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破碎大量样品、低温破碎大量样品、破碎坚硬或韧性较强的样品时,人工手动研磨就成了实验猿的噩梦。当然,也有很多实验猿已经尝试过市面一些研磨机/超声波粉碎机,发现自己那顽固的样品依然无法被完全破碎/破碎过程损坏了目标成分而十分心塞。 分享个高通量高效破碎动植物组织和微生物的方法,别逗,当然不是靠徒手研磨能做到的,必须入手个神器——tissuelyser系列和JXFSTPRP系列多样品组织研磨机。对于动植物组织和微生物,包括一些难以破碎的组织样品,都可以使用这个研磨机对其进行完全粉碎。 特别地,一些尤其坚硬/韧性比较强的样品,或要求维持低温条件进行破碎提取的样品,需要结合液氮进行研磨,如:皮肤、硬骨骼、软骨、血管、结缔组织、种子等;使用普通机械研磨方法,很难既保证研磨破碎效果又保证样品一直处于低温状态,尤其是提取RNA、酶等对温度敏感的物质时,低温状态的控制显得尤为关键。入手一台上海净信的多样品组织研磨机,这些都不再是问题了。看招:注:由于样品的具体差异及实验要求的不同,下文数据部分请咨询厂家。第一部分 破碎动物组织1)样品:猪肌肉组织2)仪器:Tissuelyser多样品组织研磨机(品牌:上海净信);耗材:***毫升离心管和直径***毫米的研磨钢珠3)步骤:a.取***克左右肌肉组织样品,均匀地剪切成少量样品块,分别放入若干***毫升的研磨离心管中。b.每个试管中放入***颗直径***毫米的研磨钢珠和800μLPBS裂解液,分别盖紧管盖后,置入24孔研磨适配器中,再将适配器固定在研磨机中。c.将Tissuelyser多样品组织研磨机的参数设置为***赫兹,研磨***秒,启动研磨器。d.研磨完全停止后,拿出研磨离心管,旋开管盖,取出研磨好的肌肉组织样品。4)结果:研磨后的效果如图1,猪肌肉组织成很细腻的泥浆状,说明Tissuelyser多样品组织研磨机对猪肉组织的研磨效果良好。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/05/201505150947_546190_3397_3.jpg图1 猪肌肉研磨对比第二部分 破碎植物组织1)样品:水稻叶片2)仪器: Tissuelyser多样品组织研磨机(品牌:上海净信);耗材:***毫升离心管和直径***毫米的研磨钢珠3)步骤:a.取***克左右叶片组织样品,均匀地剪切成少量样品块,分别放入若干***毫升的研磨离心管中。b.每个试管中放入***颗直径***毫米的研磨钢珠,分别盖紧管盖后,置入24孔研磨适配器中,再将适配器固定在研磨机中。c.将Tissuelyser多样品组织研磨机的参数设置为***赫兹,研磨***秒,启动研磨器。d.研磨完全停止后,拿出研磨离心管,旋开管盖,取出研磨好的叶片组织样品。4)结果:研磨后的效果如图2,叶片组织成很细腻的泥浆状,说明Tissuelyser多样品组织研磨机对叶片组织的研磨效果良好。顺带附上研磨黄豆(坚硬的植物种子)的研磨对比图。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/05/201505150948_546191_3397_3.jpg图2 水稻叶片研磨对比http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/05/201505150948_546192_3397_3.jpg图3 黄豆研磨对比第三部分 结合液氮使用tissuelyser研磨机 当样品死活无法破碎完全/样品傲娇要低温环境时,Tissuelyser多样品组织研磨机+液氮=问题轻松解决。以血管和植物叶片为例,具体操作方法如下: 血管: 取0.1克新鲜血管,用剪刀剪成若干小块,然后放入2毫升离心管中,加入1颗6mm研磨钢珠,盖上管盖。将整个试管放入液氮中冷冻1分钟左右或直到液氮不沸腾,然后放入机器处理30秒钟。取出样品管可见样品被破碎成乳白色粉末,然后加入提取缓冲液,可以进行接下来的后续提取,加入缓冲液之前能保证样品温度一直处于-20℃以下。 叶片: 取0.2克植物叶片,清洁叶片表面后放入离心管中,加入1颗直径5mm不锈钢研磨钢珠,盖上管盖。将整个试管和适配器放入液氮中冷冻1分钟左右或直到液氮不沸腾,然后取出放入研磨机器中机器处理30秒钟。取出样品管可见叶片被破碎成绿色粉末,然后加入提取缓冲液,进行接下来的后续提取即可,加入缓冲液之前能保证样品温度一直处于-20℃以下。后记 想入手这个神器,但又对研磨效果有所犹疑的小伙伴,现在上海净信部分研磨机产品可申请试用,是时候下手了。激动人心的还有,近期研磨机好价,试用爽了直接入手一台也是毫不含糊的。
破碎机研究的目的和意义跟着我国国民经济的疾速开展,矿产资源的综合使用技能与其工业迅猛行进,到1999年我国已建成10 879座国有大中型矿山和227854个城镇集体企业,全国矿石采掘总量超越50亿吨,矿业总产值为4000亿元。物料的破碎是许多职业为了节能和进步出产功率,所以提出了“多碎少磨”的技能准则。这使破碎机向细碎、破坏和高效节能方向开展。 别的跟着工业自动化的开展,破碎机也向自动化方向跨进跟着挖掘规划的扩展,破碎机也在向大型化开展,如粗碎旋回破碎机的处置才能已达6000th。至于新原理和新方法的破碎尚在研讨实验中,暂时还不能用于出产。对粗碎而言,当前还没有研制出更新的设备以替代传统的颚式破碎机和旋回式破碎机,主要是使用现代技能,予以改善、完善和进步耐磨性,到达节能、高效、长命的意图。细碎方面新机型更多些。总的来看,值得提出的有:颚式破碎机、圆锥破碎机、冲击式破碎机和辊压机。而使用最广泛的就是鄂式破碎机。器功用,完成了产品的更新换代。 复摆颚式破碎机的组织归于四杆组织中曲柄摇杆组织的使用,曲柄为自动件。颚式破碎机以布局简略、功能牢靠、修理方便在物料破坏职业广泛使用。复摆鄂式破碎机的动鄂,是直接悬挂在偏疼轴上的饿,是曲柄连杆组织,没有独自的连杆。由于动鄂是由偏疼轴的偏疼直接股动,所以活动鄂板可还做笔直和水平的杂乱摇摆,鄂板上各点的摇摆轨道是由顶部的挨近圆形接连改变到下部的椭圆形,越到下部的椭圆形越扁,动鄂的水平行程则由下往上越来越大的改变着,因而对石块不但能起压碎、劈碎,还能起辗碎效果。由于偏疼轴的转向是逆时针方向,动鄂上各点的运动方向都有利于促进排料,因而破碎效果好,破碎率较高、产物粒度均匀且多。 复摆鄂式破碎机和简摆鄂式破碎机相比较,复摆鄂式破碎机的机器分量较轻,布局简略,出产功率较高级长处。但复摆鄂式破碎机的鄂板笔直行程大,石料对鄂板的磨削效果严峻,磨削较快,且能量消耗也大,任务时易发生较多的粉尘。在工程上使用较为广泛的是复摆鄂式破碎机。国产的鄂式破碎机数量最多的也是复摆鄂式破碎机。复摆鄂式破碎机主要由机架、鄂板、侧护板、主轴、飞轮、肘板和调整组织等组成。
细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式,一种是在强启动子条件下的高效表达,由于蛋白的过度表达,使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲,以固体颗粒的形式堆积于胞间质中,这就是所说的包涵体,另外一种是间质内的可溶性表达,即可以发生正常折叠,具有生物活性。一般情况下,细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包涵体和可溶性表达的蛋白分离开。超声破碎的条件一般是300 w,10 s/10 s,20分钟,具体条件可根据自身情况而定。 超声前菌体的准备:菌液离心后,先用PBS将菌沉淀洗2-3遍,然后按原菌液体积的1/5-1/10加入裂解液重悬菌体,裂解液的成分:50 mMTris-HCl, pH8.0, 2 mM EDTA,100 mM NaCl,加溶菌酶至100 ug/ml,0.1%Triton X-100。切记冰浴超声! 如何判断是否超声完全:根据网友的经验,一般有以下几个方面: 1. 外观判断:超声前菌悬液是浑浊的,超声完全后变的透明、清澈。2. 液体的粘滞性:超声后菌液从枪头滴下不粘连。3. 高速离心:有用高速离心检测超声破碎程度的(一般用6,000 g 10 min, 比一般离心收集菌体的转速高一点)。 沉淀是未破碎或破碎不完全的菌体。 4. 染色:破碎后的菌液涂片,革兰氏结晶紫溶液染色0.5分钟,镜检。超声后加入核酸酶消除核酸对蛋白的污染。一些需要注意的问题: 1. 蛋白以包涵体形式表达,追求的是高破碎率,要求细胞碎片很小,而另一种蛋白是可溶形式表达,所以细胞碎片不能很小,两种情况要求不同但目的相同,都是便于后期的固液分离。2. 如果超声时出现黑色沉淀,说明超声功率太强。3. 超声时间太长、功率太高对蛋白活性肯定有影响。4. 尽量防止泡沫的产生。