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Inspire PFP柱子检测维生素A、四种构型的维生素E,实验结果与大家一起分享~~[img=,601,354]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141401_01_1987954_3.png[/img][img=,591,397]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141401_02_1987954_3.png[/img][img=,593,322]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141401_03_1987954_3.png[/img][img=,613,346]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141401_04_1987954_3.png[/img][img=,583,392]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141402_01_1987954_3.png[/img][img=,596,331]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141402_02_1987954_3.png[/img]
最近在用《GB/T 5009.82-2003》做食品中的维生素E,维生素E主要有α-E、β-E、γ-E、δ-E四种衍生物,在这份标准上只有α-E、γ-E、δ-E的比吸光系数和测定波长,唯独就没有β-E的比吸光系统和测定波长,可杯具的是我们就要测定β-E,现在不知道β-E的比吸光系数,无法标定其准确浓度。有大侠知道,或者有相关的资料可以提供不?如何可以确定β-E的比吸光系数呢?
[b]维生素E(Vitamin E)是一种脂溶性维生素,其水解产物为生育酚,是最主要的抗氧化剂之一。维生素E具有促进生育功能和抗氧化功能,是食品中广泛应用的抗氧化剂和营养剂。GB 5009.82-2016 食品安全国家标准 食品中维生素A、D、E的测定》就规定了维生素E的分析方法,包括α, β, γ, δ[b]四种[b]维生素E异构体的[/b][/b]分析方法。标准中列出了反相色谱法和正相色谱法两种方法分析维生素E,这里给大家分别介绍。一、反相色谱法:[/b]国标规定的条件:[img=,690,282]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711062122_01_2733737_3.jpg!w690x282.jpg[/img][img=,690,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711061347_01_2733737_3.jpg!w690x249.jpg[/img]国标中推荐使用的是3um的C30色谱柱,有些做叶黄素或者胡萝卜素的同学为了方便就直接使用5um的C30柱做维生素E的分析,有些同学严格按照国标方法,使用3um的C30柱,这里分别介绍安谱的两款C30柱分析维生素E的情况。[b](1)5umC30柱分析条件:[i][color=#ff6666]色谱柱:Athena C30 液相色谱柱 4.6 x 250mm,5μm(LAEQ-462552)[/color][/i][/b]流速:0.8ml/min柱温:20℃进样量:10ul检测器:UV,294nm流动相:A: 甲醇 B: 水[table=353][tr][td]时间(min)[/td][td]流速[/td][td]水%[/td][td]甲醇%[/td][/tr][tr][td]0.0[/td][td]0.8[/td][td]4[/td][td]96[/td][/tr][tr][td]12.0[/td][td]0.8[/td][td]4[/td][td]96[/td][/tr][tr][td]12.5[/td][td]1.0[/td][td]4[/td][td]96[/td][/tr][tr][td]17.0[/td][td]1.0[/td][td]0[/td][td]100[/td][/tr][tr][td]30.0[/td][td]1.0[/td][td]0[/td][td]100[/td][/tr][tr][td]31.0[/td][td]0.8[/td][td]4[/td][td]96[/td][/tr][tr][td]33.0[/td][td]0.8[/td][td]4[/td][td]96[/td][/tr][/table][b]谱图:[/b][img=,620,185]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711061708_01_2733737_3.jpg!w620x185.jpg[/img][b]反相分析四种VE难点就是[b]β-生育酚和γ-生育酚[/b]两种异构体的分离,使用5um的C30多次调整流动相条件,最终得出上图的分离效果,二者的分离度可以达到1.46左右,也还能接受,但是要想达到更好的分离效果还是要用3um的C30柱。(2)3umC30柱分析条件:[color=#ff0000][i]色谱柱:Athena C30 液相色谱柱 4.6 x 250mm,3μm(LAEQ-462553)[/i][/color][/b]流速:0.8ml/min柱温:20℃进样量:10ul检测器:UV,294nm[b][color=#ff0000]流动相:100% 甲醇[/color]谱图:[/b][img=,690,392]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711061709_01_2733737_3.png!w690x392.jpg[/img][b]β-生育酚和γ-生育酚两种异构体的分离度达到1.9以上,达到了基线分离,流动相使用纯甲醇,等度洗脱,相较于国标方法,更简单,更省事,有木有柱温的影响[/b]细心的同学可以发现,C30柱分离维生素E柱温必须在20℃左右,为什么呢?这里用3um的C30柱分别在15、20、25、30℃柱温下分离4种维生素E,考察一下柱温对C30柱分析维生素E的影响,结果如下:[img=,579,365]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711062139_02_2733737_3.jpg!w579x365.jpg[/img][b]R代表[b]β-生育酚和γ-生育酚的分离度,可以看出,随着柱温升高,二者的分离度明显下降,所以同学们要注意柱温哦[/b]二、正相色谱法:[/b][img=,690,245]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711062145_01_2733737_3.jpg!w690x245.jpg[/img] 手中没有国标推荐的那款酰胺基柱,但是咱有物美价廉的硅胶柱啊,效果也是杠杠的,不信,你看:[b]分析条件:[i][color=#ff9900]色谱柱:Athena Silica 4.6*250mm,5um (LAEQ-462576)[/color][/i][/b]流动相:正己烷:1,4-二噁烷(95:5)流速: 0.8mL/min 柱温: 30℃紫外检测器:294nm进样量:10ul[b]谱图:[/b][img=,690,424]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711062152_01_2733737_3.jpg!w690x424.jpg[/img][b][b]4种维生素E异构体峰型良好,β-生育酚和γ-生育酚的分离度达到2.8,完全符合国标要求。[/b]两种分析方法都已介绍完毕,反相方法5um和3um的Athena C30柱都可以分离4种维生素E,3um的分析条件更简单,分离度更好;正相方法,Athena Silica柱也能完美分离四种维生素,并且比酰胺柱更经济实惠,希望可以给大家作为参考。[/b]