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人血白蛋白多聚体测定法本法系用分子排阻色谱法测定人血白蛋白多聚体含量。照分子排阻色谱法(附录Ⅲ D)测定。色谱条件与系统适用性试验 用亲水硅胶高效体积排阻色谱柱(SEC,排阻极限300kD,粒度10μm),柱直径7.5mm,长60cm;以含1%异丙醇的pH7.0 0.2mol/L磷酸盐缓冲液为流动相;检测波长为280nm ;流速为每分钟0.6ml。取每1ml含蛋白质为12mg 的人血白蛋白溶液20μl,注入色谱柱,记录色谱图,人血白蛋白单体峰与二聚体峰间的分离度应大于1.5,拖尾因子按人血白蛋白单体峰计算应为0.95~1.40。测定法 取供试品适量,用流动相稀释成每1ml约含蛋白质12mg的溶液,取20μl,注入色谱柱,记录色谱图60分钟(色谱柱长60cm)。按面积归一法计算,色谱图中未保留(全排阻)峰的含量(%)除以2,即为人血白蛋白多聚体含量请教:为何除以2呢?很奇怪呀
[align=center][b][font=宋体]附录Ⅵ[/font][font=Times New Roman] Q[/font][font=宋体]人血白蛋白多聚体测定法[/font][/b][/align][font=宋体][size=3]本法系用分子排阻色谱法测定人血白蛋白多聚体含量。[/size][/font][size=3][font=宋体]照分子排阻色谱法(附录Ⅲ[/font][font=Times New Roman] D[/font][font=宋体])测定。[/font][/size][size=3][b][font=宋体]色谱条件与系统适用性试验[/font][/b][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]用亲水硅胶高效体积排阻色谱柱([/font][font=Times New Roman]SEC[/font][font=宋体],排阻极限[/font][font=Times New Roman]300kD[/font][font=宋体],粒度[/font][font=Times New Roman]10[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]m[/font][font=宋体]),柱直径[/font][font=Times New Roman]7[/font][font=宋体].[/font][font=Times New Roman]5mm[/font][font=Times New Roman],[/font][font=宋体]长[/font][font=Times New Roman]60cm[/font][font=宋体];以含[/font][font=Times New Roman]1[/font][font=宋体]%异丙醇的[/font][font=Times New Roman]pH7[/font][font=宋体].[/font][font=Times New Roman]0 0[/font][font=宋体].[/font][font=Times New Roman]2mol/L[/font][font=宋体]磷酸盐缓冲液[取[/font][font=Times New Roman]0[/font][font=宋体].[/font][font=Times New Roman]5mol/L[/font][font=宋体]磷酸二氢钠[/font][font=Times New Roman]200ml[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]0[/font][font=宋体].[/font][font=Times New Roman]5mol/L[/font][font=宋体]磷酸氢二钠[/font][font=Times New Roman]420ml[/font][font=宋体]、异丙醇[/font][font=Times New Roman]15[/font][font=宋体].[/font][font=Times New Roman]5ml[/font][font=宋体]及水[/font][font=Times New Roman]914.5ml[/font][font=宋体],混匀]为流动相;检测波长为[/font][font=Times New Roman]280nm [/font][font=宋体];流速为每分钟[/font][font=Times New Roman]0[/font][font=宋体].[/font][font=Times New Roman]6ml[/font][font=宋体]。取每[/font][font=Times New Roman]1ml[/font][font=宋体]含蛋白质为[/font][font=Times New Roman]12mg [/font][font=宋体]的人血白蛋白溶液[/font][font=Times New Roman]20[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]l[/font][font=宋体],注入色谱柱,记录色谱图[/font][font=Times New Roman],[/font][font=宋体]人血白蛋白单体峰与二聚体峰间的分离度应大于[/font][font=Times New Roman]1[/font][font=宋体].[/font][font=Times New Roman]5[/font][font=宋体],拖尾因子按人血白蛋白单体峰计算应为[/font][font=Times New Roman]0[/font][font=宋体].[/font][font=Times New Roman]95[/font][font=宋体]~[/font][font=Times New Roman]1[/font][font=宋体].[/font][font=Times New Roman]40[/font][font=宋体]。[/font][/size][size=3][b][font=宋体]测定法[/font][/b][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]取供试品适量,用流动相稀释成每[/font][font=Times New Roman]1ml[/font][font=宋体]约含蛋白质[/font][font=Times New Roman]12mg[/font][font=宋体]的溶液[/font][font=Times New Roman],[/font][font=宋体]取[/font][font=Times New Roman]20[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]l[/font][font=宋体],注入色谱柱,记录色谱图[/font][font=Times New Roman]60[/font][font=宋体]分钟[/font][s][font=宋体](色谱柱长[/font][/s][s][font=Times New Roman]60cm[/font][/s][s][font=宋体])[/font][/s][font=宋体]。[/font][/size][size=3][color=#fe2419][font=宋体]按面积归一法计算,色谱图中未保留(全排阻)峰的含量[/font][font=Times New Roman](%)[/font][font=宋体]除以[/font][font=Times New Roman]2[/font][font=宋体],即为人血白蛋白多聚体含量。[/font][/color][/size][size=3][font=Times New Roman][b][color=#0021b0]计算方法不是很明白,为什么要除以2 ??? 全排阻的峰指的是哪一个??谢谢[/color][/b][/font][/size]
新技术可揭示蛋白间相互作用 为膜蛋白研究提供了有力工具 科技日报多伦多3月28日电 (记者冯卫东)据最新一期《自然·方法学》杂志网络版报道,加拿大多伦多大学研究人员开发出一种研究人体蛋白质的新技术。该技术可追踪膜蛋白与其他蛋白之间的相互作用。 膜蛋白占人体所有蛋白的约三分之一,有500多种疾病与其失能相关。膜蛋白的研究难点在于,要了解其作用,必须基于对其与其他蛋白相互作用的观察。 多伦多大学细胞与生物分子研究中心教授伊戈尔·斯坦戈利亚称,新技术为检视人体细胞自然环境中的膜蛋白提供了新工具。其灵敏度足以检测到引入药物的微量变化,因此对癌症及神经疾病治疗方法的研发具有重要意义。 研究人员采用了一种被称为MaMTH(哺乳动物膜双杂交法)的新技术,来确定CRKII蛋白在最常见肺癌——非小细胞肺癌中的作用。CRKII蛋白可与表皮生长因子受体蛋白相互作用,而表皮生长因子受体的基因突变可导致癌细胞的增殖。 研究报告的主要作者、多伦多大学博士后研究员茱莉亚·佩斯奇尼格称,CRKII最有可能调控突变表皮生长因子受体的稳定性,并通过促进癌细胞间的信令传递或通信来推动肿瘤生长。研究发现,可抑制这些突变受体和CRKII的一种组合化疗法或对肺癌治疗大有助益。 此项研究汇聚了多伦多和波士顿地区的5个实验室的研究人员及癌症临床医师、生物信息学家。佩斯奇尼格及其实验室历时4年对适用于酵母的蛋白—蛋白相互作用的类似技术进行了改进,从而开发出新的MaMTH技术。研究人员下一步将对其他人体疾病中的突变蛋白进行研究。来源:中国科技网-科技日报 2014年03月31日