凝胶时间

如何研磨水凝胶？医用水凝胶是一种高分子凝胶，主要是由水、聚乙二醇、丙酮等成分组成，它具有补水、保湿、抗衰、美白、消炎的作用与功效。而水凝胶是一类极为亲水的三维网络结构凝胶，它在水中迅速溶胀并在此溶胀状态可以保持大量体积的水而不溶解。水凝胶作为一种典型生物材料，具有众多别的材料所不可比拟的特性，如良好的生物相容性和生物降解性，类似组织的断裂韧性、可拉伸性、柔韧性、离子电导率等，使其成为了生物研究中的明星材料。上海般诺生物科技有限公司为了更好地服务客户，开放了做样服务，此次就接到高校实验室老师的做样需求，因此我们的工作人员对此进行实际做样并记录如下：一、客户样品1. 1#水凝胶样品约3ml；2. S#水凝胶样品约3ml 3. 溶剂 5ml。二、客户需求1. 将2份水凝胶样品分别研磨，颗粒度要求30ul.2. 研磨后加入给定的溶剂中。三、实验工具准备1. 上海般诺生产的BIONOON-48型号高通量组织研磨仪；2. 50ML研磨罐2个；3． 氧化锆研磨珠2颗；4. 液氮1罐。四、实验过程 (一) 样品预冻1. 将两个EP管内的水凝胶分别倒入准备好的2个研磨罐中；2. 每个研磨罐中加入1颗氧化锆研磨珠；3. 拧紧研磨罐，然后放入液氮中；4. 预冻5分钟左右取出待用。（二）样品研磨1. 将预冻后的研磨罐放入模块内；2. 拧紧螺帽，关上研磨仪，并锁上安全锁； 3. 设置实验参数：频率60HZ、时间60S 、研磨次数1次、中断时间0S（即不中断）；4. 点击“Star”键，一键启动，研磨仪自动运转；5. 到达设定的时间，研磨仪自动停止； 6. 打开研磨仪，取出模块，打开研磨罐，倒出样品。（三）封装样品1. 取出2只干净的EP管；2. 将1#研磨好的样品放入EP管中，加入一半的溶剂；3. 将S#研磨好的样品放入EP管中，加入剩下的溶剂；4. 将2个EP管拧紧，封装进塑封袋中。五、客户反馈 我们为客户提供了整个实验过程的短视频，以便于客户清晰了解整个实验过程，以及样品研磨好之后的状态。客户在收到样品后，结合我们的实验过程，怼我们的工作以及整体做样结果给予了认可及肯定。 六、产品介绍 上海般诺生物科技有限公司生产的BIONOON系列高通量组织研磨仪，可对动物组织、植物组织、微生物、食品药品、易挥发样品、塑料、聚合物、环境样品等进行干磨、湿磨及低温研磨，可根据客户实验要求，提供0.2ml~50ml样品的研磨，且一次性可实现多组样品的封闭式研磨破碎，重复性好。整机在设计上采用7英寸触摸屏，可显示工作状态，实现一键操作，且可以选配编程软件及接受客户定制化要求。

葡聚糖凝胶简介月旭科技的交联葡聚糖产品名是Tandex，Tandex不溶于水，但有较强的亲水性，能迅速在水和电解质溶液中吸水膨胀，而且在碱性环境中比较稳定，所以用适当浓度的碱液（一般为0.2mol/L）可除去吸附在凝胶上的污染物。Tandex G是由葡聚糖和3-氯-1,2-环氧丙烷（交联剂）以醚键交联形成的具有三维多孔网状结构的高聚物，其交联度由交联剂的百分比决定。Tandex G的种类主要有：G10、G15、G25。G后面的阿拉伯数字表示每克干胶吸水量（g水/g干胶）的10倍。例如：Tandex G25表示该凝胶在吸水膨胀时每克干胶能吸水2.5g。G反映凝胶的洗水量、排阻极限及分离范围。例如：Tandex G10的网孔结构紧密，孔径小，吸水率低，排阻极限小，只能分离分子量较小的物质；而Tandex G25的孔径大，吸水率高，可分离分子量较大的物质。因强氧化剂和强酸可使Tandex中起交联作用的糖苷键水解断裂，所以在使用时要防止其与强氧化剂和强酸接触。在中性条件下，Tandex悬浮液可进行高温煮沸溶胀和消毒，其性质不受影响。在Tandex G25中加入亲脂性的羟丙基基团，形成烷基化葡聚糖凝胶Tandex LH型。它是一种同时具备吸附性和分子筛功能的独特凝胶介质，型号是Tandex LH-20，适用于有机溶剂洗脱，分离脂溶性物质，具有高处理量，可分离结构非常相近的分子，而且分离效果好。Tandex G系列葡聚糖凝胶产品性能Tandex LH-20产品性能

实验概要本文介绍了电泳后主要的凝胶染色方法，包括：标准考马斯亮蓝染色法、快速考马斯亮蓝染色法、凝胶铵银染色法、凝胶中性银染色法及凝胶铜染色法。实验步骤1. 标准考马斯亮蓝染色法 1) 电泳后，将凝胶转入一洁净的玻璃或塑料容器中。加入5倍于凝胶体积的0.25%考马斯亮蓝R-250(溶解于50%甲醇和10%乙酸中)； 2) 室温下振摇温育4h至过夜； 3) 去除染色液，收集保存可重复使用20-40次； 4) 依次在25%甲醇和7.5%乙酸中室温振摇下脱色。灵敏度为0.1-0.5ug蛋白／每条带。注：使用加热的染色液或脱色液可以缩短染色或脱色时间。将染色液或脱色液在微波炉或水浴中加热，(大约50-60℃)，染色时间可缩短至20min,脱色时间约 1-2h。2. 快速考马斯亮蓝染色法 1) 电泳后，将凝胶转入一洁净的玻璃或塑料容器中。加入5倍于凝胶体积的0.25%考马斯亮蓝R-250(溶解于50%三氯yi酸中)； 2) 室温下振摇温育20min； 3) 去除染色液，收集保存可重复使用多次； 4) 加入数倍体积的脱色液(25%甲醇、7%乙酸)室温振摇下脱色。必要时可更换脱色液。灵敏度为1.0ug蛋白／每条带。3. 凝胶铵银染色法 1) 电泳后，将凝胶转入一洁净的玻璃或塑料容器中。加入5倍于凝胶体积的50%乙醇和10%乙酸，振摇30min至过夜； 2) 去除50%乙醇和10%乙酸，用去离子水清洗凝胶。加入20%乙醇, 室温振摇30min； 3) 去除20%乙醇，再加5倍体积的20%乙醇，室温振摇30min； 4) 去除20%乙醇，将凝胶转入通风柜内，加入5倍体积的用去离子水配制的5％戊二醛，室温振摇30min； 5) 去除戊二醛，用去离子水清洗凝胶。加入5倍体积的20%乙醇，室温振摇20min； 6) 去除20%乙醇，重复6两次； 7) 去除20%乙醇，用去离子水清洗凝胶。再加入5倍体积的用去离子水，室温温育１0min； 8) 去除去离子水，加入4倍体积新鲜配制的氨水／银溶液，室温振摇30min。配制100ml：加1.4ml 14.8mol/L氢氧化铵到100ml水中，再加入190ul 10mol/L氢氧化钠；放置涡旋器上缓缓加入１ml新鲜配制的硝酸银溶液(0.8g硝酸银／ml水)，直至出现沉淀物，但很快溶解。 9) 去除氨水／银溶液，用去离子水清洗凝胶20min以上，其间更换水数次； 10) 去除水，加入5倍体积新鲜配制的0.005%柠檬酸，0.019%的甲醛。轻柔混匀，数分钟内条带即显现出。当背景开始变化时，去除显影剂，用用去离子水清洗凝胶。在10%乙酸和20%乙醇中温育凝胶，以终止反应。灵敏度为1－10ng蛋白／每条带。注：操作时，应戴手套并使用洁净的玻璃器皿，以免污染，影响反应的灵敏度。4. 凝胶中性银染色法 1) 电泳后，将凝胶转入一洁净的玻璃或塑料容器中。加入5倍于凝胶体积的30%乙醇和10%乙酸，振摇30min至过夜； 2) 去除乙醇/乙酸溶液，加入5倍体积的30%乙醇, 室温振摇30min； 3) 去除乙醇，再加5倍体积的30%乙醇，室温振摇30min； 4) 去除乙醇，加入10倍体积的去离子水，室温振摇10min；重复用去离子水清洗两次； 5) 去除去离子水，加入4倍体积新鲜配制的0.1%硝酸银溶液(用室温下贮存于棕色瓶内的20%原液稀释而得)，室温振摇30min； 6) 去除硝酸银溶液，用去离子水清洗凝胶20s； 7) 去除水，加入5倍体积的2.5%碳酸钠和 0.02%的甲醛(pH4.0),室温振摇温育，数分钟内条带即显现出。当背景开始变黑时，停止温育； 8) 在1％乙酸内清洗，停止反映。用去离子水清洗，更换数次，每次10min 灵敏度为1－10ng蛋白／每条带。5. 凝胶铜染色法凝胶铜染色法为考马斯亮蓝或银染色法的替代染色方法。将凝胶氯化铜溶液中温育，在Tris和SDS同时存在时可形成明显的白色不透明的沉淀物。蛋白条仍然清晰，留下一个多肽分离模式的附染图象。由于蛋白质未结合在凝胶上，可通过EDTA去除Cu离子而得以洗脱，因而该方法特别适合需快速定位蛋白条带用于免疫反应，或进一步进行蛋白质化学研究。其染色模式如同考马斯亮蓝或银染色法的凝胶，易进行拍照。 1) 电泳后，凝胶用蒸馏水短时清洗数次，每次30s,勿洗过长时间； 2) 将凝胶转入一洁净的玻璃或塑料容器中。加入5倍于凝胶体积的0.3mol/L CuCl2； 3) 室温振摇5min，较厚的凝胶可适当延长时间。当CuCl2进入凝胶时，在不含蛋白的区域会出现白色沉淀； 4) 用蒸馏水清洗数分钟，在黑色背景下观察结果。灵敏度为10-100ng蛋白／每条带(0.5mm厚的凝胶)或１ug蛋白／每条带(１mm厚的凝胶)。注：将凝胶在0.25mol/L EDTA、0.25mol/L Tris溶液中温育可使铜染逆转。