二硫键连接进行确认

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二硫键连接进行确认相关的耗材

  • 安捷伦直接连接进样衬管G1544-80730 G1544-80700 G1544-80731
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  • 双柱 mini-Lam 直接进样三通组件 | 20436
    产品特点:双柱 mini-Lam 直接进样三通组件Dual Column mini-Lam Direct Injection Tee Kit订货号:20436● 用于1/4英寸填充柱进样口● 倒置杯设计提供完整的样品蒸发。● 允许更大的样本量。● 在每个出口支管中加入压力锥形,以便与每个分析柱(OD值范围为0.4到0.8 mm)之间建立完美的,无死体积的连接。● 允许直观确认色谱柱连接。● 采用开放式设计,可轻松打包玻璃棉,防止样品残留物污染杯子。产品名称:mini-Lam DI 三通组件 (mini-Lam DI Tee Kit) 包括:所有配件和卡套
  • PEEK二通连接件
    1/16"PEEK 二通/三通/四通,可以方便的将1/16"外径的管线,连接起来,实现分流,连接不同流路。 ★ 零死体积直通可以连接两根外径同为1/16″OD 或1/8″OD管。 ★ 精密设计通孔保证绝对不泄漏及零死体积连接。 ★ PEEK 材质方便手拧连接,具有生物兼容性。 产品货号 产品名称 060100 PEEK二通连接件,1/16"OD 060200 PEEK三通连接件,1/16"OD 060300 PEEK四通连接件,1/16"OD

二硫键连接进行确认相关的仪器

  • 该系统可以对空调连接管进行氦气检漏,从而检测并衡量其中的损耗。依据机器的功能,可以进行具体测试,检查测试元件的特征,甚至可以使用“ 嗅探法 ”。“ 嗅探法”要求只能用低压氦气进行元件增压,而“损耗研究”需要由连接适当接口的嗅探器以及质量光谱仪的辅助。在这种情况下,嗅探循环只能用于检测机器的真空或过程回路中的任何泄漏。完整的测试循环需要在以下阶段执行:? 元件的安置:安置测试元件的托盘从输送机上抬起,被自动装载到腔内。机器可以测试不同的烘干机款型。试车版本是通过 MOBY 模块识别。? 循环的启动:当托盘处于正确位置,电源线路向工作台下达循环启动命令。? 腔体关闭和接头连接:腔盖子会自动移动开口,自动接头会自动连接待测试工件。 腔体抽真空:测试腔内部压力必须达到参数内设置的真空值。? 氮气加载:测试部件需要通过氮气加压,从而实施大泄漏测试? 检查降压:需要监督元件的内部压力,从而在内部降压时识别大损耗的废气件。? 氮气卸载和空间真空:待测试组件需要抽空空气,从而避免氦气在之后的增压中混合,或者改变了混合物的百分比。? 传输阀打开:当腔内的真空值达到了参数内的设定值,就需要打开传输阀(TEST),让腔和测试回路与光谱仪联通。? 背景信号读取:管理系统会读取和存储底部数值,也就是腔内剩余氦气的质量光谱仪信号。? 工件内氦气加载:待测试工件需要利用氦气增压或混合,直至达到参数内设置压力。? 氦气损耗确认:确认工件氦气损耗的必要测试时间。参数可设定的测试时长。? 损耗计算:依据氦气质量光谱仪测得的损耗,软件会计算元件的实际损耗。计算的损耗会考虑到校准循环内算得的因素(K)。未校准系统将会执行错误的计算。? 氦气排空:剩余氦气需要从工件排出,并输送到回流换热器。? 测试结果:在工件合格时,系统在 HMI 上提供绿色的测试结果,在工件不合格时提供红色和警报,测试结果会存储到 MOBY 模块上,后者安装在托盘以及客户服务器数据库内。? 腔体内通气:通过空气回流阀,腔会达到大气压力? 腔体打开:盖子下降,打开腔,接头自动端开。? 元件卸载:输出输送机会下降,依据相关区域的测试结果来移动托盘。
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  • 二维气体成像二氧化硫气体相机 二氧化硫气体相机,二氧化硫检测仪,二氧化硫气体分析仪,其气体通过使用两个相邻的光路,相关的校准单元仍在光路中,消除了移动部件的需要。气相机用户界面在LabVIEW中,用于多种用途的数据使用。该接口具有一系列特性,并且可以很容易地进行定制,默认USB接口。对于CCD(包括空气冷却和分辨率的选择),应用程序需要专门的特性,有一些灵活的选择。手持传感器已经加固和密封,以承受恶劣的环境。数据可以在距离(10公里)远的地方收集。未来的选择将包括更多的气体种类。 气体摄像机拍摄到大气中二氧化硫的羽状物,产生的彩色图像显示了浓度。微型化的强磁场仪器是环境和地球科学应用的理想选择。 目前还没有其他商业上的完整软件包可以远程检测和测量二氧化硫的浓度,并实时地对其进行绘图。 这款相机配有标准的GPS和罗盘,带有倾斜传感器,可以通过USB连接到笔记本电脑上。可以提供可选的无线实时输出。LabVIEW接口也很容易修改,以适应特殊的应用。应用:1.工业环境,电厂,燃煤电厂、工业锅炉、工业窑炉、轮船、城市环境监控、交通工具及生活民用行业SO2实时监测2.实时监测排污质量,无需实验室分析,现场定性确认 3. SO2实时监控,实时图像 4. SO2实时谱图
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P12 1SEP619637R0001Parker D1FPE50MA9VB00X943Phoenix SACC-CIP-M12FS-12P SMD TSICK 1077883 DKV60-A2P00020Parker 024-44878-004IFM IG5916 IGB3008-BPKG/US-104-DPSSICK 1070865 RZT7-03ZUS-KW0ABB 432RPM9W 2CMA168239R1000IFM RC6014 RC-0500-I24/L2Phoenix MSTB 2,5/ 7-GCONTRINEX LTS-4040-104di-soric KDC 18 K 15S PSLKHengstler 0556267 RI58-O/250AK.41TBPhoenix REL-OR-120AC/3X21SICK 6041658 UP56-211118BLOCK FLD 6/18HYDAC 0240 D 050 W/-VHYDAC LF BH/HC 240 I E 10 D 1.0/-V-LEDPhoenix SACB-4/ 8-L-C SCO PBalluff BNS 813-D03-D12-62-20-01DOLD EC9901.81 AC50/60HZ 110V 0,05-1S 0035945Phoenix PTSA 1,5/ 2-3,5-Z HT BKBalluff BIS F-200-RPP+F 270769 PGV-CC25-041-050-SETPhoenix VS-M12FSBP-PPC/PL-93E-LI/2,0Hengstler 0635332 IMP.ZAE 5DC 6ST RO VERGOSSENLeuze BCL 500i SN 102 H 50105457SICK 1055189 MLG5-0100N822Phoenix PLC-RSC- 24UC/ 1/S/HSICK 5308051 LL3-TB01-10Rockwell 440T-MDBLE15EFFFSICK 7902134 IH34-30NUS-KU0HYDAC DF BH/HC 110 T C 10 B 1.0/-VDOLD EC9621.82 AC50/60HZ230V 0,01-99,99S 0006501Hengstler 0566444 AC58/1212EK.47SGDABB DDA202BAPR-25/0,3 2CSB202592R3250ABB XR-M3-185-3P 1SEP102243R3300HYDAC DFP BH/HC 660 Q D 10 LE 1.0/-VParker 026-99125-0Hengstler 0553149 RI58-O/1024AK.42TB-V0Leuze MLC510R20-300H/A 68017203SENSOPART 18/30 RZ 1/1000-Si LS=14 979-06165Phoenix LIT 2-12ABB UMBAUSATZ ANS. T7 1SDA063108R0001HYDAC MDF BN/HC 160 O E 10 D 1.0/-L24Phoenix PC 6/ 3-STF-10,16HYDAC DF BN/HC 160 Q E 20 A 1.0/-B6HYDAC NF BN/HC 2610 D P 3 BM 3.1/-A5-B6DOLD MK9053/013 AC2-20MA AC230V 1S 0034116TURCK NI20-CP40-VP4X2/S97Xecro TS22C-4POGR-3P12Xecro PH22D-4POGR-S200Xecro TS22C-5PCGR-TB5Phoenix GFKIC 2,5/ 2-ST-7,62HYDAC PDB10PZ-09-C-N-140V140-0 WITHOUT COILTURCK DX80DR2M-H-13680SICK 6041284 LFV310-XXGAVXPTXVEM K22R 355 M4ABB E4.2N 40 G H-T LS 1SDA071200R0001ABB S453M-K6 2CCS473001R0377ABB E6.2H/F 50 D LSIG 1SDA071983R0001TURCK SDNB-0800D-0007SBalluff BTL7-E100-M0500-B-KA02DOLD MI 957 DC24V 0,05-1S 0005631SICK 1206964 C4MT-09014ABB03FB0Hengstler 0554001 RI58-O/4445EK.42KDSICK 1041977 CLV630-6120HBM 1-LY15-10/120Parker 550577TURCK SLSK30-1800Q88-2RE15Balluff BTL7-E501-M5080-P-S32Parker 026-99365-GVEM IE3-W41R 315 MX6MD FX4/0P-0FSICK 6036839 WFL50-95B416Rockwell 440T-MSSUE200RBalluff BNS 813-D06-L12-100-20-02VEM KV1R 315 MY8SICK 5320027 P45ATURCK PVA225P6RQ W/6INIFM IG6146 IG-4010-CPKG/3,5M/TPE/USHYDAC HREL 6 B 32 PP ST M BLRockwell 440T-MSSUE22DXHengstler 0533553 RI76TD/2048ED.4A25KF-CHengstler 0553582 RI58-T/360EK.42KFBalluff BNS 819-X776-99-D-10-S4SICK 6034574 DSL-8U04G02M025KM1Rockwell 440T-MKEXE11BA0E0EBalluff BES 516-324-SA51-E4-C-PU-00,5Phoenix FKCVR 2,5/ 6-STABB DS201MA-C10/0,1AP- 2CSR275440R2104HYDAC RFLD BN/HC 851 DAL 10 D 1.0/-LEDHYDAC HRS 1 I1TM 16 PP ST M BLSICK 1025245 DME5000-312HYDAC HRZ 4 D 28-28 PP ST M ZNIFM SD2000 SDR21DGXFPKG/US-100di-soric OH 31 K 200 N3-K-T3Parker PVP4836K9R2MBLOCK CUL 200/0,22Phoenix UHV150-AH无锡德为源自动化科技有限公司美国KB Electronics(KB电子)交流驱动器、直流调速器、直流驱动器,品质100%保证,绕过国内中间渠道直接从原产国进口,价格优势明显,货期快捷。欢迎咨询美国美国KB Electronics(KB电子)交流驱动器、直流调速器产品相关库存、价格信息,我们将快速为您报价和服务。 我们大量供应原装美国KB Electronics(KB电子)其它型号的产品: KBIC-120、KBIC-125、KBIC-240、KBIC-225、KBIC-240D、KBIC-240DS、KBMM-125、KBMM-225、KBMM-225D、KBCC-125、KBCC-225、KBCC-125R、KBCC-240D、KBPB-125、KBPB-125、KBPB-225、KBMG-21D、KBMG-212D、KBRG-212D、KBRG-240D、KBRG-225D、KBWD-13、KBWS-25D、KBWT-26美国KB ELECTRONICS直流调速器KBRG系列KBRG-212D KBRG系列:KBRG-212D,KBRG-225D,KBRG-240D,KBRG-255再生式驱动器全波型,四象限半导体控制整流器用于永磁一开励电动机的变速和扭距控制。 美国KB ELECTRONICS直流调速器40年来,KB一直致力于中小功率的低成本电机调速控制产品的领域,尤其是半导体控制整流器,各种小功率直流调速器和交流变频调速器,同时生产多种OEM产品。公司的Penta-Power品牌的各类开放式控制器已经在全球范围得到认可。KB的宗旨“与KB,您可以获得更多的价值”。美国KB ELECTRONICS的直流马达驱动器到目前为止仍然是对小体积、低成本有高要求的客户的可以选择]。应用于对5马力以下的各类直流电动机的调速和驱动。KB提供给客户UL、CE认证。KB许多的产品都拥有能够对电机起保护作用的:比如KBMM的电流极限电路以及其他的电流反馈闭环、过载保护等等。美国KB ELECTRONICS产品主要特点:1.电流限定电路,电流优先反馈和同步电流极限(电子过载保护)可以延长马达使用寿命。2.插入式水泥电阻和电流选择,快速跳线的设定能缩小体积,降低成本。3. KB使用了高等级的金属陶瓷整流管trimpots和温度稳定元件。4.使用PENTA-POWER控制器将延长有刷电机的寿命。5.短路保护可以防止控制失败增加产品可靠性。6.引入严格对SCR、二极管、半导体和电容的质量监控,减少元器件故障的可能性。 主要产品及型号:KBIC系列:KBIC120,KBIC125,KB225,KBIC240,KBIC240D,KBIC-240DS用于分激式永磁及直流/交流电动机。控制器包含5K远距离电位器,装嵌配件和操作说明书。KBIC系列:可用于控制永磁式、分激式和AC/DC马达在1/100-3范围之内,若插上适当的插入电阻器,所有马达就可在广范围的马力内使用,速度范围是50:1具有负载调整1%。特点:包括自动、停止、电压跟随、突波吸收器暂态保护、SK速度控制器和调整小、大、加速、电阻电位和电流限制的调整器,选择配件包括辅助散热片、AC线/转子保险丝和遮断端子。KBLC系列:变速DC马达控制器适用于分激和永磁马达。KBLCTM的一个独特特性是具有插入式功率电阻器,外利用辅助散热片(选择配件)可增大每个机体的额定输出功率。对应不同的电压和电流范围,美国KB ELECTRONICS可提供不同的机型。所有机型均备有安装和操作说明书。KBMG系列:KBMG-21D,KBMG-212D。超小型再生式驱动器全波型,四象限半导体控制整流器用于永磁一开励电动机的变速和扭距控制。可使控制器保持超负载状态下也能恒速运转 提供快速回转和可控的转。随机供有一个5K的远距离电位计和完整的使用说明书.KBMG为一种超小型全波型再生驱动器,能够以双向方式控制直流永磁或开励电动机。其四象限运行以速度的两个方向提供正反转扭矩。这样能够使控制器保持超负载状况下的恒运转速并提供快速回转和可控的制动。由于其的可控制性和响应时间,KBMG可在许多应用中替代伺服电机。对于电枢反馈,控制器在出厂已经设定,可在50:1的电机基准速度内提供达到1%负载调节。还提供有测速发电机反馈,在需要时可进行优质的负载调节。简单的跳线设定可将KBMG转换成一个扭矩控制器。在这种方式下,电动机的扭矩而不是电动机的速度得到控制。这种驱动器的一个重要特点是在工厂内已进行了校准的内置式可调电动机电流跳线器。它消除了在大多数使用中对于价补偿和电流限定进行重新校准的需要。此控制器包含有一个启用[ENABLE]功能。可以用电子方式通过一个触点的闭合使电动机无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1无锡德为源优势供应日本SMC吸着确认开关 ZSP1
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    含有一对或多对二硫键修饰的多肽:二硫键在蛋白质的结构稳定中起到重要作用,目前我们国肽生物已经能够为客户提供四对二硫键修饰的多肽。多对二硫键成环技术蛋白质和多肽类药物具有作用位点专一,疗效明确等优点,近年来,蛋白质和多肽类药物的研究和发展已经成为生物医药领域研究的一个热点。二硫键在维持多肽和蛋白质的空间立体结构及由此决定的生物活性中发挥着重要的作用。二硫键即为蛋白质或多肽分子中两个不同位点Cys的巯基(-SH)被氧化形成的S-S共价键。一条肽链上不同位置的氨基酸之间形成的二硫键,可以将肽链折叠成特定的空间结构。[align=center][img=,526,200]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/04/201904300953261874_7512_3531468_3.jpg!w526x200.jpg[/img][/align]多肽分子通常分子量较大,空间结构复杂,结构中形成二硫键时要求两个半胱氨酸在空间距离上接近。此外,多肽结构中还原态的巯基化学性质活泼,容易发生其他的副反应,而且肽链上其他侧链也可能会发生一系列修饰,因此,肽链进行修饰所选取的氧化剂和氧化条件是反应的关键因素,反应机理也比较复杂,既可能是自由基反应,也可能是离子反应。多肽的二硫键修饰中,分子内或者分子间一对二硫键的合成通常比较容易,反应条件有多种选择,比如空气氧化,DMSO氧化等温和的氧化过程,也可以采用H2O2,I2,汞盐等激烈的反应条件,反应产物也比较容易纯化分离,得到较高的纯度和产率。空气氧化法形成二硫键是多肽合成中最经典的方法,并且在早期的研究中取得了较好的结果。采用空气氧化法通常是将巯基处于还原态的多肽溶于水中,在近中性或弱碱性条件下(PH值6.5~10),反应24小时以上。为了降低分子之间二硫键形成的可能,该方法通常需要在低浓度条件下进行。碘氧化法在多肽合成中应用同样广泛,一般将多肽溶于25%的甲醇水溶液或30%的醋酸水溶液中,逐滴滴加10~15mol/L的碘进行氧化,反应15~40min。当肽链中含有对碘比较敏感的Tyr、Trp、Met和His的残基时,氧化条件要控制的更精确,氧化完后,立即加入维生素C或硫代硫酸钠除去过量的碘。当一条肽链上需要形成两对或两对以上的二硫键时,反应过程就变得相对复杂。在固相合成多肽之前,需要提前设计几对二硫键形成的顺序和方法路线,选择不同的侧链巯基保护基,利用其性质差异,分步氧化形成两对或多对二硫键。通常采用的巯基保护基有trt,Acm,Mmt,tBu,Bzl,Mob,Tmob等多种基团。我们分别列出两种以2-Cl树脂和Rink树脂为载体合成的多肽上多对二硫键形成路线:[align=center][img=,666,432]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/04/201904300953443844_9290_3531468_3.jpg!w666x432.jpg[/img][/align]二硫键的形成一直是多肽合成中的一个难点,经过不懈的研究和累积,我们公司已经具备相当成熟的多对二硫键成环技术,目前我们已经能够高成功率的合成三对和四对二硫键的多肽。不断克服实验困难,不停提高产品质量,不懈努力达到客户要求是我们国肽生物的不变宗旨。成功案例:固相合成序列DC*TSHNGAC*NHHSHC*C*SNVC*NTWAHLC*T,并对其成功进行3对二硫键修饰。HPLC分析:[align=center][img=,562,246]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/04/201904300954000045_2353_3531468_3.jpg!w562x246.jpg[/img][/align]MS分析:[align=center][img=,562,224]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/04/201904300954145791_912_3531468_3.jpg!w562x224.jpg[/img][/align][align=left]我们主要提供:多肽合成、定制多肽、同位素标记肽、人工胰岛素、磷酸肽、生物素标记肽、荧光标记肽(Cy3、Cy5、Fitc、AMC等)、目录肽、偶联蛋白(KLH、BSA、OVA等)、化妆品肽、多肽文库构建、抗体服务、糖肽、订书肽、药物肽、RGD环肽等。合肥国肽生物官网:http://www.bankpeptide.com欢迎咨询服务热线:17718122172;17718122684;17730030476;17718122397[/align]

  • 抗体类分子 二硫键的异常情况

    附件中是IgG 抗体分子由两条重链和两条轻链通过链间二硫键共价交联,重链和轻链的每个结构域还各含有1 对链内二硫键。含完整二硫键的天然IgG 不应含有自由巯基,但抗体分子内含少量自由巯基是一种普遍现象,而且在不同IgG 分子内甚至具有相似的分布形式。在人各种IgG 分子内均检测到了三硫键的存在。本文对IgG 分子内的自由巯基和三硫键修饰作一综述

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  • 在线电化学方法实现免疫球蛋白链间/链内二硫键的还原
    大家好,本周为大家分享一篇发表在Analytical Chemistry上的文章,Online Electrochemical Reduction of Both Inter- and Intramolecular Disulfide Bridges in Immunoglobulins1。该文章的通讯作者是来自荷兰伊拉斯姆斯大学医学院的Martijn M. Vanduijn研究员。许多蛋白质中都包含着二硫键,二硫键是指连接不同肽链或同一肽链中两个不同半胱氨酸残基的巯基组成的化学键(-S-S-)。在蛋白质分子中,二硫键起着稳定肽链空间结构的作用。二硫键数目越多,蛋白质分子对抗外界影响的能力就越大。维持二硫键的完整有利于蛋白质的液相色谱分离,但却给后端的质谱分析带来了挑战。常规的方法是在质谱分析前期对蛋白质进行变性、还原、烷基化处理,这些前处理过程可以有效的减少二硫键对后续酶切或二级碎裂(MS/MS)的干扰,但却非常繁琐耗时,除了会产生副反应以外,蛋白样品也可能在前处理过程中发生丢失。一个有效的替代方法是采用电化学还原。一个配备金属电极的流通池,仅需要施加适当电压于电极上,流通池中蛋白分子上的二硫键就可以被还原。目前,这种微型电化学反应池已实现商业化,可在线连接至质谱前端,蛋白样品经电化学还原,离子源活化,二级碎裂后可直接进行基于MS/MS谱图的序列匹配。尽管如此,电化学反应池在设计、电极材料组成、流通池的大小以及施加的电势等方面仍在不断的提高与创新。免疫球蛋白(抗体)包含有多个链间/链内二硫键。Simone Nicolardi等人曾在2014年将电化学反应器与FTICR质谱联用用于单克隆抗体的分析,从MS1谱图中可以明显地观察到单克隆抗体由于链间二硫键还原后生成的重链和轻链。然而,由于还原不完全,导致重链/轻链上的链内二硫键仅部分打开。类似的不完全还原在Kasper D. Rand组中电化学还原与氢氘交换质谱联用中也能观察到。这种不完全还原会影响蛋白中肽链的精准测量(一对二硫键引起2 Da的质量偏差),同时,关闭的二硫键也会干扰其跨度区域的二级碎裂,碎裂产物也较难通过计算软件进行预测或分析。本文介绍了一种改进的在线电化学还原方法可以实现单克隆抗体链间/链内的完全还原。装置如图1所示,蛋白样品注入系统后在1μL/min的流速下进行色谱分离,色谱柱后流出液与19 μL/min的补充液(1%甲酸,50%乙腈)在T型管中混合,随后以20 μL/min的流速经过电化学反应池(电化学反应池固有体积为19 μL),最终还原后的反应液进入质谱进行检测。值得注意的是,补充液中的50%乙腈有利于蛋白变性,而1%甲酸则为还原反应提供氢原子,促进还原反应的进行。图1. 在线电化学反应池耦联质谱装置示意图为了考察整个方法的可行性及普遍适用性,作者利用该装置对一系列的单克隆抗体进行了电化学还原和质谱检测。如图2A为贝伐珠单抗在800 mV还原电势下色谱分离的总离子流图(TIC),图2B为图2A中色谱峰所对应的一级质谱图(MS1)。从MS1可以看出有两组电荷态分布分别对应重链和轻链,说明在800 mV电势下,贝伐珠单抗链间二硫键发生了还原,由于还原发生在色谱分离之后,所以重链和轻链产生了共流出,仅在TIC图中观察到一个色谱峰。相比较柱前还原,这种色谱柱后二硫键还原会导致肽链的共流出,质荷比接近的肽链则会产生重叠的电荷分布进而干扰谱图的解析。但这种方法在分析复杂的蛋白样本具有明显有优势,可以将还原后生成的肽链与蛋白母体相关联,方便溯源。图2C则为贝伐珠单抗在不同电势下的还原情况,随着电势的逐渐增加,MS1去卷积谱图上逐渐观察到部分还原生成的重链、轻链或重轻链组合,当电势达到1000 mV时,几乎所有的链间二硫键都实现了还原。对于链内的二硫键,由于还原产生的质量改变较小(轻链包含两个二硫键,还原后质量增加4.032 Da),且存在未还原、部分还原以及完全还原肽链间的信号干扰,所以不太容易从MS1谱图确认链内二硫键的还原情况。但轻重链朝高电荷态偏移(图2D)间接说明链内二硫键在打开,肽链更加舒展,更容易质子化。图2. 在线还原系统分析贝伐珠单抗:A)贝伐珠单抗总离子流图;B)对应色谱峰的一级质谱图;C)在不同还原电势下的一级质谱图(去卷积);D)重链在不同还原电势下电荷态的偏移。为了更加准确地评估链内二硫键的还原情况,作者模拟了不同氧化还原态的贝伐珠单抗轻链19+电荷态的同位素分布情况。如图3A,从上到下分别是模拟的完全还原(4 x SH)、部分还原(SS + 2 x SH)以及未还原(2 x SS)同位素分布。将实验测得同位素分布与模拟的同位素分布进行比对,计算每种氧化还原形式对总信号的贡献占比(图3B)。经过比对发现在1000 mV的电化学还原下是可以实现链内二硫键的完全还原的。因此,最终电化学还原设置为1000 mV。链内二硫键的完全还原可以极大的提高肽链的碎裂效率,获得更加丰富的MS/MS数据用于序列匹配。如图4所示,贝伐珠单抗以及西妥昔单抗的轻链19+电荷态被分离并碎裂。可以看到当施加1000 mV还原电势在质谱分析的前端时,轻链的二级碎片明显增加,特别是横跨链内二硫键的区域(图4,黄色阴影)。此外,在质量匹配的过程中也可以观察到二硫键处于还原状态,考虑还原氢引起的质量增加可以实现更多二级碎片的匹配。图3. A)不同氧化还原态的贝伐珠单抗轻链19+电荷态的同位素分布模拟;B)不同实验条件下的二硫键还原情况图4. MS/MS数据评估链内二硫键的还原情况总之,本文开发了一种在线电化学还原方法能够实现免疫球蛋白链间/链内二硫键的完全还原。该方法能够简化蛋白样品的前处理过程,方便后续的质谱测定。与之前的电化学反应器相比,该系统能实现链内二硫键还原的主要原因可能有以下几点:1、电化学流通池所用的表面材料,之前是全钛的设计,现在是表面镀铂。2、之前是三电极配置(工作电极,参比电极,辅助电极),而现在的设计减少至两个电极,驱动还原的电势适用于这种调整后电极配置。3、补充液的条件(50%乙腈和1%甲酸)对还原有利。此外,该电化学系统仍有需要改进的地方,例如:电化学反应池的体积过大、还原电势过高会影响质谱检测的信噪比等。该方法具有广阔的应用前景,无论是在蛋白质组学还是在结构质谱分析中。撰稿:刘蕊洁编辑:李惠琳原文:Online Electrochemical Reduction of Both Inter- and Intramolecular Disulfide Bridges in Immunoglobulins参考文献1.Vanduijn MM, Brouwer HJ, Sanz de la Torre P, Chervet JP, Luider TM. Online Electrochemical Reduction of Both Inter- and Intramolecular Disulfide Bridges in Immunoglobulins. Anal Chem. 2022, 94(7): 3120-3125. 2.Nicolardi S, Deelder AM, Palmblad M, van der Burgt YE. Structural analysis of an intact monoclonal antibody by online electrochemical reduction of disulfide bonds and Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry. Anal Chem. 2014, 86(11): 5376-5382.3.Trabjerg E, Jakobsen RU, Mysling S, Christensen S, Jørgensen TJ, Rand KD. Conformational analysis of large and highly disulfide-stabilized proteins by integrating online electrochemical reduction into an optimized H/D exchange mass spectrometry workflow. Anal Chem. 2015, 87(17): 8880-8888.
  • 【CEM】环状二硫键桥肽的全自动合成
    一、引言含有二硫键的环肽代表了一类具有广泛生物功能的化合物,其功能范围从毒素到重要的激素。1二硫键有助于稳定肽的二级结构和构象,这有利于提高蛋白水解稳定性和目标亲和力。2由于它们具有潜在的治疗价值,对合成含二硫键桥连的环肽的兴趣稳步增长。通过使用正交保护的半胱氨酸氨基酸,如Fmoc-(S)-Cys(Mmt)-OH和Fmoc-(S)-Cys(STmp)-OH(图1),可以制备含有二硫键的肽。Cys(Mmt)基团可以使用稀释的三氟乙酉夋(TFA)溶液选择性去保护,而Cys(STmp)基团则使用二硫苏糖醇(DTT)作为还原剂进行正交去保护。去保护后,使用N-氯琥珀酰亚胺(NCS)作为温和氧化剂,可以选择性氧化Cys巯基形成二硫键。3 在这里,我们报告了使用Liberty BlueTM微波肽合成器全自动合成良好纯度的含二硫键桥连的环肽。一个骨形态发生蛋白受体激活素样激酶3 (Alk3)的肽激动剂THR-1234,在3小时内完成合成,纯度为77%。最后,一种含有两个二硫键的锥蜗牛毒素肽(Conotoxin-SI)5在不到4小时内合成,纯度为67%。将微波能量应用于二硫键桥连肽的合成可以实现更高效的偶联,从而快速合成并达到高纯度(CarboMAXTM)。6图1. 左:Fmoc-(S)-Cys(Mmt)-OH;右:Fmoc-(S)-Cys(STmp)-OH二、实验部分HE-SPPS材料和方法:所有肽都是在CEM Liberty Blue&trade 自动微波肽合成器上合成的,使用的是Rink Amide ProTide&trade LL树脂(0.19 mmol/g替换)或Cl-MPA ProTide&trade LL树脂(0.18 mmol/g替换)。使用DMF进行后去保护洗涤,然后采用DIC/Oxyma活化方法进行偶联。肽树脂在CEM Razor® 肽裂解系统上用TFA/TIS/H2O/DODT(92.5/2.5/2.5/2.5)裂解。肽在冷乙酉迷中沉淀,粗品在分析前进行冻干。 分析:粗肽在配备了Acquity UPLC BEH C8柱(1.7 μm, 2.1 x 100 mm)的Waters Acquity UPLC系统上进行分析,该系统装有PDA检测器。UPLC系统连接到Waters 2100单四级杆MS用于结构测定。峰分析是在Waters MassLynx软件上完成的。分离是通过(i)水中的0.05% TFA和(ii)乙腈中0.05% TFA的梯度洗脱进行的。三、结果和讨论A)合成THR-123,CYFDDSSNVLCKKYRS-CO2H选择THR-123(图2)来展示含有C端酸的单一二硫键桥连肽的合成。该肽在10 µ mol规模上使用Cl-MPA ProTide&trade LL树脂(0.18 mmol/g替换)进行合成。第一个氨基酸使用CEM之前报道的氯化物加载循环自动加载。所有其他氨基酸循环使用1分钟/90º C去保护和一次2分钟/90º C与DIC/Oxyma偶联(使用Fmoc-(S)-Cys(Mmt)-OH用于C)。使用2% TFA的DCM溶液进行Cys(Mmt)的去保护。反应在室温下进行1分钟,重复五次。使用25 mM的NCS的DMF溶液实现二硫键的形成。反应在室温下进行15分钟。在Liberty Blue自动微波肽合成器上进行的THR-123的微波增强SPPS产生了77%纯度的目标肽(图3)。图2.THR-123图3. THR-123的UPLC色谱图B) 合成Conotoxin-SI,ICCNPACGPKYSC-NH2选择Conotoxin-SI(图4)来展示含有两个二硫键的环肽的合成。该肽在10 µ mol规模上使用Rink Amide ProTide&trade LL树脂(0.19 mmol/g替换)进行合成。所有氨基酸循环使用1分钟/90º C去保护和一次2分钟/90º C与DIC/Oxyma偶联(使用Fmoc-(S)-Cys(Mmt)-OH用于C;使用Fmoc-(S)-Cys(STmp)-OH用于C)。使用2% TFA的DCM溶液进行Cys(Mmt)的去保护。反应在室温下进行1分钟,重复五次。使用25 mM的NCS的DMF溶液实现二硫键的形成。反应在室温下进行15分钟。使用5% DTT + 0.1 M NMM的DMF溶液进行Cys(STmp)的去保护。反应在室温下进行5分钟,重复三次。最后,使用25 mM NCS的DMF溶液形成第二个二硫键(室温下15分钟)。在Liberty Blue自动微波肽合成器上进行的Conotoxin-SI的微波增强SPPS产生了67%纯度的目标肽(图5)。图4.Conotoxin-S图5. Conotoxin-SI的UPLC色谱图四、结论采用全自动快速合成技术,我们成功高效地完成了含二硫键桥接的环肽的合成,并且实现了较高的纯度。借助CarboMAX&trade 6化学技术,偶联效率得到了显著提升,这不仅极大缩短了合成时间,还确保了产物的高纯度。例如,一个C端带有羧酸的环状二硫键桥接肽——THR-123,在短短不到3小时的时间内就被迅速合成出来,且纯度达到了77%。相比之下,传统的室温合成方法通常需要长达20小时来合成包含两个二硫键的Conotoxin-SI。3而利用微波增强的固相肽合成技术(SPPS),在不到4小时内就制备出了纯度为67%的相应肽。引用1 Góngora-Benítez, M. Tulla-Puche, J. Albericio, F. Chem. Rev. 2014, 114 (2), 901–926.2 Adessi, C. Soto, C. Curr. Med. Chem. 2002, 9 (9), 963–978.3 Postma, T. M. Albericio, F. Org. Lett. 2013, 15 (3), 616–619.4 Sugimoto, H. LeBleu, V. S. Bosukonda, D. Keck, P. Taduri, G. Bechtel, W. Okada, H. Carlson, W. Bey, P. Rusckowski, M. Tampe, B. Tampe, D. Kanasaki, K. Zeisberg, M. Kalluri, R. Kalluri, R. Nat. Med. 2012, 18 (3), 396–404.5 Azam, L. McIntosh, J. M. Acta Pharmacol. Sin. 2009, 30 (6), 771–783.6 CEM Application Note (AP0124) - “CarboMAX - Enhanced Peptide Coupling at Elevated Temperature.”
  • 刘淑莹研究员:利用MALDI-MS研究含有二硫键的蛋白质和多肽问题
    仪器信息网讯,2009年11月7日,由中国质谱学会有机质谱专业委员会与中国分析测试协会联合举办的“2009年中国有机质谱年会”在北京成功召开,会议为期三天,出席会议人数达300人。仪器信息网作为特邀媒体也应邀参加。   此次质谱年会为与会代表准备了丰富的报告内容,内容涉及生命科学、医学、药学、环境科学、食品安全、毒物分析中的质谱应用研究以及质谱仪器研发的新技术、新进展等。仪器信息网将进行系列报道。   中科院长春应化所的刘淑莹研究员选取了含有二硫键的蛋白质和多肽为研究对象,详细研究了其测定分析的问题。二硫键是一种常见的蛋白质翻译后的修饰,文献报道的研究方法有:NMR、部分还原与烷基化、Edman降解与MS相结合(FAB、ESI-MS、MALDI-MS),但是NMR方法需要相当多的被拆分物,部分还原与烷基化需要耗费相当长的时间,因此课题组选择Edman降解与MS相结合中的MALDI-MS方法进行研究。 中科院长春应化所的刘淑莹研究员   课题组利用MALDI-MS研究了胰岛素、β2-微球和溶菌酶的二硫键断裂,发现MALDI线性和反射模式下均观察到了二硫键的快速裂解,并且这些裂解碎片是在气相中产生的,而不是来源于样品制备时在液相中的分解。在上述研究的基础上,课题组建立含有二硫键蛋白/多肽的新方法——还原后巯基与特定基质加成反应。实验中发现了样品与某些基质发生了加合反应,并进一步研究了基质、pH等对加合反应的影响,确定了其反应的机理,最后用于实际样品的研究。   最后,刘淑莹研究员与大家相约长春,邀请大家参加明年在长春举办的第三届世界华人质谱大会。
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