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据欧盟网站消息,4月25日欧盟发布(EU)No 418/2014号委员会实施条例,修订伊佛霉素(ivermectin)在动物肌肉组织中的最大残留限量。 新法规将动物肌肉组织中伊佛霉素的最大残留限量设置为30μg/kg。对于猪而言,伊佛霉素在脂肪中的残留限量涉及天然部分的皮与脂肪,不能用于产人消费类乳的动物。本法规自发布之日起第20天生效,并于2014年6月24日实施。
测定动物肌肉组织和鸡蛋中残留的11种甾体激素类药物甾体化合物具有一个四环的(A、B、C、D)母核,这个母核像“田”字,并且在C10和C13处各有一个角甲基,在C17处有一侧链,这样在母核上的三个侧链像“巛”字,“甾”字十分形象的表示了这类化合物。它们能促进畜禽生长,提高饲料转化率,有利于蛋白质的沉积,在畜牧业养殖中经常使用。但蛋白同化激素在动物食品中的残留可能会危及消费者的健康,具有潜在的致癌性。我国农业部于2002年发布的第235号文件中规定丙酸睾酮、苯丙酸诺龙、甲睾酮、群勃龙等在动物性食品中的最高残留限量为不得在动物性食品中检出”。因此,检测可食性动物源食品中蛋白同化类激素及其代谢产物残留量是一项重要的指标。本实验建立了同时检测猪、牛、羊及鸡的肌肉组织与鸡蛋中睾酮、甲基睾酮、群勃龙、勃地龙、诺龙、美雄酮、司坦唑醇、丙酸诺龙、丙酸睾酮及苯丙酸诺龙等10种蛋白同化激素类药物和孕激素黄体酮残留量的快速方法。1.1仪器与试剂ACQUITYlM超高压液相色谱仪和Micromass—Quattro Premier质谱仪(美国Waters公司)。睾酮(testosterone)、甲基睾酮(methyltestosterone)、黄体酮(progesterone)、群勃龙(trenbolone)、勃地龙(boldenone)、诺龙(nandrolone)、美雄酮(大力补,methandienone)、司坦唑醇(康力龙,stanozol01)、丙酸诺龙(nandrolone propionate)及丙酸睾酮(testosterone propionate)对照品购自德国Dr.Ehrenstoffer公司;苯丙酸诺龙(nadrolone phenylpropionate)对照品购自中国兽药监察所。叔丁基甲醚、乙腈、甲醇均为色谱纯(德国Merck公司);甲酸和碳酸钠均为分析纯(广州化学试剂厂);水为超纯水。1.2储备液的制备准确称取适量的睾酮、甲基睾酮、黄体酮、群勃龙、勃地龙、诺龙、美雄酮、司坦唑醇、丙酸诺龙、丙酸睾酮及苯丙酸诺龙,用甲醇分别配制成l g/L的单标准溶液及10 mg/L的混合标准溶液,冰箱中保存,备用。1.3色谱-质谱条件1.3.1色谱条件色谱柱:Ultimate XB-C18 4.60×250mm,5 um .Part Number 00201-31043 Serial Number 211302350.流动相:A相为0.1%甲酸水溶液,B相为0.1%甲酸乙腈溶液;梯度洗脱程序:0—5.0 min,50%B--,90%B;5.O一7.0 min,90%B;7.O一7.5 min,90%B一50%B;7.5—10.0 min,50%B;流速:0.3 mL/min。柱温:室温。进样体积:lo斗L。1.3.2质谱条件离子源:电喷雾离子源(ESI),电压3 200 V,温度300 oC。扫描方式:正离子模式。检测方式:多反应监测(MRM)。脱溶剂气、锥孔气均为高纯氮气,流速分别为600,20 L/h;碰撞气为高纯氩气,压力为0.36 Pa(3.6×lO—mbar)。锥孔电压、碰撞能量及定性离子对、定量离子对等参数见表1。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507021634_553131_2433088_3.png 1.4试样制备称取约500 g猪、牛、羊或鸡肌肉组织,切碎后匀浆备用;取10枚鲜鸡蛋,去壳,均质备用。1.5样品前处理称取5 g均质试样(精确至0.01 g),置于50mL离心管中,加入叔丁基甲醚25 mL。于10 000r/min均质30 S,振荡10 min;于4℃、6 000 r/min条件下离心10 min,上清液转移至100 mL梨形瓶中,残渣中再加入20 mL叔丁基甲醚振荡提取一次。合并离心后的上清液,并用旋转蒸发仪于45℃水浴中蒸发至干。加人流动相A与B(体积比为1:1)混合溶液2.0 mL,超声溶解残渣,予一20℃冰箱中放置30 min,取适量溶液于16 000 r/min下离心5 min,上清液过O.22斗m针头滤膜,滤液供测定。 1.6标准曲线的绘制空白试样按照“1.5”节方法处理,取适量空白上清液加入不同量的蛋白同化激素标准储备液,配制成1,2,4,10,20及100斗g/L的基质空白标准溶液,混匀后进样。以待测物色谱图的峰面积为纵坐标,相应待测物质量浓度为横坐标,进行回归运算,求得直线回归方程。1.7回收率试验添加质量浓度为50,100,500斗g/L的混合标准工作液0.1 mL,制得1,2,10斗g/kg添加水平的样品,按上述方法处理,测定回收率。1.8检出限与定量限的测定取适量混合标准工作液,制得0.2,0.3,0.4,0.5斗g/kg添加水平的样品,按“1.5”节所述方法处理,以最低检出浓度计算,3倍信噪比为检出限,10倍信噪比为定量限。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509101132_565576_2433088_3.png 11种甾体激素类药物的RMR离子流图(10 ug/L)
[B]肌肉组织中克伦特罗(瘦肉精)快速检测[/B]肌肉组织中的一些特殊成分往往干扰其检测,造成灵敏度下降,条带不明显,检测不准等问题。该试剂盒由于采用了特殊的前处理方法,经过前处理试剂处理,可将肌肉组织中的干扰杂质有效去除,将盐酸克伦特罗提取出来。此前处理简便、快速、易于操作。检测卡采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术设计,样品需要量少,简便快速 ,适用于大量样本的筛查。产品特点使用该快速检测试剂盒,无需特殊的仪器设备,既可以在实验室进行,也可在养猪厂、屠宰车间、饲料加工厂等实地进行测定,结果准确,灵敏度高,操作简便快速。检测下限为:组织3ng/ml;准确率大于95%。适用于市场监督部门、畜产品监督部门以及畜牧养殖部门对畜产品的现场及化验室进行检测监控。产品规格 试剂盒组成:12次/盒.成分检测卡提取液瓶固体提取剂瓶.一次性滴管说明书数量12个12个12个12个1份储存条件 a.本产品保存在4-30℃,忌冷冻。 b.环境温度在4-30℃下操作。 c.检测卡极易受潮,打开小包装后应立即使用,未用完的检测卡密封干燥保存。 d.检测卡保质期12个月。操作方法: 1、样品处理 1) 称取1克剪碎或匀浆过的样品,置于含1ml样品提取液瓶中,后再加入固体提取剂,扭紧管盖,振摇样品一分钟后,100℃水浴5分钟。 2) 冷却至室温,取清亮液体直接加样。2、样品检测a.从检测卡袋中取出所需的检测卡,放置室温,在卡上做好样品编号标记。 b.用一次性取样滴头吸取样品,滴入加样孔,每孔4滴,在加液过程中勿使液体溢出加样孔。 c.5-10分钟内观察结果,10分钟后的结果无效。3、结果如图: A: 阴性: 对照线(C)和测试线(T)同时出现,表明样品中克伦特罗的浓度小于3ng/ml。B:弱阳性:对照线(C)和测试线(T)同时出现,对照线(C)明显浅于测试线(T),表明样品中克伦特罗浓度大于3ng/ml而小于5ng/ml。C: 阳性: 只有对照线(C),无样品测试线(T),表明样品中克伦特罗的浓度大于5ng/ml。D: 无效: 对照线(C)和测试线(T)都不出现。 注意事项 1,仅用于体外诊断。 2,必须在有效期内使用。 3,当包装袋被打开后,应立即使用。 4,标本处理过程中应戴手套,并防止形成气溶胶。 5,蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照。 6,出现阳性结果的标本,建议用检测试剂盒或GC-MS复查。标品配制方法:标准贮备液:准确称取盐酸克伦特罗10mg,用甲醇溶解定溶于100mL容量瓶中,配制成100μg/mL的标准贮备液,置于0~4℃保存,有效期三个月。标准工作溶液:用蒸馏水稀释标准贮备溶液,配制1μg/mL的标准溶液0~4℃保存。联 系 人:王伦 手 机:13810239506 EMAIL:wwj613@sina.com