鱼体组织

三维多细胞类球体（肿瘤球、微球、类器官）可以帮助我们在临床前药物筛选阶段更好地预测多种候选药物的潜在作用。但是，相较于二维单层培养细胞，采用三维培养细胞模型系统进行检测分析则更具挑战性。一起来看看珀金埃尔默是如何分析3D微组织球三维体积与分区的吧！3D微组织球的制备和成像过程使用 CellCarrier Spheroid ULA 96 孔微孔板制备细胞球在CellCarrier Spheroid表面极低吸附力96孔微孔板（珀金埃尔默公司，货号6055330）中接种 HeLa 细胞，细胞浓度分别为1.25E3、2.5E3与5E3。48小时后，以3.7%甲醇固定，再用DRAQ5™ 染料对胞核染色。如前文所述，用磷酸化组蛋白H3抗体（西格玛奥德里奇公司，货号H9908）和Alexa 546二抗体（美国生命技术公司，货号A11081）联合标记有丝分裂细胞。为达到快速成像的需求，本实验应用长工作距离物镜，使用表面低吸附力的U形96孔板直接成像。对于高分辨率深度成像试验，本实验将细胞球转入兼容高质量成像CellCarrier 384孔超微孔板（珀金埃尔默公司，货号6057300），然后利用ScaleA2试剂进行透明化处理。 “预扫描（PreciScan）”功能大大缩短图像采集时间并减小数据量研究人员利用Harmony软件的“预扫描（PreciScan）”功能扫描拍摄所有细胞球的图像。“预扫描（PreciScan）”是一项智能图像采集功能，它可以智能识别确定各孔内目标细胞的x/y坐标位置。通过低倍预扫描、智能联机分析和高倍再扫描，生成目标细胞的高分辨率图像。再扫描可以包含z-stack多层扫描和 / 或时间序列扫描。“预扫描（PreciScan）”功能有效节省了测量和分析时间并减小了数据储存空间（例如，使用20x物镜对在384孔微孔板内培养的细胞球进行观察分析时，预扫描可帮助减少25倍的分析时间和数据储存空间；而使用40x物镜观察时，可减少100倍的分析时间和数据储存空间），Operetta CLS与Opera Phenix系统都配置有这一功能。利用水浸物镜与光透明化技术优化成像深度使用水浸物镜，大大提高了成像质量，特别是提升了Z轴分辨率。此外，光透明化处理进一步改善了成像深度。光透明化处理不仅提高了样品内指标的均一性，而且减少了光散射和光学像差。在此基础上，采用长波长染色（如可行）也有利于减少光散射并提高透光率，使更多的激光照射在3D样品上。因此，可显著提升成像深度和信号检测效率。3D微组织球重构与分析生成三维或 XYZ 轴图像生成三维样品的 XYZ 轴或三维图像；在三维空间中变换样品图像——旋转、缩放或平移；导出视频——三维重建或涵盖多层平面视图的视频。定位细胞球与胞核使用“定位图像区域（Find Image Region）”功能定位整个细胞球；采用局部光强阈值进行 Z 轴光衰减补偿；选用一种“定位胞核（Find Nuclei）”方法——专门用于 3D 图像胞核分割。计算细胞球与胞核三维指标使用“计算形态特性参数（Calculate Morphology Properties）”工具分析细胞球和球体内单细胞的三维形态特征。胞球体积[μm3]球度[-]覆盖面积[μm3]细胞球高度[μm]155902000.7780314286定位有丝分裂细胞使用“定位胞核（Find Nuclei）”功能，根据局部光强阈值定位有丝分裂、 pHH3 阳性细胞；使用“裁剪区（Clip Box）”功能生成剖视图，从内部（右侧）观察细胞球。使用“裁剪区（Clip Box）”工具生成剖视图进行细胞分区，分析有丝分裂细胞分布情况计算出每个胞核到细胞球边界的最短距离；使用“选择区域”和“选择细胞群”功能，将胞核分成不同区域。可随意调整区域宽度；分析每个区域有丝分裂细胞数量和空间分布差异，得到各种不同的分析数据（例如，细胞形态参数）。使用“裁剪区（Clip Box）”工具生成剖视图基于Harmony4.8软件的整体成像细胞球三维分析方法我们可以检测到细胞球整体的形态学特征和细胞球同心区单细胞特性。采用DRAQ5™ 染料（红色）和pHH3抗体（橙色）标记细胞球，然后用ScaleA2试剂进行光透明化处理5天。使用Opera Phenix或Operetta CLS系统装配的20x水浸物镜（数值孔径1.0）和间距为1μm的 z-stack模块（z轴扫描高度：300μm）记录共聚焦三维图像。Opera Phenix系统的3D成像质量最佳。经实验发现，Operetta CLS系统在被测HeLa细胞球的成像深度和胞核检测性能方面与之不相上下。此处第4和第5步骤操作仅以Opera Phenix系统成像展示，Operetta CLS系统成像效果与之相当。参考文献1. Kriston-Vizi, J., Flotow, H. (2017). Getting the whole picture: high content screening using three-dimensional cellular model systems and whole animal assays. Cytometry, 91: 152–159. doi:10.1002/cyto.a.229072. User’ s Guide to Cell Carrier Spheroid ULA microplates. PerkinElmer.3. Smyrek, I., Stelzer, EH. (2017) Quantitative three-dimensional evaluation of immunofluorescence staining for large whole mount spheroids with light sheet microscopy. Biomed Opt Express, 8(2): 484-499. doi: 10.1364/ BOE.8.0004844. Hama, H., Kurakowa, H., Kawano, H. Ando, R., Shimogori, T., Noda, H., Fukami, K., Sakaue-Sawano, A., Miyawaki, A. (2011). Scale: a chemical approach for fluorescence imaging and reconstruction of transparent mouse brain. Nature Neuroscience, vol. 14: 1481–1488. doi.org/10.1038/nn.29285. Five top tips for a successful high-content screening assay using a 3D cell model system. PerkinElmer Brief.6. Letzsch, S., Boettcher, K., Schreiner, A. (2018). Clearing strategies for 3D Spheroids. PerkinElmer Technical Note.7. Boettcher, K., Schreiner, A. (2016). The benefits of automated water immersion lenses for high-content screening. PerkinElmer Technical Note.关于珀金埃尔默：珀金埃尔默致力于为创建更健康的世界而持续创新。我们为诊断、生命科学、食品及应用市场推出独特的解决方案，助力科学家、研究人员和临床医生解决最棘手的科学和医疗难题。凭借深厚的市场了解和技术专长，我们助力客户更早地获得更准确的洞见。在全球，我们拥有12500名专业技术人员，服务于150多个国家，时刻专注于帮助客户打造更健康的家庭，改善人类生活质量。2018年，珀金埃尔默年营收达到约28亿美元，为标准普尔500指数中的一员，纽交所上市代号1-877-PKI-NYSE。了解更多有关珀金埃尔默的信息，请访问www.perkinelmer.com.cn。

2021年3月12日，经中国仪器仪表学会批准，中国仪器仪表学会标准化工作委员会分析仪器技术委员会（以下简称：分析仪器技术委员会）正式成立，将专项开展仪器团体标准的相关工作，旨在通过标准化工作助推经济发展，推动团体标准为行业和市场服务。 经过一年的讨论与征集工作，分析仪器标准技术委员会于2022年3月11日上午组织召开了首次团体标准立项预评审会议，邀请到国家环境分析测试中心、中国计量科学研究院、中国食品药品检定研究院、国家粮食和物资储备局科学研究院等单位的专家参会评审。 会上，各标准申报单位首先就标准的立项背景、必要性及主要编制内容进行了汇报，与会专家则结合行业发展实际以及标准的可操作性、科学性及适用性，从内容规范、方向定位及应用等层面提出了宝贵的意见和建议。本次会议的顺利举办，也为分析仪器技术委员会的下一步工作奠定了良好基础。 未来，团体标准的研制将成为我会的常态化工作之一，欢迎大家积极申报或推荐政策法规符合性好、市场适用性良好、具有技术先进性等的团体标准或立项建议，合力推动分析仪器新技术、新方法以及特色应用的高质量发展。 联系人：中国仪器仪表学会分析仪器分会 李老师 电 话：010-58851186 邮 箱：lyc@fxxh.org.cn

p 　　为落实国家重点研发计划重点专项管理任务，充分发挥专家在项目过程管理中的作用，保障专项任务顺利实施和任务目标的实现，近日，“生物医用材料研发与组织器官修复替代”重点专项专家组在中国生物技术发展中心成立并召开专家组第一次工作会。生物中心董志峰副局级调研员、专家组成员、生物中心相关处室人员参加了会议。 /p p 　　“生物医用材料研发与组织器官修复替代”重点专项专家组成员共10名，由生物中心聘任，任期五年，北京大学前沿交叉学科研究院奚廷斐教授担任组长，东南大学顾宁教授、浙江大学基础医学院欧阳宏伟教授担任副组长。会上，生物中心领导向专家组成员颁发了聘书并讲话。董志峰副局级调研员强调，“十三五”期间，要以实施创新驱动发展战略为主题，以深化科技体制改革为重点，来部署和实施“生物医用材料研发与组织器官修复替代”重点专项。希望专家组在专项实施过程中从专业角度积极参与项目管理，密切跟踪了解项目的执行情况，对项目任务内容、技术指标和经费安排等相关工作提出意见和建议，与生物中心一起管好专项，通过科学、规范、公正、高效的专业管理，确保“生物医用材料研发与组织器官修复替代”重点专项总体目标的实现和各项任务的落实。 /p p 　　医药生物技术处工作人员向专家组成员介绍了专项启动以来的部署和实施情况，以及生物中心对“生物医用材料研发与组织器官修复替代”重点专项管理工作的相关考虑。专家组成员对专项的实施和管理进行了富有成效的讨论，就如何充分发挥专家作用、建立快速响应机制、加强部门沟通、开展专题调研以及切实做好项目的实施管理等方面积极建言献策，为专项项目的后续组织管理工作奠定了良好基础。 /p p 　　会上，专家组还对“生物医用材料研发与组织器官修复替代”重点专项2017年立项项目任务书进行了专业、细致地审核，提出了修改意见供项目承担单位参考，并对今后专项年度总结、现场检查、中期检查与验收等工作安排提出了宝贵建议。 /p p /p