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高效液相色谱法快速检测徐长卿中丹皮酚 药材徐长卿,这个药名很像人名,属于萝藦科(这个叫法也很特别)植物徐长卿的干燥根和根茎。具有祛风、化湿、止痛、止痒等药物功效。可用于治疗风湿痹痛、胃胀疼痛、牙痛腰痛、跌打伤痛、风疹湿疹等病症,效果较好。 下面我们重点介绍下高效液相色谱法检测徐长卿药材中丹皮酚含量及色谱条件的改变对色谱效果的影响。实验部分【原理】 精密称取适量徐长卿样品(粉末)经甲醇溶解,超声提取后注入高效液相色谱系统,C18色谱柱分离,紫外检测器检测,外标法(保留时间定性,峰面积定量)计算,得出该样品中丹皮酚含量。【仪器及试剂】 仪器:高效液相色谱仪(紫外检测器+等度泵+柱温箱+在线脱气机等),超声波清洗仪,溶剂过滤器,电子天平(0.0001),药典筛(五号筛)等。 试剂:甲醇(色谱纯), 超纯水等。【样品制备】 对照品溶液制备:准确称取丹皮酚对照品2mg于100ml容量瓶中,加甲醇溶解、定容,制成20ug/ml丹皮酚对照品溶液,备用。 供试品溶液制备:取徐长卿样品适量,充分粉碎后过药典筛五号筛,准确称取过筛粉末0.5g,置具塞锥形瓶中,精密加入50ml甲醇,称定重量并记录,超声处理30分钟,放冷,再次称定重量,用甲醇补足减少的重量,摇匀,0.45um微膜滤过。精密量取1ml续滤液于10ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,待测。【色谱条件】检测器:紫外检测器检测波长:274nm色谱柱:Promosil C18 ( 250 mm X 4.6mm,5μm )流动相:甲醇:水=45:55(V:V)流速:1.0ml/min柱温:30℃进样量:10μl【色谱图】对照品溶液色谱图: http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509071520_564858_2536753_3.png供试品溶液色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509071520_564859_2536753_3.png 这个检测效果还可以,样品中干扰物很少,分离度很好,准确度也很高,该方法适合该样品中丹皮酚含量检测。这个检测效果还可以,但检测时间太长了点,太浪费时间。再三考虑后,决定改变下色谱条件,争取缩短些时间。 首先换一根150mm长其它规格相同的色谱柱,其它色谱条件不变,看下色谱效果。【色谱图】对照品溶液色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509071520_564860_2536753_3.png 供试品溶液色谱图: http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509071520_564861_2536753_3.png 效果不错,达到了预期效果。 如果实验室没有合适的色谱柱,那也没关系,我们可以通过改变流动相,也能取得很好的效果。下面我们把流动相改为甲醇:水=65:35(V:V),看下效果。【色谱图】对照品溶液色谱图: http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509071520_564862_2536753_3.png供试品溶液色谱图: http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509071520_564863_2536753_3.png 这个效果也不错吧,检测时间已经比较短了,分离度、色谱峰形也相当不错,这个方法也是相当理想的检测方法。 当然我们还可以通过增加色谱泵流速,提高柱温箱温度等色谱条件来缩短检测时间,效果也都相当不错。在这需要注意的是,色谱泵流速一般情况下不要变,因为每一规格色谱柱的内径及填料颗粒等因素决定了只有一个流速最适合它。它在这个流速下色谱峰展宽、峰对称性等效果最好,而且使用寿命最长,因此能通过改变其它色谱条件达到目的的,尽量不改变该条件。【结论】1. 以上几种方法检测徐长卿药材中丹皮酚含量结果都较准确,效果都不错,都适合该项目检测。2. 检测时间长的话可通过改变色谱柱长度,流动相中有机相含量,柱温箱温度,色谱泵流速等色谱条件缩短检测时间,但一定得注意样品中各成分的分离度,及检测结果的准确性。3. 综合考虑,选择一款较短的色谱柱是比较理想的,它既能缩短检测时间,对色谱系统产生的压力小,色谱柱价格一般还较便宜。如果换用较短的色谱柱后检测时间还较长,再适当改变流动相,这样效果会更好。4. 照抄一个方法是最简单的选择,一般都能顺利的完成实验,但实验效果不一定理想。如果这个检测项目批量比较大,参考方法检测的效果又一般,我们不防优化下色谱条件,争取达到更完美的结果。5. 优化色谱条件时一定得考虑样品情况、实验室具体条件及检测结果准确性要求等,切不可盲目追求某一指标而影响其它效果。
[size=20px][color=#93c6bc][b]鉴别[/b][/color][/size][size=16px][color=#e2a4a4]|[/color][/size][font=宋体][/font] [font=宋体] (1)本品粉末浅灰棕色。外皮层细胞表面观类多角形,垂周壁细波状弯曲,细胞间有一类方形小细胞,木化;侧面观呈类长方形,有的细胞径向壁有增厚的细条纹。[color=var(--weui-LINK)]草酸钙簇晶[i][/i][/color]直径7[/font][font=&]~[/font][font=宋体]45[/font][font=宋体]μm。分泌细胞类圆形或长椭圆形,内含淡黄棕色分泌物。[color=var(--weui-LINK)]内皮层细胞[i][/i][/color]类长方形,垂周壁细波状弯曲。[/font] [font=宋体](2)取本品粉末1g,加乙醚10ml,密塞,振摇10分钟,滤过,滤液挥干,残渣加丙酮1ml使溶解,作为供试品溶液。另取[color=var(--weui-LINK)]丹皮酚[i][/i][/color]对照品,加丙酮制成每1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验,吸取供试品溶液5μl、对照品溶液10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯(3:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以盐酸酸性5%的三氯化铁乙醇溶液,加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的蓝褐色斑点。[/font] [font=宋体](3)取本品粉末1g,加乙醚10ml,密塞,振摇10分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加丙酮1ml使溶解,作为供试品溶液。另取徐长卿对照药材1g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯(10:2:0.8)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,分别置日光和紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点或荧光斑点。[/font] [size=20px][color=#93c6bc][b]检查[/b][/color][/size][size=16px][color=#e2a4a4]|[/color][/size] [font=宋体][b] 水分 [/b]不得过15.0%(通则0832第四法)。[/font] [b][font=宋体]总灰分 [/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]不得过10.0%(通则2302)。[/font] [b][font=宋体]酸不溶性灰分[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]不得过5.0%(通则2302)。[/font] [font=宋体]【[b]浸出物[/b]】 照醇溶性浸出物测定法(通则2201)项下的热浸法测定,用乙醇作溶剂,不得少于10.0%。[/font] [font=宋体]【[b]含量测定[/b]】 照高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法(通则0512)测定。[/font] [b][font=宋体]色谱条件与系统适用性试验[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]以[color=var(--weui-LINK)]十八烷基硅烷键合硅胶[i][/i][/color]为填充剂;以甲醇-水(45:55)为流动相;检测波长为274nm。理论板数按丹皮酚峰计算应不低于3000。[/font] [b][font=宋体]对照品溶液的制备[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]取丹皮酚对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含20μg的溶液,即得。[/font] [b][font=宋体]供试品溶液的制备[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]取本品粗粉约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,超声处理(功率250W,频率33kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液1ml,置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。[/font] [b][font=宋体]测定法[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url],测定,即得。[/font] [font=宋体]本品按干燥品计算,含丹皮酚(C[sub]9[/sub]H[sub]10[/sub]O[sub]3[/sub])不得少于1.3%。[/font] [font=宋体] [/font]
从史前的口头流传到《本经》,从《纲目》到今天的《中华本草》,中药材的品种、内涵都大大地丰富、扩充了,人们对药物的认识水平也随着科学的发展而发展,随着人类文明的进步而进步。盖因中药材、中草药品种繁多,产地广泛,应用历史悠久,由于历代本草记载、地区用语、使用习惯的不同,类同品、代用品、民间用药的不断涌现,以及同科属药材外形相似,缺乏各种鉴定指标等因素,致使同名异物。同物异名等混乱现象普遍存在,更有不法商人,以次充好,以假乱真,甚至制假、售假,加之管理环节上的疏漏,使中药材质量难以保证,严重影响到临床用药的安全有效。正如李时珍所云:“一物有谬,便性命及之”,诚所谓至理名言。 中药材品种混乱,自古以来皆有之,如“蛇床乱靡芜,荠苨乱人参,杜衡乱细辛”。特别是杜衡与细辛之乱,多家本草皆有记述。宋代的《本草衍义》云:“杜衡用根,似细辛,但根色白,叶如马蹄之下,市者往往乱细辛,须如此别之。《尔雅》以谓似葵而香是也。将杜衡与细辛相对,便见真伪,况细辛惟出华州者良,杜衡其色黄白,拳局而脆,干则作团。”明代李时珍在论徐长卿时说:“鬼督邮、及己之乱杜衡,其功不同,苗亦不同也。徐长卿之乱鬼督邮,其苗不同,其功同也。杜衡之乱细辛,则根苗功用皆仿佛,乃弥近而大乱也,不可不审。”