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用干法消化植物组织,根据国标方法,高温消化多个小时后,加入稀硝酸溶解,但是很多不溶物,为什么呢?茎叶是已经灰白色了,植物茎还是有明显褐色物质……请有经验者帮分析一下,谢谢!
破碎大量样品、低温破碎大量样品、破碎坚硬或韧性较强的样品时,人工手动研磨就成了实验猿的噩梦。当然,也有很多实验猿已经尝试过市面一些研磨机/超声波粉碎机,发现自己那顽固的样品依然无法被完全破碎/破碎过程损坏了目标成分而十分心塞。 分享个高通量高效破碎动植物组织和微生物的方法,别逗,当然不是靠徒手研磨能做到的,必须入手个神器——tissuelyser系列和JXFSTPRP系列多样品组织研磨机。对于动植物组织和微生物,包括一些难以破碎的组织样品,都可以使用这个研磨机对其进行完全粉碎。 特别地,一些尤其坚硬/韧性比较强的样品,或要求维持低温条件进行破碎提取的样品,需要结合液氮进行研磨,如:皮肤、硬骨骼、软骨、血管、结缔组织、种子等;使用普通机械研磨方法,很难既保证研磨破碎效果又保证样品一直处于低温状态,尤其是提取RNA、酶等对温度敏感的物质时,低温状态的控制显得尤为关键。入手一台上海净信的多样品组织研磨机,这些都不再是问题了。看招:注:由于样品的具体差异及实验要求的不同,下文数据部分请咨询厂家。第一部分 破碎动物组织1)样品:猪肌肉组织2)仪器:Tissuelyser多样品组织研磨机(品牌:上海净信);耗材:***毫升离心管和直径***毫米的研磨钢珠3)步骤:a.取***克左右肌肉组织样品,均匀地剪切成少量样品块,分别放入若干***毫升的研磨离心管中。b.每个试管中放入***颗直径***毫米的研磨钢珠和800μLPBS裂解液,分别盖紧管盖后,置入24孔研磨适配器中,再将适配器固定在研磨机中。c.将Tissuelyser多样品组织研磨机的参数设置为***赫兹,研磨***秒,启动研磨器。d.研磨完全停止后,拿出研磨离心管,旋开管盖,取出研磨好的肌肉组织样品。4)结果:研磨后的效果如图1,猪肌肉组织成很细腻的泥浆状,说明Tissuelyser多样品组织研磨机对猪肉组织的研磨效果良好。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/05/201505150947_546190_3397_3.jpg图1 猪肌肉研磨对比第二部分 破碎植物组织1)样品:水稻叶片2)仪器: Tissuelyser多样品组织研磨机(品牌:上海净信);耗材:***毫升离心管和直径***毫米的研磨钢珠3)步骤:a.取***克左右叶片组织样品,均匀地剪切成少量样品块,分别放入若干***毫升的研磨离心管中。b.每个试管中放入***颗直径***毫米的研磨钢珠,分别盖紧管盖后,置入24孔研磨适配器中,再将适配器固定在研磨机中。c.将Tissuelyser多样品组织研磨机的参数设置为***赫兹,研磨***秒,启动研磨器。d.研磨完全停止后,拿出研磨离心管,旋开管盖,取出研磨好的叶片组织样品。4)结果:研磨后的效果如图2,叶片组织成很细腻的泥浆状,说明Tissuelyser多样品组织研磨机对叶片组织的研磨效果良好。顺带附上研磨黄豆(坚硬的植物种子)的研磨对比图。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/05/201505150948_546191_3397_3.jpg图2 水稻叶片研磨对比http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/05/201505150948_546192_3397_3.jpg图3 黄豆研磨对比第三部分 结合液氮使用tissuelyser研磨机 当样品死活无法破碎完全/样品傲娇要低温环境时,Tissuelyser多样品组织研磨机+液氮=问题轻松解决。以血管和植物叶片为例,具体操作方法如下: 血管: 取0.1克新鲜血管,用剪刀剪成若干小块,然后放入2毫升离心管中,加入1颗6mm研磨钢珠,盖上管盖。将整个试管放入液氮中冷冻1分钟左右或直到液氮不沸腾,然后放入机器处理30秒钟。取出样品管可见样品被破碎成乳白色粉末,然后加入提取缓冲液,可以进行接下来的后续提取,加入缓冲液之前能保证样品温度一直处于-20℃以下。 叶片: 取0.2克植物叶片,清洁叶片表面后放入离心管中,加入1颗直径5mm不锈钢研磨钢珠,盖上管盖。将整个试管和适配器放入液氮中冷冻1分钟左右或直到液氮不沸腾,然后取出放入研磨机器中机器处理30秒钟。取出样品管可见叶片被破碎成绿色粉末,然后加入提取缓冲液,进行接下来的后续提取即可,加入缓冲液之前能保证样品温度一直处于-20℃以下。后记 想入手这个神器,但又对研磨效果有所犹疑的小伙伴,现在上海净信部分研磨机产品可申请试用,是时候下手了。激动人心的还有,近期研磨机好价,试用爽了直接入手一台也是毫不含糊的。
我找到一套资料,是关于样品前处理的,原版英文的,希望能对大家分析应用有所帮助。资料比较多,我先试着翻译翻译,不妥之处望大家指正,先发一篇,以后逐步发表,待集成册后上载供大家查阅。DESTRUCTION OF ORGANIC MATTER IN PLANT AND ANIMAL TISSUE WITH PERCHLORIC ACID-NITRIC ACID MIXTURESPublication: Handbook of INDUCTIVELY COUPLED PLASMA SPECTROMETRYAuthors: M. Thompson and J N WalshField: Biology, Animal, Agriculture, plantReagents(i)Nitric acid, ~ 70 % m/m(ii)Perchloric acid ~ 60 % m/m.(iii)Hydrochloric acid ( 6 M). Dilute hydrochloric acid ( 36 % m/m, 534 ml) to 1l.(iv)Calibration blank – hydrochloric acid ( 1 M).Procedure(i)Weigh each sample (2.00 g, dried at 105 °C and ground *) into a clean, dry, numbered conical flask.(ii)Add nitric acid (40 ml) to each flask, cover with a watch glass, and set aside in the fume cupboardOvernight.(iii) Place the flask on the hotplate and warm gently until frothing ceases and the solutions are almost clear. The nitric acid should be boiling gently ( but without major loss of volume) at the end of this stage.(iv)Allow the flasks to cool, and check that there are no fat globules floating in the liquid.(v)Add perchloric acid ( 3 ml), replace the flasks on the hotplace without cover glasses, and very gently heat until the contents have just reached dryness. Do not overheat.(vi)Allow the flasks to cool, and add water (2-3 ml) and hydrochloric acid (2.0 ml, 6 M) to each. Warm to dissolve the residues.(vii)Transfer the cooled solutions either to graduated test-tubes or to graduated flasks, and dilute to volume with water. * Samples which are difficult to dry by heating (e.g soft fruits) can be freeze-dried, or homogenized and weighed wet. Moisture content can be determined separately.植物和动物组织使用高氯酸和硝酸混合物消解发表: ICP 手册作者: M. Thompson and J N Walsh应用领域: 生物学,动物学,农业,植物研究试剂:1.70 % m/m 硝酸2.60 % m/m 高氯酸3.稀释盐酸36% m/m 534ml 至 1 L4.标准空白 盐酸(1M) 过程:1.每个样品称重(2.00g ,在105 °C 下干燥并研碎 *)置于干净、干燥、带刻度的几个锥形烧瓶中2.在每个瓶中添加硝酸 (40 ml), 用玻璃覆盖, 放置在通风橱内,过夜.3.将烧瓶放置在电炉加热盘上,缓慢加热至起泡并溶液几乎是清亮的. 在本步骤最后硝酸应该缓慢沸腾(但主要体积没有损耗)4.让烧瓶冷却并检查溶液中没有漂浮的脂肪球.5.添加高氯酸 ( 3 ml), 再次将烧瓶放置在电炉加热盘上不用盖盖,然后非常缓慢的加热至内部刚好干燥,不要过热 .6.让烧瓶冷却并且添加水 (2-3 ml) 和盐酸 (2.0 ml, 6 M) 到每个烧瓶. 加热并溶解瓶中的剩余物质7.将冷却后的溶液移到最后的试管或测试的容量瓶中,然后用水稀释定容. * 难于加热干燥的样品(如软的水果)可以冷冻干燥,或者结构均匀可以称量湿重,水份可以分开测量.