1）比色皿架及比色皿在使用中的正确到位问题。有些使用者对这个问题不够重视，因操作不当造成偶然误差，严重影响分析结果。首先，应保证比色皿不倾斜放置。稍许倾斜，就会使参比样品与待测样品的吸收光径长度不一致，还可能使入射光不能全部通过样品池，导致测试比准确度不符合要求。其次，应保证每次测试时，比色皿架推拉到位。若不到位，将影响到测试值的重复性或准确度。最后,还应保证比色皿的清洁度,延长其使用寿命.2）干燥剂的使用问题。干燥剂失效将导致a）数显不稳、无法调“0”点或“100%”点（电路或光电管受潮）。b）反射镜发霉或沾污，影响光效率、杂散光增加。鉴于上述原因，分光光度计的放置地点应远离水池等湿度大的地方、干燥剂应定期更换或烘烤。3）仪器的工作环境。应避免阳光直射、避免强电场、避免与较大功率的电器设备共电、避开腐蚀性气体等。

分光光度计的光源为连续光源，包含任意波长的光。1、如果不要单色器，直接让连续光源照射样品，也会产生吸收吗？2、单色器分光以后得到的单色光，在连续光源里面也有啊，不分光行吗？

国家质检总局23日公布紫外可见分光光度计产品质量国家监督抽查结果，在17批次被抽查产品中，两批次不合格。 本次共抽查了北京、天津、上海、山东等4个省、直辖市17家企业生产的17种紫外可见分光光度计产品。依据《紫外可见分光光度计》JB/T6777-1993、《分析仪器环境试验方法》GB/T11606-2007和经备案现行有效的企业标准及产品明示质量要求，对紫外可见分光光度计产品的波长准确度、波长重复性、透射比准确性、透射比重复性、杂光、外电压变化时引起的透射比变化、基线直线性、漂移、噪声、运输贮存试验等10个项目进行了检验。 抽查发现有1种产品透射比示值误差不符合标准的规定，主要是产品的单色光光路偏离，会导致检验数据出现偏差；有1种产品运输贮存试验不符合标准的规定，主要是产品在高温、低温、交变湿热、碰撞、自由跌落试验后，仪器无法通过自检，不能正常工作。

在实际的分光光度计的制造和使用过程中有很多的盲区，即在使用中和制作过程中不可能达到的： 其一：灯源发出的光是复合光，经过狭缝，再经过光栅分光等步骤，因为受到狭缝和光栅本身的限制，光栅分光不可能达到纯单色光。还有光度计的整体设计问题，光度计不可能没有其它的杂光存在。其二：因为光是直线传播的，在分光光度计制造过程中，灯源发出的光是发散的，经过聚焦镜进行聚焦等直到经过溶液的整体过程中，光是不可能平行的。其三：用户的溶液也不可能是纯净的，也会含有一些杂质，这些对光度的吸收都会存在影响。除以上三个方面的影响外，在实际的光度计应用过程中还会存在其他因素的影响，例如：1、比色皿宽度是否为10mm的标准值；2、测试波长是否准确；3、经过比色皿的光是否垂直；4、程序设计是否存在漏洞等等，都会直接影响到利用琅伯-比尔定律计算出的结果。所以在日常的测试过程中，得出的结果和琅伯-比尔定律有些偏差是很正常的，只是我们关注偏差多少的问题。

分光光度计是利用单色仪或特殊光源提供的特定波长的单色光通过标样和被分析样品，比较两者的光强度来分析物质成分的光谱仪器。

分光光度计及使用维护中的注意事项一、 分光光度计检定(测试)的主要项目对分析结果的影响 1)波长准确度 分光光度法原理要求照射在样品池上的单色光必须对应于样品吸收光谱中的某一个吸收峰的波长。由于仪器的制造和调整误差，单色光的实际波长与仪器的波长读数值间都存在一定的误差。样品中绝大部分的主要吸收峰都有一定的宽度，对波长准确度要求允许宽些。但是，当吸收峰宽度较小，而且吸收峰两侧边缘比较陡直，此时波长准确度的影响就必须引起注意。 2)透射比（吸光度）准确度 很显然,透射比或吸光度的误差越大,测试结果的可信性越差,从而影响到测试数据的准确性. 3)杂散光 杂散光是由于光学元件制造误差以及光学和机械零件表面的漫反射形成的。杂散光是分析样品的非吸收光，随着样品浓度的增加，杂散光的影响也随之增大，将给分析结果带来一定的误差。在紫外的短波区域光源强度和检测器的灵敏度均明显减弱，杂散光的影响更不能忽视。因此，杂散光的大小也是仪器性能的一项重要指标。 二、与分光光度计正确使用和维护有关的几个注意事项 （在使用仪器前，必须仔细阅读其使用说明书） 1）若大幅度改变测试波长，需稍等片刻，等灯热平衡后，重新校正“0”和“100%”点。然后再测量。 2）指针式仪器在未接通电源时，电表的指针必须位于零刻度上。若不是这种情况，需进行机械调零。 3）比色皿使用完毕后，请立即用蒸馏水冲洗干净，并用干净柔软的纱布将水迹擦去，以防止表面光洁度被破坏，影响比色皿的透光率。 4）操作人员不应轻易动灯泡及反光镜灯，以免影响光效率。 5）WFZ800-DA、756型等分光光度计，由于其光电接收装置为光电倍增管，它本身的特点是放大倍数大，因而可以用于检测微弱光电信号，而不能用来检测强光。否则容易产生信号漂移，灵敏度下降。针对其上述特点，在维修、使用此类仪器时应注意不让光电倍增管长时间暴露于光下，因此在预热时，应打开比色皿盖或使用挡光杆，避免长时间照射使其性能漂移而导致工作不稳。 6）放大器灵敏度换挡后，必须重新调零。 7）比色杯的配套性问题。比色杯必须配套使用，否则将使测试结果失去意义。在进行每次测试前均应进行比较。具体方法如下；分别向被测的两只杯子里注入同样的溶液，把仪器置于某一波长处，石英比色杯；220nm、700nm装蒸馏水，玻璃比色杯：700nm处装蒸馏水，将某一个池的透射比值调至100%，测量其他各池的透射比值，记录其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范围内则可以配套使用，若超出此范围应考虑其对测试结果的影响。 三、分光光度计操作中容易出现的几个典型故障及其排除方法 1）仪器不能调零。可能原因： a）光门不能完全关闭。解决方法：修复光门部件，使其完全关闭。 b）透过率“100%”旋到底了。解决方法：重新调整“100%”旋钮。 c）仪器严重受潮。解决方法：可打开光电管暗盒，用电吹风吹上一会儿使其干燥，并更换干燥剂。d）电路故障。解决方法：送修理部门，检修电路。 2）仪器不能调“100%”。可能原因： a）光能量不够。解决方法：增加灵敏度倍率档位，或更换光源灯（尽管灯还亮）。 b）比色皿架未落位。解决方法：调整比色皿架使其落位。 c）光电转换部分老化。解决方法：更换部件。 d）电路故障。解决方法：调修电路。 3)测量过程中,“100%”点经常变动。可能原因： a）比色皿在比色皿架中放置的位置不一致，或其表面有液滴。解决方法：用擦镜纸擦干净比色皿表面，然后将其安放在比色槽的左边，上面用定位夹定位。 b）电路故障（电压、光电接收、放大电路）。解决方法：送修。 4)数显不稳。可能原因： a）预热时间不够。解决方法：延长预热时间至30分钟左右（部分仪器由于老化等原因，长时间处于工作状态时，也会工作不稳）。 b）光电管内的干燥剂失效，使微电流放大器受潮。解决方法：烘烤电路，并更换或烘烤干燥剂。 c）环境振动过大、光源附近空气流速大、外界强光照射等。解决方法：改善工作环境。 d）光电管、电路等其它原因。解决方法：送修。 四、提高分光光度计透射比检定及使用精度的几种方法 在分光光度计的使用或检定中,透射比(吸光度)的准确度是衡量仪器工作性能的一项重要指标,它的准确程度直接关系到所测数据的可信性及科学性。所以提高此项指标的使用及检定准确度显得尤为重要。下面结合近年来对分光光度计的检定或修理实践,把如何提高透射比的测试及使用精度的几点方法列表叙述如下： 五、小结 综上所述，以下几个问题应引起仪器操作人员注意：1）比色皿架及比色皿在使用中的正确到位问题。有些使用者对这个问题不够重视，因操作不当造成偶然误差，严重影响分析结果。首先，应保证比色皿不倾斜放置。稍许倾斜，就会使参比样品与待测样品的吸收光径长度不一致，还可能使入射光不能全部通过样品池，导致测试比准确度不符合要求。其次，应保证每次测试时，比色皿架推拉到位。若不到位，将影响到测试值的重复性或准确度。最后,还应保证比色皿的清洁度,延长其使用寿命.2）干燥剂的使用问题。干燥剂失效将导致a）数显不稳、无法调“0”点或“100%”点（电路或光电管受潮）。b）反射镜发霉或沾污，影响光效率、杂散光增加。鉴于上述原因，分光光度计的放置地点应远离水池等湿度大的地方、干燥剂应定期更换或烘烤。3）仪器的工作环境。应避免阳光直射、避免强电场、避免与较大功率的电器设备共电、避开腐蚀性气体等。

72型分光光度计是可见光分光光度计，波长范围为420nm～700nm，它由三大部分组 成:磁饱和稳压器、光源、单色光器和测光机构、微电计。其光学系统如图5-11所示。72型分光光度计的基本依据是朗伯—比耳定律，它是根据相对测量原理工作的，即先选定某一溶剂作为标准溶液，设定其透光率为100%，被测试样的透光率是相对于标准溶液而言的，即让单色光分别通过被测试样和标准溶液，二者能量的比值就是在一定波长下对于被测试样的透光率。如图所示，白色光源经入射狭缝、反射镜和透光镜后，变成平行光进入棱镜，色散后的单色光经镀铝的反射镜反射后，再经过透镜并聚光于出射狭缝上，狭缝宽度为0.32nm。反射镜和棱镜组装在一可旋转的转盘上并由波长调节器的凸轮所带动，转动波长调节器便可以在出光狭缝后面选择到任一波长的单色光。单色光透过样品吸收池后由一光量调节器调节为适度的光通量，最后被光电电池吸收，转换成电流后由微电计指示，从刻度标尺 上直接读出透光率的值。分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。 分光光度计的简单原理分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。核酸的定量核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。 每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如EppendorfBiophotometer的准确度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如 A 260 / A 280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是 280 nm。纯净的样品，比值大于 1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于 1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A 230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸 A 260 / A 230 的比值大于 2.0。A 320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A 320 一般是 0。蛋白质的直接定量（UV法）这种方法是在280 nm波长，直接测试蛋白。选择 Warburg公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质，一般要消除320 nm的“背景”信息，设定此功能“开”。与测试核酸类似，要求 A 280 的吸光值至少大于 0.1A，最佳的线性范围在1.0-1.5 之间。实验中选择 Warburg 公式显示样品浓度时，发现读数“漂移”。这是一个正常的现象。事实上，只要观察A 280的吸光值的变化范围不超过 1%，表明结果非常稳定。漂移的原因是因为 Warburg公式吸光值换算成浓度，乘以一定的系数，只要吸光值有少许改变，浓度就会被放大，从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说，速度快，操作简单；但是容易受到平行物质的干扰，如DNA 的干扰；另外敏感度低，要求蛋白的浓度较高。比色法蛋白质定量蛋白质通常是多种蛋白质的化合物，比色法测定的基础是蛋白质构成成分：氨基酸（如酪氨酸，丝氨酸）与外加的显色基团或者染料反应，产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关，从而反应蛋白质浓度。比色方法一般有 BCA，Bradford，Lowry 等几种方法。Lowry 法：以最早期的 Biuret 反应为基础，并有所改进。蛋白质与Cu2+反应，产生蓝色的反应物。但是与 Biuret相比，Lowry 法敏感性更高。缺点是需要顺序加入几种不同的反应试剂；反应需要的时间较长；容易受到非蛋白物质的影响；含EDTA，Triton x-100，ammonia sulfate 等物质的蛋白不适合此种方法。BCA（Bicinchoninine acid assay）法：这是一种较新的、更敏感的蛋白测试法。要分析的蛋白在碱性溶液里与Cu2+反应产生 Cu+，后者与 BCA 形成螯合物，形成紫色化合物，吸收峰在 562 nm波长。此化合物与蛋白浓度的线性关系极强，反应后形成的化合物非常稳定。相对于 Lowry 法，操作简单，敏感度高。但是与 Lowry法相似的是容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。Bradford 法：这种方法的原理是蛋白质与考马斯亮兰结合反应，产生的有色化合物吸收峰595 nm。其最大的特点是，敏感度好，是 Lowry 和 BCA 两种测试方法的 2倍；操作更简单，速度更快；只需要一种反应试剂；化合物可以稳定1小时，方便结果；而且与一系列干扰 Lowry，BCA 反应的还原剂（如DTT，巯基乙醇）相容。但是对于去污剂依然是敏感的。最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大，无可比性。某些初次接触比色法测定的研究者可能为各种比色法测出的结果并不一致，感到迷惑，究竟该相信哪种方法？由于各种方法反应的基团以及显色基团不一，所以同时使用几种方法对同一样品得出的样品浓度无可比性。例如：Keller 等测试人奶中的蛋白，结果 Lowry，BCA测出的浓度明显高于Bradford，差异显著。即使是测定同一样品，同一种比色法选择的标准样品不一致，测试后的浓度也不一致。如用Lowry测试细胞匀浆中的蛋白质，以 BSA 作标准品，浓度1.34 mg / ml，以 a 球蛋白作标准品，浓度 2.64 mg /ml。因此，在选择比色法之前，最好是参照要测试的样本的化学构成，寻找化学构成类似的标准蛋白作标准品。另外，比色法定量蛋白质，经常出现的问题是样品的吸光值太低，导致测出的样品浓度与实际的浓度差距较大。关键问题是，反应后的颜色是有一定的半衰期，所以每种比色法都列出了反应测试时间，所有的样品（包括标准样品），都必须在此时间内测试。时间过长，得到的吸光值变小，换算的浓度值降低。除此，反应温度、溶液PH值等都是影响实验的重要原因。此外，非常重要的是，最好是用塑料的比色法。避免使用石英或者玻璃材质的比色杯，因为反应后的颜色会让石英或者玻璃着色，导致样品吸光值不准确。细菌细胞密度（OD 600）实验室确定细菌生长密度和生长期，多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验，需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度。OD600是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。以未加菌液的培养液作为空白液，之后定量培养后的含菌培养液。为了保证正确操作，必须针对每种微生物和每台仪器用显微镜进行细胞计数，做出校正曲线。实验中偶尔会出现菌液的OD值出现负值，原因是采用了显色的培养基，即细菌培养一段时间后，与培养基反应，发生变色反应。另外，需要注意的是，测试的样品不能离心，保持细菌悬浮状态。分光光度计的重要配件 —— 比色杯比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根据不同的测量体积，有比色杯和毛细比色杯等。一般测试核酸和紫外定量蛋白，均采用石英杯或者玻璃杯，但是不适合比色法测定。因为反应中的染料（如考马斯亮兰）能让石英和玻璃着色，所以必须采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不适合用于在紫外范围内测试样品。由于另外测试的样品量不同，所以一般分光光度计厂家提供不同容积的比色杯以满足用户不同的需求。目前市场已经存在一种既可用于核酸、紫外蛋白质定量，亦可用于蛋白比色法测定的塑料杯，样品用量仅需50μl，比色杯单个无菌包装，可以回收样品。如Eppendorf UVette?塑料比色杯，是目前比色杯市场上一个革新。随着生命科学以及相

请问各位高手，在荧光分光光度计里有个指标“光度类型”中写的比例计算监视单色光，这是个什么概念呢？与仪器的哪个部分有关呢？

紫外分光光度计根本作业原理和红外光谱仪类似，使用必定频率的紫外可见光照耀被剖析的有机物质，导致分子中价电子的跃迁，它将有挑选地被吸收。一组吸收随波长而改变的光谱，反映了试样的特征。在紫外可见光的范围内，关于一个特定的波长，吸收的程度正比于试样中该成分的浓度，因而测量光谱可以进行定性剖析，而且根据吸收与已知浓度的标样的对比，还能进行定量剖析。　　紫外-可见分光光度计　　紫外-可见分光光度计的类型很多，但可概括为三种类型，即单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。　　1、单光束分光光度计　　经单色器分光后的一束平行光，轮番经过参比溶液和样品溶液，以进行吸光度的测定。这种简便型分光光度计结构简略，操作方便，维修容易，适用于惯例剖析。　　2、双光束分光光度计　　经单色器分光后经反射镜分解为强度持平的两束光，一束经过参比池，一束经过样品池。光度计能主动对比两束光的强度，此比值即为试样的透射比，经对数变换将它变换成吸光度并作为波长的函数记载下来。　　双光束分光光度计通常都能主动记载吸收光谱曲线。由于两束光一起别离经过参比池和样品池，还能主动消除光源强度改变所导致的差错。　　3、双波长分光光度计　　由同一光源宣布的光被分红两束，别离经过两个单色器，得到两束不同波长1和2 的单色光;使用切光器使两束光以必定的频率替换照耀同一吸收池，然后经过光电倍增管和电子控制系统，最后由显示器显示出两个波利益的吸光度差值。关于多组分混合物、混浊试样(如生物组织液)剖析，以及存在布景搅扰或共存组分吸收搅扰的情况下，使用双波长分光光度法，通常能进步办法的灵敏度和挑选性。使用双波长分光光度计，能取得导数光谱。　　经过光学系统变换，使双波长分光光度计能很方便地转化为单波长作业方式。假如能在1和2处别离记载吸光度随时刻改变的曲线，还能进行化学反应动力学研讨.

一、 分光光度计检定(测试)的主要项目对分析结果的影响 1)波长准确度 分光光度法原理要求照射在样品池上的单色光必须对应于样品吸收光谱中的某一个吸收峰的波长。由于仪器的制造和调整误差，单色光的实际波长与仪器的波长读数值间都存在一定的误差。样品中绝大部分的主要吸收峰都有一定的宽度，对波长准确度要求允许宽些。但是，当吸收峰宽度较小，而且吸收峰两侧边缘比较陡直，此时波长准确度的影响就必须引起注意。 2)透射比（吸光度）准确度 很显然,透射比或吸光度的误差越大,测试结果的可信性越差,从而影响到测试数据的准确性. 3)杂散光 杂散光是由于光学元件制造误差以及光学和机械零件表面的漫反射形成的。杂散光是分析样品的非吸收光，随着样品浓度的增加，杂散光的影响也随之增大，将给分析结果带来一定的误差。在紫外的短波区域光源强度和检测器的灵敏度均明显减弱，杂散光的影响更不能忽视。因此，杂散光的大小也是仪器性能的一项重要指标。 二、与分光光度计正确使用和维护有关的几个注意事项 （在使用仪器前，必须仔细阅读其使用说明书） 1）若大幅度改变测试波长，需稍等片刻，等灯热平衡后，重新校正“0”和“100%”点。然后再测量。 2）指针式仪器在未接通电源时，电表的指针必须位于零刻度上。若不是这种情况，需进行机械调零。 3）比色皿使用完毕后，请立即用蒸馏水冲洗干净，并用干净柔软的纱布将水迹擦去，以防止表面光洁度被破坏，影响比色皿的透光率。 4）操作人员不应轻易动灯泡及反光镜灯，以免影响光效率。 5）WFZ800-DA、756型等分光光度计，由于其光电接收装置为光电倍增管，它本身的特点是放大倍数大，因而可以用于检测微弱光电信号，而不能用来检测强光。否则容易产生信号漂移，灵敏度下降。针对其上述特点，在维修、使用此类仪器时应注意不让光电倍增管长时间暴露于光下，因此在预热时，应打开比色皿盖或使用挡光杆，避免长时间照射使其性能漂移而导致工作不稳。 6）放大器灵敏度换挡后，必须重新调零。 7）比色杯的配套性问题。比色杯必须配套使用，否则将使测试结果失去意义。在进行每次测试前均应进行比较。具体方法如下；分别向被测的两只杯子里注入同样的溶液，把仪器置于某一波长处，石英比色杯；220nm、700nm装蒸馏水，玻璃比色杯：700nm处装蒸馏水，将某一个池的透射比值调至100%，测量其他各池的透射比值，记录其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范围内则可以配套使用，若超出此范围应考虑其对测试结果的影响。 三、分光光度计操作中容易出现的几个典型故障及其排除方法 1）仪器不能调零。可能原因： a）光门不能完全关闭。解决方法：修复光门部件，使其完全关闭。 b）透过率“100%”旋到底了。解决方法：重新调整“100%”旋钮。 c）仪器严重受潮。解决方法：可打开光电管暗盒，用电吹风吹上一会儿使其干燥，并更换干燥剂。d）电路故障。解决方法：送修理部门，检修电路。 2）仪器不能调“100%”。可能原因： a）光能量不够。解决方法：增加灵敏度倍率档位，或更换光源灯（尽管灯还亮）。 b）比色皿架未落位。解决方法：调整比色皿架使其落位。 c）光电转换部分老化。解决方法：更换部件。 d）电路故障。解决方法：调修电路。 3)测量过程中,“100%”点经常变动。可能原因： a）比色皿在比色皿架中放置的位置不一致，或其表面有液滴。解决方法：用擦镜纸擦干净比色皿表面，然后将其安放在比色槽的左边，上面用定位夹定位。 b）电路故障（电压、光电接收、放大电路）。解决方法：送修。 4)数显不稳。可能原因： a）预热时间不够。解决方法：延长预热时间至30分钟左右（部分仪器由于老化等原因，长时间处于工作状态时，也会工作不稳）。 b）光电管内的干燥剂失效，使微电流放大器受潮。解决方法：烘烤电路，并更换或烘烤干燥剂。 c）环境振动过大、光源附近空气流速大、外界强光照射等。解决方法：改善工作环境。 d）光电管、电路等其它原因。解决方法：送修。 四、提高分光光度计透射比检定及使用精度的几种方法 在分光光度计的使用或检定中,透射比(吸光度)的准确度是衡量仪器工作性能的一项重要指标,它的准确程度直接关系到所测数据的可信性及科学性。所以提高此项指标的使用及检定准确度显得尤为重要。下面结合近年来对分光光度计的检定或修理实践,把如何提高透射比的测试及使用精度的几点方法列表叙述如下： 五、小结 综上所述，以下几个问题应引起仪器操作人员注意：1）比色皿架及比色皿在使用中的正确到位问题。有些使用者对这个问题不够重视，因操作不当造成偶然误差，严重影响分析结果。首先，应保证比色皿不倾斜放置。稍许倾斜，就会使参比样品与待测样品的吸收光径长度不一致，还可能使入射光不能全部通过样品池，导致测试比准确度不符合要求。其次，应保证每次测试时，比色皿架推拉到位。若不到位，将影响到测试值的重复性或准确度。最后,还应保证比色皿的清洁度,延长其使用寿命.2）干燥剂的使用问题。干燥剂失效将导致a）数显不稳、无法调“0”点或“100%”点（电路或光电管受潮）。b）反射镜发霉或沾污，影响光效率、杂散光增加。鉴于上述原因，分光光度计的放置地点应远离水池等湿度大的地方、干燥剂应定期更换或烘烤。3）仪器的工作环境。应避免阳光直射、避免强电场、避免与较大功率的电器设备共电、避开腐蚀性气体等。

分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。而分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。 常用的波长范围为：(1)200～400nm的紫外光区,(2)400～760nm的可见光区,(3)2.5～25μm(按波数计为4000cm～400cm)的红外光区。 所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。 单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比，其关系如下式：分光光度计属于精密仪器，应当妥善保管和精心维护，这样才能保证分光光度计长期使用、长期的稳定可靠、测量精度高。 在一定环境下维护分光光度计，具体如下： 1、环境温度在条件容许的情况下，尽量保持在15-30摄氏度之间，这样能保持电器件稳定工作，不易老化，使分光光度计不易损坏，灯源的使用寿命得到延长。若条件不容许，在高温的情况下，缩短开机时间，高效使用分光光度计，使电器件不要长期保持在高温下。在低温下，使预热时间比常温下的预热时间要长，这样能保证在仪器稳定的情况下进行测试。 2、环境湿度在条件容许的情况下，尽量保持在60%以下，这样能保证光度计内部的光学件和电器件不易受潮、腐蚀、和上霉。若条件不容许，在高湿度和低湿度的情况尽量保持通风。 3、环境在条件容许的情况下尽量保持洁净，打扫环境时动作不宜太大，不要扬起灰尘，打扫之前用防尘罩盖上分光光度计，不要让灰尘进入分光光度计内部。（选自网络）

一、 分光光度计检定(测试)的主要项目对分析结果的影响 1)波长准确度 分光光度法原理要求照射在样品池上的单色光必须对应于样品吸收光谱中的某一个吸收峰的波长。由于仪器的制造和调整误差，单色光的实际波长与仪器的波长读数值间都存在一定的误差。样品中绝大部分的主要吸收峰都有一定的宽度，对波长准确度要求允许宽些。但是，当吸收峰宽度较小，而且吸收峰两侧边缘比较陡直，此时波长准确度的影响就必须引起注意。 2)透射比（吸光度）准确度 很显然,透射比或吸光度的误差越大,测试结果的可信性越差,从而影响到测试数据的准确性. 3)杂散光 杂散光是由于光学元件制造误差以及光学和机械零件表面的漫反射形成的。杂散光是分析样品的非吸收光，随着样品浓度的增加，杂散光的影响也随之增大，将给分析结果带来一定的误差。在紫外的短波区域光源强度和检测器的灵敏度均明显减弱，杂散光的影响更不能忽视。因此，杂散光的大小也是仪器性能的一项重要指标。 二、与分光光度计正确使用和维护有关的几个注意事项 （在使用仪器前，必须仔细阅读其使用说明书） 1）若大幅度改变测试波长，需稍等片刻，等灯热平衡后，重新校正“0”和“100%”点。然后再测量。 2）指针式仪器在未接通电源时，电表的指针必须位于零刻度上。若不是这种情况，需进行机械调零。 3）比色皿使用完毕后，请立即用蒸馏水冲洗干净，并用干净柔软的纱布将水迹擦去，以防止表面光洁度被破坏，影响比色皿的透光率。 4）操作人员不应轻易动灯泡及反光镜灯，以免影响光效率。 5）WFZ800-DA、756型等分光光度计，由于其光电接收装置为光电倍增管，它本身的特点是放大倍数大，因而可以用于检测微弱光电信号，而不能用来检测强光。否则容易产生信号漂移，灵敏度下降。针对其上述特点，在维修、使用此类仪器时应注意不让光电倍增管长时间暴露于光下，因此在预热时，应打开比色皿盖或使用挡光杆，避免长时间照射使其性能漂移而导致工作不稳。 6）放大器灵敏度换挡后，必须重新调零。 7）比色杯的配套性问题。比色杯必须配套使用，否则将使测试结果失去意义。在进行每次测试前均应进行比较。具体方法如下；分别向被测的两只杯子里注入同样的溶液，把仪器置于某一波长处，石英比色杯；220nm、700nm装蒸馏水，玻璃比色杯：700nm处装蒸馏水，将某一个池的透射比值调至100%，测量其他各池的透射比值，记录其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范围内则可以配套使用，若超出此范围应考虑其对测试结果的影响。 三、分光光度计操作中容易出现的几个典型故障及其排除方法 1）仪器不能调零。可能原因： a）光门不能完全关闭。解决方法：修复光门部件，使其完全关闭。 b）透过率“100%”旋到底了。解决方法：重新调整“100%”旋钮。 c）仪器严重受潮。解决方法：可打开光电管暗盒，用电吹风吹上一会儿使其干燥，并更换干燥剂。d）电路故障。解决方法：送修理部门，检修电路。 2）仪器不能调“100%”。可能原因： a）光能量不够。解决方法：增加灵敏度倍率档位，或更换光源灯（尽管灯还亮）。 b）比色皿架未落位。解决方法：调整比色皿架使其落位。 c）光电转换部分老化。解决方法：更换部件。 d）电路故障。解决方法：调修电路。 3)测量过程中,“100%”点经常变动。可能原因： a）比色皿在比色皿架中放置的位置不一致，或其表面有液滴。解决方法：用擦镜纸擦干净比色皿表面，然后将其安放在比色槽的左边，上面用定位夹定位。 b）电路故障（电压、光电接收、放大电路）。解决方法：送修。 4)数显不稳。可能原因： a）预热时间不够。解决方法：延长预热时间至30分钟左右（部分仪器由于老化等原因，长时间处于工作状态时，也会工作不稳）。 b）光电管内的干燥剂失效，使微电流放大器受潮。解决方法：烘烤电路，并更换或烘烤干燥剂。 c）环境振动过大、光源附近空气流速大、外界强光照射等。解决方法：改善工作环境。 d）光电管、电路等其它原因。解决方法：送修。 四、提高分光光度计透射比检定及使用精度的几种方法 在分光光度计的使用或检定中,透射比(吸光度)的准确度是衡量仪器工作性能的一项重要指标,它的准确程度直接关系到所测数据的可信性及科学性。所以提高此项指标的使用及检定准确度显得尤为重要。下面结合近年来对分光光度计的检定或修理实践,把如何提高透射比的测试及使用精度的几点方法列表叙述如下： 五、小结 综上所述，以下几个问题应引起仪器操作人员注意：1）比色皿架及比色皿在使用中的正确到位问题。有些使用者对这个问题不够重视，因操作不当造成偶然误差，严重影响分析结果。首先，应保证比色皿不倾斜放置。稍许倾斜，就会使参比样品与待测样品的吸收光径长度不一致，还可能使入射光不能全部通过样品池，导致测试比准确度不符合要求。其次，应保证每次测试时，比色皿架推拉到位。若不到位，将影响到测试值的重复性或准确度。最后,还应保证比色皿的清洁度,延长其使用寿命.2）干燥剂的使用问题。干燥剂失效将导致a）数显不稳、无法调“0”点或“100%”点（电路或光电管受潮）。b）反射镜发霉或沾污，影响光效率、杂散光增加。鉴于上述原因，分光光度计的放置地点应远离水池等湿度大的地方、干燥剂应定期更换或烘烤。3）仪器的工作环境。应避免阳光直射、避免强电场、避免与较大功率的电器设备共电、避开腐蚀性气体等。

1、分光光度计具有低杂色光,高分辩率的单光束光路结构的单色器;　　2、分光光度计具有良好的稳定性,重现性和精确的测量读数;　　3、明亮清晰的数字显示器可显示透射比,吸光度,浓度和所设置的波长,提高了仪器的读数准确性;　　4、分光光度计采用最新微机处理技术,仪器具有自动设置0%T和100%等控制功能;　　5、仪器配有标准的RS-232双向通讯接口,不仅可向计算机发送测试参数,还可接收计算机发出的指令.　　6、分光光度计在已知标准溶液浓度前提下,测定未知样品浓度，在已知标准溶液浓度斜率前提下,测定未知样品浓度.　 分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。　　1．分光光度计应放在干燥的房间内，使用时放置在坚固平稳的工作台上，室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风，防止灯泡灯丝发亮不稳定。　　2．分光光度计使用前，使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理，以及各个操纵旋钮之功能。在未按通电源之前，应该对仪器的安全性能进行检查，电源接线应牢固，通电也要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再按通电源开关。　　3．分光光度计在仪器尚未接通电源时，电表指针必须于“0”刻线上，若不是这种情况，则可以用电表上的校正螺丝进行调节。