烟酸叶酸

Realassay® 国标即用型叶酸检测试剂盒基于国标 GB 5009.211《食品安全国家标准&bull 食品中叶酸的测定》研制的即用型产品。操作简易，利用微生物生长特异性需要叶酸而实现检测。该试剂盒主要用于一般食品、婴幼儿配方食品、特医食品、功能性食品和饮料中叶酸的定量检测（包括添加和原生叶酸）。本试剂盒提供 96 次检测（包括标准品），使用酶标仪（610 - 630 nm 或者 540 - 550 nm）进行读数。该试剂盒具有以下特点：➢ 无需传统养菌、洗菌和调值，菌板直接回温使用；➢ 冻干型标准品，加水混匀，直接稀释使用；2．试剂盒原理维生素B9（叶酸）是从样品稀释提取所获得的。将经过稀释的提取物和叶酸检测培养基加入包被有Lactobacillus rhamnosus的微孔中。Lactobacillus rhamnosus的生长状况取决于叶酸的含量。在叶酸测试培养基中，添加的叶酸标准品或含叶酸的样品提取液，细菌会一直生长直至叶酸被消耗完全。孵育条件应为黑暗、37 °C条件下孵育32 - 40小时，根据叶酸标准品浓度和相应的细菌OD值绘制成标准曲线，并计算出样品中叶酸含量。

IAC-SEP® 叶酸免疫亲和柱 （产品编号：IAC322） 使用对象IAC-SEP® 叶酸亲和柱能够特异性的纯化样品中的叶酸，它采用了柱状琼脂糖凝胶作为固相载体，琼脂糖凝胶与叶酸抗体偶联形成免疫吸附剂，装柱制成免疫亲和柱。它能够特异性的纯化样品中的叶酸。叶酸亲和柱广泛地应用于饮料、牛奶和谷物等样品的提取，该方法速度快、操作简单、准确性高，对提高食品的质量和安全性起到十分重要的作用。 原理叶酸免疫亲和柱能够特异性的纯化样品中的叶酸，将样品与提取液混合、提取、过滤，然后将滤液通过免疫亲和柱。此时，叶酸物质键合在亲和柱中的抗体上。用蒸馏水将免疫亲合柱上的杂质除去。用洗脱液通过分离柱，将叶酸从抗体上分离下来。最后，将洗脱液注入HPLC或LC-MS进行测定。储存条件该亲和柱保存在2-8 °C条件下，绝对不能冷冻，保质期为18个月。建议在室温（18-30°C）下使用。实验溶液制备 pH7.4 PBS溶液：8.0 克NaCl + 2.90克Na2HPO4 12H2O + 0.24 克 KH2PO4 + 0.2克KCl 加990mL纯水溶解，加纯水至1升。 10%抗坏血酸钠：称取10g L-抗坏血酸钠100mL容量瓶中，加水溶解混匀。 洗脱液（30%乙腈+0.2%三氟乙酸）: 准确量取30mL乙腈加入到100mL容量瓶中，然后再加入0.2mL 三氟乙酸，最后用纯水定容至100mL。 所需其他试剂：胰酶（sigma P1750） 液相色谱条件色谱柱： Agilent-C18,4.6×150mm（5um）流动相：0.1%三氟乙酸：乙腈=85:15（v/v）流速：0.5 mL/min检测器：紫外检测器，280nm进样体积：50uL 分析步骤1） 样品提取及稀释：婴儿配方食品、婴儿即食食品、牛奶、奶粉、谷物、能量棒等样品的操作步骤：称取 1-10g样品（根据需要的检测范围确定称量多少），置于250 mL锥形瓶中。将50mL pH7.4 PBS溶液加入到锥形瓶中，混匀。加入4g 胰酶，摇床震荡10分钟。加入6mL 10%抗坏血酸钠，摇床震荡5分钟。将锥形瓶置于37℃的水浴摇床震荡2 h。然后将锥形瓶置于100℃的水浴中静置20min。取出锥形瓶冷却至室温；用pH7.4 PBS溶液定容至100mL，摇匀。将提取液4000 RPM离心10 min。准确移取吸取上层液10 mL，备用。2） 样品的净化 叶酸免疫亲和柱的柱容量(最大吸附叶酸)为450ng，当样品中叶酸超过测定范围时，请适当减小上柱体积，使其在检测范围内，计算出准确含量。将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下。将上述样品提取液注入（或分次注入）玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约2mL/min（1-2滴/秒）流速缓慢通过免疫亲和柱，直至液面下降到亲和柱管体（未完全流干）。以2-3mL/min（1-2滴/秒）流速用10.0mL水淋洗，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体。准确加入1.0mL洗脱液（30%乙腈+0.2%三氟乙酸）洗脱，流速为1 mL/min ~2mL/min（1滴/秒），收集洗脱液于玻璃试管中，然后再加入1.0mL纯水洗脱，流速为1 mL/min ~2mL/min（1滴/秒），收集全部洗脱液于同一玻璃试管中，混匀。供HPLC或LC-MS分析。 注意事项1) 不要随便更改操作说明书中的操作步骤，如需更改要和本公司技术部联系，确认更改是否合理。2) 操作步骤中，样品过柱，淋洗，洗脱时，一定要控制好流速，不能太快，否则会使检测结果偏低。3) 试验中使用的玻璃仪器等，一定要清洗干净，尤其是用次氯酸等处理过的仪器。 需要准备的设备及试剂（中检维康提供）C/N编号物品21022Clover六位泵流操作架（配有1台空气泵，6个10mL针筒）IAC322叶酸免疫亲和柱（25支/盒）叶酸标准品31955美国vicam微纤维滤纸（1.5um，100张/盒）31240折叠式槽纹滤纸（100张/盒），或中速定性滤纸36010一次性塑料烧杯(25/包)34000一次性测试管(250支/包)36020塑料漏斗(10 个/包)35016色谱纯级的甲醇（4升/瓶）C546150-UCloversil C18 反相色谱柱4.6*150mm（5um）C546250-UCloversil C18 反相色谱柱4.6*250mm（5um）

该样品为不含叶酸的空白基质样品，使用时与待测样品采用相同的操作方法，用于加标实验时按待测样品处理即可。做加标实验使用时，根据所加标准品的浓度进行梯度稀释即可，计算方式与待测样品一致。