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浮游生物培养器

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浮游生物培养器相关的论坛

  • 请教:关于浮游生物

    公司想做浮游生物的检测,包括浮游动植物,请问下都需要那些仪器设备或者器材,每种器材的大概或者说平常价格区间为多少??万分感谢!

  • 浮游生物网自家生产厂家

    浮游生物网自家生产厂家

    [img=,397,220]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/06/201706201629_01_3194653_3.jpg[/img][b]技术规格[/b][color=#8d9395]• 名称:浮游生物网[/color][color=#8d9395]• 介绍:13号浮游生物网用于水中枝角类和挠足类等浮游动物样品的采集 25号浮游生物网用于水中浮游植物、原生动物和轮虫等样品[/color][color=#8d9395]的采集。可配备钢丝吊绳。[/color][color=#8d9395]• 网衣:25号网(200目 0.064mm孔径)、13号网(125目 0.112mm孔径)[/color][color=#8d9395]• 材质:人造尼龙[/color][color=#8d9395]• 网长:50cm[/color][color=#8d9395]• 网圈内径:20cm[/color][color=#8d9395]• 收集器:铝合金/铜(可配备尼龙绳及缠绕轴)[/color][color=#8d9395]• 浮游生物网规格:25#、13#[/color]

  • 洁净室浮游菌采样培养后,菌落里可能有致病菌吗

    [img=,690,112]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/04/202404091628166498_4458_5519762_3.png!w690x112.jpg[/img]1、给定一个洁净室,对其进行浮游菌采样,采样后TSA平皿按上述标准培养,请问培养后菌落里是否可能有致病菌?因为采样器是不分辨空气中细菌种类(全量采集),谁也不知道空气中是否有致病菌,是不是培养后有可能有致病菌。2.还有TSA培养基限制致病菌繁殖吗?3.还有菌落计数后的样品,是否不管其是否潜在涉及致病菌,都要高温灭菌后,当危险废物处理,还是确认不涉及致病菌后,计数后不高温灭菌,当危废处理?不太懂微生物,求教。

  • 【原创大赛】解剖FKC-1型浮游菌采样器,揭示Anderson(安德森)检测机理

    【原创大赛】解剖FKC-1型浮游菌采样器,揭示Anderson(安德森)检测机理

    现代社会,人们对生存环境中的空气质量的重要性认识日益提高。在制药、食品、化妆品行业和环境保护等领域,因为空气中的微生物日益污染和影响产品和其生产过程,从而影响人类的健康,空气质量监测、控制非常重要。 在我国,根据GBT 16293-2010 医药工业洁净室(区)浮游菌的测试方法,对于洁净区空气中浮游菌的检测,使用浮游菌采样器收集悬浮在空气中的活微生物粒子于专门的培养基中,进行培养繁殖到可见到菌落计数,从而判定该洁净区的微生物浓度。一、浮游菌采样器原理:现行的浮游菌采样方法,绝大部分是基于Anderson(安德森)撞击法原理。可分为狭缝式采样器、离心式采样器、针孔式采样器。狭缝式采样器由内部风机将气流吸入,通过采样器的狭缝式平板,将采样的空气喷射并撞击到缓慢旋转的平板培养基表面上,附着的活微生物粒子经培养后形成菌落。离心式采样器由于内部风机高速旋转,气流从采样器前部吸入从后部流出,在离心力的作用下,空气中的活微生物粒子有足够的时间撞击到专用的固定培养基条上,附着的活微生物粒子经培养后形成菌落。针孔式采样器是气流通过一个金属盖被吸入,盖子上是密集的经过机加工的特制小孔,通过风机将收集到的细小的空气流直接撞击到平板培养基表面上,附着的活微生物粒子经培养后形成菌落。二、Anderson(安德森)撞击法理论(摘编):1958年美国人ARIEL A. Anderson在杂志上发表文章:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307160225_451594_1807987_3.jpg 按照Anderson撞击理论,空气中的尘菌粒子经过六层撞击塔(即取样器)时,每一级平皿培养基对粒子截留与该级空气微孔大小、速度高低有关,对于不同大小粒子的截留是不同的。六级Anderson取样器原理示意图如下:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307160226_451595_1807987_3.jpg下面是当初Anderson实验的六级取样器:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307160226_451596_1807987_3.jpg表格中是当时的实验数据:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307160226_451597_1807987_3.jpg六级采样培养皿上的菌落照片:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307160226_451598_1807987_3.jpg对Anderson(安德森)撞击理论感兴趣的网友,可参见本文结尾的附件Anderson(1958)原文。三、FKC-1型浮游菌采样器拆解FKC-1型浮游菌采样器:是一款国产的多孔吸入空气采样器。它根据等速采样理论设计,采样直接,采集头口风速与洁净室内风速基本一致,能准确地反映洁净室内的微生物浓度。采样时,带尘菌空气高速通过微孔,被均匀撞击在培养皿内的琼脂表面;这些活体微生物在琼脂表面获得营养均匀和充分,在培养室培养过程中,细菌高速生长,从而得出计数结果。属于针孔式采样器。1、外观:采样器由采样头和控制器两部分组成,用航空合金铝材制作。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307160226_451599_1807987_3.jpg2、主要特征及技术指标:⑴[size=12.0

  • 浮游菌、沉降菌

    浮游菌、沉降菌如果培养后没有长菌,出报告是是报0还是未检出?谢谢!

  • 【国产好仪器讨论】之青岛众瑞智能仪器有限公司的浮游菌采样器(ZR-2050)

    http://www.instrument.com.cn/show/Breviary.asp?FileName=C157830%2Ejpg&iwidth=200&iHeight=200 青岛众瑞智能仪器有限公司 的 浮游菌采样器(ZR-2050)已参加“国产好仪器”活动并通过初审。自上市以来,这款产品已经被多家单位采用,如果您使用过此仪器设备或者对其有所了解,欢迎一起聊聊它各方面的情况。您还可以通过投票抽奖、参与调研等方式参与活动,并获得手机电子充值卡。【点击参与活动】 仪器简介: 空气浮游菌采样器 产品简介 ZR-2050型空气浮游菌采样器是一种高效的多孔吸入式采样器,它基于安德森撞击原理,撞击速度为10.8m/s,相当于安德森撞击等级的第五级。仪器的吸气装置将空气通过多孔采样头吸入,撞击到Ф90mm的培养皿上,空气中的微生物即被“捕获到琼脂培养基上。该仪器可广泛应用于制药工业、食品工业、饮料自来水、药检所、卫生防疫、医院、公共场所等有关行业和部门。 符合标准 GMP 药品食品生产质量管理规范 ISO 14698-1/2 洁净室及相关控制环境的生物污染控制 GB/T 16293-2010 医药工业洁净室(区)浮游菌的测试方法 专利情况 一种自带校准装置的空气浮游菌采样器专利号:ZL 2011 2 0166371.9 执行标准 Q/0212 ZRB006-2011 空气浮游菌采样器 功能特点 标准撞击法筛孔式工作方式,相当于安德森撞击等级的第五级尖端空气流量传感器,恒流采样,流量控制精度高。电量不足或流量误差超2.5%自动关机。 自动测量环境温度、大气压,流量随着温度、大气压的改变自动保持恒流。 交直流两用,内置高能锂电池。 可配专用三角支架,采样高度可调。 大容量数据存储。 USB接口与专用流量校准仪通信,自动校准采样流量,国内唯一拥有浮游菌采样器流量校准技术的厂家,省去大量后续服务费用。 点阵式液晶显示屏,中文菜单化操作。 实时时钟显示。 软件参数标定。 用户密码保护。 故障检测自动保护 任何平皿采样时都不会出现堵塞采不出结果的情况 任何温度 海拔 大气压下使用无需重新流量校准 极高的环境参数实时换算功能 终生免费流量校准服务。 技术指标 主要参数 参数范围 分辨率 准确度 采样流量 100L/min 1L/min 优于±2.5% 环境大气压 (80~106)kPa 0.01kPa 优于±0.53kPa 工作温度 (-20~50)℃ 采样体积设定范围 (100~3000)L 培养皿规格 Ф90mm 材质 阳极氧化铝 锂电池组 11.1V/4.4Ah 充电时间 10h 外部供电电源 DC15V,3A 主机尺寸W×D×H (Ф150×235)mm 仪器噪声 60dB(A) 整机重量 约2kg 功耗 20W....【了解更多此仪器设备的信息】

  • 【仪器心得】FKC-Ⅲ型浮游菌采样器 使用心得

    [align=center][b][font=宋体][color=#333333][font=宋体]【仪器心得】[/font][font=Arial]FKC-[/font][font=宋体]Ⅲ型浮游菌采样器 使用心得[/font][/color][/font][/b][/align][align=center][b][font=宋体][color=#333333] [/color][/font][/b][/align][font=宋体][color=#333333]FKC-Ⅲ浮游菌采样器根据等速采样理论设计,采样直接,采集头口风速与洁净室内风速保持基本一致,准确反映洁净室内微生物的浓度。采样时,带尘菌空气高速通过微孔,被均匀撞击在培养皿内的琼脂表面。对于生产环境监测必不可少。[/color][/font][font=宋体][color=#333333] [/color][/font][font=宋体][color=#333333]1.关于仪器的使用经验:[/color][/font][font=宋体][color=#333333][font=宋体]戴上已灭菌的手套,接通电源开机后,按确认键,屏幕上的字体显白,根据预测房间或区域的要求设置采样位置([/font][font=宋体]O)、采样量(L)、采样日期(D)、采样时间(T),完成后按“确认”键结束。若采样器有消毒液残留,不放入培养皿,取下外罩按启动3,开始抽气,使残留的消毒液蒸发,工作5分钟后,采样泵自动停止,关闭电源。取下外罩和针孔取样口,放入培养皿下盖,重新盖上针孔取样口和外罩,放在取样点根据被测房间或区域的级别按相应的启动键。测试结束后,泵停止抽气,关闭电源,取下培养皿盖上上盖,做好标记。[/font][/color][/font][font=宋体][color=#333333] [/color][/font][font=宋体][color=#333333]2.仪器的优点和不足[/color][/font][font=宋体][color=#333333][font=宋体]操作简单,买了设备之后就不能再找第三方实验室检测了,长期看节省了成本。但是这种方法虽然简便[/font][font=宋体],[/font][/color][/font][font=宋体][color=#333333]但有不少缺点[/color][/font][font=宋体][color=#333333]例如[/color][/font][font=宋体][color=#333333][font=宋体]不能知道单位体积空气中所含细菌的数字[/font] 细菌的自然沉降慢,所以难以收集,效率低,采集时间长[/color][/font][font=宋体][color=#333333],[/color][/font][font=宋体][color=#333333][font=宋体]产生的误差大。[/font] [/color][/font][font=宋体][color=#333333] [/color][/font][font=宋体][color=#333333]3.总结[/color][/font][font=宋体][color=#333333]浮游菌采样器[/color][/font][font=宋体][color=#333333]是一种高效的多孔吸入式微生物采集器。[/color][/font][font=宋体][color=#333333]起初我们的环境动态监测是找其他实验室做的,每年的费用支出累计完全可以购买一台了。对于验证较多的实验室也是降低成本的很好的选择。[/color][/font][font=宋体][color=#333333] [/color][/font]

  • 关于微好氧/低氧培养(微生物)和三气培养(细胞)

    对于微生物培养,大家常用的是恒温培养箱、霉菌培养箱、震荡培养箱、恒温水浴箱、发酵罐等,满足了日常工作需要;当然,这都是针对好氧菌而言。 而对于厌氧菌和兼性好氧菌,则需要考虑选用合适的厌氧、微好氧/低氧培养装置(如厌氧培养盒/袋、厌氧罐以及专业的厌氧培养箱、厌氧工作站、微好氧/低氧培养箱、厌氧发酵罐/反应池等)。 常规的动物细胞培养,一般选用CO2培养箱、滚瓶培养装置、悬浮培养装置、生物反应器/细胞培养罐等。为更接近或模拟体内微环境,三气培养箱(即CO2培养箱加配O2传感器)逐渐为人们所熟知!当然,更专业的Biospherix 系列O2/CO2控制器加培养盒、H35微好氧/低氧细胞培养箱、X vivo 一体化细胞工作站等三气培养装置也给大家提供了更多的选择!

  • 微生物培养的仪器问题

    微生物培养的仪器问题对于微生物的研究,拥有大量的实验材料是十分必要的,这就需要进行微生物的培养。而且,对于某些微生物病原体的检测,也是需要进行微生物的培养。所以微生物培养用的培养基的制作也就成为了最基本的实验技术。 然而现今培养基已经可以工业化生产,技术也比较成熟,也就对培养基不是那么重视了。常识性的,培养基分为天然的(Defined Media)和合成的(Complex Media) 。天然培养基是提供接近于微生物生长的自然环境的营养物质,然而为此付出的代价是我们并不完全清楚其中的物质的组成或其含量,这种培养基可以用于实验用基本培养基和生产,但在作某些实验时得到的数据会不稳定。合成的培养基是用多种高纯化学试剂配制成的,各种成分和含量都是已知的。虽然制作成本高,也很烦琐,但成分精确,重复性强,用于对于营养、代谢、生理生化特性的研究等要求较高的工作。然而可以在这种微生物培养基上生长的微生物十分有限,原应是许多微生物的生长代谢我们并不完全了解,无法配出微生物满意的营养基质。现在的微生物培养技术已经相当成熟了,然而其中总有令人不满的地方。比如,无论何时空气中总有微生物,无论是制作培养基过程中还是将微生物接种到培养基上时总会和空气接触,很容易想到不久后长出的菌落到底是谁的,样品的?还是空气的?这些也许是无法避免的,但确实会带来很多麻烦。整个过程充满着失败的可能性,没有先进的仪器设备就无法降低这种可能性,对于研究这种时时处处在身边的小东西我们总显得有点力不从心。用铁丝接种环划线就很容易弄坏培养基,更别说分离出单菌落了。这需要经验和技术,对于一个研究微生物的人来说本不该去关心的经验和技术。前人也许是这样的,但我们未必也需要这样。对于无法用肉眼观察的东西,研究和培养是很困难的,尤其是没有先进的仪器设备的时候,那种痛苦是可想而知的。我们现在用的固体培养基大都是用琼脂。在琼脂发现以前,想要做细菌的纯培养是非常困难的,那时候只有液体培养基,根本无法进行纯培养。后来用凝胶培养基,但很多细菌都无法在基质上正常生长,直到琼脂被用来做固体培养基的基质,才解决了这个难题。应为琼脂是多聚糖的硫酸盐,其中主要是D-半乳糖,一般微生物很难分解利用它。这在微生物培养上是一次很大的革新。由于材料容易获得,而且本身的特性又很好,所以至今仍在使用。然而,微生物的培养依旧受到很大限制。我们对微生物的了解还不够多,许多微生物的培养只能用天然培养基,这在要求可重复的实验中会带来很大的麻烦;另外,条件的限制导致很多实验都无法达到无菌环境,实验结果有多少是可靠的,很难说明。微生物的培养只是一种手段,但却是一种很重要的手段。虽然只要能说明研究成果就可以了,但在实际操作中也确实有着非常繁琐,难以操作的地方存在,只要做过微生物培养的实验便可以知道,想要做出漂亮的结果是非常困难的,其中需要改进的地方有很多,比如有没有办法就算再不是无菌的环境下也能尽量减少空气中细菌的干扰,可不可以用更柔软的材料做接种环来划线,有没有其他的方法来给涂布棒灭菌。不然实验失败很难找出其中的原因。虽然实验失败的可能性很多,但我们至少应该减少它发生的可能性。微生物培养基是微生物实验必不可少的组成,它以及与它有关的组成构成了微生物培养的装置,这些仪器和操作中的不确定因素太多,这样做出的实验结果是没有说服力的。这些仪器和操作有待于改进。(因为我的基础太差,所以无法指出其中需要改进的地方到底应该改成怎样,但已经明显体会到了这些仪器以及操作的不足之处。)

  • 微生物培养的污染因素

    微生物培养的污染因素及预防方法随着现代生物学研究的发展,微生物培养成为了重要的实验手段之一。然而,在进行微生物培养过程中,存在着许多污染因素,这些污染因素可能会对实验结果产生影响或者导致实验结果不准确。下面将介绍一些常见的微生物培养的污染因素以及相应的预防方法。1、风速与风向培养箱内的风速和风向对于保持温度的均一性以及避免污染都非常重要。一般来说,适当的风速和风向可以帮助培养箱内的温度保持均一,有利于微生物的正常生长。然而,当风速过大时,可能会导致培养基干裂,从而影响培养结果的准确性。另外,药典要求培养皿倒置培养,这是因为经过多次验证发现,当培养箱运行时的风向与培养皿盖的朝向不一致时,容易引入空气中的灰尘、杂菌等,从而污染培养物。因此,在使用培养箱的过程中,需要注意风速和风向的控制,并尽量与培养皿盖的朝向一致。2、培养皿的密闭性培养皿由平底和盖组成,一些微生物实验室常用的培养皿直径为90mm,采用顶盖封装。然而,由于不同厂家制造的培养皿的成型工艺和参数不同,平底和盖之间的间隙也存在差异。这些间隙虽然能够满足需氧型微生物对氧气的需求,但也增加了污染的可能性。经过实验证实,在同样的培养条件下,间隙大的培养皿比间隙小的培养皿更容易受到污染。此外,间隙的大小不同还会导致培养皿内培养基的水分蒸发不一致,从而影响培养结果数据的一致性。因此,在使用培养皿的过程中,需要选择质量可靠的培养皿,并注意平底和盖之间的间隙情况。3、培养箱内的湿度微生物生长需要一定的湿度条件。湿度对微生物生长的影响是通过影响微生物细胞内水分活度进而影响其新陈代谢来实现的。不同微生物的生长对湿度有一定的要求,一般来说,细菌最为敏感,酵母和霉菌次之。降低湿度会使微生物的水分活度降低,从而减慢其生长速度。因此,在微生物培养的过程中,需要保持适宜的温度和湿度,以有利于微生物的生长。培养箱内湿度的来源主要有培养基的水分散失、湿度自动调控系统以及培养箱所在的环境。因此,在使用培养箱的过程中,需要控制湿度,保持适宜的生长环境。4、培养物溢洒培养物溢洒是指含有生物危险物质的液体或固体物质意外与包装材料分离的过程。一旦发生生物危害物品的溢出,尤其是含有病原微生物的培养物的溢出时,会导致微生物的生长和繁殖,从而引起培养箱的污染。为了预防交叉污染,当发生培养物溢洒时,需要及时清理和消毒培养箱。应该使用有效的消毒剂对培养箱的内壁以及接触溢出物品的材料进行消毒或高压灭菌。此外,如果溢洒物中含有破碎的玻璃等材料,不得直接用手取走或弃置,应该使用硬纸板和镊子等工具处理,并将处理物放置在安全的废弃物容器中。最后,对清洁工具也需要进行消毒处理,以确保卫生安全。5、自然环境污染培养箱需要放置在洁净、干燥、通风良好的自然环境中。如果环境中空气洁净度不够高,容易滋生细菌、真菌和病毒等微生物,并通过平底和盖之间的间隙污染培养基,从而影响培养结果数据的准确性。因此,在使用培养箱的过程中,需要注意放置环境的卫生和通风状况,尽量避免自然环境的污染。综上所述,微生物培养过程中存在着多种污染因素,这些因素可能会对实验结果产生影响或导致实验结果不准确。为了保证实验结果的准确性,需要在使用培养箱进行微生物培养时,注意控制风速和风向、选择合适的培养皿、控制湿度、避免培养物溢洒以及注意自然环境的卫生状况。只有这样,我们才能够获得可靠且准确的微生物培养结果。

  • 【版主已悬赏50分】【讨论】浮游菌的检测

    在培养基无菌灌注试验中,有的方案有对环境浮游菌的监测,有的则没有,想请教一下大家,没有可行否?为什么?谢谢![em44][B]本版版主将对跟帖中有效回答主帖问题的朋友额外奖励50分(回帖时间限定为10月28日至11月4日)。[/B]--jun来也!奖励分发放如下:gglon(15分);cbjcn1985(30分);baifugui(5分),将通过转让积分形式给予,请各位注意查收。--jun来也于071105

  • 【分享】浮游菌采样器的原理介绍

    浮游菌采样器根据狭缝撞击的原理,以缝隙加速法采集空气中的浮游细菌,具有采集效率高的特点 。浮游菌采样器内置进口大流量无油真空泵,可以在很短的时间内完成GMP要求的流量采集,并可根据使用要求设置不同的采样量。由单片微电脑控制运行,操作简便,采集过程自动进行。与常规的沉降法相比,浮游细菌采样器能直接得到单位体积空气中所含的菌落数,而且不受环境气流的影响。 其中ZH7498浮游菌采样器设计合理,性能稳定,操作方便,其主要性能指标达到了国外同类仪器的先进水平。应用于制药厂、医院、生物制品、食品加工、公共场所、劳动卫生、检验检疫等行业。

  • 【分享】生物实验室培养箱类别与原理

    在过去的数十年间,细胞生物学、分子生物学、药理学等的研究领域都有了惊人的长足进步,同时,这些领域中的技术应用也不得不跟上“脚步”。虽然典型的生命科学实验室设备有了很大的改变,但培养箱依然是实验室中的主要组成部分,其使用的最终目的也都是维持和促使细胞和组织更好地生长。然而,随着技术的进步,其功能和运作都变得越来越精确、可靠和方便。如今,培养箱已成为实验室最普遍使用的常规仪器之一,已广泛应用于医学、免疫学、遗传学、微生物、农业科学、药物学的研究和生产。除此之外高等院校以及各科研院所只要涉及到需要做低温恒温试验、培养试验、环境试验、储藏菌种、生物培养之用时,培养箱自然是不可缺席的重要设备。培养箱类别与原理(1)生化培养箱 目前应用最为广泛的主要有生化培养箱、二氧化碳培养箱、直接电热式培养箱、隔水电热式培养箱四种类型,每种类型都有其特点和独特的功用,以用于不同的科研及教学领域。其中生化培养箱的应用最为普遍,这种培养箱同时装有电热丝加热和压缩机制冷。可适应范围很大,一年四季均可保持在恒定温度,因而逐渐普及,被广泛应用于细菌、霉菌、微生物、组织细胞的培养保存以及水质分析与BOD测试,适合育种试验、植物栽培等,在高校所开设的如环境保护、卫生防疫、药检、农畜、水产等专业都有使用。(2)二氧化碳培养箱 二氧化碳培养箱是在普通培养的基础上加以改进,通过对周围环境条件的控制制造出一个能使细胞/组织更好地生长的环境,条件控制的结果就会形成一个稳定的条件:如恒定的酸碱度(pH值:7.2-7.4)、稳定的温度(37°C)、较高的相对湿度(95%)、稳定的CO2水平(5%),这就是为什么上述领域的研究员如此热衷于使用方便稳定可靠的二氧化碳培养箱。此外,由于增加了二氧化碳浓度控制,并且使用微控制器对培养箱温度进行精确控制,使生物细胞,组织等的培养成功率、效率都得到改善。总之,二氧化碳培养箱是普通电热恒温培养箱不可替代的新型培养箱。

  • 悬浮培养工艺与转瓶培养工艺的比较分析

    作者: 陈文庆 王建超 刘华杰 高飞 张韧 (北京清大天一科技有限公司 102200 ) (《中国兽药杂志》 2010.44 ( 10 ): 37-41 )【摘要】 采用反应器全悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒与微载体悬浮培养Vero细胞生产狂犬病毒分别与相应的转瓶培养工艺生产案例对比分析,比较悬浮培养工艺与转瓶培养工艺的生产效益。分析显示,与转瓶培养工艺相比,反应器悬浮培养工艺获得的细胞密度、病毒效价、产品的产量和质量明显提高,生产时的能耗和劳动力需求明显降低。结果表明悬浮培养工艺的生产效益明显高于转瓶培养工艺,适宜于国内生物制品工业化生产的升级换代。【关键词 】 细胞培养;生物反应器;悬浮培养;微载体细胞悬浮培养技术是指细胞在生物反应器中自由悬浮于培养液内生长增殖的一种培养方法。根据细胞是否贴壁,又分为全悬浮细胞培养和贴壁细胞微载体培养。国际上该项技术发展较快,已趋向成熟,是疫苗、抗体等生物制品生产的普遍生产工艺模式。与转瓶培养技术相比,该工艺具有操作简单、产率高、容易放大等优点,本文结合口蹄疫病毒和狂犬病毒的生产,分别对细胞悬浮培养工艺与转瓶培养工艺的经济效益等进行了分析和分析。1. 全悬浮培养口蹄疫病毒与转瓶培养案例对比高效、安全的病毒性疫苗是防止口蹄疫情发生的最有效方法。BHK21细胞是繁殖FMDV的理想宿主,早在1962年Capstick PB等就实现FMDV的悬浮培养。1965年Telling, R.C.等实现在不锈钢发酵罐中悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫疫苗。目前国外(Intervet公司、Merial公司)普遍已经采用2000~5000L反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫苗。本文就本公司自主研发的650L生物反应器和无血清培养基进行悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫疫苗与转瓶培养工艺进行比较和分析。1.1主要材料细胞株:BHK21贴壁细胞株(中国兽医药品监察所)毒 株:FMDV-O型(某兽用疫苗企业)培养基:低血清MEM培养基(产品代号MD611)、BHK21细胞无血清培养基(北京清大天一科技有限公司)血 清:特级新生牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)仪 器:5 L反应器(德国贝朗),120L和650LCLAVORUS ® 生物反应器(北京清大天一科技有限公司)1.2实验方法1.2.1转瓶培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒将复苏的BHK21细胞在T75培养瓶中使用低血清培养基(含5%牛血清)培养,连续传代扩增接种15L转瓶,37 ℃培养48小时,传代比例为1:8-1:10,按常规方法接种病毒及维持液,细胞病变90%左右收获病毒液。1.2.2反应器全悬浮无血清培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒(1)贴壁细胞悬浮驯化培养:用BHK21细胞无血清培养基在恒温摇床或者方瓶中无血清驯化贴壁BHK21细胞,可采用直接驯化或者逐级降低血清驯化等方法,每代观察细胞数量和细胞活率,直至BHK21细胞在无血清培养基中的生长增殖速率正常,细胞活率达95%以上,并可连续稳定传代,说明细胞已适应无血清悬浮培养。(2)反应器用种子细胞扩增:采用反应器罐倒罐逐级放大技术,细胞从摇瓶→5 L反应器→120 L反应器→650 L反应器进行逐级放大培养。细胞培养方式为批培养,控制反应器各参数在正常范围:温度37.0 ℃、pH7.2~7.4、溶氧(DO)20~70%、搅拌转速50~150 r/min。(3)反应器培养口蹄疫病毒:待650 L反应器中细胞达到一定密度,提高培养pH至7.5左右,按一定比例直接接种口蹄疫病毒进行病毒维持培养,控制温度、pH、DO、搅拌转速等参数在合适范围,在线无菌间隔取样判断细胞病变情况并检测病毒毒价(LD50,TCID50),确定收获的最佳时间。1.3 细胞培养结果对比分别对低血清培养基15 L转瓶培养的贴壁BHK21细胞进行观察和细胞计数,反应器全悬浮培养的BHK21细胞取样进行数量和活率检测。培养条件和结果对比见表1。表1 转瓶培养和反应器全悬浮培养BHK21细胞对比http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442105_small.jpg http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442106_small.jpg http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442107_small.jpg 图1 转瓶BHK21细胞低血清培养48 hr,100X 图2 反应器全悬浮无血清培养48 hr,100X 结果显示,转瓶培养的BHK21细胞,培养48小时显微镜观察成致密单层,见图1,96小时细胞开始出现脱落死亡;反应器无血清全悬浮培养BHK21细胞48小时的细胞显微镜观察状态如图2,生长至96小时细胞密度可达5.4x106 cells/ml,活率维持在94%左右。从细胞数量比较,650L反应器培养一批的细胞数量相当于500~700个15 L转瓶培养的细胞总量。1.4 病毒培养效果对比两种不同培养工艺,细胞在满足活力要求的基础上,以同等条件分别接种FMDV病毒,取样测定病毒毒价,结果见表2。 表2 转瓶和反应器全悬浮培养BHK21细胞病毒毒价对比http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442112_small.jpg结果表明,无血清悬浮培养的口蹄疫病毒毒价(TCID50和LD50)检测不低于转瓶培养工艺。根据反应器低血清悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫完整病毒粒子(146S)检测较转瓶高10倍左右的情况,应用无血清悬浮培养工艺,杂蛋白含量更少,口蹄疫完整病毒粒子和口蹄疫疫苗质量均提高。1.5 反应器和转瓶经济效益估算对比依据培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒工艺过程要求,从细胞密度、病毒毒价、产品效力、资源环境、劳动力等方面进行简单对比,借以一窥二者的经济效益差别(见表3)。 表3 反应器无血清悬浮培养与转瓶培养BHK21细胞经济效益对比http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442114_small.jpg*按照反应器无血清悬浮培养一条生产线(5L-120L-650L)、转瓶体积15 L进行对比按照目前培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒质量要求,对悬浮无血清培养工艺的产能进行预估,一条5L-120L-650L的反应器生产线年生产病毒量约为2.1亿毫升,生产疫苗量约为4.2亿毫升。2. 人狂犬病毒微载体培养与转瓶培养的对比我国是受狂犬病危害最为严重的国家之一,近年报告狂犬病死亡人数均在2400人/年以上,一直位居我国各类传染病报告死亡数的前三位,根据有关国家成功控制狂犬病的经验,世界卫生组织提出倡议,到2020年消除人狂犬病。我国距此倡议目标还有大量工作要做,国内也对人用和兽用狂犬病疫苗的生产做了大量研究工作。下面就120L反应器微载体培养Vero细胞生产狂犬病毒效果与转瓶培养工艺和培养效果比较分析。2.1主要材料细胞株:Vero细胞株毒 株:aG株(细胞株和毒株均来自某人用疫苗企业)培养基:低血清199培养基(产品代号MD504)、 Vero细胞反应器培养用培养基(产品代号MD505), 均来自北京清大天一科技有限公司仪 器:5 L反应器(德国贝朗)、120LCLAVORUS ® 生物反应器(北京清大天一科技有限公司)血 清:特级新生牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)微载体:Cytodex 1 (美国GE

  • [基本原理] 生物实验室培养箱类别与原理整理

    http://bbs.ibioo.com/data/attachment/album/201110/25/170323wl11ub4lytsfj1sb.jpg在过去的数十年间,细胞生物学、分子生物学、药理学等的研究领域都有了惊人的长足进步,同时,这些领域中的技术应用也不得不跟上“脚步”。虽然典型的生命科学实验室设备有了很大的改变,但培养箱依然是实验室中的主要组成部分,其使用的最终目的也都是维持和促使细胞和组织更好地生长。然而,随着技术的进步,其功能和运作都变得越来越精确、可靠和方便。如今,培养箱已成为实验室最普遍使用的常规仪器之一,已广泛应用于医学、免疫学、遗传学、微生物、农业科学、药物学的研究和生产。除此之外高等院校以及各科研院所只要涉及到需要做低温恒温试验、培养试验、环境试验、储藏菌种、生物培养之用时,培养箱自然是不可缺席的重要设备。   培养箱类别与原理   (1)生化培养箱   目前应用最为广泛的主要有生化培养箱、二氧化碳培养箱、直接电热式培养箱、隔水电热式培养箱四种类型,每种类型都有其特点和独特的功用,以用于不同的科研及教学领域。其中生化培养箱的应用最为普遍,这种培养箱同时装有电热丝加热和压缩机制冷。可适应范围很大,一年四季均可保持在恒定温度,因而逐渐普及,被广泛应用于细菌、霉菌、微生物、组织细胞的培养保存以及水质分析与BOD测试,适合育种试验、植物栽培等,在高校所开设的如环境保护、卫生防疫、药检、农畜、水产等专业都有使用。   (2)二氧化碳培养箱   二氧化碳培养箱是在普通培养的基础上加以改进,通过对周围环境条件的控制制造出一个能使细胞/组织更好地生长的环境,条件控制的结果就会形成一个稳定的条件:如恒定的酸碱度(pH值:7.2-7.4)、稳定的温度(37°C)、较高的相对湿度(95%)、稳定的CO2水平(5%),这就是为什么上述领域的研究员如此热衷于使用方便稳定可靠的二氧化碳培养箱。此外,由于增加了二氧化碳浓度控制,并且使用微控制器对培养箱温度进行精确控制,使生物细胞,组织等的培养成功率、效率都得到改善。总之,二氧化碳培养箱是普通电热恒温培养箱不可替代的新型培养箱。   (3)电热式和隔水式培养箱   电热式和隔水式培养箱的外壳通常用石棉板或铁皮喷漆制成,隔水式培养箱内层为紫铜皮制的贮水夹层,电热式培养箱的夹层是用石棉或玻璃棉等绝热材料制成,以增强保温效果,培养箱顶部设有温度计,用温度控制器自动控制,使箱内温度恒定。隔水式培养箱采用电热管加热水的方式加温,电热式培养箱采用的是用电热丝直接加热,利用空气对流,使箱内温度均匀。   (4)光照培养箱   是具有光照功能的高精度恒温设备;光照培养箱是细菌、霉菌、微生物的培养及育种试验的专用恒温培养装置,特别实用于生物工程、医学研究、农林科学、水产、畜牧等领域从事科研和生产使用的理想的设备。   (5)微生物培养箱   主要适用于环境保护、卫生防疫、农畜、药检、水产等科研、院校实验和生产部门。是水体分析和BOD测定细菌、霉菌、微生物的培养、保存、植物栽培、育种实验的专用恒温,恒温振荡设备。   (6)植物培养箱   植物培养箱实际就是一个有光照的带湿度恒温培养箱,其中的光照、温度、湿度等条件能够满足植物的生长需求。植物培养箱原理是几组灯管和一套控温装置(通常5-50度)。如果高级点的还有光照设置比如几点开灯几点关灯,什么时候光照强一些等   (7)人工气候室   可人工控制光照、温度、湿度、气压和气体成分等因素的密闭隔离设备小型的称“人工气候箱”。   (8)恒温恒湿箱   恒温恒温箱:可以准确地模拟恒温、恒湿等复杂的自然状环境的,有着精确的温度和湿度控制系统的一种箱体,实验室一般用在用于植物培养、育种试验;细菌、微生物培养,用作育种、发酵、微生物培养、各种恒温试验、环境试验、物质变性试验和培养基、血清、药物等物品的储存等。可广泛适用于药物、纺织、食品加工等无菌试验、广泛应用于医疗卫生、生物制药、农业科研、环境保护等研究应用领域。恒温恒湿箱工业一般用在适用于电子电工、家用电器、汽车、仪器仪表、电子化工、零部件、原材料及涂层、镀层进行高低温,高低湿的实验、在航天、航空、船舶、兵器、电子、石化、邮电、通讯、汽车、等领域倍受青睐。

  • 【分享】十二种无血清培养基资料及目录介绍

    ㈠无血清培养基和试剂被广泛的应用于培养哺乳动物和无脊动物细胞以制备单克隆抗体,病毒抗原和重组蛋白等。大多数的无血清产品含有向细胞内转运离子的转铁蛋白和调节葡萄糖摄取量的胰岛素,以及一些蛋白质如清蛋白,纤连蛋白,胎球蛋白等,这些蛋白在细胞培养中发挥各种不同功能,如吸附毒性化合物,抗生物反应器剪切力,提供细胞贴壁所需的基质,作为脂类和其他生长因子的载体等。㈡它的优点:更高的成分限定性各批产品之间更高的产品质量一致性简化提纯和下游生产过程便于控制培养的生理环境特殊细胞类型的优化配方㈢它的种类说明⑴UltraCULTURETM培养剂(通用无血清培养基)UltraCULTURE培养剂是一种通用的无血清培养剂。它的组成包括:F-12DMEM培养基,重组人胰岛素,牛转铁蛋白,以及牛血清蛋白的纯化混合物(包括清蛋白)。UltraCULTURE培养基的总蛋白浓度大约为3mg/ml。可在UltraCULTURE培养基中添加防冻剂(Cat.No.12-132),用于无血清环境下细胞的冻存。UltraCULTURE培养基不含L-谷氨酸,使用前请先加入5ml200mM的L-谷氨酸溶液(Cat.No.17-605或17-905)应用:培养贴壁和悬浮哺乳动物细胞,疫苗生产中病毒颗粒的制备

  • 微生物培养方式

    1.分批培养(batchculture)将微生物置于一定容积的培养基中,经培养,最后一次收获,谓分批培养。在分批培养中,培养基一次加入,不予补充,不再更换。由于营养消耗,代谢产物积累,对数生长期不能长期维持。2.连续培养(continuous culture)在培养器中不断补充新鲜营养物质,并不断排出部分培养物(包括菌体和代谢产物),以保持长时间生长状态的一种培养方式。主要有恒浊连续培养和恒化连续培养两类。恒浊连续培养通过不断调节流速,使培养液浊度保持恒定,因而可不断提供具有一定生理状态的细胞,并可得到以最高生长速率进行生长的培养物。恒化连续培养通过控制恒定的流速使营养物浓度基本恒定,从而使微生物保持恒定的生长速率。用不同浓度的限制性营养物进行恒化培养,可得到不同生长速率的培养物。3.半连续培养(semi-continuous culture)在发酵罐中的一部分发酵液保留下来作为菌种液,放出其余部分进入提练加工工序,在剩余的培养液中加满新的未接种的培养液,继续培养,如此反复,谓之半连续培养。4.补料分批培养(fed-batch culture)补料分批培养又称半分批培养,是指在分批培养过程中,间歇或连续地补加新鲜培养液,但不取出培养物。待培养到适当时期,将其从反应器中放出,从中提取目的生成物(菌体或代谢产物)。若放出大部分培养物后,继续进行补料培养,如此反复进行,则称为重复补料分批培养(repeated fed-batch culture)。与传统分批发酵相比,补料分批发酵的优点在于使发酵系统中的基质浓度维持在低水平,这有以下优点:①可除去快速利用碳源的阻遏效应,并维持适当的菌体浓度,以减轻供氧矛盾;②避免有毒代谢物的抑菌作用;③大为减少了无菌操作要求十分严格的接种的次数。与连续发酵相比,补料分批培养不会产生菌种老化和变异等问题。故其应用范围十分广泛。5.同步培养 能使培养的微生物处于较一致的,生长发育在同一阶段上的培养方法叫同步培养法。利用同步培养法控制细胞的生长,使它们处于同一生长阶段,所有细胞都能同时分裂,这种生长方式叫同步生长(图3—4)。用同步培养法得到的培养物叫同步培养物(synchronous culture)。这样,群体和个体行为一致,即可用研究群体的方法来研究个体水平上的问题。由于同步群体的个体差异,同步生长往往最多维持2个~3个世代,然后又逐步变为随机生长。

  • 反应器细胞悬浮培养和微载体培养技术在动物疫苗生产中的应用

    张韧,王建超,陈文庆,刘华杰,高飞,徐舸辰,林龙飞(北京清大天一科技有限公司,北京102200) 反应器悬浮培养技术是目前国内外疫苗生产的热点之一,它可以极大提高疫苗的质量和生产率。介绍了该技术在国内外疫苗生产中的研发和应用现状,表明国内该技术目前已经在口蹄疫疫苗生产中获得成功应用,利用MDCK、Vero等细胞培养生产禽流感疫苗的技术也正在积极研发中,并将逐步替代传统的鸡胚生产工艺。积极推广和应用这一新型疫苗生产技术将是我国兽用生物制品行业升级换代的必然趋势。 生物反应器;悬浮培养;微载体培养;口蹄疫;禽流感 在我国,细胞反应器悬浮培养和微载体培养技术在动物疫苗生产领域的研发和应用正成为行业技术革新、产业升级的重要内容。农业部公告第1708号中明确规定,自2012年2月1日起,各省级兽医行政管理部门停止转瓶培养生产方式的兽用细胞苗生产线项目兽药GMP验收申请。该公告对动物疫苗生产技术升级做出了强制性规定。本文就反应器细胞悬浮培养和微载体培养技术在口蹄疫疫苗和禽流感疫苗生产中的国内外应用和发展进行了综述,分析了动物疫苗产业发展趋势和我国疫苗产业技术升级所面临的机遇和挑战。1 反应器悬浮培养技术在口蹄疫疫苗生产中的应用口蹄疫被认为家畜传染性疾病中传染性最强的一种疾病,国际兽医局(OIE)将之列为A类传染病。2010和2011年,在亚洲、非洲都有口蹄疫局部的爆发。接种安全、高效的疫苗是预防口蹄疫疫情发生的最有效策略之一。通常主要通过浓缩技术提高口蹄疫疫苗的有效抗原量来实现其高效性;通过病毒纯化工艺、有效的病毒灭活工艺来保证疫苗的安全性。反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒能显著提高口蹄疫病毒抗原浓度。国际上先进的口蹄疫疫苗的生产工艺都采用反应器悬浮培养BHK21细胞技术、有效的病毒纯化工艺及二次病毒灭活工艺。当前,面对国内外严峻的口蹄疫防控形势,高质量的口蹄疫疫苗必将在口蹄疫防控中发挥关键作用。1.1 国外应用现状和发展趋势 BHK21细胞是繁殖口蹄疫病毒的理想宿主。20世纪60年代,许多国家实验室建立起了转瓶培养BHK21细胞繁殖口蹄疫病毒的生产系统。1962年BHK21细胞悬浮培养成功,细胞增殖迅速,并成功应用于口蹄疫病毒的生产。反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒也就成为最普遍的口蹄疫疫苗生产方式,主要集中在印度、土耳其、巴西、阿根廷等国家(表1)。印度口蹄疫生产企业使用8000L反应器生产口蹄疫疫苗,南美口蹄疫疫苗生产企业一般采用3000~5000 L反应器生产口蹄疫疫苗,口蹄疫病毒抗原146S浓度大约在2 μg/mL。因为口蹄疫疫苗保护力与146S有正相关性,这些企业根据口蹄疫病毒146S来配制疫苗有效地保证了疫苗的质量。表1 国外部分悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫疫苗企业及其生产工艺http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/08/A1375859824_small.jpg*来自作者所属公司的客户信息调查但是,这种20世纪60年代开发的口蹄疫疫苗生产工艺延续至今,存在许多技术上的缺陷。国外口蹄疫疫苗生产使用的BHK21细胞培养液是添加磷酸肉汤(Tryptosephosphate broth, TPB)或水解乳蛋白(Lactalbumin hydrolysate, LAH)的GMEM及EMEM,再补加5%~10%牛血清(表1)。不同批次间血清质量差异引起细胞培养效果不稳定,导致影响疫苗生产工艺的稳定性和疫苗质量。疫苗中残留的血清蛋白使接种动物过敏反应升高,一定程度上影响疫苗的安全性。在口蹄疫强制免疫的国家,牛血清中存在含有抗口蹄疫病毒抗体的可能性,不仅影响病毒繁殖,而且可能导致口蹄疫病毒在抗体压力下选择性变异。牛血清中潜在污染朊病毒或疯牛病病毒可给动物疫苗带来潜在的生物危害,TPB或LAH等动物来源成份也存在安全隐患。为提升产品质量及安全性,目前国外多数口蹄疫疫苗生产厂家急于将现使用的含血清生产工艺升级为不含血清生产工艺。自从20世纪的80年代起,细胞培养基(液)发展迅速,低血清细胞培养基、无血清细胞培养基、无血清无动物来源成分细胞培养基已商品化,为疫苗生产中少使用或不使用血清奠定了物质基础。1.2 国内应用现状 默克密理博北京清大天一科技有限公司(以下简称“清大天一”)在国内较早开发了BHK21低血清细胞培养基和BHK21无血清无动物来源成分细胞培养基。2008年,清大天一开发了BHK21低血清细胞培养基及反应器悬浮培养BHK21技术,并于2009年成功应用到国内一家口蹄疫疫苗生产企业中。使用该工艺生产的口蹄疫抗原146S浓度可以达到3 μg/mL左右,工艺全过程管道化操作,产品内毒素含量低,口蹄疫疫苗生产和质量显著提高,同时生产成本下降30%。2009年,清大天一成功开发了BHK21无血清无动物来源成分培养基和反应器无血清悬浮培养BHK21细胞技术,并 2010年成功应用到国内某口蹄疫生产企业。相比于含血清悬浮培养工艺,无血清悬浮培养工艺具有巨大的技术优势。从种子库复苏BHK21细胞开始,到口蹄疫病毒繁殖、直至收获的全过程,不添加任何的血清和动物来源成分,消除了血清抗体对病毒繁殖的干扰,同时减轻了纯化压力。无血清悬浮培养BHK21细胞的细胞密度可以达到5×106~6×106/mL以上,为生产高浓度口蹄疫疫苗奠定了技术基础。图1是反应器无血清培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒的工艺流程图,相比于含血清口蹄疫病毒生产工艺,因实现细胞无血清培养,工艺过程无需沉降换液。 http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/08/A1375859832_small.jpg 图1 4000L反应器无血清悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒工艺流程目前国内某企业使用该工艺生产的口蹄疫疫苗正处于报批阶段,其他多家口蹄疫疫苗生产企业及研究单位也在研发或寻求无血清悬浮培养生产口蹄疫疫苗的工艺。

  • 微生物细菌培养皿

    [color=#444444]一次性塑料培养皿,公司现在人力成本太高,想要把玻璃培养皿替换成塑料培养皿,一年将消耗[/color][color=#444444]30[/color][color=#444444]万只培养皿,有没有谁知道上海及上海周边有生产此类的厂家信息吗?[/color]

  • 什么是水体富营养化?水体富营养化有哪些危害?

    水体富营养化是指由于水体中氮磷营养物质的富集,引起藻类及其他浮游生物的迅速繁殖,使水体溶解氧含量下降,造成藻类、浮游生物、水生生物衰亡甚至绝迹的污染现象。水体出现富营养化时因占优势的浮游生物的不同而水面往往呈现出蓝色、红色、棕色和乳白色等。在江河、湖泊和水库中称为“水华”,在环境监别技术问答海洋中称为“赤潮”。 水体中氮磷的来源主要有两方面:一是天然的,如从天然降水中接纳氮磷等营养物质,从地表土壤的侵蚀和淋溶中得到氮磷物质;二是人为的,如城市中人们排放出的含有大量氮磷营养物质的生活污水进入水体,农业施用化学肥料和牲畜粪便经雨水冲刷和渗透,最终进入水体。 水体富营养化破坏了水体原有的生态系统的平衡,将导致藻类的大量繁殖,使有机物积蓄起来,这又将造成以下危害。 (1)促进细菌类微生物的繁殖,一系列异养生物的食物链都会有所发展,水体中耗氧量将大大增加。 (2)藻类的死亡和沉淀将把有机物转入深层或底层水中,在那里发生厌氧分解反应,使水质恶化,变臭。 (3)无机氮的富集开始使硝化细菌繁殖,大量消耗溶解氧,在缺氧状态下,又会转为反硝化过程。这样在底层将出现呼吸消耗有机物速度远大于光合作用生成有机物速度的腐化污染状态,并逐步向表层发展,严重时可使一部分水体完全变为腐化区。

  • 用固体培养基对微生物进行分离纯培养

    单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体,称为菌落(colony)。当固体培养基表面众多菌落连成一片时,便成为菌苔(lawn)。不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征,可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。大多数细菌、酵母菌、以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落,采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养。所谓平板,即培养平板(culture plate)的简称,它是指固体培养基倒入无菌平皿,冷却凝固后,盛固体培养基的平皿。这方法包括将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面。固体培养基用琼脂或其它凝胶物质固化的培养基,每个孤立的活微生物体生长、繁殖形成菌落,形成的菌落便于移植。最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基平板。这种由Kock建立的采用平板分离微生物纯培养的技术简便易行,100多年来一直是各种菌种分离的最常用手段。   1. 稀释倒平板法(pour plate method)  先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释(如1:10、1:100、1:1,000、1:10,000......),然后分别取不同稀释液少许,与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合,摇匀后,倾入灭过菌的培养皿中,待琼脂凝固后,制成可能含菌的琼脂平板,保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当,在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落,这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落,或重复以上操作数次,便可得到纯培养。   2. 涂布平板法(spread plate method)  由于将含菌材料先加到还较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡,而且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长,因此在微生物学研究中更常用的纯种分离方法是涂布平板法。其做法是先将已熔化的培养基倒入无菌平皿,制成无菌平板,冷却凝固后,将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面,再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面,经培养后挑取单个菌落。  3. 平板划线法(streak plate method)  用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料,在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线,微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少,并逐步分散开来,如果划线适宜的话,微生物能一一分散,经培养后,可在平板表面得到单菌落。   4. 稀释摇管法(dilution shake culture method)  用固体培养基分离严格厌氧菌有它特殊的地方。如果该微生物暴露于空气中不立即死亡,可以采用通常的方法制备平板,然后置放在封闭的容器中培养,容器中的氧气可采用化学、物理或生物的方法清除。对于那些对氧气更为敏感的厌氧性微生物,纯培养的分离则可采用稀释摇管培养法进行,它是稀释倒平板法的一种变通形式* 。先将一系列盛无菌琼脂培养基的试管加热使琼脂熔化后冷却并保持在50℃左右,将待分离的材料用这些试管进行梯度稀释,试管迅速摇动均匀,冷凝后,在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物,将培养基和空气隔开。培养后,菌落形成在琼脂柱的中间。进行单菌落的挑取和移植,需先用一只灭菌针将液体石蜡--石蜡盖取出,再用一只毛细管插入琼脂和管壁之间,吹入无菌无氧气体,将琼脂柱吸出,置放在培养皿中,用无菌刀将琼脂柱切成薄片进行观察和菌落的移植。

  • 微生物培养基用到的主要原料

    蛋白胨是一种外观呈淡黄色的粉剂,具有肉香的特殊气息。它作为微生物培养基的主要原料,在抗生素,医药工业,发酵工业,生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大;不同的生物体需要特定的氨基酸和多肽,因此存在各种蛋白胨,一般来说,用于蛋白胨生产的蛋白包括动物蛋白(酪蛋白、肉类)和植物蛋白(豆类)两种。蛋白胨当中不仅含有丰富的氨基酸,特别是含硫氨基酸较多,而且含有更多的细菌生长需要的维生素和其它生长因子。是生物制药发酵及各种培养基制备的基础原材料。在培养基当中它起的主要作用是提供氮源。胰酪蛋白胨(Casein Tryptone)是一种优质蛋白胨,亦称胰酶蛋白胨(Pancreatic digestof Casein),或称胰蛋白胨。该蛋白胨系采用酪蛋白经胰酶消化后,浓缩干燥而成的浅黄色粉末,具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好物理性状。可配制各种微生物培养基。蛋白胨的用途:实验室用作培养基,培养细菌。食品中用作提高蛋白含量。用于饲料中显著降低了饲料厂的生产成本,是饲料行业中蛋白源不足的良好佳品。大豆蛋白胨是是用大豆为基质,采用新工艺提取而成的淡黄色粉末,含有多种营养成份,适合做微生物培养用原料。专门用于培养链球菌、肺炎球菌、布氏杆菌等,营养丰富,也可用做工业化生产的发酵原料!牛肉蛋白胨用新鲜精牛肉,采用最新工艺精致而成的类白色粉末。适合奈瑟氏菌、沙门氏菌属等生长!牛肉浸膏用新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。色泽呈微黄色适宜于各种微生物培养基的基础及发酵材料。牛肉膏当中含有肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类的水溶性物质。该产品广泛应用于生物制药发酵及各种培养基的制备。在培养基当中它起的主要作用是补充蛋白胨以及其它氮源的营养不足。多价胨采用先进生物提取工艺精致而成,为淡黄色干燥粉末,营养极为丰富,可做多种培养基的基础。酪蛋白胨是用酪蛋白经胰酶水解精制而成,色泽呈淡黄色或白色。月示胨采用精蛋白为基质,经特殊水解提取制备的干燥粉末,营养极为丰富,可做多种培养基的基础。骨蛋白胨系蛋白质分解产物,如将牛肉、酪蛋白、牛奶粉、白明胶、大豆蛋白、丝蛋白、血纤维蛋白等为原料,经不完全的水解工艺所得的产物。市售产品以淡黄至棕黄色粉剂为主。其分子量介于月示和肽之间,约2000左右。不同来源的蛋白质和不同的水解条件,其水解物中组成可千差万别。所以胨往往是一个复杂的多肽混合物。可溶于水,过热不凝固,在饱和硫酸铵中不发生沉淀但可为蛋白质沉淀剂所沉淀。可用作微生物和动物细胞培养基、特种功能性食品和化妆品的配料,也有用作啤酒等产品的稳定剂。鲜骨蛋白胨采用新鲜骨为原料,经发酵喷雾干燥而成。 广泛用于黄原胶、食品添加剂、医药中间体、生物制品等发酵产品中。

  • 【原创大赛】南湖富营养化分析

    【原创大赛】南湖富营养化分析

    长春南湖水富营养化分析报告1 引 言 近期,南湖水的治理一直是众人瞩目的焦点。管理部门为了使南湖水的水质达到国家标准,深入分析了南湖水富营养化污染的来源、特点及规律,采取了各种措施。尤其在南湖富营养化生物治理技术上的研究,即利用高等水生植物(如凤眼莲、芦苇、菖蒲、菱、黑三菱、荷花等)和草食性水生动物(如水蚤、蚌、螺、白鲢、花鲢等)来净化水质,在一定程度上取得了确实的效果,但从长远来看,这些方法如果想彻底改变南湖水质,难度相当大,且效果不甚理想。2 分析指标的确定 为了提出相对准确的解决方案,我们进行了多次的实地考察,对湖水进行了详细的分析化验。根据南湖的环境特点,我们选择了透明度、总磷、总氮、叶绿素a、浮游生物等指标。3.样品的采集 样品的采集分成三大类 (1)透明度,使用国标黑白盘法,目视,不存在水样采集问题 (2)总磷、总氮、叶绿素a:使用采水器采集表层0.5m下水样 (3)浮游生物:包括浮游动物和浮游植物。定性采用网捞的形式;定量采集时,浮游植物采集0.5m下水样1L,加鲁戈氏碘液现场固定;浮游动物采集也是0.5m下水样,采集10L,现场用25号网过滤后,加福尔马林固定4.样品的分析 (1)透明度,使用国标黑白盘法,目视,现场测定 (2)总磷 GB11893-89 (3)总氮 HJ636-2012 (4)叶绿素a:丙酮提取分光光度法,水和废水第四版 (3)浮游生物:镜检法,水和废水第四版5.南湖水富营养化情况 富营养化评价国内常用富营养化指数法,其实这个方法对于某些污染严重的水体明显不适用。这里我们引用了国际上使用比较多的单因子分析法,我们将日本提出的贫营养型与富营养型的特征与长春南湖进行比较,来表明南湖水营养型的特征。表1 贫营养型、富营养型湖泊特征与南湖营养型划分http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212301103_417241_2121991_3.jpg 综上所述,南湖水质多项指标仍属于富营养型特征,明显地呈现富营养化特征,因此上应加大治理力度。

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